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一种微生态制剂无效专利 发明

技术领域

本发明涉及微生物领域,更具体地指涉及一种益生素饲料添加剂。它能够在数量或种类上补充动物肠道内减少或缺乏的有益微生物,调整或维持肠道内的微生态平衡,增强机体免疫机能和抗应激能力,提高养殖效益。

相关背景技术

通常单一微生物经发酵产生微生物代谢物,利用该代谢物产物作为抗菌治病,饲料添加等等的有用物质,例如:中国专利CN 200410077706.4,该发明通过微生物发酵,添加剂添加到饲料中或配制非抗生素类饲料,能显著提高动物免疫能力,促进动物的新陈代谢,提高动物机体的抗病能力,改善动物的消化机能,促进动物生长,并明显改善动物的肉质。在微生物制剂的应用及发展趋势,该文综述了微生态制剂—益生素是种天然的生物活性制剂,无毒副作用,无耐药性,无药物残留物,具有保健、促进生长、提高饲料利用率等功效(出处:山东家禽2001,(5):31-32页)。美国专利涉及一种检测动物饲料中微生态制剂质量标准的方法。该饲料中含有微生态菌与寡糖,检测方法主要为杂交与聚合酶链式反应技术(TI:Methods for detecting and quantifying specificprobiotic microorganisms in animal feed.Inventor:amer BE.Application number:S2004000711155 Patent number:S20050048515)。

具体实施方式

丝状真菌(菌种选育和菌种培植)--28~32℃菌种 接种---原料(玉米、米糠、豆、黄粉)----发酵罐---发酵----40~50h--菌体富集(离心机)-真空冷冻干燥机-低温干燥----包装机---成品乳酸菌(菌体选育和菌体培植)28~35℃---菌种-----接种------原料(玉米、米糠、黄粉、豆)--发酵罐---发酵---40~50℃---加填充料(1∶1)---35~50℃-----烘干粉碎----40~60目过筛---成品。
试验方法:采样方法:产品每批抽样5箱,每箱抽1瓶,无菌操作,每瓶吸取5毫升一同放入无菌的三角瓶中,摇均匀,瓶上粘贴标签,表明产品名称、取样日期、批号、取样人,供检验用。
感观指标的测定:目测鼻嗅,无异臭味、黄褐色液体有效活细胞数和杂菌率的测定枯草芽孢杆菌活细胞数的测定枯草芽孢杆菌细胞测定用琼脂培养基的制备:葡萄糖    0.5g(NH4)SO4 0.2g柠檬酸钠  0.1gK2HPO4   1.4gKH2PO4   0.6gMgSO4    0.02g蒸馏水    100ml纯化琼脂  2gpH 7.0确证实验:枯草芽孢杆菌在琼脂培养基上菌落生长形态特征,菌落较大,直径3-10mm,灰白色、不透明,表面粗糙似毛玻璃状,边缘常呈扩展状。
用无菌吸管吸取5ml1号产品加入带玻璃珠的45ml无菌水中,静置20min后,充分震荡30min,混匀成1∶10稀释的菌悬液,这样依次稀释,分别得到1∶1×102,1∶1×103和1∶1×104等浓度(每个稀释度必须更换无菌吸管)。
用1ml无菌吸管分别吸取不同稀释度均悬液0.1ml,加至直径为9cm平皿的枯草芽孢杆菌细胞测定用琼脂培养基表面,用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。每个样品取3个连续适宜稀释度,每一稀释度重复3次,同时加无菌水的空白对照,好氧培养2-4天,培养温度为28℃-30℃,每个稀释度取5-10个菌落的菌体,涂片染色,显微镜观察识别后计数菌落。
嗜酸乳杆菌活细胞数测定嗜酸乳杆菌在琼脂培养基上培养,长成菌落,计数。其菌落的形态特征为:平皿底为黄色,菌落中等大小,呈棉团状,微白色,湿润,边缘不整齐,直径3±1mm。计数步骤如下:(1)用无菌吸管吸取5ml2号产品加入带玻璃珠的45ml无菌水中,静置20min后,充分震荡30min,混匀成1∶10稀释的菌悬液,这样依次稀释,分别得到1∶1×102,1∶1×103和1∶1×104等浓度(每个稀释度必须更换无菌吸管)。
(2)用1ml无菌吸管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1ml加至直径为9cm平皿的嗜酸乳杆菌细胞测定用琼脂培养基表面,用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。每个样品取3个连续适宜稀释度,每一稀释度重复3次,同时加无菌水的做空白对照,厌氧培养2~4天,培养温度为28℃~30℃,每个稀释度取5~10个菌落的菌体,涂片染色,显微镜观察识别后计数菌落。
嗜酸乳杆菌细胞测定用琼脂培养基的制备番茄汁50ml酵母提取液5g肉膏10g乳糖20g葡萄糖2g磷酸氢二钾2g吐温80 1g乙酸钠5g琼脂15g水加至1000ml PH 6.8±0.2嗜酸乳杆菌在琼脂培养基上菌落生长形态特征,平皿底为黄色,菌落中等大小,微白色,湿润,边缘不整齐,直径3±1mm,如棉团状菌落。
粪链球菌活细胞数测定粪链球菌在琼脂培养基上培养,长成菌落,计数。其菌落的形态特征为:菌落呈红色或粉红色,边缘整齐,表面以下常呈椭圆或晶状体。其计数步骤如下:(1)用无菌吸管吸取5ml2号产品加入带玻璃珠的45ml无菌水中,静置20min后,充分震荡30min,混匀成1∶10稀释的菌悬液,这样依次稀释,分别得到1∶1×102,1∶1×103和1∶1×104等浓度(每个稀释度必须更换无菌吸管)。
(2)用1ml无菌吸管分别吸取不同稀释度均悬液0.1ml加至直径为9cm平皿的粪链球菌细胞测定用琼脂培养基表面,用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。每个样品取3个连续适宜稀释度,每一稀释度重复3次,同时加无菌水的空白对照,厌氧培养2~4天,培养温度为28℃~30℃,每个稀释度取5~10个菌落的菌体,涂片染色,显微镜观察识别后计数菌落。
粪链球菌细胞测定用琼脂培养基的制备蛋白胨10.0g酵母浸膏10.0g氯化钠5.0g甘油磷酸钠10.0g麦芽糖20.0g乳糖1.0g叠氮化钠0.4g琼脂20.0g蒸馏水1000ml粪链球菌在琼脂培养基上菌落生长形态特征,琼脂平板上生长的红色或粉红色菌落,边缘整齐,表面以下常呈椭圆或晶状体,都是粪链球菌。
杂菌率的测定用无菌吸管吸取5ml产品加入带玻璃珠的45ml无菌水中,静置20min后,充分震荡30min,混匀成1∶10稀释的菌悬液,这样依次稀释,分别得到1∶1×102,1∶1×103和1∶1×104等浓度(每个稀释度必须更换无菌吸管)。
4.3.4.2用1ml无菌吸管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1ml加至直径为9cm平皿的琼脂培养基表面,用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。每个样品取3个连续适宜稀释度,每一稀释度重复3次,同时加无菌水的空白对照,好氧培养2~4天,培养温度为30~33 & ordm;C,每个稀释度取5~10个菌落的菌体,涂片染色,显微镜观察识别后计数菌落。
计算公式:每一种活细胞数的计算都按下述方法进行,统计算出同一稀释度3个平皿上菌落平均数。
产品活细胞数=菌落平均数×稀释倍数×10杂菌率(%)=[杂菌数÷(有效菌数+杂菌数)]×100根据菌落特征判定,分别计算出产品中的特定微生物细胞数(以亿/ml表示)。
PH值测定仪器:烧杯、酸度计。
测定方法:随机取10ml样品置于干净烧杯内,预热PH计用标准溶液(PH 6.86)校正仪器后,测定样品的PH,边测边搅拌,仪器读数稳定后记录。每个样品重复三次。
出厂检验检验标准:饲料级禾维益生素由公司的技术部门进行检验,应保证所有出厂的饲料级禾维益生素都达到本标准要求,每批出厂的饲料级微生物添加剂都应附有一定格式的质量合格证明,饲料级禾维益生素以每一发酵罐生产的产品为一批(3t)。
检验指标:产品感官指标、有效活细胞数和汞、镉、砷、铅、大肠杆菌、沙门氏菌、霉菌的测定为出厂检验项目,由质检科按本标准检验方法进行检验。检验合格并签发合格证后方可出厂。
如果检验结果不符合标准规定时,应以加倍数量按规定选取试样进行检验,如仍不符合标准规定,该批产品判为不合格。

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