技术领域
[0001] 本发明属于提纯技术领域，具体涉及一种超声波活性提纯灵芝孢子油的方法。
相关背景技术
[0002] 灵芝孢子油是从灵芝（学名：Ganodermalucidum，又称赤芝、神芝等）的孢子中提取的一种油状物质。灵芝孢子是灵芝成熟后从菌褶中弹射出来的微小生殖细胞，富含多种生物活性成分。灵芝孢子油因其丰富的营养价值和药用价值而在保健品市场中占有一席之地。
[0003] 灵芝孢子油中含有的主要成分包括但不限于：三萜类化合物：灵芝酸（ganodericacids）、灵芝醇（ganoderols）等，这些成分被认为具有抗炎、抗氧化、免疫调节等多种生物活性。多糖：灵芝多糖（polysaccharides），尤其是β‑葡聚糖，这类成分有助于增强人体免疫力。不饱和脂肪酸：如亚油酸（linoleicacid）、棕榈酸（palmiticacid）等，这些都是必需脂肪酸，对人体健康有益。微量元素：包括硒、锗等矿物质元素，这些元素对人体健康有一定的促进作用。
[0004] 灵芝孢子油因其含有上述活性成分，被认为具有以下功效：增强免疫力：灵芝多糖和三萜类化合物被认为能够激活免疫系统，增强机体的防御能力。抗氧化：灵芝孢子油中的抗氧化成分可以清除自由基，对抗氧化应激，保护细胞免受损害。抗炎：三萜类化合物具有抗炎作用，可以帮助减轻炎症反应。辅助治疗：一些研究表明灵芝孢子油可能对心血管疾病、肝脏疾病、糖尿病等慢性病有一定的辅助治疗作用。
具体实施方式
[0027] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
[0028] 本发明使用的菌种为市售产品：瑞士乳杆菌，保藏编号：CCTCCAB2010205，购自中国典型培养物保藏中心。
[0029] 保加利亚乳杆菌，保藏编号：CCTCCCB20082295，购自中国典型培养物保藏中心。
[0030] 短双歧杆菌，保藏编号：SHBCCD24424JCM7017，购自上海保藏微生物中心。
[0031] 干酪乳杆菌，保藏编号：SHBCCD24737，购自上海保藏微生物中心。
[0032] 实施例1本实施例提供了一种超声波活性提纯灵芝孢子油的方法，包括以下步骤：
步骤1，将灵芝孢子粉通过变温压差脆化干燥，然后进行热爆处理，得到预处理后的灵芝孢子粉；
步骤2，将预处理后的灵芝孢子粉置于高压釜中，静置12min后于1s内完成泄压，重复2次，得到脆化灵芝孢子粉；
步骤3，将质量比1:4的脆化灵芝孢子粉和水混合，得到混合料液，向混合料液中加入纤维素酶，酶解5h，灭酶后，向混合料液中加入保加利亚乳杆菌，43℃发酵1.5天，灭菌；继续加入短双歧杆菌，在42℃下发酵2.6天，灭菌、过滤、烘干，粉碎，得到发酵灵芝孢子粉；
步骤4，将发酵灵芝孢子粉与水混合，进行超声波提取，置于超声波提取设备中，提取完成后离心，取油料，油料分级过滤后再进行精密过滤，过滤后的油料放入沉淀设备自然沉淀，取上层液得到灵芝孢子油。
[0033] 纤维素酶在混合料中的使用量为110U/mL。
[0034] 保加利亚乳杆菌在混合料液中的使用量为106CFU/mL。
[0035] 短双歧杆菌在混合料液中的使用量为109CFU/mL。
[0036] 热爆处理的步骤为：将经过通过变温压差脆化干燥的孢子粉通过螺杆挤出机，该螺杆挤出机的螺杆加热温度梯度依次为60℃，85℃，100℃，135℃；挤出获得膨化后的孢子粉。
[0037] 自然沉淀设备的温度控制在22℃。
[0038] 所述超声波提取时，超声功率设置为370W，浸提温度设置为63℃，浸提时间设置为25min。
[0039] 将装有鲜活的灵芝孢子粉的膨化罐内的温度升为85℃，压强升至高于膨化罐外大气压0.2MPa，保持的时间为12分钟；将膨化罐内压强降至真空状态，将膨化罐内降温至室温，然后在所述真空状态下保持45分钟，最后破除真空，制得脆化灵芝孢子粉。
[0040] 将脆化的灵芝孢子粉置于超微粉碎机中，进行微粉破壁，制得脆化灵芝孢子粉。
[0041] 所述的脆化灵芝孢子粉的原料筛选后的粒度大于2000目。
[0042] 油料按60目、80目、120目分级过滤。
[0043] 将发酵灵芝孢子粉与水按重量体积比1：8的比例混合。
[0044] 高压釜的压力为1.8Mpa。
[0045] 自然沉淀8天。
[0046] 实施例2本实施例提供了一种超声波活性提纯灵芝孢子油的方法，包括以下步骤：
步骤1，将灵芝孢子粉通过变温压差脆化干燥，然后进行热爆处理，得到预处理后的灵芝孢子粉；
步骤2，将预处理后的灵芝孢子粉置于高压釜中，静置10min后于1s内完成泄压，重复2次，得到脆化灵芝孢子粉；
步骤3，将质量比1:3的脆化灵芝孢子粉和水混合，得到混合料液，向混合料液中加入纤维素酶，酶解4h，灭酶后，向混合料液中加入保加利亚乳杆菌，42℃发酵1天，灭菌；继续加入短双歧杆菌，在40℃下发酵2天，灭菌、过滤、烘干，粉碎，得到发酵灵芝孢子粉；
步骤4，将发酵灵芝孢子粉与水混合，进行超声波提取，置于超声波提取设备中，提取完成后离心，取油料，油料分级过滤后再进行精密过滤，过滤后的油料放入沉淀设备自然沉淀，取上层液得到灵芝孢子油。
[0047] 纤维素酶在混合料中的使用量为100U/mL。
[0048] 保加利亚乳杆菌在混合料液中的使用量为106CFU/mL。
[0049] 短双歧杆菌在混合料液中的使用量为108CFU/mL。
[0050] 热爆处理的步骤为：将经过通过变温压差脆化干燥的孢子粉通过螺杆挤出机，该螺杆挤出机的螺杆加热温度梯度为60℃，80℃，100℃，130℃；挤出获得膨化后的孢子粉。
[0051] 自然沉淀设备的温度控制在20℃。
[0052] 所述超声波提取时，超声功率设置为350W，浸提温度设置为60℃，浸提时间设置为20min。
[0053] 将装有鲜活的灵芝孢子粉的膨化罐内的温度升为80℃，压强升至高于膨化罐外大气压0.1MPa，保持的时间为10分钟；将膨化罐内压强降至真空状态，将膨化罐内降温至室温，然后在所述真空状态下保持40分钟，最后破除真空，制得脆化灵芝孢子粉。
[0054] 将脆化的灵芝孢子粉置于超微粉碎机中，进行微粉破壁，制得脆化灵芝孢子粉。
[0055] 所述的脆化灵芝孢子粉的原料筛选后的粒度大于2000目。
[0056] 油料按60目、80目、120目分级过滤。
[0057] 将发酵灵芝孢子粉与水按重量体积比1：6的比例混合。
[0058] 高压釜的压力为1.5Mpa。
[0059] 自然沉淀5天。
[0060] 实施例3本实施例提供了一种超声波活性提纯灵芝孢子油的方法，包括以下步骤：
步骤1，将灵芝孢子粉通过变温压差脆化干燥，然后进行热爆处理，得到预处理后的灵芝孢子粉；
步骤2，将预处理后的灵芝孢子粉置于高压釜中，静置15min后于2s内完成泄压，重复3次，得到脆化灵芝孢子粉；
步骤3，将质量比1:5的脆化灵芝孢子粉和水混合，得到混合料液，向混合料液中加入纤维素酶，酶解6h，灭酶后，向混合料液中加入保加利亚乳杆菌，45℃发酵2天，灭菌；继续加入短双歧杆菌，在45℃下发酵3天，灭菌、过滤、烘干，粉碎，得到发酵灵芝孢子粉；
步骤4，将发酵灵芝孢子粉与水混合，进行超声波提取，置于超声波提取设备中，提取完成后离心，取油料，油料分级过滤后再进行精密过滤，过滤后的油料放入沉淀设备自然沉淀，取上层液得到灵芝孢子油。
[0061] 纤维素酶在混合料中的使用量为120U/mL。
[0062] 保加利亚乳杆菌在混合料液中的使用量为107CFU/mL。
[0063] 短双歧杆菌在混合料液中的使用量为109CFU/mL。
[0064] 热爆处理的步骤为：将经过通过变温压差脆化干燥的孢子粉通过螺杆挤出机，该螺杆挤出机的螺杆加热温度梯度为65℃，85℃，105℃，135℃；挤出获得膨化后的孢子粉。
[0065] 自然沉淀设备的温度控制在25℃。
[0066] 所述超声波提取时，超声功率设置为400W，浸提温度设置为65℃，浸提时间设置为30min。
[0067] 将装有鲜活的灵芝孢子粉的膨化罐内的温度升为90℃，压强升至高于膨化罐外大气压0.3MPa，保持的时间为15分钟；将膨化罐内压强降至真空状态，将膨化罐内降温至室温，然后在所述真空状态下保持50分钟，最后破除真空，制得脆化灵芝孢子粉。
[0068] 将脆化的灵芝孢子粉置于超微粉碎机中，进行微粉破壁，制得脆化灵芝孢子粉。
[0069] 所述的脆化灵芝孢子粉的原料筛选后的粒度大于2000目。
[0070] 油料按60目、80目、120目分级过滤。
[0071] 将发酵灵芝孢子粉与水按重量体积比1：10的比例混合。
[0072] 高压釜的压力为2Mpa。
[0073] 自然沉淀10天。
[0074] 对比例1本对比例与实施例1的区别为：不进行热爆处理。
[0075] 对比例2本对比例与实施例1的区别为：不进行高压釜处理。
[0076] 对比例3本对比例与实施例1的区别为：超声条件不同。
[0077] 所述超声波提取时，超声功率设置为200W，浸提温度设置为63℃，浸提时间设置为35min。
[0078] 对比例4本对比例与实施例1的区别为：超声条件不同。
[0079] 所述超声波提取时，超声功率设置为400W，浸提温度设置为63℃，浸提时间设置为10min。
[0080] 对比例5本对比例与实施例1的区别为：使用的酶种类不同。具体为：将纤维素酶替换为果胶酶。
[0081] 对比例6本对比例与实施例1的区别为：使用的菌种类不同。具体为：将保加利亚乳杆菌替换为瑞士乳杆菌；短双歧杆菌替换为干酪乳杆菌。
[0082] 性能测试对本发明的实施例1‑3和对比例1‑6的灵芝孢子油进行动物实验，用该产品涂布受试动物大白鼠后，观察大白鼠皮肤的刺激反应、皮肤中羟脯氨酸的含量。
[0083] 试验方法：6月龄大白鼠，分为10组，每组5只，未涂抹作为对照组。
[0084] 减去背部鼠毛面积5cm2，用0.1克该产品涂于无毛皮肤每日二次，每次0.1克连续3个月，观察无刺激反应，同时取皮用氯氨T法进行羟脯氨酸含量分析。之后进行人体皮肤实验也没发现有任何刺激现象。
[0085] 水分残存率＝（实施例/对比例的表面羟脯氨酸含量‑未涂抹的表面羟脯氨酸含量）/未涂抹的表面羟脯氨酸含量 100%。
[0086] 表1.放置10min后大白鼠皮肤表面的水分残存差别。
[0087]
[0088] 由实验结果可知，受试大白鼠皮肤均无红肿异常发生。施用该产品后，放置相同时间的大白鼠皮肤表面的水分残存率明显增加，保湿效果显著提高。
[0089] 对比实施例1与对比例1 3可看出,经过热爆处理和高压釜处理能够显著提高保水~效果。对比实施例1与对比例3 4可看出,本发明的超声条件显著提高了保水效果。对比实施~
例1与对比例5 6可看出,本发明使用的酶和菌的种类，使保水效果更佳。
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[0090] 以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
