本发明公开了一种兽用疫苗复合佐剂及其制备方法和应用,所述疫苗复合佐剂中的活性成分为含锰复合物和Mincle激动剂。本发明的兽用疫苗复合佐剂将Mn与TDB组合,使TDB佐剂的免疫增强效果。所述复合佐剂可以诱导强烈免疫应答反应,显著提升了免疫效果,且使用无残留损害。本申请中利用H7N9亚型禽流感灭活病毒为抗原,与复合佐剂混合后制备的H7N9疫苗与单独使用DDA‑TDB相比,能增强机体的体液免疫和细胞免疫应答反应,减少病毒载量,提高保护水平,为兽用疫苗的生产提供产品和技术支撑。