[0001] 本发明属于烟草检测技术领域，涉及一种烟叶中烟碱含量的检测方法。

[0002] 烟碱是烟叶中的重要生物碱之一，在茄科烟草属植物中也被检测到，它还是一种有高挥发性的植物源杀虫剂，可防治各类蔬菜、果树上的害虫幼虫等，目前已有的烟叶中烟碱提取分离方法有乙醇‑水超声萃取法、酸提倍释法、甲醇提取法、醋酸‑水提取法，主流的检测方法有气相法、气相色谱‑质谱联用法、气相色谱‑氢焰检测器法、高效液相色谱‑光电二极管阵列检测器法、超高效液相色谱‑质谱联用法等。

[0003] CN111337604 A中公开了一种烟草制品中烟碱含量的测定方法，其采用气相色谱法对所述萃取液进行烟碱含量分析，虽然气相色谱法在烟叶中烟碱含量的测定中使用较为广泛，但也存在着烟碱易转化、检出限与检测限较低等问题。

[0019] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。

[0020] 实施例1（1）针对发酵过的雪茄烟叶，称取0.5 g烟叶粉末到50 mL离心管中，加入含0.1 mol/L 75％氢氧化钠的甲醇溶液50 mL，超声震荡浸提60 min，离心过膜得到烟碱提取液。

[0021] （2）将步骤（1）中的烟碱提取液上液相色谱仪检测，配备的紫外检测器，C18色谱柱，柱温40℃，检测波长259 nm。进样体积 10 μL，流动相A（90%水+10%甲醇，pH 6.8，0.15%醋酸钠），流动相B（90%甲醇+10%水，pH 3.8），梯度洗脱程序为：0min‑1.0min  (0% B)‑4.0min (15% B)‑8.0min (35%B)‑15.0min (40%B)‑30min (0% B)。匀速洗脱1.0 mL/min。
通过与标准品出峰时间比对定性生物碱组分，再根据标准曲线计算各生物碱组分浓度（mg/mL）。其色谱图见图1。

[0022] 实施例2（1）针对发酵过的雪茄烟叶，称取0.5 g烟叶粉末到50 mL离心管中，加入含0.1 mol/L 75％氢氧化钠的甲醇溶液50 mL，超声震荡浸提60 min，离心过膜得到烟碱提取液。

[0023] （2）将步骤（1）中的烟碱提取液上气相色谱检测仪，配备的火焰离子检测器，FFAP色谱柱，升温程序从起始柱温50℃开始，以9 ℃/min的升温速度开始升温，升至230℃保持2民。通过与标准品出峰时间比对定性生物碱组分，再根据标准曲线计算各生物碱组分浓度（mg/mL）。其色谱图见图2。

[0024] 实施例3（1）针对发酵过的雪茄烟叶，称取0.5 g烟叶粉末到50 mL离心管中，加入含0.1 mol/L 75％氢氧化钠的甲醇溶液50 mL，超声震荡浸提60 min，离心过膜得到烟碱提取液。

[0025] （2）将步骤（1）中的烟碱提取液上液相色谱仪检测，配备的紫外检测器，C18色谱柱，柱温40℃，检测波长259 nm。进样体积 10 μL，流动相A（超纯水，pH 6.8，0.15%醋酸钠），流动相B（甲醇，pH 3.8），30%B恒等洗脱，洗脱速度1.0 mL/min。通过与标准品出峰时间比对定性生物碱组分，再根据标准曲线计算各生物碱组分浓度（mg/mL）。其色谱图见图3。

[0026] 以上实施例1 实施例3测定的烟碱含量见表1。~

[0027] 表1

[0028] 注：*为未检出。

[0029] 通过对实施例1和实施例2对比，可以发现，气相方法干扰多，由于烟叶中并非只有烟碱具有挥发性，利用气相方法对烟碱的定性工作较为复杂，没有实施例1的液相色谱法直接明了。通过对实施例1和实施例3的对比可以发现，实施例1经过流动相洗脱梯度的优化设计，和流动相配比设计，可将四种烟碱很好的分离，而常用的流动相配比的实施例3，其结果是四种烟碱无法做到很好分离。

[0030] 以上实施例描述了本发明的优选实施方式，但本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。