[0001] 本发明涉及生物样品保存技术领域，具体涉及一种保存液及其试剂盒与用途。

[0002] 肠道是人体最重要的器官之一。在肠道中，细胞增殖很常见，肠道通过细胞增殖促进旧细胞的更新来维持上皮层的完整性，旧细胞则通过挤压和脱落释放到粪便中。据报道，10 4
人体每天大约有10 个上皮细胞从宿主的胃肠道脱落。每份粪便样品中含有5×10 到4×
7
10个脱落的大肠上皮细胞。90％的结直肠癌起源于上皮层，上皮细胞的过度增殖导致结直肠癌患者粪便中脱落细胞含量比正常人更高。因此粪便脱落细胞是很有潜力的生物标志物，而目前结直肠癌无创早筛的应用大多专注于分析核酸和蛋白，而忽略了粪便中的细胞成分。

[0003] 粪便中还含有大量的微生物，复杂的成分使得我们在分析粪便中的总核酸或蛋白的时候，出现大量的背景干扰，影响检测结果的灵敏度和特异性。先从粪便中分离肠道脱落细胞，再进行检测分析能够去除背景干扰从而提高检测结果的准确性。

[0004] 粪便等样本的采集和保存会对下游分析方法的功效产生很大影响，现有的粪便保存条件多为低温保存，但考虑到运输和保存的便捷程度、样本的重复利用率等问题，常温保存更能节省成本。目前也有一些常温保存粪便样本的试剂和方法，但现有的保存试剂保存效果较差，难以维持样本中细胞的完整性和活性，细胞易破裂，无法用于细胞表现蛋白(例如细胞表面的生物标志物)分析，且RNA降解严重，此外，现有试剂缺乏必须的粪便粘液溶解剂，使用的固定剂杀死脱落上皮细胞，并使核酸蛋白出现交联等。

[0005] 因此，目前用于保存粪便等样本中脱落细胞的保存液有待改进。

[0033] 下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本申请能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他材料、方法所替代。在某些情况下，本申请相关的一些操作并没有在说明书中显示或者描述，这是为了避免本申请的核心部分被过多的描述所淹没，而对于本领域技术人员而言，详细描述这些相关操作并不是必要的，他们根据说明书中的描述以及本领域的一般技术知识即可完整了解相关操作。

[0034] 另外，说明书中所描述的特点、操作或者特征可以以任意适当的方式结合形成各种实施方式。同时，方法描述中的各步骤或者动作也可以按照本领域技术人员所能显而易见的方式进行顺序调换或调整。因此，说明书和附图中的各种顺序只是为了清楚描述某一个实施例，并不意味着是必须的顺序，除非另有说明其中某个顺序是必须遵循的。

[0035] 本文中为部件所编序号本身，例如“第一”、“第二”等，仅用于区分所描述的对象，不具有任何顺序或技术含义。

[0036] 本文中，常温是指10℃～30℃。

[0037] 粪便等新鲜样本往往难以获得，或难以立即送到实验室进行细胞分离鉴定、核酸提取等下游分析。样本采集和保存过程中，粪便中完整的大肠脱落上皮细胞会迅速破裂死亡，胞内核酸随之发生降解。在一实施例中，本发明的保存液能够维持粪便中完整大肠脱落上皮细胞的活性和完整性，使新鲜粪便样本能够更方便地运输和保存，从而能够应用于下游的细胞分离、鉴定，以及高完整性核酸的提取。

[0038] 在一实施例中，提供一种用于保存粪便等生物样本中细胞的保存液，其主要功能是保存粪便中的大肠脱落上皮细胞，使其保存活性和完整性。本保存液在不杀伤细胞和固定细胞的情况下保持细胞的完整性，因此更有利于下游的细胞分离鉴定，完整核酸的提取等应用。

[0039] 根据第一方面，在一实施例中，提供一种保存液，包括如下组分：抑菌剂、稳定剂、分散剂，以及缓冲液。

[0040] 在一实施例中，包括如下组分：

[0041] 0.1～10g/L抑菌剂、5～30g/L稳定剂、1～10g/L分散剂，以及缓冲液。

[0042] 在一实施例中，包括如下组分：

[0043] 0.5～2g/L抑菌剂、5～25g/L稳定剂、1～9g/L分散剂，以及缓冲液。

[0044] 在一实施例中，包括如下组分：

[0045] 0.5～2g/L抑菌剂、5～10g/L稳定剂、1～5g/L分散剂，以及缓冲液。该配方可以将粪便保存液保存72小时，维持细胞的完整性及活性，显著降低RNA的降解量，满足物流运输样本的要求，可将3天内将样本送达目的地。

[0046] 在一实施例中，保存液中抑菌剂的浓度包括但不限于0.1g/L、0.2g/L、0.3g/L、0.4g/L、0.5g/L、0.6g/L、0.7g/L、0.8g/L、0.9g/L、1g/L、2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、
8g/L、9g/L、10g/L。

[0047] 在一实施例中，保存液中稳定剂的浓度包括但不限于5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L。

[0048] 在一实施例中，保存液中分散剂的浓度包括但不限于1g/L、2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L。

[0049] 在一实施例中，抑菌剂包括但不限于硫柳汞、Proclin 300、β‑丙内酯(BPL)中的至少一种。抑菌剂可以抑制细菌生长，使粪便中的微生物组分保持在新鲜粪便的状态，同时防止微生物生长导致的宿主肠道脱落细胞破裂。

[0050] 在一实施例中，稳定剂包括但不限于牛血清白蛋白、人血清白蛋白、羊血清白蛋白中的至少一种。稳定剂可以抑制蛋白酶的活性。

[0051] 在一实施例中，分散剂包括但不限于N‑乙酰半胱氨酸、聚山梨醇酯‑20(亦称吐温20)、羧甲司坦中的至少一种。分散剂使粪便能够快速分散在保存液中，从而更好的保护粪便中的细胞。

[0052] 在一实施例中，缓冲液包括但不限于杜氏磷酸盐缓冲液、Hank's平衡盐溶液(Hank's Balanced Salt Solution)、磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，亦称磷酸缓冲盐溶液、PBS)、Earle's平衡盐溶液(EBSS)中的至少一种。缓冲液用于维持细胞需要的渗透压、营养物质等，从而使细胞保持完整性和活性。

[0053] 在一实施例中，稳定剂为牛血清白蛋白，分散剂为N‑乙酰半胱氨酸。

[0054] 在一实施例中，还包括除臭剂、指示剂中的至少一种。除臭剂用于去除粪便样本的臭味，对实验操作人员更加友好，同时不影响下游分析的结果。

[0055] 在一实施例中，保存液含有10～100g/L除臭剂、0.0001～0.1g/L指示剂。

[0056] 在一实施例中，保存液中除臭剂的浓度包括但不限于10g/L、20g/L、30g/L、40g/L、50g/L、60g/L、70g/L、80g/L、90g/L、100g/L。

[0057] 在一实施例中，保存液中指示剂的浓度包括但不限于0.0001g/L、0.0005g/L、0.001g/L、0.005g/L、0.01g/L、0.05g/L、0.1g/L。

[0058] 在一实施例中，保存液包括如下组分：0.6g/L抑菌剂、5～25g/L稳定剂、5g/L分散剂、10g/L除臭剂，以及缓冲液；抑菌剂为硫柳汞，除臭剂为活性炭，缓冲液为磷酸盐缓冲液。

[0059] 在一实施例中，保存液包括如下组分：0.6g/L抑菌剂、15g/L稳定剂、5g/L分散剂、10g/L除臭剂，以及缓冲液；抑菌剂为硫柳汞，除臭剂为活性炭，缓冲液为磷酸盐缓冲液。

[0060] 在一实施例中，保存液包括如下组分：0.6g/L抑菌剂、15g/L稳定剂、1～9g/L分散剂、10g/L除臭剂，以及缓冲液；抑菌剂为硫柳汞，除臭剂为活性炭，缓冲液为磷酸盐缓冲液。

[0061] 在一实施例中，保存液包括如下组分：0.6g/L抑菌剂、15g/L稳定剂、7g/L分散剂、10g/L除臭剂，以及缓冲液；抑菌剂为硫柳汞，除臭剂为活性炭，缓冲液为磷酸盐缓冲液。

[0062] 在一实施例中，指示剂包括但不限于酸碱指示剂(亦称pH指示剂)。pH指示剂能够通过肉眼简单判断保存液是否变质。

[0063] 在一实施例中，酸碱指示剂包括但不限于酚红。

[0064] 在一实施例中，保存液的pH为7～9，优选为7.5～8.5。

[0065] 在一实施例中，保存液用于保存生物样本。

[0066] 在一实施例中，生物样本包括但不限于体液样本或组织样本。

[0067] 在一实施例中，生物样本包括但不限于粪便、血液、血浆、血清、尿液、唾液、母乳、眼泪、汗液、脑脊液、滑液、精液、阴道液、腹水或羊水。

[0068] 在一实施例中，生物样本包括细胞。

[0069] 在一实施例中，细胞但不限于干细胞、骨细胞、血细胞(例如，红细胞和/或白细胞)、肌肉细胞、脂肪细胞、皮肤细胞、神经细胞、内皮细胞、生殖细胞、胰腺细胞、癌细胞、肿瘤细胞或循环肿瘤细胞。在一些实施例中，细胞可以是直接来源于生物体的细胞(例如脱落细胞)、实验室衍生或经修饰的细胞。

[0070] 在一实施例中，生物样本来源于动物。动物包括但不限于哺乳动物，如人、啮齿动物(例如小鼠或大鼠)、绵羊、犬、非人灵长类动物(例如猕猴)、兔子或者其它哺乳动物，或者非哺乳动物，如斑马鱼等。在一些实施方案中，生物样本来源于人。

[0071] 根据第二方面，在一实施例中，提供一种试剂盒，含有第一方面任意一项的保存液。

[0072] 在一实施例中，该试剂盒包括用于盛放保存液的容器。

[0073] 在一实施例中，该试剂盒还包括使用说明书，用于指导用户使用。

[0074] 根据第三方面，在一实施例中，提供第一方面任意一项的保存液在保存样本中的应用。

[0075] 在一实施例中，本发明提供的粪便细胞保存液的配方及各组分的功能如下表1所示。

[0076] 表1

[0077]

[0078] 表1中是以1L作为的保存液的总体积为例进行说明。需要说明的是，保存液的总体积不受限制，各组分的用量可以根据保存液总体积的变化比例，等比例放大或缩小。

[0079] 实施例1～3

[0080] 本实施例制备了粪便细胞保存液，并进行保存细胞测试。

[0081] 本实施例中，粪便细胞保存液配制和使用方法如下：

[0082] (1)配制方法：按照配方称取各组成成分，用无菌去离子水溶解后，通过0.22μm的滤膜过滤或高压灭菌，即得粪便细胞保存液。

[0083] (2)使用方法：粪便样本采集到含有粪便细胞保存液的采集管中。颠倒数次混匀即可。样本采集后可以在常温或使用冰袋在72小时内运输到实验室进行下游分析。

[0084] 为了验证细胞保存液可以在常温下维持细胞活性。使用培养的结直肠癌上皮细胞系(HT‑29)加入到粪便细胞保存液中，使用细胞计数仪，每间隔24h测量一次细胞活率。结果如下表2所示：

[0085] 表2

[0086]

[0087] 保存液主要用于粪便样本的采集和运输，运输时间越短越好，按照目前的物流速度，通常可以在3天内将样本运达目的地，因此，3天内细胞活率维持越高越好。

[0088] 表2中的细胞活率数据证实，保存72小时后，细胞依然具有较好的完整性和活性，可用于细胞表面蛋白的分析(例如细胞表面的生物标志物)。

[0089] 对照组细胞培养基为：含10％FBS的DMEM培养基，总体积为1L。

[0090] 实施例1的配方(配方1.1)为：0.6g/L硫柳汞、5g/L BSA、5g/L N‑乙酰半胱氨酸、10g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为PBS溶液。总体积为1L。

[0091] 实施例2的配方(配方1.2)为：含有0.5g/L硫柳汞、10g/L BSA、1g/L羧甲司坦、15g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为PBS溶液。总体积为1L。

[0092] 实施例3的配方(配方1.3)为：含有2g/L硫柳汞、5g/L BSA、2g/L N‑乙酰半胱氨酸、10g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为DPBS溶液。总体积为1L。

[0093] 粪便样品检测方法如下：

[0094] 分别对三个粪便样本(三个样本采集自不同的人)进行了试验，每个粪便样本平均分为两份，将其中一份转移到含有30mL粪便细胞保存液的采集管中(分别标记为S‑1、S‑2、S‑3)；另一份粪便样本不添加任何试剂(分别标记为D‑1、D‑2、D‑3)。

[0095] 分别将对应的粪便样本转移到含有30mL粪便细胞保存液的采集管中和没有添加任何试剂的采集管中，分别用配方1.1、配方1.2、配方1.3保存样本S‑1、S‑2、S‑3，常温保存24h、48h、72h的样本进行RNA提取，测量RNA含量。

[0096] 使用实时荧光定量PCR(探针法)检测提取的RNA中肌动蛋白基因(缩写β‑actin)。其中，β‑actin是人源性基因，可以反映提取的RNA中是否含有来自于人的基因，从而反映粪便样本中是否包含人源性的脱落细胞。

[0097] RNA提取采用QIAGEN公司的Rneasy PowerMicrobiome Kit，提取操作步骤参照试剂盒说明书。

[0098] 实时荧光定量PCR检测β‑actin所采用的引物，其上下游引物分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示序列，探针为SEQ ID No.3所示序列。

[0099] SEQ ID No.1：5’‑CGAGAAGATGACCCAGATCATG‑3’

[0100] SEQ ID No.2：5’‑CAGAGGCGTACAGGGATAGCA‑3’

[0101] SEQ ID No.3：5’‑FAM‑TGAGACCTTCAACACCCCAGCCATG‑BHQ1‑3’

[0102] 检测结果如下表3所示：

[0103] 表3

[0104]

[0105] 表中，“NA”表示未检出。

[0106] 从图1～3可见，未添加保存液的样本，在24小时及以上时间后，未检出RNA，说明大量细胞发生了严重的破裂、死亡，RNA分子出现严重的降解。

[0107] 对于采集自同一受试者的样本，添加保存液的样本，72小时后RNA的降解程度相对于未添加保存液的样本显著降低。具体地，样本D‑1、S‑1来源于第一受试者，样本D‑2、S‑2来源于第二受试者，样本D‑3、S‑3来源于第三受试者。可见，对于采集自第一受试者的样本，未添加保存液的样本D‑1在0小时能检测出RNA，而在72小时后未检出RNA，表明降解严重，而经过保存液配方1.1保存后的样本S‑1，未出现严重降解。另外两组样本也呈现出类似的实验结果。

[0108] 实施例4

[0109] 本实施例旨在研究不同用量的稳定剂对应的保存效果

[0110] 一、参照实施例1中的配方1.1，设置不同浓度的牛血清白蛋白(BSA)。粪便细胞保存液的配方具体如下(pH值为7.4)：

[0111] 配方4.1：0.6g/L硫柳汞、5g/L BSA、5g/L N‑乙酰半胱氨酸、10g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为PBS溶液(磷酸盐缓冲液)。总体积为1L。

[0112] 配方4.2：0.6g/L硫柳汞、10g/L BSA、5g/L N‑乙酰半胱氨酸、10g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为PBS溶液。总体积为1L。

[0113] 配方4.3：0.6g/L硫柳汞、15g/L BSA、5g/L N‑乙酰半胱氨酸、10g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为PBS溶液。总体积为1L。

[0114] 配方4.4：0.6g/L硫柳汞、20g/L BSA、5g/L N‑乙酰半胱氨酸、10g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为PBS溶液。总体积为1L。

[0115] 配方4.5：0.6g/L硫柳汞、25g/L BSA、5g/L N‑乙酰半胱氨酸、10g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为PBS溶液。总体积为1L。

[0116] 二、实验方案

[0117] 采集第四份新鲜粪便后，进行称量分装，1g/管，分装14管，其中2管立即进行RNA提取，其余分别用不同配方的保存液进行保存，每个配方分别保存2管，常温保存7天后进行RNA提取。

[0118] 不同管的处理方式如表4所示。

[0119] 表4

[0120] 管号 样本编号 处理方式1 D1‑1 新鲜样本立即提取作为对照
2 D1‑2 新鲜样本立即提取作为对照
3 S1‑1 添加30mL配方4.1保存液，常温保存7天，然后提取RNA
4 S1‑2 添加30mL配方4.1保存液，常温保存7天，然后提取RNA
5 S2‑1 添加30mL配方4.2保存液，常温保存7天，然后提取RNA
6 S2‑2 添加30mL配方4.2保存液，常温保存7天，然后提取RNA
7 S3‑1 添加30mL配方4.3保存液，常温保存7天，然后提取RNA
8 S3‑2 添加30mL配方4.3保存液，常温保存7天，然后提取RNA
9 S4‑1 添加30mL配方4.4保存液，常温保存7天，然后提取RNA
10 S4‑2 添加30mL配方4.4保存液，常温保存7天，然后提取RNA
11 S5‑1 添加30mL配方4.5保存液，常温保存7天，然后提取RNA
12 S5‑2 添加30mL配方4.5保存液，常温保存7天，然后提取RNA
13 S6‑1 未添加保存液，常温保存7天
14 S6‑2 未添加保存液，常温保存7天

[0121] 三、实验结果：

[0122] 采用实时荧光定量PCR(探针法)检测提取的RNA中肌动蛋白基因(具体为β‑actin)。其中，β‑actin是人源性基因，可以反映提取的RNA中是否含有来自于人的基因，从而反映粪便样本中是否包含人源性的脱落细胞。

[0123] RNA提取采用QIAGEN公司的Rneasy PowerMicrobiome Kit，提取操作步骤参照试剂盒说明书。

[0124] β‑actin实时荧光定量PCR检测采用的引物，其上下游引物分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示序列，探针为SEQ ID No.3所示序列。

[0125] SEQ ID No.1：5’‑CGAGAAGATGACCCAGATCATG‑3’

[0126] SEQ ID No.2：5’‑CAGAGGCGTACAGGGATAGCA‑3’

[0127] SEQ ID No.3：5’‑FAM‑TGAGACCTTCAACACCCCAGCCATG‑BHQ1‑3’

[0128] 结果如下表5所示：

[0129] 表5

[0130] 管号 样本编号 处理方式 Ct值1 D1‑1 新鲜样本立即提取作为对照 18.08
2 D1‑2 新鲜样本立即提取作为对照 17.64
3 S1‑1 添加30mL配方4.1保存液，常温保存7天，然后提取RNA 32.34
4 S1‑2 添加30mL配方4.1保存液，常温保存7天，然后提取RNA 31.97
5 S2‑1 添加30mL配方4.2保存液，常温保存7天，然后提取RNA 25.38
6 S2‑2 添加30mL配方4.2保存液，常温保存7天，然后提取RNA 24.87
7 S3‑1 添加30mL配方4.3保存液，常温保存7天，然后提取RNA 21.97
8 S3‑2 添加30mL配方4.3保存液，常温保存7天，然后提取RNA 21.65
9 S4‑1 添加30mL配方4.4保存液，常温保存7天，然后提取RNA 26.73
10 S4‑2 添加30mL配方4.4保存液，常温保存7天，然后提取RNA 26.72
11 S5‑1 添加30mL配方4.5保存液，常温保存7天，然后提取RNA 28.97
12 S5‑2 添加30mL配方4.5保存液，常温保存7天，然后提取RNA 28.45
13 S6‑1 未添加保存液，常温保存7天 NA
14 S6‑2 未添加保存液，常温保存7天 NA

[0131] 表中，“NA”表示未检出。

[0132] 结合上表以及图4～10，分析实验结果可知，添加保存液的样本的Ct值明显低于未添加保存液的样本，证实本实施例的5个保存液配方可有效维持细胞的完整性和活性，降低RNA的降解量。

[0133] 进一步地，配方4.2～4.4保存的样本的Ct值较低，证实对应的保存液具有较好的保存效果，能较好地维持粪便样本中细胞的完整性和活性，RNA降解较少，可从样本中提取到完整性更好的RNA。BSA有维持渗透压作用、pH缓冲作用、载体作用和营养作用。在细胞保存液中可起到生理和机械保护作用，以及载体作用。BSA浓度过低时，保护效果不明显，而且渗透压过低容易导致细胞破裂，BSA浓度过高则会导致细胞失水死亡。同时，BSA能够与游离的金属离子结合，从而抑制一些游离的核酸酶活性。

[0134] 进一步地，BSA浓度为15g/L(配方4.3)时，保存效果最佳。

[0135] 实施例5

[0136] 本实施例旨在研究不同用量的分散剂对应的保存效果

[0137] 一、参照实施例1中的配方1.1，设置不同浓度的N‑乙酰半胱氨酸。粪便细胞保存液的配方具体如下(pH值为7.4)：

[0138] 配方5.1：0.6g/L硫柳汞、15g/L BSA、1g/L N‑乙酰半胱氨酸、10g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为PBS溶液(磷酸盐缓冲液)。总体积为1L。

[0139] 配方5.2：0.6g/L硫柳汞、15g/L BSA、3g/L N‑乙酰半胱氨酸、10g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为PBS溶液(磷酸盐缓冲液)。总体积为1L。

[0140] 配方5.3：0.6g/L硫柳汞、15g/L BSA、5g/L N‑乙酰半胱氨酸、10g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为PBS溶液(磷酸盐缓冲液)。总体积为1L。

[0141] 配方5.4：0.6g/L硫柳汞、15g/L BSA、7g/L N‑乙酰半胱氨酸、10g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为PBS溶液(磷酸盐缓冲液)。总体积为1L。

[0142] 配方5.5：0.6g/L硫柳汞、15g/L BSA、9g/L N‑乙酰半胱氨酸、10g/L活性炭、0.01g/L酚红，余量为PBS溶液(磷酸盐缓冲液)。总体积为1L。

[0143] 二、实验方案

[0144] 采集第五份新鲜粪便样本后，进行称量分装，1g/管，分装14管，其中2管立即进行RNA提取，其余分别用不同配方的保存液进行保存，每个配方2管，4℃保存7天后进行RN A提取。

[0145] 不同管的处理方式如表6所示。

[0146] 表6

[0147]

[0148]

[0149] 三、实验结果：

[0150] 采用实时荧光定量PCR(探针法)检测提取的RNA中肌动蛋白基因(具体为β‑actin)。其中，β‑actin是人源性基因，可以反映提取的RNA中是否含有来自于人的基因，从而反映粪便样本中是否包含人源性的脱落细胞。

[0151] RNA提取采用QIAGEN公司的Rneasy PowerMicrobiome Kit，提取操作步骤参照试剂盒说明书。

[0152] β‑actin实时荧光定量PCR检测采用的引物，其上下游引物分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示序列，探针为SEQ ID No.3所示序列。

[0153] SEQ ID No.1：5’‑CGAGAAGATGACCCAGATCATG‑3’

[0154] SEQ ID No.2：5’‑CAGAGGCGTACAGGGATAGCA‑3’

[0155] SEQ ID No.3：5’‑FAM‑TGAGACCTTCAACACCCCAGCCATG‑BHQ1‑3’

[0156] 结果如下表7所示：

[0157] 表7

[0158]

[0159]

[0160] 表中，“NA”表示未检出。

[0161] 结合上表以及图11～17，分析实验结果可知，添加保存液的样本的Ct值明显低于未添加保存液的样本，证实本实施例的5个保存液配方可有效维持细胞的完整性和活性，降低核酸的降解量。

[0162] 进一步地，配方5.2～5.4保存的样本的Ct值较低，证实对应的保存液具有较好的保存效果，能较好地维持粪便样本中细胞的完整性和活性，RNA降解较少，可从样本中提取到完整性更好的RNA。合适浓度的分散剂能使粪便样本分散，使细胞更好的分散在保存液中，从而得到保护，分散剂浓度过低则分散不彻底，粪便包埋的细胞无法得到保护，分散剂浓度过高则可能影响细胞活性。

[0163] 进一步地，N‑乙酰半胱氨酸浓度为7g/L(配方5.4)时，保存效果最佳，Ct值最小，证实RNA降解最少，完整性最好。

[0164] 粪便保存液的最佳配方见下表8，pH为7.4。

[0165] 表8

[0166]组分 配方 浓度
抑菌剂 硫柳汞 0.6g
稳定剂 牛血清白蛋白 15g
分散剂 N‑乙酰半胱氨酸 7g
除臭剂 活性炭 10g
pH指示剂 酚红 0.01g
缓冲液 PBS(磷酸盐缓冲液) 1000mL

[0167] 在一实施例中，本发明的粪便细胞保存液能够在常温保存和运输粪便样本，长时间维持粪便样本中宿主脱落细胞的完整性和活性。

[0168] 在一实施例中，使用本发明的粪便细胞保存液保存的样本，能够从样本中提取到完整性更好的核酸样本，从而满足下游的检测分析。

[0169] 在一实施例中，使用本发明的保存液保存粪便细胞后，能够从细胞中提取到完整性高的人源核酸。

[0170] 以上应用了具体个例对本发明进行阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。对于本发明所属技术领域的技术人员，依据本发明的思想，还可以做出若干简单推演、变形或替换。