本发明涉及新的类干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)菌株，该菌 株可以用来制备发酵的乳制品，特别是益生干酪(probiotic cheese)。 背景技术 瑞典干酪是由经过巴氏消毒处理的牛奶制成的，所述牛奶是用乳酸菌 作为引子培养物发酵而制得的。这种酸化的牛奶用粗制凝乳性物质 (rennet)(凝乳酶)凝结，切割这种凝结的牛奶并搅拌。轻微加热乳清和干 酪颗粒的混合物。分离出乳清，将干酪颗粒压制成干酪，用盐处理干酪并 使其酸化；乳清分离和压制的顺序根据干酪的不同而不同。在酸化的过程 中主要是乳酸菌的次生菌群自发生长。 在酸化过程中，硬的和半硬的瑞典干酪中占优势的是自发生长的次生 菌群，通常称为非引子乳酸菌，NSLAB。这种自发的菌群继加入的引子培养 物之后产生并在使干酪酸化的选定条件下生长。NSLAB被认为与经巴氏消毒 后的牛奶原料一起或与干酪制备所用的其他成分一起进入了乳品厂。在瑞 典和挪威的干酪中最常见的NSLAB属于乳杆菌属(Lactobacillus)，特别是 类干酪乳杆菌(参见Lindberg，A.-M.，等，Bacterial flora of Norwegian and Swedish semi-hard cheese after ripening，with special reference to Lactobacillus，Netherlands Milk & Dairy Journal 50(1996) 563-572)。NSLAB在酸化数天后开始生长，酸化一个月后达到约106-107cfu/g 的水平，这种水平至少保持5个月。切达干酪(Cheddar cheese)中同样有 乳杆菌占优势的NSLAB的进展。据报道切达干酪中的菌种有干酪乳杆菌 (Lactobacillus casei)，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和短乳 杆菌(Lactobacillus brevis)，但是通常占优势的菌种是干酪乳杆菌或类 干酪乳杆菌。鉴于未对NSLAB进行控制，干酪质量的一些变化可能是由于 NSLAB组成的可变性引起的。为了控制酸化过程和NSLAB自发菌群的生长， 诸如乳酸菌等菌株的纯培养物已经被用作干酪制备中的辅料，所说的辅料 一般对干酪产品的香味和味道有影响，这种影响是不可预测的，但是可以 通过试验和误差来检验。 乳制品中的益生微生物(probiotic microorganism)在过去十年中一直 是研究的热门课题，掺入有益生微生物，如乳杆菌(Lactobacillus)和双歧 杆菌(Bifidobacterium spp)的乳制品的潜在促健康作用刺激了所述研究， 益生细菌(probiotic bacteria)被描述为“通过改善宿主动物的微生物平 衡而对宿主动物产生有益影响的活的微生物食品添加剂”，其通过消化达到 一定数量而有益于健康(Fuller，R.，Probiotics in man and animal，Journal of applied Bacteriology，66(1989)365-378)。 Klaenhammer，T.R.等(Selection and design of probiotics， International Journal of Food Microbiology 50(1999)45-47)描述并 总结了用于进行功能性益生菌筛选的所期望的特点，该筛选标准包括4个 基本方面：适用性(appropriateness)，如无毒性；技术适应性 (technological suitability)，如生存能力、竞争力(即能在内脏中存活 的能力)；性能(performance)和功能(functionality)。弄清楚这些标准如 何影响体内功能的机制是目前要解决的主要难题。 现有技术 在先研究已经证明双歧杆菌与许多益生乳杆菌菌株都能在硬干酪中， 如在切达干酪和古达干酪(Gouda cheese)中很好地存活。 Gomes，A.M.，等，Incorporation and survival of Bifidobacterium sp.strain Bo and Lactobacillus acidophilus strain Ki in a cheese product，Netherlands Milk & Dairy Journal 49(1995)71-95中公开了 将双歧杆菌菌株与嗜酸乳杆菌(L.Acidophilus)组合作为引子来制备益生 古达干酪的方法，发现这两种菌都存活得比较好，但对感官特性有消极影 响。 Dinkar等，Growth and viability of Bifodobacterium bifidum in Cheddar chesse，J Dairy Sci 77：2854-2864，1994中公开了将双歧双歧 杆菌(Bifidobacterium bifidum)掺入到切达干酪中。假如该菌是在干酪制 作的后期(如粉碎(milling)或盐处理时)作为一种辅料加入的，就会获得良 好的生存能力(107cfu/g)且酸化6个月后对干酪的质量没有负面影响。继 该研究之后，对8个月的酸化期间，切达干酪中的多种益生乳杆菌菌株， 唾液乳杆菌(L.Salivarius)和类干酪乳杆菌进行了研究(Gardiner et al.， Development of a probiotic Cheddar chees containing human-derived Lactobacillus paracasei strains，Applied and Environmental Microbiology，292-2199，June 1998)。结论是益生类干酪乳杆菌菌株特 别适合于作为辅料，因为它们能在干酪中大量生长并影响蛋白质水解但对 感官特性特性没有影响。 附图说明 图1是类干酪乳杆菌8700：2，DSM 13434的REA图谱。 图2是类干酪乳杆菌02A，DSM 13432的REA图谱。 图3是类干酪乳杆菌8700：2和02A的RAPD图谱的照片。 发明详述 本发明涉及到在干酪的制备中用作辅料的新的益生类干酪乳杆菌菌 株，该菌株在干酪中具有有利的存活特性，并能给干酪带来好的口味。 本发明尤其涉及到能在乳制品中用作益生菌的类干酪乳杆菌菌株，其 特点是在干酪产品中作为辅料使用时能在胃肠道传代(passage)中存活并 使干酪产品变得美味。 本发明的一个优选方面涉及到类干酪乳杆菌8700：2菌株或其变体， 该菌株已于2000年4月10日保藏在德意志微生物和细胞培养物保藏中心， Mascheroder Weg lb，38124 Braunschweig，德国，保藏号为DSM 13434。 图1显示了该菌株的REA图谱，这是总染色体DNA用限制性内切酶Hind III(C泳道)、Cla I(B泳道)和Eco RI(A泳道)剪切后的限制性内切酶分析 图谱。STD代表分子量标志物，该标志物是高分子量标志物(High Molecular Marker)(Life Technologies)和DNA分子量标志物VI(DNA Molecular Weight Marker VI)(Rouche Molecular Biochemicals，Boehringer Mannheim)的组合物。 本发明的另一个优选方面涉及到类干酪乳杆菌02A菌株或其变体，该 菌株已于2000年4月10日保藏在德意志微生物和细胞培养物保藏中心， Mascheroder Weg lb，38124 Braunschweig，德国，保藏号为DSM 13432。 图2显示了该菌株的REA图谱，这是总染色体DNA用限制性内切酶Hind III(C泳道)、Cla I(B泳道)和Eco RI(A泳道)剪切后的限制性内切酶分析 图谱。STD代表分子量标志物，该标志物是高分子量标志物(Life Technologies)和DNA分子量标志物VI(Rouche Molecular Biochemicals， Boehringer Mannheim)的组合物。 根据Johansson等，International Journal of Systematic Bacteriology(1995)10，670-675的描述进行了REA分析。 图3显示了菌株02A(第2泳道)和菌株8700：2(第3泳道)的RAPD 图谱，第1和4泳道是DNA分子量标志物VI(Rouche Molecular Biochemicals，Boehringer Mannheim)。根据下文材料和方法中描述的进 行RAPD分析。 本发明的新菌株可以在任何乳制食品中用作益生菌，所述乳制食品如 发酵的乳制品，酸乳(yogurt)和冰淇淋，酱(spread)，新鲜干酪，用小牛 粗制凝乳性物质制备的脂肪含量为5-50％的硬和半硬的干酪，脂肪含量为 0.1-40％的软干酪和粗制脱脂酸奶干酪(quarg)及基于粗制脱脂酸奶干酪 的产品，还有凝乳中含有或不含有发酵调味品或活细菌的Keso。 本发明菌株的一个优选用途是用作干酪的制备中的辅料。 本发明还涉及到含有一种或多种本发明的新菌株的乳制食品，食品中 的益生菌株的含量是106-109cfu/g，优选为107以上。 本发明的优选方面涉及到含有类干酪乳杆菌8700：2，DSM 13434的风 味得到改善的硬或半硬的干酪，或含有类干酪乳杆菌02A，DSM 13432的风 味得到改善的硬或半硬的干酪， 本发明的另一个方面还涉及到含有菌株类干酪乳杆菌8700：2，DSM 13434或菌株类干酪乳杆菌02A，DSM 13432和常规酸乳培养物的酸乳。 实施例 干酪模型中益生菌株的筛选试验 在一个筛选试验中，测试了干酪模型中源自肠道的15株不同乳杆菌菌 株(11株鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)菌株、3株类干酪乳杆 菌菌株和1株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)菌株)，监测它们在 干酪中的生长和存活的能力以及对干酪风味的影响。所述不同菌株根据 Molin，G.，等，Numerical taxonomy of Lactobacillus spp.associated with healthy and diseased mucosa of the human intestines，Journal of Applied Bacteriology 74(1993)314-323描述的方法从人肠道中获得。 结果，选中了该测试中的4种菌株进行进一步的研究，这些菌株被列 在下表中。 表1 菌株 生物 02A 类干酪乳杆菌 04C 植物乳杆菌 8700：2 类干酪乳杆菌 8589：2 类干酪乳杆菌 30+圆孔干酪(30+round-eyed cheese)中益生菌株的筛选试验 这个试验研究了3株类干酪乳杆菌菌株和1株植物乳杆菌菌株，在含 有至少30％干重的脂肪的圆孔干酪中，作为辅料的性能。这些菌株都是从 人的肠粘膜中分离得到的。 所测试的菌株列于上文的表1中。 材料和方法 干酪的制备 根据标准技术方案，以经过巴氏消毒(73℃，15s)的牛奶 (Skanemejerier，Horby，瑞典)为原料，在4001的大桶中制备干酪。所 制备的干酪是含有30％干重的脂肪的半硬的圆孔干酪。用106cfu/ml的测 试菌株接种干酪乳(cheese milk)。所述乳中先接种乳引子培养物之后 (30min)用解冻的冷冻缓冲液将所述测试菌株加入其中。每一批产生4份大 约10kg的干酪，其中的3份在12℃酸化，1份开始在16℃酸化14天，然 后在12℃酸化，这些干酪是在塑料薄片(plastic foil)中酸化的。将干酪 制备重复4次。每星期制备4批，3批用不同的辅料，1批是对照，不用辅 料。每星期制备的顺序是随机的，总共制备22批，6批对照，4批辅料培 养，其中每批用4种辅料培养物。 干酪分析 酸化5个月后，从用不同辅料制备的分开的2批和作为对照的2批取 样，每批取1份干酪。酸化6个月后，从剩余的4批对照和以不同辅料进 行平行双份制备的批次取样(在不同的起始温度从酸化的每批中取2份干 酪)。对这些干酪取样以检测其感官特性、微生物学特性和物理化学特性。 干酪的微生物学取样分析 从干酪的中心无菌采集10g的样品，用90ml 2％的柠檬酸钠溶液在 Stomacher(Seward Medical Limited，London SEl 1PP，UK)中均化2.5min， 常规的稀释和涂平板后，在脑心浸液琼脂(BHI；Difco，Sparks，USA)上28 ℃培养4天，对所有需氧和厌氧活菌进行计数，在Rogosa琼脂(Merck， Darmstadt，Germany)上28℃厌氧培养4天，对乳杆菌进行活菌计数。 从干酪分离微生物 从每份样品随意挑取7个菌落。从总活菌计数的平板(BHI琼脂)中挑取 2个，从乳杆菌选择性活菌计数的平板(Rogosa琼脂)挑取3个。所用的可 计数平板有不少于20个菌落。 微生物学分析 REA分析 根据Johans son等，1995，见上文的技术方案制备染色体DNA以进行限 制性内切酶分析(REA)。通过在有溴化乙锭的CsCl梯度中进行染料浮力密 度离心，从共价闭环质粒DNA(大多数质粒DNA)中分离出染色体DNA。一些 线性和开环形式的质粒DNA可仍然存在于制备物中，但对最后结果只有微 弱的影响。可用荧光计(型号TKO 100，Hoefer Scientific Instruments，San Fransisco，USA)监测染色体DNA的浓度。在37℃用10单位的Hind III、 CLAI或ECORI(Boehringer)分别消化DNA(0.75mg)4小时。电泳并根据 Johansson等的描述扫描凝胶。使用150-235mm的水平浸没式0.9％琼脂 平板凝胶。用0.2mg含有分子量8.5-48.5kb的DNA片段的高分子量DNA 标志物(Bethesda Research Laboratories，BRL)和0.5mg含有分子量 0.2-2.2kb的DNA片段的DNA分子量标志物VI(Boehringer Mannheim)作 为标准品，在40V恒压、8.5℃电泳18h。电泳期间缓冲液循环使用。然后， 在溴化乙啶(2mg/ml)中将所述凝胶染色20min，浸入蒸馏水中，用UV穿透 发光仪(UV transluminator)(UVP Inc.，SanGabriel，USA)在302nm显影 并拍照。这种凝胶电泳的方式能使得分子量在大约1.8kb以下的带分布良 好且相对较好地分离。在用分辨率为200dpi的平板扫描仪将背光材料上 的REA图谱扫描到计算机中，然后将凝胶图像转为BioNumerics格式 (Applied Maths，Kortrijk，Belgium)。用BioNumerics 1.0进行凝胶的 所有进一步分析，用皮氏产物瞬时相关系数(Pearson product moment correlation coefficient)与通过算术平均值(arithmetic averages)进行 的不加权配对分组法(unweighted pair group method)(UPGMA)对该凝胶 痕迹进行分析。用BioNumerics 1.0将每一菌株的三种剪切片段(即通过 HIND III，CLA I和Eco RI剪切的片段)的数据进行组合。 RAPD分析 用随机扩增多态DNA法，即RAPD(the method of Randomly Amplified Polymorphic DNA)对所有分离物分型(Quednau等，1998，Current Microbiology，36，332-336)。从28℃过夜培养的培养物制备细胞粗提物， 所述过夜培养是将来自BHI琼脂平板的分离物，在1ml BHI中培养；或将 来自Rogosa琼脂平板的分离物在1ml含有乳杆菌的培养基(Lactobacillus carrying medium，LCM)中培养。将纯培养的细胞在1ml无菌Milli-Q水 (Millipore S.A.，Molsheim，France)中洗2次，装在带有直径为2mm的 玻璃珠的Eppendorf管中用Eppendorf Mixer(5432；Eppendorf，Hamburg， Germany)破粹。所用的引物具有序列5-ACGCGCCCT-3′，其在反应混合物中 的浓度为15mM。RAPD处理使目前已分型的乳杆菌在凝胶上产生合适数量 的相区别的带，正如在此之前在植物乳杆菌中所证明的(Johansson，M. L.，et al.，Randomly amplified polymorphic DNA(RAPD)for typing of Lactobacillus plantarum strains，Letters in Applied Microbiology， 21(1995)155-159)。 用皮氏产物瞬时相关系数与用算术平均值进行的不加权配对分组法 (UPGMA；Romesburg，1984)通过Gel ComparTM 4.2(Applied Maths，Kortrijk， Belgium)对凝胶的带模式进行分析，将RAPO模式的计算机组分析 (computerised cluster analysis)与视觉比较相结合。 感官评价 5个月后，由7个分级工(6个分级专家和1个Lund大学食品科学系的 员工)，在美味等级方面(分析后分为0-10个等级)对干酪分级，其中考虑 到许多属性(attribute)(表面、气味、初级质地(initial texture)、次级 质地(secondary texture)和风味的品质以及气味、风味和异味的强度)和 总体质量。6个月后，由4个分级专家将干酪在美味方面分级，考虑表面的、 质地的、味道的、风味的和总体的品质及11种相关属性的强度。这些干酪 被置于16℃，用随机的3位数字标记，按照随机的顺序使用。 结果 干酪的制备 在制备过程中所有检测组的干酪的pH值是相似的，测试组之间干酪的 组成如预计的那样有变动，其归因于如此规模的干酪制备中的困难。 干酪的微生物学分析 在酸化5个月后取样的干酪样品中，在有辅料的情况下制备的干酪具 有比对照干酪高约1Lg cfu/g的活菌计数，这些值在下文表2中列出。 表2 酸化5个月后的干酪中的活菌计数 干酪 活菌计数，Lg(cfu/g干酪) 总的需氧菌 总的厌氧菌 乳杆菌 对照 6.85±0.33 7.27±0.02 6.81±0.00 +04C 7.50±0.25 7.74±0.27 7.42±0.02 +8589：2 8.20±0.01 8.20±0.02 7.62±0.00 +8700：2 7.98±0.04 7.56±0.50 7.49±0.05 +02A 7.72±0.04 7.65±0.43 7.58±0.00 将从酸化5个月后取样的所有干酪样品中得到的分离物(10份干酪，70 份分离物)分成12种不同的RAPD型，将从对照干酪中得到的分离物分成7 种不同的RAPD型，将从有辅料04C的条件下制备的干酪中得到的分离物分 成5种不同的RAPD型，将从有辅料02A的条件下制备的干酪中得到的分离 物分成4种不同的RAPD型，将从有辅料8700：2和8589：2的条件下制备 的干酪中得到的分离物分别分成3种不同的RAPD型。所有干酪共有一种 RAPD型的分离物。 酸化5个月后，所有使用的辅料培养物在相应的平行双份干酪样品中 都被发现。辅料培养物04C，8589：2和02A仅能从乳杆菌选择性琼脂中重 新分离到(04C：6份分离物中的2份；8589：2：6份分离物中的3份；02A： 6份分离物中的4份)。在一份对照干酪中，发现一种RAPD型与04C相同的 分离物，在另一份对照干酪中，发现一种RAPD型与02A相同的分离物。辅 料8700：2是从总菌计数琼脂(8份分离物中的2份)和乳杆菌选择性琼脂(6 份分离物中的6份)中重新分离到的。 在酸化6个月后取样的干酪样品中，所有测试组的总活菌计数与在12 ℃酸化的干酪中的相似(8.0-8.4Lg(cfu/g干酪))，最初在16℃酸化的干 酪中的总活菌计数一般比在12℃下酸化的干酪中的总活菌计数低，特别是 在对照干酪中(7.4-7.5Lg(cfu/g干酪))。对于在12℃下酸化的干酪中的 乳杆菌的选择性计数，一般来说，有辅料时制备的干酪(7.6-7.8Lg(cfu/g 干酪))比对照(7.3Lg(cfu/g干酪))的计数高。酸化6个月后的乳杆菌选 择性计数不受升高的初始酸化温度的影响。 感官评价 酸化5个月后，对照干酪与在有辅料的条件下制备的干酪相比，质地(初 级和次级)方面的得分明显最低。对照干酪和在有辅料8700：2的条件下制 备的干酪与在有辅料8589：2和02A的条件下制备的干酪相比，表面的得 分低得多。在有辅料8700：2和02A的条件下制备的干酪与对照干酪相比， 风味品质和总体质量方面的得分高得多。在用辅料培养物制备的干酪中， 用8700：2制备的干酪在总体质量方面具有最高的得分，在异味强度方面 具有最低的得分。用02A制备的干酪在风味品质和强度方面具有最高的得 分。所有被分析的干酪在气味的品质和强度方面的得分非常相似(数据没有 显示)。 在下文的表3中，显示了每种干酪制备过程中的pH值、脂肪的干重和 非脂肪固体的湿度(平均值±标准偏差)，所述干酪来自每个测试组中的两个 批次。感官评价的标准是1＝差质量，低强度；10＝高质量，高强度；平均 值±标准偏差。 酸化6个月后，不同测试组的干酪间没有发现明显的不同，但所观察 的主要趋势是，初始酸化温度越升高、质地品质越低和风味越好，在有辅 料的条件下制备的干酪尤其如此。 表3 酸化5个月后用不同辅料制备的干酪的感官评价 对照1 04C 8589：2 02A 8700：1 压制后的PH 6,01±0,05 6,04±0,04 5,91±0,02 5,93±0,06 6,01±0,05 加盐后的PH 5,39±0,00 5,40±0,00 5,36±0,03 5,36±0,02 5,36±0,03 脂肪干重(％) 34,25±0,60 33,65±0,60 32,30±0,70 31,95±0,17 33,20±0,63 非脂肪固体的湿度 63,40±0,07 60,15±0,11 58,65±0,74 60,05±0,32 59,80±0,70 (％) 表面2 3,42±0,50*a 5,69±1,76 6,72±0,83*b 7,20±0,94*b 4,09±0,60*a 初级质地2 3,98±0,43*c 7,04±0,98*d 6,66±0,88*d 7,16±0,81*d 6,86±0,89*d 次级质地2 3,91±0,81*e 6,15±0,85*f 5,80±0,74*f 6,72±0,79*f 6,47±0,81*f 风味品质2 4,25±0,86*g 5,39±0,71 5,45±0,67 6,19±0,61*h 6,44±0,63*h 风味强度 4,98±0,83 5,84±0,84 5,77±0,62 5,96±0,52 6,08±0,69 异味强度 3,52±1,383 2,16±0,924 2,70±0,914 2,08±0,654 1,58±0,814 总体质量2 3,78±0,86*i 5,34±0,65 5,06±0,74 6,03±0,49*j 6,49±0,60*j 1)没有加入辅料 2)用不同字母表示的组间显著性差异(P＝0.05) 3)酸和苦 4)苦 益生特性测试 另外，当菌株以干酪中的形式运送时，其在肠道传代中的生存能力受 到监控，并与自发生长的次级微生物菌群进行比较。 给药研究 口服给药 挑选用菌株02A和8700：2接种的干酪以进行给药研究，这种挑选是基 于被接种的干酪的优良风味和测试菌株在干酪中酸化期间的生长能力和存 活能力。出现于干酪中的所述培养物超过107cfu/g干酪。将参与口服给 药的志愿者随机分成3组：1)食用没有加辅料的对照干酪，2)食用接种了 8700：2的干酪和3)食用接种了02A的干酪。第1组有8名志愿者(4男，4 女，年龄43-51岁)，第2组有10名志愿者(5男，5女，年龄25-55岁)， 第3组有11名志愿者(6男，5女，年龄26-60岁)。该研究跟踪进行5周。 在第3和4周，每天给予150g干酪，这相当于每天＞0.5·109cfu的测试 菌株的剂量。在研究期间，测试者禁止吃含有益生菌或抗生素的产品。在 开始给药之前(2周时)和给药2周之后(4周时)及在停止给药后1周(第5 周时)收集粪便样品。 从粪便中分离微生物 对粪便进行常规稀释和涂平板，在Rogosa琼脂中37℃厌氧培养3天， 分析乳杆菌的活菌数。从每个样品中随机挑出3个菌落来分型。所用的可 计数平板有不少于20个的菌落。 对分离物分型 利用随机扩增多态DNA法(RAPD；Quednau et al.，1998，同上)对所 有分离物分型。 再分离 将从用辅料制备的干酪中得到的分离物的RAPD模式与辅料的RAPD模 式和从参考干酪中得到的分离物的RAPD模式进行比较。假如从用辅料制备 的干酪中得到的分离物具有与辅料相同的RAPD型，那么就认为辅料已得到 再分离。 将从每个人的粪便中得到的分离物的RAPD模式与辅料的RAPD模式、 从用该辅料制备的干酪中得到的分离物的RAPD模式和对照干酪的分离物的 RAPD模式进行比较。假如在给予干酪后而不是在给予干酪之前，在粪便中 发现了RAPD型与辅料相同的分离物，那么就能得出辅料在肠道传代中存活 的结论。而且，假如在给予干酪1周后而不是在给予干酪之前在粪便中发 现了RAPD型与辅料相同的分离物，那么就能得出辅料已在人肠道中建群 (colonised)的结论。 统计学分析 通过用t-分布计算置信区间，而对活菌计数和感官特性得分值进行方 差分析并确定显著性差异。用SPSS 6.0(SPSS inc.，Chicago，USA)通过 Wilcoxon秩和检验(Wilcoxon rank sum test)对3次不同时间采样得到的 粪便中活菌计数的差异的显著性进行统计学评估。 口服给药的结果 在刚刚结束给药后，11个志愿者中有6个的粪便中发现菌株02A。10 个志愿者全部都发现有菌株8700：2。在结束给药的1周后，在这两组中任 何一名志愿者的粪便中都没有发现菌株02A或8700：2。对照干酪或用辅料 制备的干酪中自发产生的RAPD型在志愿者的粪便中都没有被发现。但是， RAPD型与02A相同的分离物在刚刚结束给药后的两名接受了对照干酪的志 愿者的粪便中被发现。而且，RAPD型与04C相同的分离物在结束给药的1 周后在两名志愿者的粪便中也被发现。这2名志愿者被给予了对照干酪或 用辅料02A制备的干酪。在食用干酪后，在所有组中，粪便中乳杆菌的活 菌计数增多。食用含有辅料培养物的组的这种增多具有统计学显著性。在 结束给药后，食用含有辅料培养物的组的乳杆菌活菌计数减少，对第3组 而言具有显著性，而食用对照干酪的组的乳杆菌活菌计数增多。 下表4显示了本研究中3个组的乳杆菌的选择性计数。 表4 组 1 对照干酪 2 干酪+8700：2 3 干酪+02A 2周后 5.81±0.74 4.87±0.38 5.94±0.48 3周后 6.08±0.60 6.72±0.80 6.64±0.46 4周后 6.97±0.74 5.59±0.92 5.74±0.54 结论 上述试验显示，类干酪乳杆菌8700：2，DSM 13434和类干酪乳杆菌02A， DSM 13432这两种菌株作为干酪制备的辅料培养物表现很好，并且能从酸化 5个月后的干酪中重新分离出来。这些菌株对于感官特性也具有积极的作 用，这意味着它们有超越自发生长的次生微生物菌群的优势。 给药研究表明，这两种菌株能在胃肠道传代中存活，因此满足竞争性 的要求，并因此满足了潜在益生菌株的选择标准。