[0001] 本发明涉及一类联苯基取代的五元杂环类化合物及其制备方法、药物组合物和应用，具体涉及一类具有PD‑1/PD‑L1蛋白‑蛋白相互作用抑制活性的联苯基取代的五元杂环类化合物及其制备方法、药物组合物和应用。

[0002] 癌症是一类严重危害人类生命健康的基因变异性疾病。程序性死亡受体(PD‑1)及其配体PD‑L1/2是免疫检查点中重要的共抑制分子，它们在宿主的固有免疫和适应性免疫应答中起负调控作用，因此在机体的免疫稳态中发挥重要的调节作用。研究发现多种肿瘤通过上调自身和肿瘤微环境的PD‑L1表达，持续激活PD‑1/PD‑L1信号通路，抑制T细胞的功能，导致肿瘤免疫逃逸的发生。肿瘤免疫疗法是利用人体自身免疫系统对肿瘤细胞进行杀伤。肿瘤免疫疗法在临床上不断取得的成功，使得肿瘤免疫疗法成为目前炙手可热的肿瘤治疗手段。

[0003] 免疫逃逸是恶性肿瘤的一种基本特征。在正常生理条件下，人体的免疫系统能够识别出“异己分子”并及时进行清除。但对于肿瘤患者而言，由于机体免疫能力的下降和肿瘤细胞特殊的生物学特征，使得肿瘤细胞可以通过各种不同的机制逃避免疫系统的识别和杀灭，最终得以在体内生存与发展，即免疫逃逸现象。肿瘤免疫逃逸是一个复杂的病理过程，涉及到患者的免疫系统和肿瘤细胞的生物学特征，比如肿瘤的异质性、能量代谢和肿瘤干细胞等。尽管目前我们对肿瘤免疫逃逸的机制还不是十分清楚，但已经认识到免疫检查点与之密切相关，因此基于免疫检查点的药物研发已成为肿瘤免疫疗法中进展最快的一类，其中PD‑1/PD‑L1单抗药物和小分子抑制剂的研发已成为当今全球新药研发领域中的热点。

[0004] 细胞毒性T淋巴细胞相关分子‑4(CTLA‑4)、程序性细胞死亡受体‑1(PD‑1)和程序性细胞死亡配体‑1(PD‑L1)是最广泛研究和公认的抑制性检查点途径。免疫检查点的共刺激分子主要包括CD27、CD40、OX40、GITR、CD137、OX40和ICOS等，而共抑制分子则主要为CTLA‑4、PD‑1、PD‑L1、PD‑L2、TIM‑3、VISTA和IDO等。其中，共刺激分子可以增强免疫应答，从而有利于免疫细胞清除“异己分子”；而共抑制分子则对免疫起着负性调节作用，从而维护机体的免疫稳态，避免过度免疫而造成组织损伤。目前PD‑1/PD‑L1作为肿瘤免疫治疗的靶点已得到充分的确证。PD‑1除了表达在成熟的T细胞外，还可以低水平表达在胸腺内的CD4‑CD8‑T细胞、B细胞、树突状细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞。PD‑1有两个配体，其中PD‑L1主要表达在成熟的T细胞、B细胞以及一些非造血类型细胞，但PD‑L1可以在炎症因子(如IFN‑γ、TNF‑α和VEGF)的诱导下于多种细胞上表达。PD‑L2表达范围相对较窄，主要是在巨噬细胞和DC细胞中表达。当PD‑1与其配体结合后会引起胞质区ITSM结构域中的酪氨酸发生磷酸化，从而通过招募TCR附近的SHP‑2磷酸酶，抑制TCR近端激酶的活化，导致TCR‑CD3分子和Lck介导的ZAP‑70磷酸化水平减弱，进而激活其下游信号通路。PD‑1/PD‑L对免疫的负调控主要是通过抑制PI3K‑AKT和RAS信号通路，阻断对T细胞激活、增殖、功能和生存等具有重要作用的转录因子的活化，如激活蛋白‑1(AP‑1)、活化T细胞的核因子(NFAT)和NF‑κB。

[0005] 此外，众多研究表明，PD‑1/PD‑L信号通路的异常与人类多种肿瘤的发生、发展和预后不良存在密切的关系。在肿瘤微环境中，当PD‑1/PD‑L1信号通路被过度激活后，肿瘤细胞可以通过抗凋亡信号以及抑制抗原特异性T淋巴细胞的活性而获得生存。另外，使用PD‑1或PD‑L1抗体阻断PD‑1/PD‑L1信号通路则能够抑制肿瘤细胞的生长。通过逆转对T淋巴细胞信号转导的影响，重新激活T淋巴细胞，同时促进效应T淋巴细胞和记忆T淋巴细胞的生成以及抑制调节性T淋巴细胞的分化，最终增强肿瘤微环境内T淋巴细胞的免疫杀伤能力，从而达到治疗肿瘤的目的。目前全球已经有 和等多款PD‑1/PD‑L1单克隆抗体药物上市，广泛应用于临床治疗恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌、胃癌、肝癌、肾癌、膀胱癌等多种实体肿瘤和血液癌症，临床治疗效果显著，并且目前适应症还在不断地增加。与此同时，PD‑1/PD‑L1单抗药物与其它药物联用治疗多种恶性肿瘤的临床试验也在积极的开展中。

[0006] 然而，PD‑1/PD‑L1单抗药物也存在明显的不足，如易导致T细胞过度激活，引发免疫相关副作用，加上不能口服给药，依从性差，且制备和纯化难度大，造成价格昂贵等。因此研发PD‑1/PD‑L1小分子抑制剂具有重要价值。

[0076] 下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步说明。

[0077] 试剂与材料：实验所需要的所有试剂未经特别说明均为市售化学纯或分析纯产品。

[0078] 仪器：1H NMR用BrukerAV‑300MHz型核磁共振仪测定，化学位移值(δ)以ppm为单位，耦合常数(J)值以Hz为单位，TMS为内标。质谱(MS)分析仪器为岛津LCMS‑2020型质谱仪测定；薄层层析(TLC)使用青岛海洋化学有限公司生产HG/T2354‑92型GF254薄层层析硅胶，ZF7型三用紫外分析仪254nm显色；柱色谱使用青岛海洋化工厂粗孔(ZCX‑II)型300‑400目柱层析硅胶。

[0079] 实施例1：((5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,3,4‑噁二唑‑2‑基)甲基)甘氨酸(1)及其盐酸盐(1s)的合成

[0080]

[0081] 2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑羧酸(1A)的合成

[0082] 将3‑溴‑2‑甲基苯甲酸(10.00g，46.50mmol)、苯硼酸(11.34g，93.00mmol)、碳酸钾(19.28g，139.51mmol)和Pd(PPh3)4(0.54g，0.47mmol)加入100mL1,4二氧六环和10mL水中，N2氛围80℃反应12h。减压浓缩，用4M HCl调pH至2，抽滤，干燥，得白色固体9.53g，收率+ 196％。MS(EI)m/z 213[M+H] ；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.74‑7.34(m,1H),
7.50‑7.38(m,3H),7.38‑7.34(m,2H),7.33‑7.28(m,2H),2.29(s,3H).

[0083] 2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑羧酸甲酯(1B)的合成

[0084] 将1A(9.53g，44.90mmol)加入100mL甲醇中，搅拌下滴入5mL浓硫酸，回流反应4h。冷却，减压浓缩，加入300mL水，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，合并有机相，得黄色油状液+ 1
体9.96g，收率98％。MS(EI)m/z 227[M+H]；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.45‑
7.32(m,4H),7.30‑7.15(m,3H),7.07(d,J＝7.5Hz,1H),3.98(s,3H)，2.32(s,3H).[0085] 2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑碳酰肼(1C)的合成

[0086] 将1B(9.96g，44.02mmol)加入100mL乙醇中，加入5mL水合肼，回流反应5h。冷却，减压浓缩，加入100mL冰水，析出固体，抽滤，干燥，得白色固体9.24g，收率93％。MS(EI)m/z + 1227[M+H]；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)8.02(s,1H),7.45(d,J＝7.5Hz,3H),7.37(s,1H),7.33(d,J＝1.8Hz,3H),2.52(s,3H).

[0087] N'‑(2‑氯乙酰基)‑2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑甲酰肼(1D)的合成

[0088] 将氯乙酰氯(0.50g，4.46mmol)用5mL无水二氯甲烷溶解，滴入经冰浴冷却的1C(1.00g，4.42mmol)和三乙胺(1.34g，13.26mmol)二氯甲烷溶液中，反应3h，抽滤，干燥，得白+ + 1色固体1.21g，收率90％。MS(EI)m/z 303[M+H] ；MS(EI)m/z 301[M+H]；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.64‑7.52(m,3H),7.51‑7.31(m,5H),5.06(s,2H),2.33(s,3H).[0089] 2‑氯甲基‑5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,3,4‑噁二唑(1E)的合成[0090] 将1D(0.70g，2.31mmol)，三氯氧磷5mL，回流反应12h。减压浓缩，乙酸乙酯溶解后滴入冰水中，萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得白色固体0.47g，收率71％。MS(EI)m/z + 1
285[M+H] ；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.62‑7.56(m,4H),7.50‑7.32(m,4H),
5.04(s,2H),2.39(s,3H).

[0091] ((5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,3,4‑噁二唑‑2‑基)甲基)甘氨酸甲酯(1m)的合成

[0092] 将1E(0.30g，1.05mmol)，K2CO3(0.51g，3.69mmol)，甘氨酸甲酯盐酸盐(0.33g，2.63mmol)加入5mL乙腈中，回流反应8h。冷却，减压浓缩，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，+ 1
柱层析纯化得白色固体0.14g，收率41％。MS(EI)m/z 338[M+H] ；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.84(dt,J＝7.2,1.8Hz,1H),7.56‑7.47(m,4H),7.45‑7.40(m,1H),
7.39‑7.33(m,2H),4.68(s,2H),4.12(s,2H),3.67(s,3H),2.33(s,3H).

[0093] ((5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,3,4‑噁二唑‑2‑基)甲基)甘氨酸乙酯(1e)的合成

[0094] 参照1m的制备方法，由甘氨酸乙酯盐酸盐得白色固体，收率39％。MS(EI)m/z 352+ 1[M+H]；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.86(dt,J＝7.2,1.8Hz,1H),7.55‑7.48(m,
4H),7.47‑7.43(m,1H),7.41‑7.36(m,2H),4.65(s,2H),4.19(q,J＝7.2Hz,2H),4.10(s,
2H),2.34(s,3H),1.26(t,J＝6.9Hz,3H).

[0095] ((5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,3,4‑噁二唑‑2‑基)甲基)甘氨酸异丙酯(1i)的合成

[0096] 参照1m的制备方法，由甘氨酸异丙酯盐酸盐得白色固体，收率35％。MS(EI)m/z + 1366[M+H]；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.82(dt,J＝7.2,1.5Hz,1H),7.55‑7.49(m,3H),7.48‑7.42(m,2H),7.41‑7.34(m,2H),5.10(p,J＝6.3Hz 1H),4.62(s,2H),4.10(s,
2H),2.34(s,3H),1.20(d,J＝6.9Hz,6H).

[0097] ((5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,3,4‑噁二唑‑2‑基)甲基)甘氨酸(1)及其盐酸盐(1s)的合成

[0098] 将1m(0.35g，1.04mmol)，LiOH(0.75mg，3.11mmol)加入3mL甲醇中，室温反应5h，减压浓缩，加入2mL水，用4M盐酸调pH至3，抽滤，干燥，得白色固体(1)0.31g，收率92％。将1(0.31mg，0.94mmol)加入1mL1,4‑二氧六环(4M)盐酸溶液中，室温反应过夜，减压浓缩，无水+ 1乙醚洗涤，抽滤，干燥，得白色固体0.30g。MS(ESI)m/z 324[M+H] ；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)9.21(s,1H),7.92(dt,J＝7.2,1.8Hz,1H),7.54‑7.47(m,4H),7.46‑7.43(m,1H),
7.40‑7.36(m,2H),4.67(s,2H),4.09(s,2H),2.44(s,3H).

[0099] 采用与实施例1相似的操作，制得下列化合物：

[0100]

[0101]

[0102] 实施例13：(3‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,2,4‑噁二唑‑5‑基)甲基)甘氨酸(13)及其盐酸盐(13s)的合成

[0103]

[0104] 3‑溴‑2‑甲基苯甲腈(2A)的合成

[0105] 将3‑溴‑2‑甲基苯甲腈(10.00g，51.01mmol)、苯硼酸(12.44g，102.02mmol)、碳酸钾(7.76g，56.11mmol)和Pd(PPh3)4(0.59g，0.51mmol)加入100mL 1,4二氧六环和10mL水中，N2氛围90℃反应12h。冷却，减压浓缩，加入300mL水，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，合并+ 1有机相，得白色固体8.87g，收率90％。MS(EI)m/z 194[M+H]；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.62(d,J＝7.5Hz,1H),7.47(d,J＝8.4Hz,2H),7.45‑7.27(m,5H),2.46(s,3H).[0106] N‑羟基‑2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑羧酰亚胺(2B)的合成

[0107] 将2A(8.86g，45.85mmol)、羟基氯化铵(11.15g，0.16mol)、碳酸氢钠(15.41g，183.39mmol)加入100mL甲醇中，50℃反应4h。冷却，减压浓缩，加入300mL水，乙酸乙酯萃取，+ 1
饱和食盐水洗涤，合并有机相，得白色晶状固体9.5g，收率91％。MS(EI)m/z 227[M+H]；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.65(d,J＝7.5Hz,1H),7.49‑7.25(m,7H),2.29(s,3H).N‑((氯羰基)氧基)‑2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑羧酰胺(2C)的合成

[0108] 将2B(9.50g，41.98mmol)加入100mL二氯甲烷中，滴加三乙胺(8.50g，83.97mmol)、冰浴冷却5min，滴加氯乙酰氯(5.69g，50.38mmol)，升至室温反应4h。直接投入下一步反应。

[0109] 5‑(氯甲基)‑3‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,2,4‑噁二唑(2D)的合成[0110] 将2C溶于50mL甲苯，120℃回流反应12h。减压浓缩，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干+ 1燥，柱层析纯化得白色固体8.8g，收率71％。MS(EI)m/z 285[M+H] ；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.90(dd,J＝6.9,2.4Hz,1H),7.50‑7.32(m,7H),4.50(dd,J＝8.7,
7.2Hz,2H),2.45(s,3H).

[0111] (3‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,2,4‑噁二唑‑5‑基)甲基)甘氨酸甲酯(13m)的合成

[0112] 参照实施例1的方法，将2D和甘氨酸甲酯盐酸盐进行缩合反应，制得白色固体13m，+ 1收率58％。MS(EI)m/z 338[M+H]；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.84‑7.81(m,1H),
7.50(d,J＝1.5Hz,1H),7.47(d,J＝4.2Hz,1H),7.45‑7.41(m,2H),7.39(q,J＝2.1Hz,2H),
7.35(t,J＝1.5Hz,1H),4.19(s,2H),3.88(s,3H),3.42(s,2H),2.34(s,3H).

[0113] 化合物13及其盐酸盐(13s)的合成

[0114] 参照实施例1的方法，将13m水解制得13，收率84％。再由13与盐酸成盐，制得13s，+ 1收率78％。MS(EI)m/z 324[M+H] ；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)9.51(s,1H),7.86‑7.81(m,1H),7.48(d,J＝1.6Hz,1H),7.46(d,J＝4.2Hz,1H),7.44‑7.40(m,2H),7.38(q,J＝
2.1Hz,2H),7.36(t,J＝1.5Hz,1H),4.15(s,2H),3.42(s,2H),2.36(s,3H).

[0115] 采用与实施例13相似的操作，制得下列化合物：

[0116]

[0117] 实施例17：(5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)甲基)甘氨酸(17)及其盐酸盐(17s)的合成

[0118]

[0119] 2‑氯甲基‑5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑(3A)的合成[0120] 将1D(1.00g，3.30mmol)，劳森试剂(1.14g，3.34mmol)加入10mL甲苯中回流反应2h。减压浓缩，乙酸乙酯溶解后滴入冰水中，萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得白色固体+ 1
0.70g，收率71％。MS(EI)m/z 301[M+H]；HNMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.62(s,1H),
7.50‑7.31(m,7H),5.04(s,2H),2.39(s,3H).

[0121] (5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,3,4‑噻二唑‑2‑基)甲基)甘氨酸甲酯(17m)的合成

[0122] 参照实施例1的方法，将3A和甘氨酸甲酯盐酸盐进行缩合反应，制得白色固体17m，+ 1收率58％。MS(EI)m/z 354[M+H] ；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)7.59(d,J＝1.8Hz,1H),
7.47(d,J＝7.5Hz,2H),7.43(s,1H),7.38(d,J＝8.1Hz,4H),4.23(s,2H),3.65(s,3H),3.51(s,2H),2.39(s,3H).

[0123] 化合物17及其盐酸盐(17s)的合成

[0124] 参照实施例1的方法，将17m水解制得17，收率84％。再由17与盐酸成盐，制得17s，+ 1收率78％。MS(EI)m/z 340[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)9.28(s,1H),7.60(d,J＝
1.8Hz,1H),7.49(d,J＝7.5Hz,2H),7.45(s,1H),7.39(d,J＝8.1Hz,4H),4.20(s,2H),3.56(s,2H),2.33(s,3H).

[0125] 采用与实施例17相似的操作，制得下列化合物：

[0126]

[0127] 实施例19：((5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,3,4‑噁二唑‑2‑基)甲基)甘氨酸(19)及其盐酸盐(19s)的合成

[0128]

[0129] 1‑(3‑溴‑2‑甲基苯基)乙烷‑1‑酮(4A)的合成

[0130] 将1,3‑二溴‑2‑甲基苯(10.00g,40.01mmol)溶于85mLDMF，搅拌下加入三正丁基(1‑乙氧基乙烯)锡(14.41g,40.01mmol)和Pd(PPh3)4(0.46g,0.40mmol)，N2氛围85℃反应12h。冷却，乙酸乙酯萃取，减压浓缩。加入20mL 4M HCl，室温反应3h。乙酸乙酯萃取，无水硫+ 1
酸钠干燥，柱层析纯化得油状物8.02g，收率94％。MS(EI)m/z 213[M+H]；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.59(d,J＝7.8Hz,1H),6.93(s,2H),2.60(s,3H),2.30(s,3H).[0131] 1‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)乙烷‑1‑酮(4B)的合成

[0132] 参照实施例1的方法，将4A和苯硼酸进行偶联反应，制得油状物4B，收率87％。MS+ 1(EI)m/z 211[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)7.70(dd,J＝7.2,2.4Hz,1H),7.50‑
7.26(m,7H),2.58(d,J＝2.7Hz,3H),2.22(d,J＝3.0Hz,3H).

[0133] 2‑溴‑1‑(2‑甲基‑1,1'‑联苯)‑3‑基)乙烷‑1‑酮(4C)的合成

[0134] 将4B(1.50g,7.13mmol)和溴化铜(3.51g,14.27mmol)加入20mL乙酸乙酯中，回流反应8h。冷却，抽滤，减压浓缩。加入10mL四氢呋喃、亚磷酸二乙酯(0.26g,1.87mmol)和三乙胺(0.21g,2.06mmol)，室温反应2h。乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得黄色油+ 1状物1.34g，收率65％。MS(EI)m/z 289[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)7.80(dd,J＝
6.3,2.7Hz,1H),7.50‑7.36(m,5H),7.35‑7.26(m,2H),4.91(s,2H),2.21(s,3H).

[0135] 2‑氨基‑1‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)乙烷‑1‑酮(4D)的合成

[0136] 将4C(1.21g,4.15mmol)和二甲酰氨基钠(0.39g,4.15mmol)加入15mL乙腈中，75℃反应12h，趁热抽滤，减压浓缩，加入5mL 4M HCl，回流1h。减压浓缩，乙酸乙酯重结晶，得白+ 1色固体0.65g，收率70％。MS(EI)m/z 226[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)8.39(s,
3H),7.90‑7.84(m,1H),7.53‑7.39(m,6H),4.52(d,J＝6.0Hz,2H),2.28(s,3H).

[0137] 2‑氯‑N‑(2‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯基]‑3‑基))‑2‑氧代乙基)乙酰胺(4E)的合成[0138] 将氯乙酰氯(0.20g，1.79mmol)用3mL无水二氯甲烷溶解，滴入经冰浴冷却的4D(0.40g，1.78mmol)和三乙胺(0.74g，5.33mmol)二氯甲烷溶液中，反应3h，乙酸乙酯萃取，无+ 1水硫酸钠干燥，柱层析纯化得黄色固体0.48g，收率90％。MS(EI)m/z 302[M+H] ；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)7.65(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.52‑7.45(m,2H),7.45‑7.41(m,
1H),7.41(d,J＝3.2Hz,2H),7.38‑7.33(m,2H),7.26(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),4.83(s,2H),
2.28(s,3H).2‑氯甲基‑5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)噁唑(4F)的合成

[0139] 将4E(0.20g,0.51mmol)加入3mL乙酸酐中，加入4滴浓硫酸，80℃反应2h。冷却，乙+ 1酸乙酯萃取，减压浓缩，制得黄色油状物0.11g，收率62％。MS(EI)m/z 284[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)7.68(s,1H),7.51‑7.26(m,8H),4.83(s,2H),2.28(s,3H).[0140] ((5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)噁唑‑2‑基)甲基)甘氨酸甲酯(19m)的合成[0141] 参照实施例1的方法，将4F和甘氨酸甲酯盐酸盐进行缩合反应，制得白色固体19m，+ 1
收率58％。MS(EI)m/z 337[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)7.65(dd,J＝7.8,1.5Hz,
1H),7.51‑7.45(m,2H),7.44‑7.41(m,1H),7.40(d,J＝3.2Hz,2H),7.37‑7.33(m,2H),7.26(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),5.12(p,J＝6.3Hz,1H),4.46(s,2H),3.91(s,3H),3.86(s,2H),
2.24(s,3H).

[0142] 化合物19及其盐酸盐(19s)的合成

[0143] 参照实施例1的方法，将19m水解制得19，收率84％。再由19与盐酸成盐，制得19s，+ 1收率78％。MS(ESI)m/z 323[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)9.51(s,1H),7.69(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.50‑7.47(m,2H),7.46‑7.41(m,1H),7.39(d,J＝3.2Hz,2H),7.36‑7.30(m,2H),7.25(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),3.96(s,2H),3.37(s,2H),2.25(s,3H).

[0144] 采用与实施例19相似的操作，制得下列化合物：

[0145]

[0146]

[0147] 实施例25：((2‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)噻唑‑5‑基)甲基)甘氨酸(25)及其盐酸盐(25s)的合成

[0148]

[0149] 3‑溴‑2‑甲基‑1,1'‑联苯(5A)的合成

[0150] 将1,3‑二溴‑2‑甲基苯(10.00g，40.01mmol)、苯硼酸(4.88g，40.01mmol)、碳酸钾(11.06g，80.02mmol)和Pd(PPh3)4(0.46g，0.40mmol)加入100mL 1,4二氧六环和10mL水中，N2氛围80℃反应12h。冷却，减压浓缩，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，得白色油状物+ 18.90g，收率90％。MS(EI)m/z 247[M+H] ；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.73(s,
1H),7.51‑7.32(m,7H),2.39(s,3H).

[0151] 4,4,5,5‑四甲基‑2‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)‑1,3,2‑二氧硼烷(5B)的合成[0152] 将5A(9.00g，36.42mmol)、苯硼酸(18.50g，72.83mmol)、醋酸钾(10.76g，72.85mmol)和Pd(dppf)Cl2(0.53g，0.07mmol)加入100mL 1,4二氧六环中，N2氛围80℃反应
12h。冷却，减压浓缩，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得白色油状物8.00g，收+ 1
率74％。MS(EI)m/z 295[M+H]；H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ(ppm)7.66(s,1H),7.56‑
7.32(m,7H),2.33(s,3H),1.21(s,12H).

[0153] 2‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)噻唑‑5‑甲醛(5C)的合成

[0154] 将5B(3.05g，10.42mmol)、2‑溴噻唑‑5‑甲醛(1.00g，5.21mmol)、碳酸钾(1.44g，10.42mmol)和Pd(PPh3)4(0.11g，0.10mmol)加入10mL 1,4二氧六环和1mL水中，N2氛围80℃反应12h。冷却，减压浓缩，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得白色油状物+ 1
2.00g，收率80％。MS(EI)m/z280[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)9.82(s,1H),8.10(s,1H),7.63(dd,J＝7.6,1.5Hz,1H),7.51‑7.40(m,4H),7.39‑7.33(m,3H),2.30(s,3H).[0155] ((2‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)噻唑‑5‑基)甲基)甘氨酸甲酯(25m)的合成将5C(0.15g,0.44mmol)加入5mL DCM中，依次加入甘氨酸甲酯盐酸盐(0.14g,0.89mmol)、TEA(0.13g,1.33mmol)、冰醋酸(0.13g,2.21mmol)和氰基硼氢化钠(0.14g,2.21mmol)，室温反应4h，加10mL水，乙酸乙酯萃取，柱层析纯化得白色固体0.12g，收率60％。MS(ESI)m/z 353+ 1
[M+H] ；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)8.10(s,1H),7.63(dd,J＝7.6,1.5Hz,1H),7.51‑
7.40(m,4H),7.39‑7.33(m,3H),4.38‑4.22(m,2H),3.92(s,3H),3.88(s,1H),3.87‑3.78(m,
2H),2.30(s,3H).

[0156] 化合物25及其盐酸盐(25s)的合成

[0157] 参照实施例1的方法，将25m水解制得白色固体25，收率60％。再将25与盐酸成盐，+ 1制得白色固体25s，收率94％。MS(ESI)m/z 339[M+H] ；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)
10.03(s,1H),9.83(s,1H),8.10(s,1H),7.63(dd,J＝7.6,1.5Hz,1H),7.51‑7.40(m,4H),
7.39‑7.33(m,3H),4.38‑4.22(m,2H),3.88(s,1H),3.87‑3.78(m,2H),2.30(s,3H).[0158] 采用与实施例27相似的操作，制得下列化合物：

[0159]

[0160] 实施例27：(5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)噻吩‑2‑基)甲基)甘氨酸(27)及其盐酸盐(27s)的合成

[0161]

[0162] 5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)噻吩‑2‑甲醛(6A)的合成

[0163] 将5B(3.07g，10.47mmol)、5‑溴噻吩‑2‑甲醛(1.00g，5.23mmol)、碳酸钾(1.45g，10.47mmol)和Pd(PPh3)4(0.06g，0.05mmol)加入10mL 1,4二氧六环和1mL水中，N2氛围80℃反应12h。冷却，减压浓缩，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得黄色油状物+ 1
2.00g，收率80％。MS(EI)m/z 279[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)9.85(s,1H),7.47(dd,J＝7.8,6.3Hz,2H),7.43‑7.39(m,1H),7.39‑7.38(m,1H),7.36(d,J＝2.1Hz,2H),
7.36‑7.31(m,2H),7.25(dd,J＝6.6,2.4Hz,1H),7.17(d,J＝3.6Hz,1H),2.22(s,3H).[0164] (5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)噻吩‑2‑基)甲基)甘氨酸甲酯(27m)的合成[0165] 参照实施例27的方法，将6A和甘氨酸甲酯盐酸盐进行缩合反应，制得黄色固体+ 1
27m，收率58％。MS(ESI)m/z 352[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)7.57(dd,J＝7.8,
6.3Hz,2H),7.45‑7.40(m,1H),7.39‑7.37(m,1H),7.35(d,J＝2.1Hz,2H),7.34‑7.31(m,
2H),7.24(dd,J＝6.6,2.4Hz,1H),7.19(d,J＝3.6Hz,1H),4.45(s,2H),3.90(s,3H),3.88(s,2H),2.23(s,3H).

[0166] 化合物27及其盐酸盐(27s)的合成

[0167] 参照实施例1的方法，将27m水解制得黄色固体27，收率60％。再将27与盐酸成盐，+ 1制得黄色固体27s，收率94％。MS(ESI)m/z 338[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)7.67(dd,J＝7.8,6.3Hz,2H),7.48‑7.42(m,1H),7.40‑7.38(m,1H),7.37(d,J＝2.1Hz,2H),
7.35‑7.32(m,2H),7.28(dd,J＝6.6,2.4Hz,1H),7.20(d,J＝3.6Hz,1H),4.42(s,2H),3.88(s,2H),2.24(s,3H).

[0168] 采用与实施例27相似的操作，制得下列化合物：

[0169]

[0170] 实施例29：(5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)呋喃‑2‑基)甲基)甘氨酸(29)及其盐酸盐(29s)的合成

[0171]

[0172] 5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)呋喃‑2‑甲醛(7A)的合成

[0173] 将5B(3.35g，11.43mmol)、5‑溴呋喃‑2‑甲醛(1.00g，5.71mmol)、碳酸钾(1.58g，11.43mmol)和Pd(PPh3)4(0.07g，0.06mmol)加入10mL 1,4二氧六环和1mL水中，N2氛围80℃反应12h。冷却，减压浓缩，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得黄色油状物+ 1
0.98g，收率65％。MS(EI)m/z 263[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)9.85(s,1H),7.49(dd,J＝7.8,6.3Hz,2H),7.43‑7.42(m,1H),7.39‑7.37(m,1H),7.35(d,J＝2.1Hz,2H),
7.34‑7.29(m,2H),7.23(dd,J＝6.6,2.4Hz,1H),7.17(d,J＝3.6Hz,1H),2.25(s,3H).[0174] (5‑(2‑甲基‑[1,1'‑联苯]‑3‑基)呋喃‑2‑基)甲基)甘氨酸甲酯(29m)的合成[0175] 参照实施例27的方法，将7A和甘氨酸甲酯盐酸盐进行缩合反应，制得黄色固体+ 1
29m，收率59％。MS(ESI)m/z 336[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)7.55(dd,J＝7.8,
6.3Hz,2H),7.46‑7.43(m,1H),7.39‑7.37(m,1H),7.36(d,J＝2.1Hz,2H),7.35‑7.29(m,
2H),7.26(dd,J＝6.6,2.4Hz,1H),7.15(d,J＝3.6Hz,1H),4.46(s,2H),3.91(s,3H),3.88(s,2H),2.25(s,3H).

[0176] 化合物29及其盐酸盐(29s)的合成

[0177] 参照实施例1的方法，将29m水解制得黄色固体29，收率60％。再将29与盐酸成盐，+ 1制得黄色固体29s，收率94％。MS(ESI)m/z 322[M+H]；H NMR(300MHz,DMSO‑d6)δ(ppm)7.56(dd,J＝7.8,6.3Hz,2H),7.47‑7.41(m,1H),7.39‑7.38(m,1H),7.36(d,J＝2.1Hz,2H),
7.35‑7.31(m,2H),7.24(dd,J＝6.6,2.4Hz,1H),7.18(d,J＝3.6Hz,1H),4.42(s,2H),3.89(s,2H),2.23(s,3H).

[0178] 实施例30：本发明化合物对PD‑1/PD‑L1蛋白‑蛋白相互作用的抑制活性[0179] 1、实验目的

[0180] 使用PD‑1/PD‑L1 binding assay kit试剂盒(BPS Bioscience)检测本发明化合物对PD‑1/PD‑L1蛋白‑蛋白相互作用的抑制活性。

[0181] 2、主要实验材料

[0182] PD‑1/PD‑L1 binding assay kit试剂盒购自BPS Bioscience，其中含有PD‑1、PD‑L1、Anti‑tag1‑Eu、Anti‑tag2‑XL665、Dilute Buffer和Detection Buffer等实验所需的试剂；384孔微孔板购自Perkin Elmer公司；阳性药(BMS‑202)购自Selleck。

[0183] 3、仪器

[0184] 离心机(Eppendorf，型号：5430)；酶标仪(Perkin Elmer，型号：EnVision)[0185] 4、实验方法

[0186] (1)配制1×Assaybuffer。

[0187] (2)化合物加样：用Echo550仪器按化合物不同浓度梯度转移200nL到384反应板中。

[0188] (3)配制PD‑L1‑Biotin工作液于1×Assaybuffer中。

[0189] (4)在化合物孔和阳性对照孔分别加5μL的PD‑L1‑Biotin工作液；在阴性对照孔中加5μL的Assaybuffer。

[0190] (5)1000rpm离心30秒，室温孵育15分钟。

[0191] (6)配制PD‑1‑Eu和Dye labeled acceptor混合液于1×Assaybuffer中。

[0192] (7)加入15μL PD‑1‑Eu和Dye labeled acceptor混合液。

[0193] (8)1000rpm离心30秒，室温孵育90分钟。

[0194] (9)EnVision读取665nm/615nm ratio。根据荧光比值计算化合物对蛋白结合的抑制率。

[0195] 5、计算公式

[0196]

[0197] 其中：Ratiosample是样品孔的比值；Ratiomin：阴性对照孔比值均值；Ratiomax：阳性对照孔比值均值。用Graphpad计算化合物IC50值。

[0198] 6、实验结果

[0199] 本发明化合物对PD‑1/PD‑L蛋白‑蛋白相互作用的抑制活性如表1所示。实验结果表明，本发明的化合物对PD‑1/PD‑L1蛋白‑蛋白相互作用具有显著的抑制活性。其中，A表示IC50＝1～100nM；B表示IC50＝100.01～500nM；C表示IC50＞500nM。

[0200] 表1.本发明化合物对PD‑1/PD‑L1相互作用的抑制活性

[0201]