技术领域
[0001] 本实用新型涉及生物试剂盒领域，尤其是一种基于RAA等温扩增试剂的猫瘟病毒核酸胶体金试纸条。
相关背景技术
[0002] 当前猫瘟病毒检测方法主要依赖于分子生物学方法，如PCR/qPCR/ELISA等方法被广泛应用，但这些方法均有不足之处：1、操作繁琐，依赖大型设备；2、对操作人员要求高；3、检测效率低，耗费时间长，无法满足立等可取的时效性要求。这些不足之处导致现场实时检测无法实现。实用新型内容
[0003] 本实用新型的目的在于提供一种基于RAA等温扩增试剂的猫瘟病毒核酸胶体金试纸条，旨在解决现有技术中操作繁琐、对仪器设备及操作人员要求高且检测效率低而导致无法实现现场实时检测的问题。
[0004] 本实用新型是这样实现的，一种基于RAA等温扩增试剂的猫瘟病毒核酸胶体金试纸条，包括样品垫、金标释放垫、吸收垫、NC膜以及背衬，背衬为长条形的平板且位于最下层，背衬上从一端开始依次粘贴样品垫、金标释放垫、NC膜，在另一端粘贴吸收垫，NC膜位于金标释放垫与吸收垫之间。
[0005] 优选的，NC膜上设有检测线与质控线。
[0006] 优选的，检测线靠近金标释放垫，质控线靠近吸收垫。
[0007] 优选的，RAA等温扩增试剂中还包括引物序列一与引物序列二，引物序列一修饰标签一，引物序列二修饰标签二。
[0008] 优选的，引物序列一为：
[0009] 5‘‑TGGAGGTAAAACAGGAATTAACTATACTAA‑3’，5’端修饰标签一
[0010] 优选的，引物序列二为：
[0011] 5‘‑CTTGGTTTTAAGTCAGTATCAAATTCTTTATCC‑3’，5’端修饰标签二。
[0012] 优选的，标签一为生物素标签，标签二为地高辛标签。
[0013] 与现有技术相比，本申请通过设计不同的引物序列，且不同引物序列带有不同标签，会特异性识别猫瘟病毒核酸序列，扩增出包含不同标签的核酸序列，以及不同标签分别与胶体金颗粒、检测线特异性结合而显色，达到快速检测的目的。这样设置操作简单且检测效率高，可满足立等可取的时效性要求，可实现现场实时检测。
具体实施方式
[0017] 为了使本实用新型的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本实用新型进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。
[0018] 本实施例的附图中相同或相似的标号对应相同或相似的部件；在本实用新型的描述中，需要理解的是，若有术语“上”、“下”、“左”、“右”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本实用新型和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此附图中描述位置关系的用语仅用于示例性说明，不能理解为对本专利的限制，对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语的具体含义。
[0019] 以下结合具体实施例对本实用新型的实现进行详细的描述。
[0020] 参照图1所示，为本实用新型提供较佳实施例。
[0021] 一种基于RAA等温扩增试剂的猫瘟病毒核酸胶体金试纸条，包括样品垫1、金标释放垫2、吸收垫5、NC膜6以及背衬7。其中，背衬7为长条形的平板，背衬7位于最下层，背衬7上从一端开始依次粘贴样品垫1、金标释放垫2、NC膜6，在另一端粘贴吸收垫5，NC膜6位于金标释放垫2与吸收垫5之间。
[0022] 其中，NC膜6上设有检测线3与质控线4。
[0023] 进一步地，检测线3靠近金标释放垫2，质控线4靠近吸收垫5。
[0024] RAA等温扩增指的是重组酶介导等温核酸扩增技术，即一种利用重组酶、单链结合蛋白、DNA聚合酶在等温条件下(如37℃)进行核酸扩增的技术。具体原理为：重组酶、单链结合蛋白(SSB)、引物形成复合体扫描双链DNA，在与引物同源的序列处使双链DNA解旋，单链结合蛋白防止单链DNA复性，在能量和dNTP存在的情况下，由DNA聚合酶完成链的延伸，30分钟就可实现无仪器扩增。利用胶体金试纸条特异性地与RAA扩增出的猫瘟病毒核酸结合，形成可视化的一条红色直线，达到判断待测样本中是否含有猫瘟病毒的目的。
[0025] 其中，本申请中引物具有两条，分别带有不同标签，即标签一和标签二。
[0026] 进一步地，引物序列一为：5
[0027] ‘‑TGGAGGTAAAACAGGAATTAACTATACTAA‑3’，5’端修饰标签一即生物素标签，包括但不限于生物素的类似物，如PEG‑生物素，亲和素，罗丹明，异硫氰酸荧光素(FITC)。
[0028] 进一步地，引物序列二为：5
[0029] ‘‑CTTGGTTTTAAGTCAGTATCAAATTCTTTATCC‑3’，5’端修饰标签二即地高辛标签，包括但不限于地高辛类似，如常用荧光基团FAM，VIC，ROX，JOE，HEX，Cy5。
[0030] 一种基于RAA等温扩增试剂的猫瘟病毒核酸胶体金试纸条检测过程如下：
[0031] 1、抽取待测猫的全血样本，将20μL全血和200μL免提取试剂A液混匀，静置2min后再加入50μL免提取试剂B液混匀，得到样本核酸溶液；
[0032] 2、取适量样本核酸溶液加入到RAA等温扩增试剂中，39°恒温孵育30min，设计的两条带标签引物(引物序列一和引物序列二)会特异性识别猫瘟病毒核酸序列，只在猫瘟病毒存在的情况下才会扩增出包含两种标签(标签一和标签二)的核酸序列；
[0033] 3、用胶体金试纸条插入孵育后的溶液中，DNA分子的标签一与胶体金颗粒特异性结合而带上红色，溶液经层析到达检测线3，检测线3可与DNA分子的标签二特异性结合显示红色直线，若DNA分子不含标签二则检测线3不显示红色；
[0034] 4、静置层析15min后，肉眼直接观察试纸条检测线3和质控线4的显色情况：若检测线3无色、质控线4红色则样本结果判定为阴性(即不含猫瘟病毒)；若检测线3红色、质控线4红色则样本结果判定为阳性(即含猫瘟病毒)；若质控线4无色、则无论检测线3是无色还是红色、均判定结果无效(即试纸条失效)，需更换新的试纸条，重复步骤1重新检测。
[0035] 对比现有技术，本申请具有以下优点：
[0036] 1、操作简单，方便操作者操作，可实现现场实时检测；
[0037] 2、检测效率高，耗费时间短，可满足立等可取的时效性要求。
[0038] 以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。
