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bFGF长循环脂质体、制备及其应用无效专利 发明

技术领域

[0001] 本发明属于药物制剂技术领域,具体而言,涉及一种bFGF长循环脂质体、制备及其应用。

相关背景技术

[0002] 牵张性脊髓损伤是脊柱矫形手术的常见并发症,在早期使用的Harrington、Luque、Dick和Cotrel-Dubousset等脊柱矫形复位手术中时有发生。随着CD、TSRH等三维矫形器械及诱发电位术中监护的相继应用,脊柱侧凸畸形矫正的手术适应证不断扩大,效果也越来越好。但随之而来的医源性牵张性脊髓损伤仍然是个严重的问题。因此,各种原因造成的脊柱过度牵拉并由之引发的脊髓牵张性损伤逐渐被关注。目前对牵张性脊髓损伤的治疗效果和预后均不够理想,主要是因为牵张性脊髓损伤后的病理生理机制非常复杂,对其认识还不够全面、深入。因此,寻求新的、更加有效的治疗方法,以及更透彻地阐明牵张性脊髓损伤所涉及的复杂机制,更有效地评估牵张性脊髓损伤后处理手段的正确性是目前的研究热点。
[0003] 脊髓损伤的治疗至今是个难题,如何有效地治疗脊髓损伤并促进损伤脊髓的功能恢复,一直是国内外研究的重点。应用神经营养因子修复脊髓损伤,是该领域最具潜力的研究方向之一。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)属于成纤维细胞生长因子(FGF)总族,是一种具有广泛生物学活性的肽类生长因子,可诱导起源于中胚层和神经外胚层的多种细胞的增殖与分化,因而在胚胎发育、血管形成、创伤修复等方面发挥着重要作用,其在神经系统中的作用尤为突出。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是近年来被关注程度较高的一种神经营养因子,其神经营养作用包括促进神经细胞再生和存活。在体外试验中发现,bFGF以剂量依赖方式促进多种神经元再生并延长存活时间,且在体内能促进外周神经损伤的修复[8-9]与再生 。bFGF几乎存在于包括中枢神经系统的所有组织中,在中枢神经系统损伤后它可能被释放。近期研究表明,脊髓损伤可明显增加损伤后神经元bFGFmRNA的表达,并且bFGF主要在脊髓中间神经元和前角的运动神经元中表达,其表达的高峰出现于损伤后1~7天,[10]
此后开始逐渐下降 。提示bFGF可能对损伤神经元有保护作用。在体外实验中,bFGF对多种体外培养的神经元都具有营养作用,可以促进突起生长和神经元的成活,有中枢性的神经元,包括皮层、海马、丘脑、脊髓等的神经元;也有周围性神经元,包括视网膜神经节和[11]
睫状神经节细胞。其中中枢神经元较多,说明bFGF对中枢神经的营养作用较强。Kojima等研究发现脊髓损伤后早期连续给予外源性bFGF可以对脊髓损伤区域起到明显的保护作用,促进脊髓功能的恢复。但bFGF如何保护脊髓组织,其间的信号传递通路及存在哪些调控因素,值得研究。bFGF对脊髓损伤后神经细胞凋亡相关蛋白的影响机理也尚待研究。
[0004] 脊髓损伤及其继发性病理生理反应可直接导致神经功能损害,引起组织器官功能障碍,致残率非常高。对其研究的难题之一就是如何建立一个可以确实模拟实际损伤情况、定量的、可重复性的动物模型,使其病理过程能恰如其分地复制到模型动物身上,应用于脊髓损伤后的研究。目前关于脊髓损伤的实验研究多以诱发电位来判断和评价脊髓神经功能的变化,诱发电位检测的解剖生理学基础与脊髓的病理改变密切相关,为临床上如何防止牵张性脊髓损伤提供了重要的实验依据,也为临床脊柱手术中脊髓功能监护提供了有[21-24]益的参考。当脊髓受到牵张性损害时,有学者主张以P1波幅降低50%作为临界线 。
[25-26]
Fehlings等 观察脊髓运动、感觉诱发电位和脊髓血流变化,以了解牵张性脊髓损伤后运动传导束和感觉传导束轴突功能的改变与脊髓血流变化的相互关系。线性判断分析结果显示运动、感觉诱发电位振幅的衰减与脊髓损伤程度和脊髓损伤血流量递减有明显关联,并且认为脊髓损伤程度和损伤部位血流量的下降存在线性关系(r=-0.89)。目前,一些实验研究试图解释牵张性脊髓损伤机制,包括脊髓机械性牵张损伤、脊髓微血管内皮细胞损伤、肿胀和活性胺类或血管收缩因子的释放等,认为牵张性脊髓损伤应是综合因素所致,但确切机制仍不十分清楚。
[0005] 相关的问题还在于,血液循环中的大分子药物(主要为蛋白质及肽类)一直被认为是无法通过血脑(脊髓)屏障的,即使药物进入中枢神经系统也达不到有效剂量。bFGF分子量较大(18KDa),难以通过血脑屏障。且bFGF本身对热、酸和有机溶剂均不稳定,56℃作用5min或酸性条件下(pH=2.0)作用2h可失活。在体内复杂内环境下半衰期很短,仅[14]3~5分钟即在生物体内被迅速灭活而无法达到治疗目的 。目前尚无使用bFGF的具体方案,其使用剂量和疗程也有待作进一步研究。因此,bFGF必须经过加工修饰,以延长bFGF在血浆中的存留时间,从而增加bFGF透过血脑屏障的量,其中脂质体包裹bFGF是一种有希望的解决方法。
[0006] 脂质体(liposomes)或称类脂小球、脂囊泡,是一种定向药物载体,属于靶向给药系统的一种类似微型胶囊的新剂型。脂质体形状为球形,直径大小约为几十纳米到几十微米。然而,如何制备具有较高包封率、稳定性好的bFGF长循环脂质体,以提高其在治疗牵张性脊髓损伤的疗效是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

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