技术领域
[0001] 本实用新型涉及检测试剂盒技术领域，具体为液基薄层细胞p16MCM2联染检测试剂盒。
相关背景技术
[0002] p16基因又名多肿瘤抑癌基因（multipletumorsuppressor1，MTS），其表达的抑癌蛋白p16是细胞周期进展负调节蛋白。当人乳头瘤病毒整合感染宫颈上皮细胞后，引入并激活致癌基因E7，促使致癌蛋白E7表达，抑制pRB与E2F蛋白结合，促进宫颈上皮细胞增殖；当细胞增殖过度，将激活细胞增殖负反馈调节机制，即通过激活抑癌基因p16，促使抑癌蛋白p16表达，促进pRB与E2F蛋白结合，从而抑制宫颈上皮细胞过度增殖,在P16基因或者MCM2基因检测过程中需要用到检测试剂盒。
[0003] 现有的试剂盒结构不够完善。同样的双染试剂盒，其缓冲溶液、巴氏染色液由于装量较大，会分为两管进行分装，这造成了污染的可能性。但同时一管装量较大的缓冲液及巴氏染色液可能会增加试剂盒体积。同样的双染试剂盒，其抗体浓缩液由于装量较小，会分装在较小的管子中，装入大管中的话，在运输过程中的倾覆和颠倒会造成试剂的损失的问题，为此，我们提出这样一种液基薄层细胞p16MCM2联染检测试剂盒。实用新型内容
[0004] 本实用新型的目的在于提供液基薄层细胞p16MCM2联染检测试剂盒，以解决上述背景技术中提出的试剂盒结构不够完善。同样的双染试剂盒，其缓冲溶液、巴氏染色液由于装量较大，会分为两管进行分装，这造成了污染的可能性。但同时一管装量较大的缓冲液及巴氏染色液可能会增加试剂盒体积。同样的双染试剂盒，其抗体浓缩液由于装量较小，会分装在较小的管子中，装入大管中的话，在运输过程中的倾覆和颠倒会造成试剂的损失的问题。
[0005] 为实现上述目的，本实用新型提供如下技术方案：液基薄层细胞p16MCM2联染检测试剂盒，包括盒体和羊抗鼠二抗工作液盛装槽，所述盒体的内侧安置有衬垫，且衬垫的内部一侧开设有无菌装置孔，所述衬垫的内部另一侧开设有p16一抗浓缩液盛装槽，且p16一抗浓缩液盛装槽的外部上侧分布有MCM2一抗浓缩液盛装槽，所述MCM一抗浓缩液盛装槽外部上侧设置有抗体稀释液盛装槽，所述羊抗鼠二抗工作液盛装槽分布于p16一抗浓缩液盛装槽外部右侧，且羊抗鼠二抗工作液盛装槽的外部上侧设置有羊抗兔二抗工作液盛装槽，所述羊抗兔二抗工作液盛装槽的外部上侧分布有DAB染色底物盛装槽，所述无菌装置孔的外部右侧设置有苏木素染色液盛装槽，且苏木素染色液盛装槽的外部下侧分布有巴氏染色液盛装槽。
[0006] 优选的，所述衬垫的外部尺寸大小与盒体内部尺寸大小相吻合，且衬垫和盒体之间为固定连接。
[0007] 优选的，所述p16一抗浓缩液盛装槽与MCM2一抗浓缩液盛装槽呈平行状分布，且p16一抗浓缩液盛装槽和MCM2一抗浓缩液盛装槽内部底端均为托高结构。
[0008] 优选的，所述抗体稀释液盛装槽、羊抗鼠二抗工作液盛装槽、羊抗兔二抗工作液盛装槽和DAB染色底物盛装槽等距离分布在衬垫内部一侧，且抗体稀释液盛装槽、羊抗鼠二抗工作液盛装槽、羊抗兔二抗工作液盛装槽和DAB染色底物盛装槽内部尺寸大小相一致。
[0009] 优选的，所述苏木素染色液盛装槽与巴氏染色液盛装槽和无菌装置孔呈平行状分布，且苏木素染色液盛装槽与巴氏染色液盛装槽槽长之和等于无菌装置孔的槽长。
[0010] 与现有技术相比，本实用新型的有益效果是：该液基薄层细胞p16MCM2联染检测试剂盒设置有衬垫，衬垫的外部尺寸大小与盒体内部尺寸大小相吻合，大小相互吻合的衬垫和盒体，可以保证之间连接的紧密性与牢固性，不会出现在实际使用过程中衬垫松动导致内部打开的试剂出现外漏的情况，保证P16/MCM2的免疫细胞化学双染色检测高效、稳定，能够很好的满足科学和工作的需要，提升该检测试剂盒的实际使用效果；
[0011] P16一抗浓缩液盛装槽与MCM2一抗浓缩液盛装槽呈平行状分布，p16一抗浓缩液盛装槽和MCM2一抗浓缩液盛装槽内部安放的试剂瓶体积性较小，托高结构的结构可以有效防止倾覆，保证试剂瓶存放在内部的稳定性，同时托高结构的结构便于对内部试剂瓶的取拿和存放，提升该检测试剂盒的使用效率；
[0012] 抗体稀释液盛装槽、羊抗鼠二抗工作液盛装槽、羊抗兔二抗工作液盛装槽和DAB染色底物盛装槽等距离分布在衬垫内部一侧，等距离分布在衬垫内部的抗体稀释液盛装槽、羊抗鼠二抗工作液盛装槽、羊抗兔二抗工作液盛装槽和DAB染色底物盛装槽，使得整个检测试剂盒结构紧凑，便于使用，同时苏木素染色液盛装槽与巴氏染色液盛装槽存放的试剂瓶体积较大，因而设置为长方形槽状，将试剂瓶横置安放，便于取拿。
具体实施方式
[0017] 下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。
[0018] 请参阅图1-3，本实用新型提供一种技术方案：液基薄层细胞p16MCM2联染检测试剂盒，包括盒体1、衬垫2、无菌装置孔3、p16一抗浓缩液盛装槽4、MCM2一抗浓缩液盛装槽5、抗体稀释液盛装槽6、羊抗鼠二抗工作液盛装槽7、羊抗兔二抗工作液盛装槽8、DAB染色底物盛装槽9、苏木素染色液盛装槽10和巴氏染色液盛装槽11，盒体1的内侧安置有衬垫2，且衬垫2的内部一侧开设有无菌装置孔3，衬垫2的外部尺寸大小与盒体1内部尺寸大小相吻合，且衬垫2和盒体1之间为固定连接，大小相互吻合的衬垫2和盒体1，可以保证之间连接的紧密性与牢固性，不会出现在实际使用过程中衬垫2松动导致内部打开的试剂出现外漏的情况，保证P16/MCM2的免疫细胞化学双染色检测高效、稳定，能够很好的满足科学和工作的需要，提升该检测试剂盒的实际使用效果；
[0019] 衬垫2的内部另一侧开设有p16一抗浓缩液盛装槽4，且p16一抗浓缩液盛装槽4的外部上侧分布有MCM2一抗浓缩液盛装槽5，p16一抗浓缩液盛装槽4与MCM2一抗浓缩液盛装槽5呈平行状分布，且p16一抗浓缩液盛装槽4和MCM2一抗浓缩液盛装槽5内部底端均为托高结构，p16一抗浓缩液盛装槽4和MCM2一抗浓缩液盛装槽5内部安放的试剂瓶体积性较小，托高结构的结构可以有效防止倾覆，保证试剂瓶存放在内部的稳定性，同时托高结构的结构便于对内部试剂瓶的取拿和存放，提升该检测试剂盒的使用效率；
[0020] MCM2一抗浓缩液盛装槽5外部上侧设置有抗体稀释液盛装槽6，羊抗鼠二抗工作液盛装槽7分布于p16一抗浓缩液盛装槽4外部右侧，且羊抗鼠二抗工作液盛装槽7的外部上侧设置有羊抗兔二抗工作液盛装槽8，羊抗兔二抗工作液盛装槽8的外部上侧分布有DAB染色底物盛装槽9，无菌装置孔3的外部右侧设置有苏木素染色液盛装槽10，且苏木素染色液盛装槽10的外部下侧分布有巴氏染色液盛装槽11，苏木素染色液盛装槽10与巴氏染色液盛装槽11和无菌装置孔3呈平行状分布，且苏木素染色液盛装槽10与巴氏染色液盛装槽11槽长之和等于无菌装置孔3的槽长，抗体稀释液盛装槽6、羊抗鼠二抗工作液盛装槽7、羊抗兔二抗工作液盛装槽8和DAB染色底物盛装槽9等距离分布在衬垫2内部一侧，且抗体稀释液盛装槽6、羊抗鼠二抗工作液盛装槽7、羊抗兔二抗工作液盛装槽8和DAB染色底物盛装槽9内部尺寸大小相一致，等距离分布在衬垫2内部的抗体稀释液盛装槽6、羊抗鼠二抗工作液盛装槽7、羊抗兔二抗工作液盛装槽8和DAB染色底物盛装槽9，使得整个检测试剂盒结构紧凑，便于使用，同时苏木素染色液盛装槽10与巴氏染色液盛装槽11存放的试剂瓶体积较大，因而设置为长方形槽状，将试剂瓶横置安放，便于取拿。
[0021] 工作原理：对于这类的液基薄层细胞p16MCM2联染检测试剂盒，首先在盒体1内部的对应试剂盛装槽内部安放对应试剂，大小相互吻合的衬垫2和盒体1，可以保证之间连接的紧密性与牢固性，不会出现在实际使用过程中衬垫2松动导致内部打开的试剂出现外漏的情况，保证P16/MCM2的免疫细胞化学双染色检测高效、稳定，能够很好的满足科学和工作的需要，提升该检测试剂盒的实际使用效果，p16一抗浓缩液盛装槽4和MCM2一抗浓缩液盛装槽5内部安放的试剂瓶体积性较小，托高结构的结构可以有效防止倾覆，保证试剂瓶存放在内部的稳定性，同时托高结构的结构便于对内部试剂瓶的取拿和存放，提升该检测试剂盒的使用效率，等距离分布在衬垫2内部的抗体稀释液盛装槽6、羊抗鼠二抗工作液盛装槽7、羊抗兔二抗工作液盛装槽8和DAB染色底物盛装槽9，使得整个检测试剂盒结构紧凑，便于使用，同时苏木素染色液盛装槽10与巴氏染色液盛装槽11存放的试剂瓶体积较大，因而设置为长方形槽状，将试剂瓶横置安放，便于取拿；
[0022] 实例一：检测方法免疫细胞化学染色
[0023] 1.一抗孵育：
[0024] 1.1试剂盒开封后，将1.85ml抗体稀释液和100µlp16一抗浓缩液混合，加入到100µlMCM2一抗浓缩液中，配置成p16/lMCM2一抗工作混合液，黏贴新标签，2～8℃避光保存，备用。
[0025] 1.2滴加一抗工作混合液50µl/片，37℃湿盒孵育30min，PBST漂洗3min×3次，适度甩干。
[0026] 2.二抗孵育：
[0027] 2.1试剂盒开封后，将1ml羊抗鼠二抗工作液，加入到1ml羊抗兔二抗工作液中，配置成羊抗鼠/兔二抗工作混合液，黏贴新标签，2～8℃避光保存，备用。
[0028] 2.2滴加二抗工作混合液50µl/片，37℃湿盒孵育15min，PBST漂洗3min×3次，适度甩干。
[0029] 3.DAB染色：
[0030] 3.1取出缓冲液：
[0031] 3.2制备DAB工作混合液（根据样本量，取适量DAB染色底物和DAB染色剂缓冲液混匀），即配即用，4h内使用完，室温（20～25℃）避光保存。
[0032] 3.2滴加DAB工作混合液50µl/片，室温（20～25℃）湿盒孵育5～10min，流水冲洗3min，适度甩干（不可干片）。
[0033] 4.red染色：
[0034] 4.1制备red工作混合液，即配即用，30min内使用完，室温（20～25℃）避光保存。
[0035] 4.2滴加red工作混合液50µl/片，室温（20～25℃）湿盒孵育10～30min，流水冲洗3min，适度甩干。
[0036] 5.复染：将细胞制片放入苏木素染料中浸染，室温（20～25℃）1s，进行复染，流水冲洗3min，吹干。
[0037] 6.封片：滴加1滴中性快速封片剂，加盖盖玻片，光学显微镜下评估结果。
[0038] 7.苏木素染色：每份样本取固定后的一张细胞涂片，放入苏木素染色液中浸染（或者50～100µl/片滴染），室温（20～25℃）孵育3～5min，流水冲洗4min，少许晾干；放入无水乙醇中，室温（20～25℃）孵育30s，室温晾干。
[0039] 8.巴氏染色：将细胞涂片放入巴氏染色液中浸染（或者50～100µl/片滴染），室温（20～25℃）孵育3～5min，依次放入两缸无水乙醇中洗涤2次，每次10s，再置入第三缸无水乙醇，室温（20～25℃）孵育1min，流水冲洗4min，滤纸擦干或晾干。
[0040] 9.结果分析：
[0041] 根据同一单层细胞或者同一细胞簇的细胞核和细胞浆的染色情况进行结果分析。
[0042] P16/MCM2抗体孵育后，DAB和red染料双染，同一单层细胞或者细胞簇的细胞核显蓝色或者红色，细胞浆无染色；或者细胞核显棕色，细胞浆显棕色；或者细胞核显红色，细胞浆无染色，即判定为阴性结果：
[0043] P16/MCM2抗体孵育后，DAB染料单染，单层细胞或者细胞簇的细胞核显棕色，细胞浆显棕色；red染料单染，单层细胞或者细胞簇的细胞核显红色，细胞浆无染色，即判定为阳性结果：
[0044] 巴氏染色结果，液基细胞巴氏染色：根据细胞形态，按TBS诊断标准判定。
[0045] 就这样完成整个液基薄层细胞p16MCM2联染检测试剂盒的使用过程。
[0046] 尽管已经示出和描述了本实用新型的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本实用新型的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本实用新型的范围由所附权利要求及其等同物限定。
