[0001] 本发明涉及生物材料技术领域，具体涉及一种脱细胞基质制剂及其制备方法和促进护发、生发的用途。

[0002] 脱发可大致分为生长期脱发和静止期脱发，生长期脱发的原因是多种多样的；脱发影响着全球约一半的男性和超过四分之一的女性。中青年已经成为"脱发大军"的主力。常见脱发类型包括雄激素性秃发(Androgenetic alopecia，AGA)、斑秃、拔毛癖、休止期脱发、老年性脱发等。众所周知，雄激素性脱发，也称男性型秃发，是患者头部全部或大部分头发完全或部分脱落；其中AGA患者受影响的头皮区域会出现毛囊缩小化和发量减少；AGA发病率，随年龄增长而增加。尽管这种病症发病率很高，但对患者有效的治疗方法相对较少。
目前对毛发生长障碍的具体机制，有些尚不完全清楚，但有科学证据表明，脱发是由于毛囊发育和毛发周期之间的关系或相互作用障碍或紊乱引起的。

[0003] 众所周知，毛囊是皮肤中的一个复杂的微型器官，负责毛发的生长、周期性更替以及与周围组织的相互作用;毛囊的主要结构、成分和功能如下。毛囊结构包括以下7个部分：隆突部（Bulge）：毛囊的上部，含有毛囊干细胞（HFSC）和黑色素干细胞，对毛发色泽、再生至关重要。

[0004] 毛囊基质（Matrix）：毛囊隆突部下方的区域，毛发生长发生在此处。

[0005] 毛囊外皮鞘（Outer Root Sheath, ORS）：毛囊的外部结构，由多层细胞组成，为毛发提供保护。

[0006] 毛囊内皮鞘（Inner Root Sheath, IRS）：包围在毛发周围的多层结构，对毛发的形状和方向有影响。

[0007] 毛乳头（Dermal Papilla, DP）：位于毛囊底部的一团细胞，对毛发生长起到调控作用。

[0008] 皮脂腺（Sebaceous Gland）：与毛囊相连，分泌油脂，润滑和保护皮肤及毛发。

[0009] 立毛肌（Arrector Pili Muscle）：与毛囊相连的微小肌肉，当收缩时可使毛发竖立。

[0010] 毛囊的主要成份，包括胶原蛋白（毛囊的主要结构蛋白，提供支撑和强度）；弹性蛋白（使毛囊具有弹性，允许一定程度的伸展和回弹）；蛋白聚糖（有助于维持组织的水分和结构）；纤连蛋白（促进细胞粘附和迁移，对毛发生长和伤口愈合重要）；同时也含有自身的细胞因子和生长因子（如FGF、IGF、Wnt信号分子等），调控毛囊细胞的增殖、分化和毛发生长周期。

[0011] 毛囊的功能：包括毛囊通过其基质细胞的增殖和分化，周期性地生长毛发；毛囊周期性地更替：毛囊经历生长期（anagen）、退行期（catagen）和休止期（telogen）的周期性变化；毛囊干细胞在毛发周期的再生阶段，提供新的细胞，维持毛发生长。以及感觉功能（毛囊与神经末梢相连，参与感觉传导）；温度调节（立毛肌的收缩和松弛有助于调节体温）；保护作用（毛发为皮肤提供物理屏障，保护免受外界损伤）；以及美容美观功能，头发（毛发）具有重要的美学价值和显著的社交功能。

[0012] 毛囊的生长呈现出周期性更替，毛囊的状态和状况，对毛发生长有着决定性的影响。毛发并非持续不断地生长，而是通过周期性的更替来实现生长和脱落的过程。正常毛囊周期性更替的三个主要阶段以及它们如何影响毛发生长：生长期：占85%, 可持续2‑8年，这是毛发生长初期，毛发活跃生长的阶段，可以持续数年；在生长期，毛囊基质细胞迅速增殖，分化非常活跃，并向上推动毛发纤维，导致毛发长度增加；生长期持续时间决定了毛发可达到的最大长度。

[0013] 退行期：占1‑2%, 持续2‑4周，这是毛发生长后期，是一个过渡阶段，持续数周，毛囊开始萎缩，毛发生长停止；退行期中，毛囊结构发生改变，毛乳头逐渐与毛囊基质分离；在退化期末，毛母细胞停止产生毛发，毛发变成特定形状，即棒状；这个阶段的结束标志着毛发生长周期的下一个阶段的开始。

[0014] 休止期：占10‑15%, 持续2‑3月，休止期是毛发生长周期的最后阶段，在此期间毛囊完全停止活动并收缩，持续数月；在这个阶段，毛囊几乎不活动，旧的毛发纤维逐渐与毛囊分离并最终脱落；休止期结束后，毛囊会重新进入生长期，新的毛发开始生长，取代脱落的毛发。

[0015] 毛囊周期性更替对毛发生长的影响包括：毛发密度：休止期毛发的脱落和生长期新毛发的生长，共同决定了毛发的密度。

[0016] 毛发长度：生长期的持续时间，影响毛发能够生长到的最大长度。

[0017] 毛发颜色：随着年龄的增长，毛囊中的黑色素细胞活性可能降低，导致毛发颜色变浅。

[0018] 毛发质量：周期性更替过程中，毛囊的健康状态影响毛发的粗细和弹性。

[0019] 毛发生长模式：不同个体的毛囊周期性更替模式，可能导致不同的毛发生长模式，如毛发稀疏或浓密。

[0020] 目前，干细胞移植是实现毛囊功能再生的可选策略之一，如干细胞疗法作为潜在的新型疗法受到了较多的关注，其防治AGA的原理是毛囊干细胞的再激活，从而改善毛囊的生长和毛发的再生。移植干细胞的来源有两种主要类型，自体和同种异体。有些研究表明，注射含有皮肤上皮干细胞和间充质干细胞的混合物可以诱导产生新的毛囊。重要的是，毛囊干细胞(HFSC)会周期性地在活跃期和非活跃期之间切换，从而使毛囊中的干细胞群保持稳定；然而，这种能力会随着年龄的增长而减弱。

[0021] 毛囊中含有多种细胞资源，如黑色素细胞、上皮细胞和不同发育来源的干细胞，能够不断更新、调节毛发生长和毛发稳态。毛囊中主要两种干细胞；第一种是HFSC，它们位于立毛肌附着区域和峡部近端区域的外根鞘(ORS)内，这两个区域都被称为“凸起”。第二种是真皮乳头细胞 (DPC)，它负责控制毛发的诱导和生长，并参与新毛囊的形成。AGA属于非瘢痕性脱发，HFSCs无损伤，只是祖细胞受损。这一事实使得雄激素性脱发可能是可逆的。受雄激素性脱发影响的头皮中DPC复制潜能降低，并且还发现其形状、大小和特征标记物易发生丢失。近年来，有些门诊开展了简单的干细胞培养和移植。由于干细胞具有再生潜能，干细胞疗法，在患有雄激素性脱发的医生和患者中备受关注；虽然干细胞疗法在AGA中的功效的研究有相继发表；但此疗法治疗AGA疗效仍有待进一步观察。

[0022] 有研究和调查表明毛囊干细胞中存在毛囊上皮干细胞，这些上皮干细胞具有调节毛发周期的功能，参见JID Symposium Proceedings，8：28‑38（2003）；报道称上皮和间充质之间的相互关系是毛囊形成的关键因素。

[0023] 毛发移植是解决秃顶的有效方法之一，即从仍然具有正常功能的供体区域（例如沿着头部的后部和侧面）取出毛根，然后移植到毛根已经死亡的头皮区域;外科手术，例如头皮整形手术，包括例如头皮缩小手术、头皮瓣手术和组织延伸或组织扩张。

[0024] 药物疗法,包括使用米诺地尔（Minoxidil）和非那雄胺（Finasteride）。非那雄胺和米诺地尔是仅有的两种经FDA批准用于头发再生的药物; 上述药物疗法的主要缺点是，停止用药后对脱发的治疗基本没有效果，因此上述治疗方法只是治疗脱发的暂时手段，而非永久性手段。

[0025] 目前获得的替代方法包括，包括，例如毛发移植和头皮整形手术，以及各种药理学（或药物）疗法；尽管对毛发生长方法的研究和开发颇多，但遗憾的是，目前这些方法还存在较为麻烦，使用不方便，以及存在效果不稳定等缺陷与不足，暂时没有能够从根本上预防或治疗脱发的有效方法。

[0026] 另一方面，国内外通过各类脱细胞技术，包括物理、化学、生物方式等多种方式，去细胞所使用的试剂及方法具体请参考CN201910804397.2中的表1；专利名称为：一种组织修复材料及其制备方法。对同种或异种组织，去除免疫原性物质后的细胞外基质（ECM）材料，也称为脱细胞产品制剂，也有的技术人员，称之为脱细胞补片或组织再生支架；目前该类产品（ECM）已广泛应用于组织工程和临床再生医学领域，如用于心脏瓣膜、血管、神经、肌腱、骨、软骨、皮肤、食道、气管、腹壁、以及许多其它组织的修复重建。已有充足的研究表明，采用适宜的脱细胞工艺，可以制备得到的免疫原物质少，同时保留原有ECM中各类成分，且保留结构良好的ECM，可以实现内源性诱导包括干细胞再生和组织修复在内的原位组织再生。现有研究显示，ECM类产品的组织修复重建效果，与材料组织来源和脱细胞工艺等密切相关，目前以猪小肠粘膜下层（SIS）为研究热点和重点，其具有易获得、来源较多、不存在伦理问题、以及病毒传播风险低的优势，更兼具可规模化生产的特点而备受产业界技术领导和学术界专家的双重青睐；本公司的技术团队，多年来就以猪小肠粘膜下层（SIS）为主要原料，进行脱细胞工艺的反复研究和优化，并做进一步地深加工处理，为此开展多系列的三类医疗器械的研发、生产和应用。

[0027] 虽然目前已有将脱细胞基质或有时也称为细胞外基质（Extracellular Matrix, ECM）制剂，用于防治成年人的各类脱发，也表现出一定的潜力和兴趣。ECM由多种大分子组成，包括胶原蛋白、弹性蛋白、蛋白聚糖、糖蛋白和纤维连接蛋白等构成；ECM不仅为细胞提供结构支持，还参与调控细胞行为，包括细胞的粘附、迁移、增殖和分化。在毛发生长中，ECM的作用主要体现在以下几个方面：1.结构上支持：ECM为毛囊提供稳定的支撑结构，保持其形态和完整性，有助于毛发的正常生长。

[0028] 2.细胞信号传导：ECM与细胞表面受体相互作用，触发细胞内信号传导，影响毛囊干细胞的行为和毛发生长周期。

[0029] 3.细胞粘附：ECM上的活性分子，通过与细胞表面的整合素受体结合，促进毛囊细胞的粘附和锚定。

[0030] 4.营养输送：ECM有助于营养物质和氧气的输送，为毛发生长提供必需的营养和环境。

[0031] 5.细胞迁移和分化：ECM的组成和结构变化，可引导毛囊干细胞和其他细胞的迁移和分化，促进新毛发的形成。

[0032] 6.免疫调节：ECM可以调节局部免疫反应，影响毛囊的炎症状态，进而影响毛发生长。

[0033] 7.毛发生长周期的调控：ECM与毛发生长周期各个阶段密切相关，包括生长期、退行期和休止期。

[0034] 8.伤口愈合和再生：在皮肤损伤后，ECM的修复和再生，对毛囊的恢复和毛发生长至关重要。

[0035] ECM促进护发、生发的功效，体现为：其一，改善毛发生长周期，延长生长期，以及缩短退行期或休止期而及时进入生长期；其二，促进毛发密度和厚度的增加；其三，增强毛发的弹性和抗断裂能力。

[0036] ECM在促进毛发生长中的作用是多方面的，然而，目前的治疗效果，并不令人满意。其中一个重要的原因可能是：脱细胞基质在制备的全过程中，包括离体后靶组织地及时妥善预处理（简称S1），不同脱细胞工艺（有时过于苛刻的脱细胞条件，试剂高浓度，长时间，多次反复）处理过程中，对ECM天然立体结构产生不同程度的破坏，以及不同处理工艺，可能对ECM中天然载有的生物活性成份和或生长因子产生不同影响，导致含量损失多或破坏较多，促进组织再生的活性降低，甚至完全丧失殆尽；进而直接影响ECM制剂的促毛发生长的功效；在具体使用时，对各类毛发干细胞或相关毛发再生细胞诱导能力差，包括缺乏足够的相应细胞生长因子和细胞通道信号支持，从而不能有效地促进已受伤或受损的毛发组织的再生；最终难以体现出促进毛发再生的明显效果。

[0037] 主要参考文献如下非专利文章
“Wnt信号通路在毛囊乳头细胞诱导毛囊形成及生长过程中作用的研究新进展”中国细胞生物学学报 2021, 43(7): 1550–1560
作者及单位 袁牧 陆军军医大学大坪医院 干细胞与再生医学科
“干细胞治疗雄激素脱发的研究进展”
中国药科大学学报 2023，54（3）：372 ‑ 379
作者及单位 晏文静 中国药科大学生命科学与技术学院
“碱性成纤维细胞生长因子治疗化疗药物导致的脱发的作用机制的研究”
2021年 中国医科大学博士学位论文，82页
作者及单位：覃洁 中国医科大学附属第一医院
Wnt Ligands Secreted by Subepithelial Mesenchymal Cells Are Essential for the Survival of Intestinal Stem Cells and Gut Homeostasis.
Valenta et al., 2016, Cell Reports 15, 911–918
“MAP3K2‑regulated intestinal stromal cells define a distinct stem
cell niche”
《Nature》volume 592,pages606–610 (2021)
作者及单位：苏冰上海交通大学医学院和上海市免疫学研究所
该文章研究发现肠道干细胞底部，存在一类被称为MRISC的新型肠道间质细胞；揭示了MRISC细胞在肠道炎症和损伤过程中，通过特异调控肠道干细胞微环境信号，参与肠道上皮组织损伤修复的作用和机理，为肠道修复和再生提供了新思路。

[0038] 现有专利技术文献：US20140086867A1；
US20210299036A1；
CN201610511579.7；
关于脱细胞保护液，CN201610511580.X（简称D4）,发明名称：一种优化的抗氧化脱细胞保护液；拜欧迪赛尔（北京）生物科技有限公司（发明人为史真和史伟云）公开发明专利；该保护液有特定pH值，特定晶体和胶体渗透压，且呈现为淡红色液体.
很明显该发明的保护液主要功能,至少是抗氧化；配方中除了使用DMEM细胞培养基粉末，还额外添加有其他九种成份；具体如下：(2)L‑组氨酸盐酸盐2.87‑3.83g/L；(3)硫酸软骨素25‑30g/L；(4)低分子右旋糖酐20‑35g/L；(5)羟丙基甲基纤维素2‑8g/L；(6)别嘌呤醇0.5‑0.8g/L；(7)HEPES缓冲液20‑25ml/L；(8)盐酸地塞米松1‑2mg/L；(9)还原型谷胱苷肽1.5‑3g/L；(10)左氧氟沙星0.1‑0.2g/L。

[0039] 第一方面，保护液中使用了DMEM细胞培养基粉末，DMEM是广泛使用的细胞培养基，由Dulbecco改良自Eagle's Minimum Essential Medium（MEM）；DMEM粉末成分包括：氨基酸（细胞生长所需的所有必需氨基酸）；维生素（包括如维生素B群、维生素C、维生素D等），矿物质（如钙、磷、钾、镁、铁等微量元素和常量元素），葡萄糖（作为细胞的能量来源），氯化钠（维持培养液的渗透压），碳酸氢钠（帮助维持培养环境中的pH平衡），L‑谷氨酰胺（其在溶液中不稳定）,丙酮酸钠(作为细胞的辅助能量来源);酚红(pH指示剂，帮助监测培养液的酸碱度)。

[0040] DMEM主要为细胞提供必要的营养成分，以支持细胞体外生长；在D4发明的保护液中实际上并无必要，似多此一举，其实际上已脱离了D4发明的最初目的和本义；也远离了发明主题“抗氧化脱细胞保护液”。

[0041] 第二方面，因为DMEM是细胞培养基，其成份本身就较为复杂，原因如上；进而导致该发明的脱细胞保护液，实际上是配方之上的配方,有着明显地双重复杂性;前面要促进细胞生长，后面又进行脱细胞;使得应用该保护液的最终目的，前后有些矛盾;至少是不一致的，甚至是完全相背的。

[0042] 第三方面，D4保护液中，一方面，既有晶体渗透压，介于330‑380mOsm/kgH2O之间,源自盐酸组氨酸；实施例一中每升保护液含有盐酸组氨酸2.87克；另一方面，又有胶体渗透压，介于310‑350mOsm/kgH2O之间，且源自硫酸软骨素，羟丙基甲基纤维素和低分子右旋糖酐，这三种成份本身自已的分子结构和分子量都存在较大的波动；硫酸软骨素（chondroitin sulfate sodium，简称CS）是一种酸性粘多糖，由D‑葡糖醛酸与2‑乙酰氨基‑2‑脱氧‑硫酸‑D‑半乳糖组成,分子结构式为（C14H21NO14S）n。根据硫酸基位置的不同，若在半乳糖的4位上，称为硫酸软骨素A；在6位上，称为硫酸软骨素C；关键是硫酸软骨素的分子量波动范围较大，从1万到5万道尔顿都有；硫酸软骨素的性质，还会因不同来源和不同提取方式而有较大差异。

[0043] 羟丙基甲基纤维素（Hydroxypropyl methyl cellulose，简称HPMC），按2005年版《中国药典》二部收载，其甲基取代度为1.0〜2.0，羟丙基取代度为0.1〜0.34，相对分子质量一般为1万到15万；因此具体HPMC的分子量，完全会因为存在不同程度的羟丙基取代度和甲基取代度而有显著差异。

[0044] 低分子右旋糖酐（Dextran）的分子量范围，从2.5万到4.5万，导致分子量存在较大波动。

[0045] 而且这三个能产生胶体渗透压成份的用量，也是在较大范围内变化，如D4保护液中HPMC的用量低限和高限，相差4倍（低者2克/升，高者达8克/升）；即实际上，这三种成份，一方面，每个成份本身分子量就存在较大变动；第二方面，这三种成份的用量变化也较大；因此实际操作中，仅仅是能产生胶体渗透压的这三种成份，就存大多重变化因素，这样会直接影响D4保护液中的胶体渗透压参数的变动，即存在较多的不确定因素；或者为了能达到预先设定的目标胶体渗透压值，还需要额外增加不必要的调试麻烦，和多次地核实。

[0046] 第四方面，尤其值得注意的是，D4保护液中的渗透压，实际上由晶体渗透压和胶体渗透压联合构成，则至少可以达到600mOsm/kgH2O；这与实际上所预设的保护液本来要达到的保护目的，并不能有效吻合；甚至可能还会产生相反或明显不良的副作用。

[0047] 第五方面，D4发明的保护液成份实际上很复杂，事实上有近二十种之多；因为成份众多，针对配制该脱细胞保护液所需的成份和对应剂量，实际操作难度大和复杂性增强，平添了更多的不确定性，进而易对效果带来更多的波动和变化。

[0048] 第六方面，D4发明的脱细胞保护液中，至少用了两个细胞培养用的试剂级产品；一个是前述DMEM细胞培养基粉末，另一个是HEPES缓冲液(非离子两性缓冲液，成份为4‑(2‑羟乙基)‑1‑哌嗪乙磺酸)；仅仅就是这两个成份,价格就不便宜，如赛默飞HEPES每20ml市场价达400多元，这直接导致该抗氧化脱细胞保护液使用成本相当贵。

[0049] 第七方面，D4是在全过程中，都使用抗氧化的脱细胞保护液;而实际上，在脱细胞过程处理中，细胞膜已经完全破裂，导致实际上该D4保护液，在本质上，已经完全不能起到其所宣称的保护作用。

[0162] 实施例一 F2保护液和助悬液的制备（本发明要点之一）一）F2保护液，包括二类成份，即等渗剂和溶酶体稳定剂。

[0163] 第一步：将等渗液，在本发明中，使用商品化的等渗性全肠灌洗液（源自深圳万和制药有限公司，商品名称，和爽；通用名称为：复方聚乙二醇电解质散（II），即聚乙二醇4000，60克、无水硫酸钠5.68克、氯化钠1.46克、氯化钾0.75克、碳酸氢钠1.68克；加水配成升；即制成钠离子125mmol/L、钾离子 10mmol/L、碳酸氢根离子 20mmol/L、硫酸根离子
40mmol/L、氯离子 35mmol/L的全肠等渗性溶液；配制后，充分混匀；并将pH值调至7.4。

[0164] 第二步：添加少量的溶酶体稳定剂，即NSAID药物，具体而言，选择阿斯匹林，用量为每升保护液添加0.2克（质量浓度比）阿斯匹林，到第一步制得的溶液（等渗性全肠灌洗液）中，充分搅拌混匀，并置于4摄氏度保存待用。

[0165] 二）助悬液配制，按甘油浓度为0.5%（W/V）和透明质酸钠浓度为0.2%(W/V)，透明质酸的分子量为120‑150万道尔顿；使用磷酸盐缓冲液，调整助悬液pH为7.10，渗透压为330mOsmol/L；常温保存待用。

[0166] 实施例二 常规ECM微粒的制备（即对照组ECM，未使用保护液浸泡）。

[0167] （1）灭活：取猪小肠粘膜下层，使用浓度为1％过氧乙酸和浓度为20％乙醇的混合水溶液，超声条件下，室温浸泡60min，进行灭活。

[0168] （2）脱细胞：将灭活后SIS先用水在超声条件下清洗，分装成小包装，快速冷冻过夜，次日化冻，重复“清洗‑分装‑冷冻‑化冻”冻融步骤；使用含0.05%胰蛋白酶和含0.05％EDTA的混合水溶液，超声条件下，36±2℃处理，之后使用PBS超声清洗；于15%氯化钠高渗溶液中，超声条件下，36±2℃处理，之后用水清洗；于浓度为25mM的NaOH水溶液中，超声条件下，36±2℃处理；之后使用水超声清洗直至中性；加DNA酶处理，以去除残留的DNA。

[0169] （3）冻干：将SIS片叠加，固定于模具上，冷冻干燥。

[0170] （4）制粒：将冻干后SIS剪成小碎片，经液氮冷冻后粉碎，使用不同目数的不锈钢筛网筛分，得到微粒大小在50μm‑400μm范围的ECM微粒。

[0171] （5）分装：将ECM微粒称重，将如100mg、200mg或300mg分装于COP注射器内，加塞密封。

[0172] （6）灭菌：选择钴60灭菌方式，辐射剂量为25kGy‑30kGy。

[0173] 实施例三 制备ECM微粒（即制备高活性ECM，使用低温F2保护液浸泡）基本上同实施例二的工艺步骤相同，区别点在于，在预处理前或预处理时，即在靶组织离开活体后（动物活体组织通常为35‑39℃之间，更常见36‑38℃），立即使用实施例一制备的F2保护液，对靶组织（也可以包括对靶器官），对猪小肠粘膜下层（SIS），（注明：当然本技术领域，IPC主分类号为A61L27的技术人员，完全也可以合理逻辑推导出，本发明的保护液，同样也适用于其他等同或同类的待脱细胞组织或器官）；使用本发明的保护液在低温（2‑8℃）条件下，对待脱细胞组织，浸泡至少一个小时，以保护细胞外基质中活性成份和或各类细胞生长因子不易被降解和破坏。

[0174] 其余步骤（如灭活、脱细胞、冻干、制粒、分装和灭菌）完全同实施例二。

[0175] 实施例四 ECM中有效成分的检测（bFGF,Wnt2b）采用ELISA试剂盒法，对实施例2、实施例3制得的ECM中相关成分进行检测。

[0176] 需要注意的是，对两个实施例中制备的ECM样品进行检测前预处理，要使用尿素肝素溶液（非酶降解方式），并按文献方法进行操作。针对实施例2‑3制备获得ECM中的相关活性成分（生长因子）检测，在本发明中，检测ECM活性成分，主要针对的是典型再生生长因子，也是与干细胞再生，如生发密切相关的细胞因子，即碱性成纤维细胞生长因子（bFGF），采用ELISA法；检测结果分别是：实施例2的ECM中bFGF含量为12.76+/‑0.71pg/mg，Wnt2b的含量为48.79+/‑
0.18pg/mg；
实施例3（使用了本发明的F2保护液进行浸泡）的ECM中bFGF含量为20.18+/‑
0.51pg/mg；Wnt2b的含量为76.11+/‑0.48pg/mg。

[0177] 小结：靶组织离开活体（36‑38℃）后，使用低温保护液浸泡，再进行后续的包括脱细胞工艺的处理；经过这类保护液浸泡处理，可显著提高脱细胞基质（ECM）中各类功能和或生长因子及蛋白的含量。

[0178] 根据本发明原理和实际检测结果，可以符合逻辑地科学推导出，本发明制备的ECM（使用保存液浸泡）能较好地保留ECM中的再生相关活性成分（如Wnt蛋白、bFGF等），这可以说明本发明制备的ECM，具有更好的天然ECM结构，可以更好地去与靶部位细胞或干细胞表面的整合素相结合，促进受施部位干细胞信号的激活或组织的再生，激发主要干细胞的活性，启动各类靶组织的修复与再生；在本专利中，特别是刺激包括毛发再生相关组织，如促进DPC和HFSC干细胞活化；并为毛发再生再长，提供丰富高效的物质基础和有力地微环境（Niche）保障。

[0179] 实施例五 两类ECM混合制剂的促生发效果试验对实施例2、实施例3制得的ECM微粒，分别与实施例1制备助悬液充分混匀，制成可注射的混悬剂，命名为A3和A2。然后进行动物试验，动物促毛发生长的试验结果,初步结果表明，A3组的动物试验促毛发生长的效果，明显优于A2组。