[0001] 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及蜡样芽孢杆菌微生态制剂在提高酿酒葡萄酸度中的应用。

[0002] 酿酒葡萄与鲜食葡萄在多个方面存在显著差异，其中酸度是一个重要的指标。酸度源于葡萄中的酒石酸和苹果酸以及发酵产生的琥珀酸、乳酸和醋酸。酸度赋予葡萄酒清新、清脆的品尝感。酸有洁净嘴巴和让上颚焕然一新的效果。酿酒葡萄的酸度通常比鲜食葡萄更高。这种高酸度对于酿酒过程来说是必要的，因为它有助于将糖分转化为酒精，同时酸度也为葡萄酒提供了独特的风味。高酸度的葡萄酒更容易与食物搭配，因此在餐饮中更受欢迎。此外，酸度还能平衡酒中的果味，保持葡萄酒的颜色和稳定性，抑制细菌繁殖。

[0003] 酿酒葡萄的高酸度是其特点之一，这对于酿造高品质的葡萄酒是必要的。本发明拟开发一种微生态制剂，从而为提高酿酒葡萄酸度提供技术支持。

[0019] 现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。

[0020] 应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。

[0021] 除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。

[0022] 在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。

[0023] 关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。

[0024] 以下实施例中的蜡样芽孢杆菌S‑A购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，菌株编号为CGMCC 1.8589；蜡样芽孢杆菌S‑B购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌株编号为CGMCC 1.7920；蜡样芽孢杆菌S‑C购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，菌株编号为CICC 21163。

[0025] 实施例1

[0026] LB液体培养基：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L和NaCl 10g/L(固体培养基再加入琼脂15g/L)。配制方法如下：将胰蛋白胨10g、酵母提取物5g和NaCl 10g溶解在去离子水中，用5mol/LNaOH调pH至7.0，用去离子水定容至1L，121℃高压蒸汽灭菌20min。

[0027] 分别制备蜡样芽孢杆菌S‑A、S‑B和S‑C的微生态制剂，制备方法如下：

[0028] (1)固体斜面培养：将菌株接种于LB固体培养基中，于37℃恒温培养2天，使菌株活化。

[0029] (2)一级种子培养：将步骤(1)活化的菌株，接种于LB液体培养基中，于37℃，160rpm下培养2天，获得种一级种子液。

[0030] (3)二级种子培养：将步骤(2)所得一级种子液以10％的接种量接种于5L的三角瓶中，培养基同步骤(2)，在37℃条件下培养2天，即得二级种子液。

[0031] (4)将步骤(3)中获得的二级种子液以10％的接种量接种于装有5L发酵培养基(即LB液体培养基)的15L发酵罐中，于37℃，120rpm，通气量0.8vvm下进行发酵培养2天，获得发酵液。

[0032] (5)用LB液体培养基将步骤(4)获得的发酵液稀释至OD600＝0.6，即得到蜡样芽孢杆菌微生态制剂。

[0033] 实施例2

[0034] 1.试验材料和试验区

[0035] 供试酿酒葡萄品种为‘赤霞珠’(Vitis vinifera cv.Cabernet Sauvignon)，南北行向定植，树形为“厂”字形，株行距为0.6m×3.5m。

[0036] 试验区位于宁夏回族自治区银川市，平均海拔1010‑1150m，光照充足，年平均气温10.6℃，年日照率65％‑69％。

[0037] 2.试验方法

[0038] 2.1试验分组

[0039] 本试验设置5个试验组，分别按照表1所示进行试验处理，即分别在根部土壤浇灌施加蜡样芽孢杆菌微生态制剂、清水或LB液体培养基，各试验组根据当地方法进行施肥和田间管理。

[0040] 表1试验分组

[0041]

[0042] 2.2样品采集和指标检测

[0043] 在成熟期，统计各试验组的葡萄产量，并对各试验组葡萄进行采样，对酿酒葡萄果实品质指标进行检测。

[0044] 从每棵葡萄树的两侧分别采集4串葡萄，从每串葡萄的不同部位采集3粒葡萄，保存，待测。各组随机选取50粒葡萄果实，揉碎过滤取汁，采用数显糖度计测定可溶性固形物含量，采用斐林试剂热滴定法测定还原糖含量；采用氢氧化钠滴定法(参照GB/T15038‑2006)测定可滴定酸含量，每次试验重复3次，结果取平均值。

[0045] 3.试验结果

[0046] 各试验组的产量和酿酒葡萄果实品质的检测结果见表2。结果显示，施用实施例1制备得到的蜡样芽孢杆菌S‑C微生态制剂，可以有效提高酿酒葡萄果实酸度，同时，其产量以及还原糖含量也得到显著提高。

[0047] 表2各试验组的产量和酿酒葡萄果实品质的检测结果

[0048]

[0049]

[0050] 注：相对于空白对照，*P<0.05，**P<0.01。

[0051] 以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。