[0001] 本申请涉及烟草根黑腐病防治技术领域，特别是一种用于防治烟草根黑腐病的试剂。

[0002] 根黑腐病是一种由真菌引起的病害，是烟草的主要病害之一，主要危害烟草的根部，导致烟草根部腐烂，影响烟草的生长和产量。这种病害通常在烟草种植地区较为常见，尤其是在土壤湿度较高、通风不良的环境下容易发生。烟草根黑腐病的症状主要包括根部变褐、腐烂，地上部分植株矮小、叶片黄化等。随着病情加重，烟草植株会逐渐死亡。该病害的病原菌通常在土壤中越冬，通过风雨、灌溉水等传播，从烟草根部伤口侵入。

[0003] 在适宜的温湿度条件下，病原菌繁殖迅速，连作种植、土壤质地粘重、排水不良等环境因素也容易诱发烟草根黑腐病，表现为根部腐烂和植株生长不良。初期病株根尖变褐，开始腐烂，随着病情加重，根部逐渐变为褐色或黑色，并出现软腐现象，直至整株死亡。地上部分的植株则表现为矮小、叶片黄化，严重时甚至整株枯死。在潮湿的环境下，病部还可能产生白色霉层。近年来烟草根黑腐病呈增长趋势，会对烟草的生长和产量造成严重影响，防治工作愈发困难。从而导致烟草的巨大经济损失。

[0004] 预防烟草根黑腐病需要采取综合措施，从品种选择、轮作换茬、精细整地、合理施肥、适时浇水到药剂防治等方面加强管理。同时，针对烟草根黑腐病发病特征，以抑制病原菌为主。但该方法人工管理成本高，对管理人员要求高，不适于农户使用，在农户中推广后，落实难度大，导致烟草种植区域烟草根黑腐病日益严重。

[0005] 通过喷洒具有杀菌效果的农药后又会导致环境污染和残留的问题，且由于病菌可在土壤中长期存在，杀灭效果不理想。

[0006] 大理天门冬，是一种百合科植物。这种植物在中国西南地区常见，特别是在云南和四川的海拔较高的地方。它通常生长在岩石缝隙或者灌木丛中，是一种多年生的草本植物。大理天门冬的根和茎都可以入药，具有养阴清热、润肺止咳、消肿止痛的功效。大理天门冬所含主要有效成分为天冬氨酸、三萜皂苷、苦参碱。未见相关成分在防治烟草根黑腐病上的相关报道和研究。

[0007] 公开于背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域普通技术人员所公知的现有技术。

[0022] 下面结合附图与实施例对本发明作进一步的详细说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。

[0023] 实施例

[0024] 以下实施例中所用物料和仪器如无特殊说明均为商业渠道获得；所用检测方法如无特殊说明，均为现有方法。

[0025] 以下实施例中所用烟草根黑腐病病原菌为基生根串珠霉菌(Thielaviopsis basicola)为Roland W.S.Weber,Henry T.Tribe.This species was first described as Torula basicola(Berkeley&Broome,1850),parasitizing stem bases of peas and Nemophila auriculata at King’s Cliffe,England.Thielaviopsis basicola is the only species in the Ceratocystis‑Thielaviopsis complex with multicellular chlamydospores.Mycologist.2004；18(1):6‑10.doi:10.1017/s0269‑915x(04)00102‑8.中记载的菌株，保藏于云南农业大学，申请人于申请日后20年内免费向公众提供。

[0026] 实施例1大理天门冬根系提取物制备

[0027] 1)取新鲜健康大理天门冬的根系，使用自来水冲洗以去除表面多余的杂质，滤纸吸干表面水分；

[0028] 2)将根系在95℃下杀青30min，放入60℃烘箱中烘干(8h)；

[0029] 3)将烘干的样品置于粉碎机中粉碎，过孔径为60目的筛，将所得粉末置于干燥容器中保存备用；

[0030] 4)称取干燥粉末1g置于圆底烧瓶水提取3次，每次提取方法为：粉末加入80ml蒸馏水中加热到100℃后，提取3h后，固液分离得到粉末；合并3次提取所得滤液；

[0031] 5)于2000rad/min下离心滤液2min，重复操作2次，离心后合并上清液蒸干浓缩，获得提取物；

[0032] 6)将步骤5中获得的提取物倒入瓶中(空瓶先称重)，再称重，做好记录，贴好标签并写上编号名称，保存至4℃冰箱中备用；

[0033] 实施例2大理天门冬根系提取液制备

[0034] 按照1:10的体积比例将实施例1中所得提取物与无菌水搅拌混匀，得到提取液。

[0035] 实施例3大理天门冬根系提取液抗烟草根黑腐病病原菌性能验证

[0036] 1)PDA培养基配制：将马铃薯(去皮)200g，蔗糖20g，琼脂15g，加入1L ddH2O煮沸30min，过滤后高温(121℃，20min)灭菌制成培养基备用；

[0037] 2)将烟草根黑腐病菌(Thielaviopsis basicola)接种到上述PDA培养基中央，放入28℃的恒温培养箱中培养5d以活化病原菌；

[0038] 3)将培养好的烟草根黑腐病病原菌用直径为5mm的灭菌打孔器打成若干菌饼；

[0039] 4)用无菌枪头吸取200ul实施例2中所得提取液加入PDA培养基中，制成含有提取液的培养基，比例为1:4；对照组培养基不加提取液。

[0040] 5)将步骤3中的病原菌菌饼接种至培养基中央，做3次重复，于28℃恒温培养箱培养实验组、对照组培养基7d；

[0041] 6)观察并记录烟草根黑腐病病原菌菌落在对照组和实验组培养基上的生长情况，评估上述提取液对病原菌的抑制作用并计算抑菌率。对照组如图1a)所示，及实验组培养皿如图1b)所示。由图1可见，培养3天后，处理组的病原菌菌落直径小于对照组，说明该试剂具有抑制病原菌生长的作用，随着培养时间的延长，病原菌菌落直径虽然有所增大，但依然小于对照组的直径，说明该试剂可可持续发挥抑制病原菌生长的作用。其中培养3d后，处理组的抑菌率最高，达52.38％。

[0042] 抑菌率＝(对照平板病原菌直径‑处理平板病原菌直径)/对照平板病原菌直径*100％；

[0043] 表1病原菌生长情况及抑菌率

[0044]   3d 5d 7d对照病原菌直径(mm) 42 65 80
处理病原菌直径(mm) 20 43 58
抑菌率(％) 52.38 33.84 27.5

[0045] 实施例4

[0046] 与实施例1的区别在于：杀青条件为在90℃下杀青20min；粉碎前的烘干为70℃下烘干7h；

[0047] 水提操作为：按粉末质量与水体积比为0.5g:75ml混合：提取为加热至95℃后，提取2h，过滤得到滤液。

[0048] 对水体所得合并滤液离心；离心条件为在1500rad/min下离心2～3min。

[0049] 实施例5

[0050] 与实施例1的区别在于：杀青条件为在100℃下杀青40min；粉碎前的烘干为50℃下烘干9h；

[0051] 水提操作为：按粉末质量与水体积比为1.5g:85ml混合：提取为加热至100℃后，提取4h，过滤得到滤液。

[0052] 对水体所得合并滤液离心；离心条件为在2500rad/min下离心2～3min。

[0053] 实施例6

[0054] 与实施例2的区别在于：将所得提取物与水按体积比为1:11混合后制得。

[0055] 实施例7

[0056] 与实施例2的区别在于：将所得提取物与水按体积比为1:11混合后制得。

[0057] 实施例8大理天门冬根系提取液在染病烟株上的运用

[0058] 将实施例1中所得大理天门冬根系提取液喷洒于烟草根黑腐病染病烟株上。

[0059] 在实验田中随机各选6株染病烟苗分为2组，其中一组为实验组，另一组为对照组。

[0060] 实验组处理方式：采用实施例1中所得芦笋根系提取液稀释10倍后喷洒于烟株发病区域，按10ml/株喷洒，并于首次喷施后3天内再次重复上述操作，连续处理3次后，正常养护烟株1个月后观察喷洒区域情况。

[0061] 对照组与实验组的区别在于喷施清水。

[0062] 1个月后观察结果为：对照组的染病区域未发生任何变化，且染病情况加重。实验组的染病区域面积增大速度减慢。

[0063] 实施例9

[0064] 与实施例8实验组的区别在于：采用灌根的方式进行处理。所得效果与实施例8相似。

[0065] 尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。