[0001] 本发明涉及棉花黄萎病防治领域，具体涉及沼液用于防治棉花黄萎病的应用及防治方法。

[0002] 由大丽轮枝菌引起的黄萎病是世界性的棉花重要病害之一。沼气发酵是由种类繁多的微生物参与的一个生化反应过程。发酵之后产生的沼渣和沼液是一种能改善土壤结构和生态系统的有机肥料，由于沼液和沼渣的排放量越来越多，沼液的综合利用在沼液的处理中也扮演的角色越来越重要。

[0003] 目前鸡粪沼液用于棉花黄萎病防治尚未见报道。

[0015] 实施例1沼液的生产

[0016] 将鸡粪放入发酵罐内中温38.5℃左右厌氧发酵，获得鸡粪发酵液，再经沉淀过滤，去除沼液中部分细小砂砾、不溶杂质；经酸化水解，分解原沼液中的大分子；随后经过无机陶瓷膜的超滤膜进行过滤除杂，再依次经过纳滤膜、反渗透膜进行截留浓缩，去除沼液中的固体不溶颗粒和其它难以被作物吸收的大分子物质，获得高倍浓缩的以有机小分子营养物质为主的鸡粪沼液。发酵获得的鸡粪发酵液主要成份为：N：1-2g/L，P2O5：5-10g/L，K2O：20-40g/L，有机质：20-50g/L，腐植酸：5-10g/L，微量元素Te：3-6g/L，PH为10.0。

[0017] 实施例2在温室环境条件下沼液对棉花黄萎病的控制作用

[0018] 将灭菌后的蛭石和沙子按6：4混合，做直径6cm的无底纸钵，放置22cm×16cm的塑料盘内。以耐病品种鲁棉研21为供试品种，每钵播种棉花种子8粒，出苗后留苗5株，每处理24个钵，每6个钵为一个重复，4次重复，随机排列。棉花播种后，将塑料盘置温室中，待棉苗第一片真叶露尖时，用沼液灌根或喷雾处理，4d后接种中等偏强致病力黄萎病菌株Vd080孢子悬浮液10mL，孢子浓度为1×107个孢子/ml。接种方法为，将10mL孢子悬浮液倒入直径
10cm的培养皿中，将纸钵从塑料盘中取出放置在培养皿中40s，待孢子悬浮液被吸干后，将纸钵放回塑料盘中。3d后再用沼液灌根或喷雾处理棉苗。温室温度控制在18℃-28℃，接种Vd080 20d后按5级分级标准进行病害的分级调查，计算病株率、病情指数和防治效果。

[0019]

[0020]

[0021] 表1温室环境条件下鸡粪沼液对棉花黄萎病菌的抑制作用

[0022]

[0023] 表1显示了温室环境条件下沼液对棉花黄萎病菌的抑制作用，如表1所示，实施结果表明在温室环境条件下，沼液灌根或喷雾对棉花黄萎病具有较好的控制作用，当鸡粪沼液用量达到160L/ha灌根或50倍喷雾时，对棉花黄萎病的防治效果达到60.0％以上。图1为沼液温室防治黄萎病效果图，如图1所示，当使用400L/ha沼液灌根处理时，对棉花黄萎病的防治效果达到74.6％；使用25倍沼液喷雾处理时，对棉花黄萎病的防治效果达到71.4％。

[0024] 实施例3：大田条件下沼液对棉花黄萎病的控制作用

[0025] 滴灌试验在棉花黄萎病病圃进行，于5月30日棉花黄萎病发生始期开始，连续滴灌3次，间隔10天。设置4个施药剂量45L/ha、75L/ha、120L/ha和150L/ha，以100亿枯草芽孢杆菌15Kg/ha滴灌为对照，每处理4次重复，每重复4行区，小区面积20.0㎡。第1次滴灌前和最后一次滴灌后10天，按照国家标准调查发病情况，计算病情指数和防病效果。防治效果的计算公式如下：

[0026]

[0027] 表2鸡粪沼液滴灌对棉花黄萎病病的防治效果

[0028]

[0029] 表2显示了沼液滴灌对棉花黄萎病病的防治效果，如表2所示，实施结果表明，沼液能有效防治棉花黄萎病，当施药剂量为75L/ha～120L/ha时，防治效果为40.9％～41.2％，显著高于100亿枯草芽孢杆菌的防治效果。

[0030] 喷雾试验在棉花黄萎病重病田进行，于5月30日棉花黄萎病发生始期开始，连续喷雾3次，间隔10天，试验设置4个处理，分别为10倍、25倍、50倍和100倍，以0.5％氨基寡糖素100倍喷雾为对照，每处理4次重复，每重复4行区，小区面积32.0㎡。第1次喷雾前和最后一次滴灌后10天，按照国家标准调查发病情况，计算病情指数和防病效果。

[0031] 表3鸡粪沼液喷雾对棉花黄萎病病的防治效果

[0032]

[0033] 表3显示了沼液喷雾对棉花黄萎病病的防治效果，如表3所示，实施结果表明，沼液能有效防治棉花黄萎病，当稀释25～50倍喷雾时，防治效果为34.4％～36.3％，与0.5％氨基寡糖素的防治效果相当。

[0034] 实施例4：生长速率法检测沼液对棉花黄萎病病原菌丝生长的抑制

[0035] 按照植物病害研究法常用的生长速率测定法，测定棉花黄萎病病原菌的生物活性：用打孔器取5mm菌落边缘生长旺盛的病原菌菌种，放在加药的PDA平板上面，以培养基内加等量的无菌水作为对照，每次重复5次，置于25℃恒温培养，用十字交叉法测定每个菌落的直径，以其平均值为代表菌落的直径，以下列公式求出抑制菌丝生长率：

[0036] 抑制菌丝生长率＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5)×100％[0037] 表4鸡粪沼液对棉花黄萎病病原菌丝生长的抑制作用

[0038]

[0039] 表4显示了沼液对棉花黄萎病病原菌丝生长的抑制作用，图2为生长速率法鸡粪沼液对棉花黄萎病菌的抑菌效果图，实施结果表明沼液对棉花黄萎病病原菌菌丝生长具有较好的抑制作用，当沼液浓度达到6.0％时，抑菌率达到100％。

[0040] 实施例5牛津杯法研究沼液对棉花黄萎病病原菌丝生长的抑制

[0041] 在PDA平板中央放入牛津杯并加200μL沼液，待充分吸收后，在PDA平板上均匀涂布棉花黄萎病菌孢子液，浓度为1×107个/mL，共5次重复。25℃培养5d后，用游标卡尺计量其抑菌圈直径。

[0042] 图3显示了牛津杯法沼液对棉花黄萎病菌的抑菌效果，实施结果表明，沼液对棉花黄萎病病原菌菌丝生长具有较好的抑制作用，沼液对棉花黄萎病菌抑菌圈直径为23±2.48mm。

[0043] 实施例6对扣培养法研究沼液挥发性物质对棉花黄萎病病原菌丝生长的抑制[0044] 在直径90mm培养皿的皿底倒入20mL PDA培养基，待凝固后，在其中心接种5μl的黄萎病菌Vd080的菌液，查彼液体培养7d；再在另一个直径90mm培养皿的皿底倒入1mL沼液，然后将上述接种Vd080培养皿倒扣在含沼液培养皿上，用不透气的保鲜膜密封，放入25℃恒温培养箱中。以仅接种Vd080的培养皿为对照，每个处理重复4次。每天观察病原菌及生防菌的生长状况，对扣培养14d后采用十字交叉法测量病原菌的菌落直径，计算沼液挥发性代谢产物对病原菌生长的抑制率。

[0045] 图4显示了生长速率法测定沼液挥发性物质和非挥发性物质对棉花黄萎病菌的抑菌效果，实施结果表明，沼液挥发性物质对棉花黄萎病病原菌菌丝生长具有较好的抑制作用，对棉花黄萎病菌抑菌率为100％，推断该物质是鸡粪发酵过程中会产生的NH3、H2S及活性小分子物质。

[0046] 实施例7生长速率法研究沼液非挥发性物质对棉花黄萎病病原菌丝生长的抑制[0047] 将沼液倒入烧杯中，置于37℃恒温箱中放置1个月，每隔2天搅拌1次，然后将剩余液体，按照植物病害研究法推荐的生长速率测定法，对棉花黄萎病病原菌进行了生物活性测定，方法参照实例4。

[0048] 抑制菌丝生长率＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5)×100％[0049] 表5沼液非挥发性物质对棉花黄萎病病原菌丝生长的抑制作用

[0050]

[0051] 表5显示了沼液非挥发性物质对棉花黄萎病病原菌丝生长的抑制作用，实施结果表明，沼液非挥发性物质对棉花黄萎病病原菌菌丝生长几乎无抑制作用(图4)。