技术领域
[0001] 本发明涉及有机合成技术领域，具体涉及一种DIO的制备方法。
相关背景技术
[0002] DiO即DiOC18(3)，全称为3,3′‑dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现绿色荧光。DiO是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiO被激发后可以发出绿色的荧光，DiO和磷酯双层膜结合后最大激发波长为484nm，最大发射波长为501nm。DiO可以溶解于无水乙醇、DMSO和DMF，其中在DMSO中溶解度大于10mg/ml。发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。DiO被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long‑termtracer)。DiO通常不会明显影响细胞的生存力(viability)。DiO对于细胞膜染色的荧光强度通常要低于DiI，有时对于某些经过固定的组织的染色效果欠佳。DiO除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。但是DiO的具体合成路线未见报告。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明实施方式作进一步地详细描述。
[0018] 实施例1在反应瓶中加入2‑甲基苯并恶唑13.3克，溴代十八烷50克，四丁基碘化胺3.7克，氮气保护下，加热至140℃，反应48小时，冷却至室温，加入甲基叔丁基醚搅拌，过滤，干燥，得到类白色溴代季铵盐固体32g,收率69%。
[0019] 实施例2在反应瓶中加入季铵盐9.32g(0.02mol)，N,N'‑二苯甲脒1.96g(0.01mol)，乙酸酐
100毫升，乙酸钠2.46g(0.03mol)，加热至60℃，反应3时候后，减压回收溶剂至干，加入二氯甲烷500毫升，过滤，得到产物的二氯甲烷溶液。
[0020] 实施例3在反应瓶中加入上述二氯甲烷溶液500毫升，2M高氯酸钠溶液100毫升，室温搅拌
12小时，水洗，分液，无水硫酸钠干燥，回收二氯甲烷，柱层析得到橙色固体6.6g，收率75%。
产物的检测结果如下：
1
HNMR (400 MHz, DMSO‑d6, TMS) : 8.29 (t, J 13.7 Hz, 1H), 7.76 (d, J
7.5 Hz, 2H), 7.67 (d, J 7.3 Hz, 2H), 7.53‑7.33(m, 4H), 6.03 (d, 2H), 4.13 (t, J=9.0 Hz, 4H), 1.67 (quin, J=9.0 Hz, 4H,), 0.97 ‑1.65(m, 66H) MS (ESI) m/z: +
781.7[M]。
[0021] 以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
