具体技术细节
[0004] 本发明提供了一种烟叶中烟碱含量的检测方法，通过氢氧化钠与烟碱中的酸性基团结合形成可溶性盐类从而达到分离与提取烟碱的目的，使用紫外检测方法提高液相色谱测定烟碱含量准确性。
[0005] 为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：一种烟叶中烟碱含量的检测方法，包括以下步骤：S1、将烟叶干燥粉碎后加入氢氧化钠的甲醇溶液进行提取，离心过膜得到烟碱提取液；
S2、所述烟碱提取液采用液相色谱仪检测，检测时，流动相包括体积百分比90%水+
10%甲醇的流动相A，和体积百分比90%甲醇+10%水的流动相B，进行梯度洗脱，通过与标准品出峰时间比对定性生物碱组分，再根据标准曲线计算各生物碱组分浓度，单位为mg/mL，生物碱组分含量的计算公式如下：
生物碱含量（mg/g DW）= ；
式中：y为标准曲线计算的烟碱浓度，单位为mg/mL；L1为提取液体积，单位为mL；M为样品重量，单位为g；m为样品干物率，具体为0.95。
[0006] 可选地，所述氢氧化钠的甲醇溶液中氢氧化钠的浓度为0.1 mol/L；甲醇采用75%的甲醇水溶液。
[0007] 可选地，氢氧化钠的甲醇溶液的加入量为烟叶粉末的50‑100倍。
[0008] 可选地，S1中提取时，超声震荡浸提20‑60min。
[0009] 可选地，液相色谱仪检测，配备紫外检测器，C18色谱柱，柱温40℃，检测波长259 nm。
[0010] 可选地，进样体积为10μL，洗脱速度为1.0 mL/min。梯度洗脱程序为：0min‑1.0min (0% B)‑4.0min (15% B)‑8.0min (35%B)‑15.0min (40%B)‑30min (0% B)。
[0011] 可选地，流动相A中，加入0.15%醋酸钠调整pH 为6.8。可选地，流动相B的pH控制为3.8。
[0012] 本发明还涉及所述检测方法在雪茄烟叶中烟碱含量检测中的应用。
[0013] 可选地，所述的烟碱包括但不限于降烟碱( NOR)、假木贼碱( ANAB)、新烟碱( ANAT)、及烟碱(NIC)。
[0014] 本发明具有以下有益效果：1、本发明研究发现，烟碱在60℃以下和210℃以上可与水混溶，形成水合物，同时也可与乙醚、乙醇等醇、醚混溶，易溶于大多数有机溶剂，与酸或碱结合后形成盐。另外烟碱有不同的旋光异构体，天然产物是左旋体，有不同的最大紫外吸收强度，通常在240‑260nm之间；本发明使用甲醇与超声震荡提取方式最大程度上提取了烟叶中的各类化合物，在此过程中，溶液中的氢氧化钠也发挥作用，与烟碱分子的酸性基团按一定的比例反应形成可溶性钠盐，充分溶解后获得烟碱提取液，减少其他干扰物质的浸出，萃取效率大大提高。
[0015] 2、本发明提取后的溶液采用采用液相色谱法对所述萃取液进行烟碱含量分析，可以使用紫外检测方法提高液相色谱测定烟碱含量准确性，避免其旋光异构体及相关物质的干扰。
法律保护范围
涉及权利要求数量10：其中独权5项，从权-5项
1.一种烟叶中烟碱含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将烟叶干燥粉碎后加入氢氧化钠的甲醇溶液进行提取，离心过膜得到烟碱提取液；
S2、所述烟碱提取液采用液相色谱仪检测，检测时，流动相包括体积百分比90%水+10%甲醇的流动相A，和体积百分比90%甲醇+10%水的流动相B，进行梯度洗脱，通过与标准品出峰时间比对定性生物碱组分，再根据标准曲线计算各生物碱组分浓度，单位为mg/mL，生物碱组分含量的计算公式如下：
生物碱含量（mg/g DW）= ；
式中：y为标准曲线计算的烟碱浓度，单位为mg/mL；L1为提取液体积，单位为mL；M为样品重量，单位为g；m为样品干物率，具体为0.95。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述氢氧化钠的甲醇溶液中氢氧化钠的浓度为0.1 mol/L；甲醇采用75%的甲醇水溶液。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：氢氧化钠的甲醇溶液的加入量为烟叶粉末的50‑100倍。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：S1中提取时，超声震荡浸提20‑60min。
5. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：液相色谱仪检测，配备紫外检测器，C18色谱柱，柱温40℃，检测波长259 nm。
6. 根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：进样体积为10μL，洗脱速度为1.0 mL/min；梯度洗脱程序为：0min‑1.0min (0% B)‑4.0min (15% B)‑8.0min (35%B)‑15.0min (40%B)‑30min (0% B)。
7. 根据权利要求1 6任意一项所述的检测方法，其特征在于：流动相A中，加入0.15%醋~
酸钠调整pH 为6.8。
8.根据权利要求1 6任意一项所述的检测方法，其特征在于：流动相B的pH控制为3.8。
~
9.权利要求1 8任意一项所述检测方法在雪茄烟叶中烟碱含量检测中的应用。
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10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的烟碱包括但不限于降烟碱( NOR)、假木贼碱( ANAB)、新烟碱( ANAT)、及烟碱(NIC)。
