[0001] 本发明涉及食品技术领域，尤其是涉及一种基于青砖茶水提物的具有降尿酸功效的膳食营养补充剂及其应用。

[0002] 近年来，人群中高尿酸血症(hyperuricemia，HUA)的患病比例也有所增加，并存在患病人群“年轻化”趋势。《中国高尿酸血症与痛风诊疗指南》(2019版)中提出不论性别，个体非同一日2次空腹血尿酸水平超过420μmol/L，即认为该个体患有高尿酸血症，但有研究表明雌激素具有抑制肾脏中尿酸重吸收、促进尿酸代谢的功能，而未绝经女性雌激素分泌旺盛，故在某些规定中将50岁前未绝经女性的高尿酸血症诊断标准进行了区分，调整诊断标准为血尿酸水平超过360μmol/L。按照治疗HUA的作用机理不同，可将目前已有的治疗HUA药物分为尿酸合成抑制剂、促进尿酸排泄药、促进尿酸分解药三类。

[0003] 常用的尿酸合成抑制剂有别嘌呤醇，作用机理为抑制黄嘌呤氧化酶(XOD)活性，使次黄嘌呤及黄嘌呤无法转化为尿酸，从而减少机体尿酸生成量。别嘌呤醇易被机体吸收，进入机体后大部分在肝脏代谢成为氧嘌呤醇，氧嘌呤醇同样具有抑制尿酸合成的功效，这使得药物总体利用率高达八成。除部分肾功能较弱群体用药后可能导致皮肤反应等不良反应外，药物并无绝对禁忌，适用于多数患者治疗过程。另外，还有非布司他、托匹司他、Ulodesine(BCX‑4208)等尿酸合成抑制剂。促进尿酸分解药的作用机理多为抑制肾小管对于尿酸的重吸收作用，从而增加尿酸经肾脏的排泄排泄量以达到降低血尿酸水平的目的。主要药物有苯溴马隆、丙磺舒、Lesinurad(RDEA‑594)、RDEA‑3170(RDEA‑684)等。常见的促进尿酸分解药有重组黄曲霉菌尿酸氧化酶(Rasburicase)和聚乙二醇化重组尿酸氧化酶(Pegloticase)，二者都具有作用迅速、但极易致敏并可能导致痛风反复发作的特点，因而适用范围窄，常用于重度病症治疗。

[0004] 青砖茶属于黑茶，是一种由外源微生物通过堆积发酵而得到的深度发酵茶，发酵方式较之其他茶叶更为独特。主要的产地为鄂南，包括咸宁、通山、崇阳、蒲圻、通城等地，在湖南的小部分地区也有生产。青砖茶茶汤呈红褐色，具有独特的木质和陈年香气，口感苦涩但鲜爽。在营养价值上，青砖茶也有着使人体血糖下降、使人体血脂降低、延缓氧化以及改善肠道菌群等多种保健功能。

[0005] 药食同源食材是中医理论中的瑰宝，不仅具有作为一般食品的营养价值，还具有一定的药用价值。史坤等发现葛根提取物在特定剂量下具备抑制黄嘌呤氧化酶(XOD)活性的能力，进而减少了尿酸的生成，同时葛根提取物还能提升尿酸在原尿液中的溶解程度，通过双重作用有效防止了小鼠血尿酸水平的异常升高。于瑞丽等经过研究发现葛根的水提物和醇提物都展现出显著的降尿酸以及调节血脂功效。在这两种提取物中，醇提物的作用速度更快，效果更明显，不仅能够有效降低尿酸水平，还能同时改善血浆和全血的粘稠度。孟兆青等发现栀子苷降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平，作用机理为促进尿酸排泄。昊杲等研究发现虎杖的主要成分虎杖苷具有显著降低血尿酸水平的功效，但效果不呈剂量依赖性，推测可能是因为存在多种作用靶点，不同浓度下侧重点不同。此外还有如决明子、桑棋、野菊花、青梅、白芷、土获苓、荷叶、炙甘草等食材都具有降尿酸效果。

[0006] 尽管已有降尿酸功能的食品的报道，但大部分都是将不同食材和茶叶炒制得到，例如CN114885996A公开了一种具有降尿酸功能的柒风茶叶及其制备方法，将青钱柳、明日叶、玉米须、葵花盘、葛根、白茅根按比例浸泡，通过萃取、浓缩工艺得到水提取物浓缩液，倒入正在炒制的成品茶叶中，使其充分吸收干燥后，得到常规形态的产品茶叶，因每袋茶叶中含有足够量的中草药提取物，能够充分地溶解于水中，让饮用者在采用常规泡茶方式的情况下，达到显著降低体内血尿酸含量的功效。但炒制茶叶得到的食品，无法最大化地发挥茶叶中的活性成分的功效。

[0041] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，但绝不是对本发明的限制。本技术方案中如未明确说明的制备手段、材料、结构或组成配比等特征，均视为现有技术中公开的常见技术特征。

[0042] 实施例

[0043] 如图1所示，本实施例提供一种基于青砖茶水提物的具有降尿酸功效的膳食营养补充剂，活性成分包括青砖茶水提物和药食同源食材的水提物，通过青砖茶水提物和药食同源食材的水提物进行复配。

[0044] 如图11所示，具体制备及测试过程如下：

[0045] 1)青砖茶水提物的制备

[0046] 称取100g左右青砖茶样品，置于粉碎机中打碎为茶粉。取100g茶粉，以茶粉质量∶热蒸馏水质量＝1∶15的比例混合，热水温度95℃。之后将混合物置于95℃恒温的水浴锅中搅拌提取2h。提取完成后将提取得到的混合液5000rpm离心10min，分离上清液和沉淀物。弃沉淀物，将所得上清液通过旋转蒸发仪浓缩，浓缩液分装后进行冷冻干燥。将冻干产物充分捣碎获得青砖茶水提物粉末，收集装袋。所得青砖茶水提物粉末储存在于‑20℃，用于后续实验。

[0047] 2)体内抗高尿酸实验

[0048] 本研究动物体内实验部分选用3周龄雄性KM小鼠(20.0±2.0g)，购自伊莱克实验动物有限责任公司。所有动物及动物实验操作均已获得上海交通大学动物伦理委员会批准(A2023109)。所有小鼠饲养于上海交通大学实验动物中心，在22‑25℃、湿度40‑60％、12h明暗循环的标准条件无菌动物房内饲养。在进行正式实验处理前，需对小鼠进行7天的适应性饲养，饮食使用正常无菌饲料和灭菌的普通纯净水。

[0049] 在小鼠适应性喂养7天后，将总计60只小鼠随机分为6组，每组10只以降低小鼠个体差异带来的偶然性误差，提高实验结果可信度。6个组别分别计为空白对照组NC、高尿酸血症模型组MC、阳性药物对照组AP、低剂量青砖茶组LD、中剂量青砖茶组MD以及高剂量青砖茶组HD。实验第8‑35d，模拟人类日常饮茶情况，分别根据小鼠饮水量称取青砖茶水提物冻干粉末加入无菌纯净水中，替换低、中、高剂量青砖茶组小鼠的日常饮水。实验第36‑63d，用0.5％ CMC‑Na作为溶剂，分别配制PO和AP悬浊液，PO悬浊液为200mg/kg PO+50mg/kg腺嘌呤，AP悬浊液为10mg/kg剂量的别嘌呤醇。保持低、中、高剂量青砖茶组小鼠特殊饮水条件不变的基础上，每日早晨9∶00给除NC组外各组小鼠灌胃PO悬浊液，NC组灌胃等量0.5％ CMC‑Na，早晨10∶00给AP组小鼠灌胃AP悬浊液，其余各组灌胃等量0.5％ CMC‑Na。实验处理如表1所示：

[0050] 表1动物实验各阶段实验处理

[0051]

[0052]

[0053] PO：氧嗪酸钾；AP：别嘌呤醇；CMC‑Na：羧甲基纤维素钠溶液；mg/kg：每日每千克体重的用量，如300mg/kg则为每日每千克体重用量为300mg。

[0054] 固定时间每两天给所有小鼠记录一次体重，在第61天时使用代谢笼收集小鼠24h排泄的尿液，第62、63天收集小鼠粪便。在第63天最后一次处理的1h后，对小鼠进行吸入式麻醉，之后进行眼眶静脉取血收集全血样本。随后断脊椎处死小鼠，解剖肝脏、肾脏，洗干净表面血污后吸干表面水分称重。取部分肝脏和左肾放入福尔马林溶液中固定；剩余肝脏组织和右肾洗净后放入离心管中冷冻保存。所有组织和样本取样后应尽快存于‑80℃冰箱以备后续检测。

[0055] 3)药食同源食材的水提物(单种食材的水提物)的制备

[0056] 10种食材(菊苣、栀子、茯苓、黄芪、陈皮、百合、薏苡仁、枸杞、黑枸杞以及桑葚)洗净烘干，分别称取5g左右，分别以食材质量∶热蒸馏水体积＝1∶30(g/mL)的比例混合，热水温度90℃。之后将混合物置于90℃恒温的水浴锅中提取30min。收集过滤后的提取液，提取液冷却至室温25℃，待测。

[0057] 4)药食同源食材对黄嘌呤氧化酶(XOD酶)的体外抑制率测定

[0058] 样品对黄嘌呤氧化酶的体外抑制能力评价方法参考刘璐(中草药提取物体外黄嘌呤氧化酶抑制活性及其复合饮料研究[D].华南理工大学,2013.)、姜晗阳(藜蒿复合饮品开发及其降尿酸活性研究[D].华中农业大学,2022.)的方法，并进行融合改动。黄嘌呤氧化酶可以催化底物黄嘌呤反应生成尿酸，而尿酸在295nm紫外条件处有最大吸收吸光值，故通过测定反应体系在295nm紫外条件下一段时间内的吸光度变化值可以得到尿酸的生成量，可以以此衡量体系中黄嘌呤氧化酶的活性。

[0059] 黄嘌呤氧化酶液的制备：用0.2mol/L的磷酸缓冲液(pH7.5)配制0.5U/mL黄嘌呤氧化酶溶液，置于4℃保存。

[0060] 黄嘌呤底物的制备：用少量0.1mol/L NaOH溶液溶解底物黄嘌呤，再用0.2mol/L磷酸缓冲液(pH7.5)稀释为2mg/L黄嘌呤溶液。

[0061] 取0.2mL样品水提液，加入0.2mLXOD酶液(提前于25℃下保温20min)，混合后静置2min，之后加入1mL磷酸缓冲液和2mL底物溶液启动反应。在295nm紫外条件下测定反应体系
6min内的吸光值变化。因为底物黄嘌呤在265nm波长下有最大吸光值，故需减去。空白对照组将样品水提液替换为RO水(反渗透水)，不加酶液组将样品水提液和XOD酶液分别替换为RO水和磷酸缓冲液(pH7.5)。每个样品做三组平行，XOD酶活性抑制率计算公式为：

[0062] 黄嘌呤氧化酶抑制率(％)＝(1‑(B‑C)/(A‑C))×100

[0063] 其中，A为空白对照组吸光度变化值，B为样品组吸光度变化值，C为不加酶液组吸光度变化值。

[0064] 5)制备青砖茶水提物组合物(膳食营养补充剂)

[0065] 按照青砖茶水提物50wt％、降尿酸功效食材30wt％(包括黄芪和茯苓，黄芪和茯苓的质量比为1：1)、调味食材20wt％(选自桑葚、枸杞、陈皮中的一种或多种，具体见表2)的比例分别称取对应食材，放入一次性无纺布茶叶包中。以1∶20(质量比)的比例进行水提30min，温度为95℃。提取液过滤后冷却至室温25℃，稀释5倍待测。调味食材比例如表2所示。

[0066] 表2青砖茶组合物中调味食材含量

[0067]

[0068] 6)青砖茶水提物组合物感官评定

[0069] 将一个10g的青砖茶组合物茶包放入茶杯中，加入300mL煮沸的蒸馏水，泡制5min。之后取出茶包，将茶水混匀，冷却至室温备用。

[0070] 感官问卷采用打分法，总分100分，具体评分标准见表3。

[0071] 表3感官评定标准

[0072]

[0073] 本次感官评定共邀请8名评定员，均来自上海交通大学，年龄为20‑30岁，女性6人，男性2人。评定员到达评定室后，实验人员将准备好的7种茶汤分别倒入7个写有对应编号(采用随机三位数编号)的一次性品评杯中，样品茶汤将与一杯清水一同呈递给评定员。受试者会在测试开始前被告知评价的原则，即：在评价每种样品时应尽量充分地用感觉器官感受样品的特征并如实填写问卷；评价两个样品之间需要用清水充分漱口，可适当休息，以避免样品间相互影响；一旦完成一个样品的评价则不可再次重复品尝样品。最终收到有效问卷8份。

[0074] 分析如下：

[0075] 1)青砖茶水提物主要成分含量

[0076] 青砖茶水提物总酚含量采用Folin‑ciocalteu比色法测定，标准品为没食子酸；总黄酮含量采用比色法进行测定；总可溶性糖含量采用苯酚‑硫酸法测定；TFs、TRs和TBs的含量采用分光光度法进行测定；TA含量通过氨基酸分析仪进行测定，结果如表4所示。主要的次生代谢产物(如儿茶素、没食子酸和嘌呤生物碱)含量采用高效液相色谱法(HPLC，High Performance Liquid Chromatography)同时进行测定，结果如表5所示。

[0077] 表4生物活性成分含量检测结果

[0078]

[0079] 表5儿茶素类、生物碱及没食子酸的含量检测结果

[0080]

[0081] 2)高尿酸血症小鼠模型的建立

[0082] 如表6所示，与空白对照NC组相比，高尿酸血症模型MC组小鼠的血尿酸水平极显著升高，升高了61.8％(p＜0.01)，说明造模很成功。个体体内尿酸升高会加重肾脏的转运代谢负担，故血尿素氮、血肌酐水平常用于评估肾脏受损情况。通过对比发现，MC组的血尿素氮和血肌酐水平的升高都达到了极显著水平，分别升高了197.5％和334.7％(p＜0.01)，说明通过PO建立高尿酸血症小鼠模型可能导致小鼠肾脏严重受损。

[0083] 表6HUA小鼠模型生理指标

[0084]

[0085] 注：与正常组相比，*：p＜0.05，**：p＜0.01；与模型组相比，#：p＜0.05，##：p＜0.01。下同。

[0086] 3)青砖茶水提物对HUA小鼠的影响

[0087] 由图1可知，在整个动物实验期间，小鼠体重总体呈上升趋势，在特殊饮水的第8‑36d中，未喝茶的NC、MC及AP组小鼠的平均体重增长量为9.4g，而喝茶的三组小鼠的平均体重增长量为8.6g，高浓度青砖茶HD组小鼠的平均体重增长量只有8.1g，说明青砖茶可能存在降低小鼠体重或控制小鼠体重增长速度的功效。在给药造模的第37‑63d中，灌胃PO的五组小鼠的体重增长速度相较NC组明显减缓，甚至出现负增长，说明实验所用药物或实验操作可能会导致小鼠体重下降。

[0088] 由图2可以发现，与NC组对比，其余各组小鼠的肾脏及肝脏指数都有所上升其中AP组肾脏指数极显著升高(p＜0.01)，LD组与MD组肾脏指数升高情况达到显著水平(p＜0.05)。LD组肝脏指数升高达到极显著水平(p＜0.01)，其余组别变化未达到显著水平。说明AP及青砖茶水提物对小鼠的肾脏指数具有一定影响。

[0089] 经过处理，小鼠血尿酸、血尿素氮、血肌酐水平结果如图3所示。与模型组小鼠对比，小鼠灌胃高尿酸血症治疗药物AP后三项指标皆极显著下降，分别下降了89.3％、63.8％、76.0％(p＜0.01)，说明10mg/(kg·d)AP对于降低小鼠血尿酸水平十分有效，并可以有效缓解或逆转高尿酸血症对于小鼠肾脏的损伤。

[0090] 低剂量青砖茶LD组、中剂量青砖茶MD组、高剂量青砖茶HD组相较于高尿酸血症模型MC组，血尿酸水平也有所下降，且都达到了显著水平(p＜0.05)，分别降低了21.1％、20.3％和27.8％，说明青砖茶具有一定降低HUA小鼠血尿酸水平的效果，且可能与剂量存在一定关系。LD组与HD组的血尿素氮水平下降了57.0％和56.4％，显著下降(p＜0.05)。从尿酸与尿素氮水平结果来看，低浓度及高浓度青砖茶对于高尿酸血症小鼠的预防及缓解效果更好，且都可以缓解小鼠的肾功能损伤。

[0091] 4)青砖茶水提物对肾脏及肝脏的保护作用

[0092] (1)对肾脏的保护作用

[0093] HUA小鼠饮用青砖茶后血肌酐水平有显著下降，说明青砖茶可能对小鼠的肾脏有保护作用或能缓解小鼠肾脏损伤。图4为各组小鼠肾脏外观图。NC组小鼠肾脏颜色呈暗红褐色，表面光滑，而高尿酸血症小鼠的肾脏颜色明显变浅，且表面变得粗糙。与MC组相比，AP组小鼠的肾脏颜色相对更深，表面也相对更光滑，形态与NC组更相似，说明AP可以有效减轻小鼠的肾脏损伤；而饮用青砖茶的三组小鼠的肾脏颜色也有不同程度的加深，说明青砖茶对于小鼠肾脏也有类似AP的作用。

[0094] 图5为小鼠肾脏H&E切片染色结果，可以发现NC组肾脏未见明显病变或炎症，MC组小鼠的肾脏存在明显的部分肾小球缩小、系膜增厚、肾小管扩张以及炎性细胞浸润现象，呈现明显病变。而经过AP治疗后，小鼠肾脏炎性细胞浸润现象明显减弱，但其他症状未见明显缓解。饮用青砖茶的LD、MD、HD组小鼠肾脏炎症现象也有一定缓解，其中HD组的变化最明显，说明高浓度青砖茶可以缓解小鼠的肾脏炎症。与NC组肾脏切片表现最相似的是HD组，说明高浓度青砖茶对于小鼠肾脏病变可能具有很好的预防或缓解作用。

[0095] (2)对肝脏的保护作用

[0096] 图6为小鼠血清中XOD酶活性的检测结果，可以发现与正常组NC相比，模型组MC的血清XOD水平极显著上升，而经过AP治疗后，阳性对照组AP小鼠的血清XOD活性较模型组有显著下降，甚至低于正常组水平。推测PO可能导致了小鼠肝脏损伤，使得肝脏中的XOD大量释放到血清中，而AP可能缓解了该种损伤。

[0097] 图7为小鼠肝脏的H&E切片染色结果，经过对比并未发现明显区别，故推测小鼠肝脏未出现明显损伤，小鼠血清中的XOD活性改变主要由于肝脏中XOD活性的改变，而与释放到血清中的XOD的量无影响。

[0098] 5)青砖茶水提物肠道菌群及SCFAs的影响

[0099] (1)对肠道菌群的影响

[0100] 图8为各组小鼠肠道菌群丰度结果。通过对比肠道菌群的Chao指数和ACE指数可以发现，与正常组小鼠相比，模型组和AP治疗组小鼠的肠道微生物多样性与丰富度都没有显著变化，而青砖茶处理组的两项数据皆明显上升，说明多样性和丰富度明显增加。而Venn图展示了不同组别肠道菌群的相交情况，所有组别存在800种共同的微生物，但也各自存在独特的类型，而青砖茶处理组和模型组存在很多未相交部分，说明存在较大差异。图8展示了各组小鼠在基因水平上以及以门(phylum)作为区分的组成情况，可以发现肠道菌群的组成也有明显改变。结果说明无论是使用PO构造高尿酸血症小鼠模型，还是使用AP和青砖茶水提物对HUA小鼠进行干预，都会改变小鼠肠道菌群的组成，而青砖茶处理会增加微生物丰度，这可能与青砖茶生产中的发酵过程会引入很多微生物有关。

[0101] 经过数据比对筛选，发现了8种变化较为明显的肠道微生物种类(图9)。结果显示经过PO的模型组小鼠的肠道中的乳酸菌(Lactobacillus)、拟杆菌另支菌属(Alistipes)、颤螺菌属Colidextribacter以及假丝酵母菌属(Candidatus_Saccharimonas)的相对丰度与正常组相比存在一定减少，而普雷沃氏菌属的Prevotellaceae_UCG‑001、Alloprevotella、Prevotellaceae_NK3B31_group以及副拟杆菌(Parabacteroides)的相对丰度存在明显增加。青砖茶处理后，8类微生物的比例都恢复到正常水平，甚至表现更好。值得一提的是，青砖茶处理增加了Oscillospiraceae的相对丰度。已有多项研究对乳酸菌的降尿酸作用及机理进行了探究，发现乳酸菌存在多种降尿酸机制。如可以通过消耗嘌呤、核苷等前体物质减少尿酸的生成、通过抑制XOD酶活性从而减少尿酸生成等。此外，乳酸菌还可以对已生成的尿酸进行分解，从而增加尿酸的排泄。

[0102] 颤螺菌属(Oscillospira)是一类常在肠道中被检测到的微生物，研究表明其与人体健康存在一定关系。有研究发现克罗恩病患者和脂肪性肝炎患者的肠道中的颤螺菌显著减少。此外还有研究发现粪便中胆汁酸浓度增加，颤螺菌数量也同时增加，且颤螺菌的相对丰度与粪便中次级胆汁酸的含量存在比例关系，而次级胆汁酸是一种已知的抵御梭状芽胞杆菌感染的物质。这说明颤螺菌属可能具有缓解炎症反应或作为炎症水平指示指标的作用。另支菌(Alistipes)是一种相对较新的细菌，相关研究并不算多。在致病性方面，有对比证据表明，Alistipes可能对某些疾病具有保护作用，如肝纤维化、结肠炎、癌症和心血管疾病等。但相比之下，其他研究表明，Alistipes在结直肠癌中具有致病性，并且与抑郁症的精神症状有关。普雷沃氏菌和拟杆菌在种群水平的微生物组调查中呈反相关，部分原因是它们是拮抗的。研究表明普雷沃氏菌可以增加小鼠增加硫酸葡聚糖钠诱导的结肠炎的易感性；HIV感染者黏膜和粪便中的普雷沃氏菌水平显著升高，可能促进HIV感染者的慢性炎症。青砖茶水提物可以增加小鼠肠道菌群丰度，减少高尿酸血症小鼠肠道中的致病菌，增加其中的益生菌及其他有益菌相对丰度，通过改善微生物组成来影响高尿酸血症进程。

[0103] (2)对肠道SCFAs的影响

[0104] 肠道中的SCFAs主要由肠道微生物产生，对机体的代谢起着重要作用。乙酸、丁酸等小分子代谢物可以影响机体代谢，调节肠上皮细胞的增殖、抑制炎性反应、纠正嘌呤代谢紊乱状态，从而增加尿酸经肠道排泄量，进而缓解高尿酸血症。健康人群相比，痛风患者产生乙酸盐、丁酸盐的细菌减少，而乙酸盐与丁酸盐可为肠道上皮细胞提供能量，进一步影响肠道上皮细胞中的尿酸转运子数量及分布范围，以促进尿酸的排泄。

[0105] 实验检测小鼠粪便中的主要SCFAs含量(乙酸、丙酸和丁酸)及总酸含量结果如图10所示。与NC组相比，经PO处理的MC组小鼠粪便中的三种酸以及总酸含量都极显著降低了(p<0.01)，以丁酸含量降低最明显，减少了86.4％。而经过AP治疗后的AP组小鼠粪便中三种酸以及总酸含量有一定程度回升，除乙酸含量外，与PO处理的MC组都存在极显著差异。说明造模药物PO可能导致小鼠肠道微生物数量减少或导致微生物代谢产生的SCFAs减少，而采用AP对PO处理导致的高尿酸血症进行治疗，可缓解小鼠肠道SCFAs方面产生的差异。

[0106] 饮用青砖茶的三组小鼠粪便中三种SCFAs和总酸含量相较MC组都有一定程度上升，基本存在显著差异。其中高剂量青砖茶HD组的效果最明显，小鼠粪便中的乙酸、丁酸及总酸含量相较PO处理的MC组大幅度上升，效果都达到极显著水平，说明高浓度青砖茶可能对肠道微生物产生乙酸和丙酸有益，从而影响小鼠体内尿酸水平。

[0107] 6)10种药食同源食材对XOD活性的抑制效果

[0108] 经过检测，选取的十种食材中只有菊苣、栀子、黄芪和茯苓对XOD酶活性具有较明显的抑制效果，故选取黄芪和茯苓作为功效食材进行后续组合物复配(表7)。其余物质虽未表现出明显XOD抑制作用，但仍有研究表明其具有降尿酸效果，故选取风味较好的桑葚、枸杞和陈皮作为调味食材进行后续组合物复配。

[0109] 表7 10种药食同源食材XOD酶活性抑制效果

[0110]

[0111] 7)最佳调味食材组合的确定

[0112] 7种具有不同调味食材组合的青砖茶组合物对XOD酶活性的抑制率测定及感官评定(表8)。调味食材为桑葚和枸杞的青砖茶组合物具有最好的XOD酶抑制效果，抑制率达到18.5％，效果显著。而对比7组青砖茶组合物感官得分，组间并不具有显著差异，故综合各项检测指标，确定青砖茶组合物调味食材的种类和比例分别为桑葚10wt％，枸杞10wt％。结合市面上便携式茶杯容量，确定青砖茶组合物为茶包形式，每包10g，内含青砖茶5g，黄芪
1.5g，茯苓1.5g，桑葚1g，枸杞1g。

[0113] 表8不同青砖茶组合物XOD抑制率及感官评定结果

[0114]

[0115] 经过对选取的十种药食同源食材进行了选择，初步确定了具有降尿酸功效的青砖茶的配方。因产品为青砖茶组合物，故青砖茶的含量占比应最大，定为50％，功效物质定为30％，调味物质定为20％。选取黄芪和茯苓作为功效物质，而因黄芪具有较大中草药气味与滋味，并为改善青砖茶固有的陈味，选取桑葚、枸杞和陈皮来作为调味物质。对具有不同调味物质的青砖茶组合物进行检测，发现桑葚+枸杞组对XOD酶活性具有较好抑制作用，而各组件间感官评定结果不存在显著差异，故确定调味物质组合。

[0116] 本发明以青砖茶水提物作为研究对象，采用动物实验HUA小鼠模型、组织切片H&E染色、16S rRNA测序等方法，研究了三种剂量的青砖茶水提物对高尿酸血症小鼠的影响以及其降尿酸可能的作用因素。动物实验使用了60只KM小鼠，平均分为6组，设置正常组、高尿酸血症模型组、别嘌呤醇治疗组以及低(300mg/kg)、中(600mg/kg)、高(900mg/kg)三种青砖茶剂量组进行研究，除正常组外，其余组都采用连续灌胃200mg/kg PO+50mg/kg腺嘌呤进行高尿酸血症造模。研究主要结论如下：

[0117] (1)青砖茶对高尿酸血症小鼠的影响

[0118] 对造模结果进行评价，发现模型组小鼠血尿酸水平较正常组小鼠极显著升高，说明该造模方法十分成功，同时还通过检测血尿素氮及血肌酐水平发现模型组小鼠存在肾脏损伤。对青砖茶降尿酸效果进行评价，发现三种剂量的青砖茶都可以显著降低高尿酸血症小鼠的血尿酸水平，但作用效果不与剂量呈依赖关系，可能原因是青砖茶的作用因素较多，不同浓度具有不同的作用侧重方面。此外通过血清其他理化指标发现青砖茶可以缓解HUA小鼠的肾脏损伤，恢复肾脏滤过、排泄功能。

[0119] (2)青砖茶水提物降尿酸机制探究

[0120] 高尿酸血症会同时引起小鼠的肾脏损伤，故对不同组别小鼠的肾脏外观形态以及肾脏组织的H&E染色切片结果进行了对比。对比发现模型组小鼠的肾脏外观颜色明显变浅、表面变得粗糙，而经过药物治疗及青砖茶干预后的小鼠肾脏形态与正常组更相似，颜色恢复暗红色，表面也变得更光滑，说明青砖茶可以通过缓解肾脏损伤，增加尿酸排泄以降低尿酸水平。检测小鼠血清中XOD及ADA水平，发现模型组XOD活性水平显著升高，而对比肝脏组织的H&E染色切片结果，发现不同组别小鼠的肝脏组织表现没有明显不同，故推测青砖茶还可能通过抑制机体XOD酶活性以减少尿酸生成。

[0121] 对不同组别小鼠肠道菌群的差异进行分析，发现青砖茶作用组肠道菌群多样性和丰富度都有所上升，肠道微生物组成也发生了改变，表现为逆转了致病菌的上升与益生菌和潜在有益菌的下降，甚至超过原本正常水平；青砖茶组小鼠粪便中的乙酸和丁酸含量相较模型组也有所上升，说明青砖茶水提物可能通过调节肠道菌群及其代谢活性缓解高尿酸血症的症状。

[0122] (3)对10种药食同源食材水提物的XOD酶活性抑制率进行测定，选取黄芪和茯苓作为降尿酸功效食材，桑葚、枸杞和陈皮作为调味食材与青砖茶进行复配。对7组加入不同调味食材的青砖茶组合物进行XOD酶活性抑制率测定及感官评定，综合评价后选择桑葚和枸杞作为调味食材。初步确定产品形式为青砖茶组合物茶包，内含青砖茶水提物5g，黄芪1.5g，茯苓1.5g，桑葚1g，枸杞1g。

[0123] 上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。