本发明属于烟草检测技术领域，具体公开了一种烟叶中烟碱含量的检测方法包括以下步骤：S1、将烟叶干燥粉碎后加入氢氧化钠的甲醇溶液进行提取，离心过膜得到烟碱提取液；S2、所述烟碱提取液采用液相色谱仪检测，检测时，流动相包括体积百分比90%水+10%甲醇的流动相A，和体积百分比90%甲醇+10%水的流动相B，进行匀速洗脱，通过与标准品出峰时间比对定性生物碱组分，再根据标准曲线计算各生物碱组分浓度。本发明通过氢氧化钠与烟碱中的酸性基团结合形成可溶性盐类从而达到分离与提取烟碱的目的，使用紫外检测方法提高液相色谱测定烟碱含量准确性。