[0001] 本发明属于医疗诊断仪器试剂技术领域，具体涉及一种线性宽范围血球仪试剂及其制备方法。

[0002] 血液分析是现代医学诊断中不可或缺的一部分，广泛应用于临床诊断、疾病监测和健康检查。血球仪作为一种重要的血液分析工具，能够快速、准确地检测血液中的各种细胞成分，如红细胞、白细胞和血小板等。然而，现有的血球仪试剂在检测范围和准确性等方面存在一定的局限性。

[0003] 现有的血球仪试剂制备过程复杂，不利于大规模生产和应用，且部分试剂为进口试剂，不仅周期长且价格高。同时，许多现有的血球仪试剂只能覆盖有限的检测范围，无法满足临床对广泛血液参数的需求，例如，某些试剂在检测低浓度或高浓度血液样本时，可能会出现误差或无法检测。此外，传统试剂在储存和使用过程中容易受到环境因素的影响，导致检测结果不稳定。

[0004] 中国专利CN 104698157 B涉及一种血细胞分析仪用试剂，所述试剂由稀释液、EOI溶血剂、LH溶血剂、EOII染色液和清洗液组成，此试剂使用范围广，适用机型多，检测结果准确，与原装血球试剂的线性回归后相关系数R值达到0.99以上，体现为较好的相关性，而且试剂原材料无毒无害，有利于该血细胞分析仪用试剂的推广和应用。然而，此试剂不涉及抗凝性的研究，而抗凝剂不仅涉及到采血后样本的处理和保存，且其选择对于血细胞的计数和分类至关重要。

[0005] 因此，亟需开发一种线性宽范围血球仪试剂，使得试剂检测结果稳定、准确。

[0041] 以下将结合具体实施方案来说明本发明。需要说明的是，下面的实施例为本发明的示例，仅用来说明本发明，而不是用来限制本发明。在不偏离本发明主旨或范围的情况下，可进行本发明构思内的其他组合和各种改良。

[0042] 按照以下实施例和对比例规定的各原料的配比及制作方法，制作各血球仪试剂。

[0043] 为了方便本领域技术人员实施本发明，现对实施例和对比例的部分原料厂家进行如下说明：

[0044] 聚次甲基染料：购自多荧生物科技公司；

[0045] 聚氧乙烯月桂醚：购自湖北鑫宇宏生物医药技术有限公司，型号N/A；

[0046] 烷基酚聚氧乙烯醚：购自江苏省海安石油化工厂，辛基酚聚氧乙烯醚OP‑10和壬基酚聚氧乙烯醚NP‑10；

[0047] 其他原料不做特殊说明，均可购自市场。

[0048] 制备例1

[0049] 抗凝剂A的制备方法，包含如下步骤：

[0050] S1.将30mmol 2,2‑二异戊基‑1,3‑丙二醇、250mmol 2‑羟基‑4‑戊烯酸加入至反应釜中，通入氮气，加热至130℃，加入25mmol对甲基苯磺酸，保温反应4h，减压继续反应3h，降温至50℃，加入200ml丙酮，搅拌30min，再加入正己烷直至不再有沉淀物析出，过滤，得到沉淀产物；

[0051] S2.将步骤S1得到的20mmol沉淀产物、200ml丙酮混合，搅拌回流至溶解，加入164mmol 2‑氯丙酸，通入氮气，加热至60℃，加入15mmol氯化铁，保温反应3h，冷却至室温，得到中间产物；

[0052] S3.将48mmol氢化钠分散于50ml四氢呋喃中，得到氢化钠溶液，备用；将氢化钠溶液滴入步骤S2得到的15mmol中间产物中，反应10h，加入33mmol1,3‑丙烷磺内酯，继续搅拌反应12h，过滤，得到的固体溶于50ml二甲基亚砜中，再加入四氢呋喃沉淀直至不再有沉淀物析出，将沉淀得到的粗产物于70℃真空干燥3h，用二次水透析5d，透析产物再于100℃真空干燥3h，得到抗凝剂A。

[0053] 制备例2

[0054] 抗凝剂B的制备方法同实施例1，区别在于步骤S1中2‑羟基‑4‑戊烯酸的加入量为235mmol。

[0055] 制备例3

[0056] 抗凝剂C的制备方法同实施例1，区别在于步骤S3中1,3‑丙烷磺内酯的加入量为27mmol。

[0057] 制备例4

[0058] 稳定剂A的制备方法，包含如下步骤：

[0059] 将1mol 1,3‑苯并噻唑‑2‑羰酰氯、200ml四氢呋喃加入至反应釜中，搅拌1h溶解，加入1.2mol三乙胺，通入氮气，搅拌15min，0℃的冰水浴下逐滴加入1.75mol 2‑苯乙硫醇，加热至55℃，反应6h，用乙酸乙酯萃取分层，取有机相用无水硫酸钠干燥4h，再旋转蒸发，并用色谱柱分离提纯，洗脱剂为体积比为12:1的石油醚和乙酸乙酯，得到稳定剂A。

[0060] 制备例5

[0061] 稳定剂B的制备方法同制备例4，区别在于2‑苯乙硫醇的加入量为1.45mol。

[0062] 实施例1

[0063] 一种线性宽范围血球仪试剂，所述血球仪试剂由稀释液、溶血剂、染色剂和清洗液组成；其中，

[0064] 所述稀释液的组分及含量为：氯化钠4g/L，硫酸钠2.5g/L，硼酸1.5g/L，抗凝剂A0.5g/L，Proclin 3000.3g/L；

[0065] 所述溶血剂的组分及含量为：氯化钠2g/L，十二烷基三甲基氯化铵1.5g/L，十六烷基三甲基氯化铵2g/L，聚氧乙烯月桂醚2.5g/L，辛基酚聚氧乙烯醚OP‑102.5g/L，稳定剂A2g/L，EDTAK20.2g/L，Triton X‑1001.25g/L，4‑羟乙基哌嗪乙磺酸4.5g/L，丁二酸0.8g/L；

[0066] 所述染色剂的组分及含量为：聚次甲基染料0.025g/L，甲醇30g/L，乙二醇950g/L；

[0067] 所述清洗液的组分及含量为：氯化钠7.5g/L，壬基酚聚氧乙烯醚NP‑103.5g/L，硼酸1.75g/L，Proclin 3000.2g/L，碱性蛋白酶2.6g/L，丝氨酸蛋白酶6.4g/L。

[0068] 本实施例的血球仪试剂的制备方法，包含如下步骤：

[0069] 将稀释液、溶血剂、染色剂和清洗液中的各组分按比例混合配料后进行粗滤，再用0.22μm的滤膜进行超滤，包装，得到血球仪试剂。

[0070] 实施例2

[0071] 一种线性宽范围血球仪试剂，所述血球仪试剂由稀释液、溶血剂、染色剂和清洗液组成；其中，

[0072] 所述稀释液的组分及含量为：氯化钠3g/L，硫酸钠2g/L，硼酸1g/L，抗凝剂A0.3g/L，Proclin 3000.2g/L；

[0073] 所述溶血剂的组分及含量为：氯化钠1.6g/L，十二烷基三甲基氯化铵1g/L，十六烷基三甲基氯化铵1.8g/L，聚氧乙烯月桂醚2g/L，辛基酚聚氧乙烯醚OP‑102g/L，稳定剂A1.6g/L，EDTAK20.1g/L，Triton X‑1001g/L，4‑羟乙基哌嗪乙磺酸3g/L，丁二酸0.6g/L；

[0074] 所述染色剂的组分及含量为：聚次甲基染料0.015g/L，甲醇25g/L，乙二醇900g/L；

[0075] 所述清洗液的组分及含量为：氯化钠5g/L，壬基酚聚氧乙烯醚NP‑102g/L，硼酸1g/L，Proclin 3000.1g/L，碱性蛋白酶2g/L，丝氨酸蛋白酶4g/L。

[0076] 本实施例的血球仪试剂的制备方法同实施例1。

[0077] 实施例3

[0078] 一种线性宽范围血球仪试剂，其特征在于，所述血球仪试剂由稀释液、溶血剂、染色剂和清洗液组成；其中，

[0079] 所述稀释液的组分及含量为：氯化钠5g/L，硫酸钠3g/L，硼酸2g/L，抗凝剂A0.6g/L，Proclin 3000.4g/L；

[0080] 所述溶血剂的组分及含量为：氯化钠2.4g/L，十二烷基三甲基氯化铵1.5g/L，十六烷基三甲基氯化铵2.7g/L，聚氧乙烯月桂醚3g/L，辛基酚聚氧乙烯醚OP‑103.5g/L，稳定剂A 2.4g/L，EDTAK20.3g/L，Triton X‑1001.5g/L，4‑羟乙基哌嗪乙磺酸6g/L，丁二酸1g/L；

[0081] 所述染色剂的组分及含量为：聚次甲基染料0.035g/L，甲醇35g/L，乙二醇1000g/L；

[0082] 所述清洗液的组分及含量为：氯化钠10g/L，壬基酚聚氧乙烯醚NP‑104.5g/L，硼酸2.5g/L，Proclin 3000.3g/L，碱性蛋白酶3g/L，丝氨酸蛋白酶9g/L。

[0083] 本实施例的血球仪试剂的制备方法同实施例1。

[0084] 实施例4

[0085] 一种线性宽范围血球仪试剂及其制备方法，具体实施方式同实施例1，区别在于用等量稳定剂B替代稳定剂A。

[0086] 实施例5

[0087] 一种线性宽范围血球仪试剂及其制备方法，具体实施方式同实施例1，区别在于用等量抗凝剂B替代抗凝剂A。

[0088] 实施例6

[0089] 一种线性宽范围血球仪试剂及其制备方法，具体实施方式同实施例1，区别在于用等量抗凝剂C替代抗凝剂A。

[0090] 实施例7

[0091] 一种线性宽范围血球仪试剂及其制备方法，具体实施方式同实施例1，区别在于用等量EDTA2K替代抗凝剂A。

[0092] 对比例1

[0093] 一种线性宽范围血球仪试剂及其制备方法，具体实施方式同实施例1，区别在于不加入稳定剂A。

[0094] 效果评价：

[0095] 将上述实施例1‑7以及对比例1制得的血球仪试剂进行测试分析。

[0096] 性能测试：

[0097] 将制得的血球仪试剂与日本希森美康公司的XN试剂共同用于同样血液样本的检测。

[0098] 在配置试剂后立即测试，得到白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板、白细胞、中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、嗜酸细胞百分比、嗜碱细胞百分比各指标的测试结果，实施例1‑3制得的试剂与XN试剂相关系数均大于0.97，尤其是实施例1的相关性高达0.999，而实施例4‑7以及对比例1的数据与进口XN试剂相关系数均小于0.97。

[0099] 在配置试剂保存48h后进行测试，得到白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板、白细胞、中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、嗜酸细胞百分比、嗜碱细胞百分比各指标的测试结果，实施例1‑3制得的试剂与XN试剂相关系数均大于0.95，尤其是实施例1的相关性高达0.99，而实施例4‑7以及对比例1的数据与进口XN试剂相关系数均小于0.95。

[0100] 以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本申请做任何形式的限制，虽然本申请以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限制本申请，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本申请技术方案的范围内，利用上述揭示的技术内容做出些许的变动或修饰均等同于等效实施案例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于技术方案的范围内。