[0001] 本发明涉及复合茶饮料技术领域，尤其涉及一种具有降糖降脂功效的复合茶固体饮料及其制备方法与应用。

[0002] 糖脂代谢是机体能量与物质来源的重要生命过程，其稳态平衡是机体应对内外环境变化的重要前提。相反，当其出现稳态失衡时则会诱发Ⅱ型糖尿病、非酒精性脂肪肝、高脂血症和肥胖症等导致多种严重威胁人类健康的重大代谢性疾病。研究表明神经内分泌轴功能障碍、胰岛素抵抗、氧化应激、慢性炎症反应以及肠道微生物群失调等病理机制均会诱导上述糖脂代谢紊乱类慢性病。其中，非酒精性脂肪肝作为糖脂代谢紊乱中一种典型的疾病，其发病率已上升到流行程度，对人类健康构成严重威胁。

[0003] 绿茶(Green tea，GT)作为一种未发酵茶，深受人们的喜爱，绿茶中含量最高的儿茶素是表没食子儿茶素没食子酸酯((‑)‑epigallocatechin gallate，EGCG)，被证明具有许多健康功效，如在控制体重和预防糖尿病方面。绿茶及其成分可预防改善高脂饮食诱发的基础代谢紊乱。虽然这些研究的剂量、途径和干预时间的处理各不相同，但与对照组相比，绿茶及其成分可以显著改善血液生化特征和肝脏组织学参数，并不同程度地缓解肝脏脂质积累。在人类中，流行病学研究表明，长期食用GT可能与降低糖尿病发病率有关，许多随机对照试验报道，每日食用GT可增强健康人群的口服葡萄糖耐量，并降低有糖尿病风险人群的空腹血糖和糖化血红蛋白水平。六安瓜片(Lu’an Guapian，LAGP)属于绿茶类，产于安徽六安，为中国十大名茶之一，有着悠久的历史底蕴和深厚的文化内涵，深受消费者喜爱，并且具有改善脂质代谢紊乱的作用。

[0004] 决明子(Cassia，CS)是国家卫健委批准的食品和药品同源物质之一，具有抗高血脂血症和保肝作用，降低高脂血症模型血清中总胆固醇和甘油三酯等功效。在现代临床中医中，决明子已被广泛用于治疗高脂血症和糖尿病。一项研究在对决明子乙醇提取物进行亚慢性毒性评估后未观察到与治疗相关的不良反应，表明该提取物相对安全。

[0005] 枸杞(Lycium barbarum，LB)含有多种生物活性化合物，分布于果皮和种子的各个层，尤其是核果的外果皮和内果皮，主要包括多糖、酚类化合物、类胡萝卜素、脂肪酸、蛋白质、有机酸(柠檬酸、草酸等)、维生素、矿物质和萜类等化合物。目前，枸杞干预对肝脏疾病作用效果及其机制的研究重要集中在缓解氧化应激、抑制炎症、抗凋亡和调节脂代谢等方面。枸杞中的甜菜碱可以抑制脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪酸合成，刺激脂肪酸氧化和脂质分泌，促进线粒体含量和活性，从而脂质和能量代谢的调节。

[0006] 目前，六安瓜片、决明子、枸杞均可单独作为膳食补充剂，且都具备减肥或者降血糖的功效，但上述三种药食同源草本单独使用在对代谢综合征(降血糖、降血脂和减肥，和保护血管)的防治方面尚缺乏系统的研究，三者联合使用也鲜见报道，相关功能型产品开发尚处于起步阶段。

[0007] 公布号为CN106070810A的中国专利申请文献，公开了一种具有降血压效果的六安瓜片及其制备方法，属于六安瓜片技术领域，该六安瓜片是由以下重量份的成分制成：六安瓜片28～32、野菊花5～7、夏枯草10～12、罗布麻叶7～9、决明子4～5、白砂糖2～4、枸杞11～13和强化剂6～8。其具有降血压作用，长期饮用能降低血压；属于纯天然产品，无毒副作用，可以长期饮用；具有清热解毒，利尿解乏。

[0008] 公布号为CN104783268A的中国专利申请文献，公开了一种决明子枸杞口服液及其制备方法，涉及保健饮品领域，该方法包括以下步骤：首先称取决明子，加入纯净水浸泡1h后，加入酪蛋白钠，制浆后经过滤无沉淀，得到决明子原浆；称取枸杞干果，加入纯净水浸泡12h后，加入酪蛋白钠和大豆卵磷脂，制浆后经过滤无沉淀，得到枸杞原浆；将决明子原浆和枸杞原浆放入匀浆机中，加入黄原胶进行匀浆处理；将匀浆后的溶液灭菌、灌装，即制成决明子枸杞口服液。该方法对决明子和枸杞中活性成分的提取率高，产品保健效果好。

[0009] 上述专利混合使用多种原料或仅使其中两种原料，并未公开本发明的将六安瓜片、决明子和枸杞三种原料的联合使用制备具有降糖降脂功效茶固定饮料。

[0039] 为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0040] 下述实施例中所用的试验材料和试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

[0041] 实施例中未注明具体技术或条件者，均可以按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。

[0042] 一种复合茶，包括以下重量份的组分：六安瓜片40～60份、决明子20～30份和枸杞子20～30份和六安瓜片20～30份、决明子20～30份和枸杞子40～60份。

[0043] 在本发明中，所述复合茶的制备方法包括：分别将六安瓜片、决明子和枸杞进行粉碎过80目筛后，进行提取、过滤、浓缩、冷冻干燥、包装等工艺生产出供冲调具有降糖降脂功效的固体饮料。

[0044] 本发明还提供了所述复合茶在制备预防糖脂代谢的食品和保健品中的应用。具体的所述预防糖脂代谢紊乱包括降低血糖、减低血脂。

[0045] 在本发明中，所述食品或保健品可以是本领域已知的各种剂型，包括但不限于片剂、粉剂、颗粒剂、口服液等。在本发明中，所述食品或保健品中除了复合茶外，还可以包括食品或保健品的辅料。下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

[0046] 实施例1：

[0047] 一种复合茶固体饮料的制备方法，包括以下步骤：

[0048] (1)将六安瓜片、决明子、枸杞按重量比1：1：2，分别粉碎、过80目筛后，混匀，得到混合料；

[0049] (2)向混合料中加水，其中料液比为1g:20mL，85℃加热回流60min，过滤，浓缩，冷冻干燥，即得。

[0050] 实施例2：

[0051] 本实施例与实施例1的区别在于：六安瓜片、决明子、枸杞的重量比为2：1：1，其他步骤同实施例1。

[0052] 实施例3：

[0053] 本实施例与实施例1的区别在于：六安瓜片、决明子、枸杞的重量比为1：1：1，其他步骤同实施例1。

[0054] 实施例4：

[0055] 本实施例与实施例1的区别在于：六安瓜片、决明子、枸杞的重量比为1：2：1，其他步骤同实施例1。

[0056] 六安瓜片(LAGP)、决明子(CS)、枸杞(LB)以及实施例1～4制得的不同配比的复合茶的性能测试

[0057] 1、对ɑ‑淀粉酶的抑制作用：

[0058] 血糖升高与α‑淀粉酶和密切相关，α‑淀粉酶能将淀粉等碳水化合物水解为低聚糖，而α‑葡萄糖苷酶将葡萄糖进一步降解成低聚糖。抑制α‑淀粉酶是对抗高血糖和Ⅱ型糖尿病的主要策略之一。

[0059] 将六安瓜片、决明子、枸杞样品用0.1mol/mL磷酸缓冲液(PBS；pH6.8)溶液配制成0.625、1.25、2.5、5.0mg/mL的样品溶液，取0.4mL样品溶液，分别加0.2mL 1％淀粉溶液(0.1mol/mL PBS配制，已预温)，40℃水浴5min，再加入0.2mL 0.5mg/mLα‑淀粉酶溶液(3700U/mg)(0.1mol/mL PBS配制)，40℃水浴10min，加入0.4mL DNS，95℃沸水浴4min，立即冰浴，于540nm处测定其吸光度值。用阿卡波糖做阳性对照组。

[0060] 由图1可知，六安瓜片决明枸杞对α‑淀粉酶均具有一定的抑制作用，且具有一定的量效关系。当浓度为5mg/mL时(不同配比复合茶的浓度是指混合料的浓度，例如配制5mg/mL：称取六安瓜片10g，决明子5g，枸杞5g，料液比为1g:20mL，加入400mL水在85℃下进行提取60min，过滤、浓缩、冷冻干燥得其冻干粉，称取复配物冻干粉5g，加入1mL水配制而成)，六安瓜片、决明子、枸杞和阿卡波糖对α‑淀粉酶的抑制率分别为38.49％、20.32％、76.84％、78.89％；在2.5mg/mL浓度时六安瓜片：决明子：枸杞＝1：1：2抑制率最高为60.10％，且与其它剂量组有明显的差异(如图2所示)。

[0061] 2、对棕榈酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗葡萄糖消耗量的作用：

[0062] 正常机体内，细胞利用胰岛素将葡萄糖分解，为机体提供能量。当机体产生胰岛素抵抗时，细胞对胰岛素敏感性降低，导致细胞对葡萄糖摄取量下降。使用改善胰岛素抵抗的药物会提高细胞对葡萄糖的消耗量，进而达到降糖效果。

[0063] 细胞经消化调整细胞浓度至5×104个/mL，将细胞接种于24孔板，每孔1mL。待细胞贴壁后，弃去原有的完全培养基，用PBS清洗2遍，加入无血清培养基进行饥饿12h，每孔1mL。待细胞处于相同状态后，弃去原有培养基，用含有0.25mM棕榈酸的5％ FBS的培养基作用于HepG2细胞24h，试验分组如下：

[0064] 空白对照组(5％ FBS培养基)，

[0065] 正常细胞对照组(5％ FBS培养基)，

[0066] 模型细胞组(0.25mM棕榈+5％ FBS培养基)。

[0067] 六安瓜片水提物、决明水提物、枸杞水提物25μg/mL、以及混合水提物(六安瓜片：决明：枸杞＝1：1：1、六安瓜片：决明：枸杞＝1：2：1、六安瓜片：决明：枸杞＝1：1：2、六安瓜片：决明：枸杞＝2：1：1)25μg/mL，每组6个重复，24h后弃去原有培养基，PBS洗两遍，每孔加入无血清无酚红高糖DMEM培养基，2min后每孔取2μL的培养基，用葡萄糖氧化酶试剂盒来测定培养基的糖残留量，每孔200μL，放入37℃温箱孵育30min，检测505nm处的吸光度。各组对IR‑HepG2细胞的葡萄糖消耗量影响见图3所示。

[0068] 与正常组相比，模型组细胞的葡萄糖消耗量显著降低；与模型组相比，LAGP、CS、LB细胞的葡萄糖消耗量都有明显提高。这说明LAGP、CS、LB能有效提高IR‑HepG2细胞对葡萄糖的消耗量，而复配干预组六安瓜片：决明：枸杞＝1：1：2干预时葡萄糖消耗量最高，与其它不同配比组和六安瓜片、决明子、枸杞组相比干预效果最好。

[0069] 3、对棕榈酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗糖原合成的作用：

[0070] 细胞摄取葡萄糖经各种酶作用合成糖原，糖原的合成与分解对维持血糖平衡极为重要。

[0071] 细胞经消化调整细胞浓度至5×104个/mL，将细胞接种于24孔板，每孔1mL。待细胞贴壁后，弃去原有的完全培养基，用PBS清洗2遍，加入无血清培养基进行饥饿12h，每孔1mL。待细胞处于相同状态后，弃去原有培养基，用含有0.25mM棕榈酸的5％ FBS的培养基作用于HepG2细胞24h，试验分组如下：

[0072] 空白对照组(5％ FBS培养基)，

[0073] 正常细胞对照组(5％ FBS培养基)，

[0074] 模型细胞组(0.25mM棕榈+5％ FBS培养基)。

[0075] 六安瓜片水提物、决明水提物、枸杞水提物25μg/mL、以及混合水提物(六安瓜片:决明:枸杞＝1：1：1、六安瓜片:决明:枸杞＝1：2：1、六安瓜片:决明:枸杞＝1：1：2、六安瓜片:决明:枸杞＝2:1:1)25μg/mL，每组6个重复，24h后弃去原有培养基，PBS洗两遍，每孔加入胰酶消化后加入培养基终止消化，将每孔含有细胞的培养基移至EP管，离心弃上清，PBS重悬洗2遍，离心后弃上清。每管加入500μL提取液超声破碎细胞(功率为20％，超声3s，间隔
10s，重复30次)；转移至10mL试管中，置于95℃水浴20min，用胶塞塞住管口，防止水分散失，每隔5min震荡试管1次，使充分混匀；取出试管冷却后，用蒸馏水定容至1mL，混匀，8000rpm 
25℃离心10min，取上清液于620nm处测定吸收波长

[0076] 各组对IR‑HepG2细胞合成糖原的影响见图4所示。LAGP、CS、LB处理后的IR‑HepG2细胞的糖原含量得到显著提高，与LAGP、CS相比，LB的干预效果最好、LAGP次之、CS最差；在相同浓度不同配比的六安瓜片决明枸杞相比，六安瓜片：决明子：枸杞＝1：1：2干预效果最好。

[0077] 4、对胰脂肪酶的抑制作用：

[0078] 脂肪酶，人体常见的一种酶类，能将食物中是甘油三酯水解成甘油和游离脂肪酸，使其被小肠吸收重新合成甘油三酯，导致脂质在体内大量累积，不被代谢排出。因此，在体外降脂高效评价中，常将脂肪酶的抑制率作为评判标准。

[0079] 分别精确称取0.01g六安瓜片决明子枸杞三种提取物于各烧杯中，加水溶解。转移到10mL容量瓶中定容，即得样品的浓度为5000μg/mL。放置4℃冰箱备用。准确吸取50μL不同浓度(625、1250、2500、5000μg/mL)样品溶液于试管中，再分别加入150μL猪胰脂肪酶溶液与350μL缓冲液，37℃预热10min，随后加入450μL底物溶液，充分混匀后置于37℃烘箱反应2h。
随后，12000rpm离心10min，取上清液，405nm测吸光值。每组三个平行。对照组用缓冲液代替酶液

[0080] 不同浓度下六安瓜片水提物、决明水提物、枸杞水提物对脂肪酶的抑制效果如图5所示。由图5可知，在一定浓度下，三种提取物对胰脂肪酶均具有一定的抑制活性。当浓度≥1.25mg/mL时，各组对胰脂肪酶表现出一定的抑制功效；当浓度高于1.25mg/mL时，六安瓜片组对胰脂肪酶具有一定的抑制活性；且相较于其它两组，抑制率最高，同时随着浓度的增加，抑制率也逐渐增加，说明其具有一定的量效关系。图6显示当六安瓜片决明枸杞配比为
2:1:1时对胰脂肪酶的抑制率最高为25.01％，且与其它组相比产生明显的差异。

[0081] 5、对棕榈酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗甘油三脂的影响：

[0082] 胰岛素抵抗还与甘油三酯(TG)的过度产生有关。

[0083] 细胞经消化调整细胞浓度至5×104个/mL，将细胞接种于24孔板，每孔1mL。待细胞贴壁后，弃去原有的完全培养基，用PBS清洗2遍，加入无血清培养基进行饥饿12h，每孔1mL。待细胞处于相同状态后，弃去原有培养基，用含有0.25mM棕榈酸的5％ FBS的培养基作用于HepG2细胞24h，试验分组如下：

[0084] 空白对照组(5％ FBS培养基)，

[0085] 正常细胞对照组(5％ FBS培养基)，

[0086] 模型细胞组(0.25mM棕榈+5％ FBS培养基)。

[0087] 六安瓜片水提物、决明水提物、枸杞水提物25μg/mL、以及混合水提物(六安瓜片：决明：枸杞＝1：1：1、六安瓜片：决明：枸杞＝1：2：1、六安瓜片：决明：枸杞＝1：1：2、六安瓜片：决明：枸杞＝2：1：1)25μg/mL，每组6个重复，24h后弃去原有培养基，PBS洗两遍，以上各组经过24h药物处理后，弃掉原有培养基，用预冷的PBS洗两遍，每孔加入150μL RIPA裂解液，1‑2s后离心取上清，用于甘油三脂的检测。

[0088] 正常细胞组相比，模型组的TG的含量显著升高(p＜0.01)。与模型组相比，经由LAGP、CS、LB处理后的IR‑HepG2细胞的甘油三酯含量得到显著降低；与CS、LB相比LAGP的干预效果最好、CS次之、LB最差；在相同浓度不同配比的六安瓜片决明枸杞相比，六安瓜片：决明子：枸杞＝2：1：1干预效果最好。(如图7所示。)

[0089] 6、对棕榈酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗脂肪堆积的影响：

[0090] 细胞经消化调整细胞浓度至5×104个/mL，将细胞接种于24孔板，每孔1mL。待细胞贴壁后，弃去原有的完全培养基，用PBS清洗2遍，加入无血清培养基进行饥饿12h，每孔1mL。待细胞处于相同状态后，弃去原有培养基，用含有0.25mM棕榈酸的5％ FBS的培养基作用于HepG2细胞24h，试验分组如下：

[0091] 空白对照组(5％ FBS培养基)，

[0092] 正常细胞对照组(5％ FBS培养基)，

[0093] 模型细胞组(0.25mM棕榈+5％ FBS培养基)。

[0094] 六安瓜片水提物、决明水提物、枸杞水提物25μg/mL、以及混合水提物(六安瓜片：决明：枸杞＝1：1：1、六安瓜片：决明：枸杞＝1：2：1、六安瓜片：决明：枸杞＝1：1：2、六安瓜片：决明：枸杞＝2：1：1)25μg/mL，每组6个重复，24h后弃去原有培养基，PBS洗两遍，以上各组经过24h药物处理后，弃掉原有培养基，每孔加PBS溶液1mL漂洗细胞两次，然后各孔加入
4％多聚甲醛固定30min。固定完成后，每孔加1mL PBS漂洗细胞2次，然后每孔加1mL 60％异丙醇浸洗。弃掉异丙醇，各孔加入油红O染色液，染色30min；弃掉油红O再加入60％异丙醇浸洗。弃掉异丙醇，每孔加入1mL纯水后，置于显微镜下观察并拍照。根据图8结果显示，正常组的HepG2细胞组只有少量细小的脂滴聚集；而模型组细胞内则有大量脂滴聚集，发生了较为严重的脂肪变性；经过干预组LAGP、CS、LB作用模型细胞开始表现出对脂质沉积的清除作用；在不同配比的水提物中可以看出，六安瓜片：决明子：枸杞＝2：1：1脂滴聚集最少，说明与其它不同配比相比，六安瓜片：决明子：枸杞＝2：1：1效果最好。

[0095] 实施例5：

[0096] 一种复合茶固体饮料的制备方法，包括以下步骤：

[0097] (1)将六安瓜片、决明子、枸杞按重量比3：1：3，分别粉碎、过60目筛后，混匀，得到混合料；

[0098] (2)向混合料中加水，其中料液比为1g:15mL，80℃加热回流70min，过滤，浓缩，冷冻干燥，即得。

[0099] 实施例6：

[0100] 一种复合茶固体饮料的制备方法，包括以下步骤：

[0101] (1)将六安瓜片、决明子、枸杞按重量比2：1：2，分别粉碎、过100目筛后，混匀，得到混合料；

[0102] (2)向混合料中加水，其中料液比为1g:25mL，90℃加热回流50min，过滤，浓缩，冷冻干燥，即得。

[0103] 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。