本发明涉及一种猪瘟兔化弱毒标记疫苗毒株的构建及疫苗的制备方法。包括如下步骤：(1)猪瘟兔化弱毒株(C株或Chinese株)全长感染性克隆的构建方法；(2)标记蛋白基因的引入方法；(3)猪瘟兔化弱毒标记疫苗病毒的拯救；(4)病毒的繁殖；(5)病毒液检验；(6)疫苗制造；(7)疫苗成品检验，包括安全检验和效力检验。本发明构建的猪瘟兔化弱毒株标记疫苗，不仅保持了猪瘟兔化弱毒株安全性好，免疫原性优良等特点，而且该毒株稳定性好，细胞生产病毒含量高，能用于工业化大生产，免疫猪体后可产生标记蛋白特异性抗体，以此来区分免疫和自然感染，对防控净化猪瘟及紧急免疫都具有重大意义。