[0001] 本发明涉及中药材加工技术领域。更具体地说，本发明涉及一种何首乌超微粉制备方法。

[0002] 何首乌，为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的块根，具有补益精血，解毒，截疟，润肠通便的功效，主治精血亏虚，头晕眼花，须发早白，腰膝酸软，久疟，痈疽，瘰疬，肠燥便秘。何首乌通常是以常规饮片的形式煎煮服用，但块根制成的饮片质地坚硬、形状不规则，有效成分难以充分溶出。超微粉技术可以将中药材粉碎成粉末，甚至可以溶于水中饮用，有利于保留有效成分、提高溶出率，将其应用到何首乌饮片上，是本申请的研究方向。直接将何首乌饮片粉碎成超微粉，存在的问题是，质地原因导致细胞破壁率不高，何首乌的有效成分主要为脂溶性化合物，不利于溶出。如何通过超微粉工艺提高何首乌的有效成分的利用，是本申请旨在解决的技术问题。

[0021] 下面结合实例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

[0022] 应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。

[0023] 需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

[0024] <实施例1>

[0025] 何首乌超微粉制备方法，包括：

[0026] 步骤一，将何首乌原药材清洗、去除杂质，晾干，切片；

[0027] 步骤二，将何首乌置于35％蔗糖溶液中浸润40min，冲洗、沥干，再按照10kg/35L的比例置于饮用水中浸润，煮沸保持40min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣，何首乌水提渣按照10kg/15L的比例置于饮用水中，煮沸保持20min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣；

[0028] 步骤三，合并水提液，60～80℃减压旋蒸浓缩，得浸膏，真空干燥，真空干燥的条件为50～60℃，真空度为10～20kPa，干燥时间为24h，得水提液颗粒，均匀喷入包埋液，置于50～60℃烘干1h，包埋过程中的芯材：壁材为1:6，包埋液包括质量比为1:3:6:90的糊精、阿拉伯胶、碳酸氢钠、水的混合溶液，包埋的条件为喷洒速度为3‑5kg/min，搅拌速率为5000r/min，搅拌时间为15min，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1200W，得水提液干颗粒；

[0029] 步骤四，将水提液干颗粒粉碎成粒径不超过1mm的粗粉，然后再将粗粉粉碎成粒径不超过200μm的细粉，再将细粉进行超微粉碎成不超过20μm的何首乌超微粉。

[0030] <实施例2>

[0031] 何首乌超微粉制备方法，包括：

[0032] 步骤一，将何首乌原药材清洗、去除杂质，晾干，切片；

[0033] 步骤二，将何首乌置于40％蔗糖溶液中浸润45min，冲洗、沥干，再按照10kg/40L的比例置于饮用水中浸润，煮沸保持45min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣，何首乌水提渣按照10kg/20L的比例置于饮用水中，煮沸保持40min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣；

[0034] 步骤三，合并水提液，60～80℃减压旋蒸浓缩，得浸膏，真空干燥，真空干燥的条件为50～60℃，真空度为10～20kPa，干燥时间为24h，得水提液颗粒，均匀喷入包埋液，置于50～60℃烘干2h，包埋过程中的芯材：壁材为1:6，包埋液包括质量比为1:3:6:90的糊精、阿拉伯胶、碳酸氢钠、水的混合溶液，包埋的条件为喷洒速度为3～5kg/min，搅拌速率为5000r/min，搅拌时间为20min，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1200W，得水提液干颗粒；

[0035] 步骤四，将水提液干颗粒粉碎成粒径不超过1mm的粗粉，然后再将粗粉粉碎成粒径不超过200μm的细粉，再将细粉进行超微粉碎成不超过20μm的何首乌超微粉。

[0036] <实施例3>

[0037] 何首乌超微粉制备方法，包括：

[0038] 步骤一，将何首乌原药材清洗、去除杂质，晾干，切片；

[0039] 步骤二，将何首乌置于45％蔗糖溶液中浸润60min，冲洗、沥干，再按照10kg/30L的比例置于饮用水中浸润，煮沸保持60min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣，何首乌水提渣按照10kg/20L的比例置于饮用水中，煮沸保持30min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣；

[0040] 步骤三，合并水提液，60～80℃减压旋蒸浓缩，得浸膏，真空干燥，真空干燥的条件为50～60℃，真空度为10～20kPa，干燥时间为24h，得水提液颗粒，均匀喷入包埋液，置于50～60℃烘干2h，包埋过程中的芯材：壁材为1:6，包埋液包括质量比为1:3:6:90的糊精、阿拉伯胶、碳酸氢钠、水的混合溶液，包埋的条件为喷洒速度为3～5kg/min，搅拌速率为5000r/min，搅拌时间为20min，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1200W，得水提液干颗粒；

[0041] 步骤四，将水提液干颗粒粉碎成粒径不超过1mm的粗粉，然后再将粗粉粉碎成粒径不超过200μm的细粉，再将细粉进行超微粉碎成不超过20μm的何首乌超微粉。

[0042] <实施例4>

[0043] 何首乌超微粉制备方法，包括：

[0044] 步骤一，将何首乌原药材清洗、去除杂质，晾干，切片；

[0045] 步骤二，将何首乌置于35％蔗糖溶液中浸润40min，冲洗、沥干，再按照10kg/35L的比例置于饮用水中浸润，煮沸保持40min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣，何首乌水提渣按照10kg/15L的比例置于饮用水中，煮沸保持20min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣；

[0046] 步骤三，合并水提液，60～80℃减压旋蒸浓缩，得浸膏，真空干燥，真空干燥的条件为50～60℃，真空度为10～20kPa，干燥时间为24h，得水提液颗粒，均匀喷入包埋液，置于50～60℃烘干1h，包埋过程中的芯材：壁材为1:6，包埋液包括质量比为1:3:6:90的糊精、阿拉伯胶、碳酸氢钠、水的混合溶液，包埋的条件为喷洒速度为3‑5kg/min，搅拌速率为5000r/min，搅拌时间为15min，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1200W，得水提液干颗粒；

[0047] 步骤四，合并水提渣，置于60～80℃、30～50kPa下保持45min，破碎至粒径不超过1cm，然后在‑18℃以下、10～20kPa下保持4h，再转移至60～80℃、30～50kPa下保持4h，破碎成颗粒，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1200W，得水提渣干颗粒；

[0048] 步骤五，将水提液干颗粒、水提渣干颗粒合并，粉碎成粒径不超过1mm的粗粉，然后再将粗粉粉碎成粒径不超过200μm的细粉，再将细粉进行超微粉碎成不超过20μm的何首乌超微粉。

[0049] <实施例5>

[0050] 何首乌超微粉制备方法，包括：

[0051] 步骤一，将何首乌原药材清洗、去除杂质，晾干，切片；

[0052] 步骤二，将何首乌置于40％蔗糖溶液中浸润45min，冲洗、沥干，再按照10kg/40L的比例置于饮用水中浸润，煮沸保持45min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣，何首乌水提渣按照10kg/20L的比例置于饮用水中，煮沸保持40min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣；

[0053] 步骤三，合并水提液，60～80℃减压旋蒸浓缩，得浸膏，真空干燥，真空干燥的条件为50～60℃，真空度为10～20kPa，干燥时间为24h，得水提液颗粒，均匀喷入包埋液，置于50～60℃烘干2h，包埋过程中的芯材：壁材为1:6，包埋液包括质量比为1:3:6:90的糊精、阿拉伯胶、碳酸氢钠、水的混合溶液，包埋的条件为喷洒速度为3～5kg/min，搅拌速率为5000r/min，搅拌时间为20min，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1000～1200W，得水提液干颗粒；

[0054] 步骤四，合并水提渣，置于60～80℃、30～50kPa下保持60min，破碎至粒径不超过1cm，然后在‑18℃以下、10～20kPa下保持5h，再转移至60～80℃、30～50kPa下保持5h，破碎成颗粒，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1200W，得水提渣干颗粒；

[0055] 步骤五，将水提液干颗粒、水提渣干颗粒合并，粉碎成粒径不超过1mm的粗粉，然后再将粗粉粉碎成粒径不超过200μm的细粉，再将细粉进行超微粉碎成不超过20μm的何首乌超微粉。

[0056] <实施例6>

[0057] 何首乌超微粉制备方法，包括：

[0058] 步骤一，将何首乌原药材清洗、去除杂质，晾干，切片；

[0059] 步骤二，将何首乌置于45％蔗糖溶液中浸润60min，冲洗、沥干，再按照10kg/30L的比例置于饮用水中浸润，煮沸保持60min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣，何首乌水提渣按照10kg/20L的比例置于饮用水中，煮沸保持30min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣；

[0060] 步骤三，合并水提液，60～80℃减压旋蒸浓缩，得浸膏，真空干燥，真空干燥的条件为50～60℃，真空度为10～20kPa，干燥时间为24h，得水提液颗粒，均匀喷入包埋液，置于50～60℃烘干2h，包埋过程中的芯材：壁材为1:6，包埋液包括质量比为1:3:6:90的糊精、阿拉伯胶、碳酸氢钠、水的混合溶液，包埋的条件为喷洒速度为3～5kg/min，搅拌速率为5000r/min，搅拌时间为20min，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1000～1200W，得水提液干颗粒；

[0061] 步骤四，合并水提渣，置于60～80℃、30～50kPa下保持60min，破碎至粒径不超过1cm，然后在‑18℃以下、10～20kPa下保持6h，再转移至60～80℃、30～50kPa下保持6h，破碎成颗粒，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1200W，得水提渣干颗粒；

[0062] 步骤五，将水提液干颗粒、水提渣干颗粒合并，粉碎成粒径不超过1mm的粗粉，然后再将粗粉粉碎成粒径不超过200μm的细粉，再将细粉进行超微粉碎成不超过20μm的何首乌超微粉。

[0063] <对比例1>

[0064] 何首乌超微粉制备方法，包括：

[0065] 步骤一，将何首乌原药材清洗、去除杂质，晾干，切片；

[0066] 步骤二，将何首乌置于45％蔗糖溶液中浸润60min，冲洗、沥干，再按照10kg/30L的比例置于饮用水中浸润，煮沸保持60min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣，何首乌水提渣按照10kg/20L的比例置于饮用水中，煮沸保持30min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣；

[0067] 步骤三，合并水提液，60～80℃减压旋蒸浓缩，得浸膏，真空干燥，真空干燥的条件为50～60℃，真空度为10～20kPa，干燥时间为24h，得水提液颗粒，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1200W，得水提液干颗粒；

[0068] 步骤四，将水提液干颗粒粉碎成粒径不超过1mm的粗粉，然后再将粗粉粉碎成粒径不超过200μm的细粉，再将细粉进行超微粉碎成不超过20μm的何首乌超微粉。

[0069] <对比例2>

[0070] 何首乌超微粉制备方法，包括：

[0071] 步骤一，将何首乌原药材清洗、去除杂质，晾干，切片；

[0072] 步骤二，将何首乌置于45％蔗糖溶液中浸润60min，冲洗、沥干，再按照10kg/30L的比例置于饮用水中浸润，煮沸保持60min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣，何首乌水提渣按照10kg/20L的比例置于饮用水中，煮沸保持30min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣；

[0073] 步骤三，合并水提液，60～80℃减压旋蒸浓缩，得浸膏，真空干燥，真空干燥的条件为50～60℃，真空度为10～20kPa，干燥时间为24h，得水提液颗粒，均匀喷入包埋液，置于50～60℃烘干2h，包埋过程中的芯材：壁材为1:6，包埋液为2wt.％糊精水溶液，包埋的条件为喷洒速度为3～5kg/min，搅拌速率为5000r/min，搅拌时间为20min，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1200W，得水提液干颗粒；

[0074] 步骤四，将水提液干颗粒粉碎成粒径不超过1mm的粗粉，然后再将粗粉粉碎成粒径不超过200μm的细粉，再将细粉进行超微粉碎成不超过20μm的何首乌超微粉。

[0075] <对比例3>

[0076] 何首乌超微粉制备方法，包括：

[0077] 步骤一，将何首乌原药材清洗、去除杂质，晾干，切片；

[0078] 步骤二，将何首乌置于45％蔗糖溶液中浸润60min，冲洗、沥干，再按照10kg/30L的比例置于饮用水中浸润，煮沸保持60min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣，何首乌水提渣按照10kg/20L的比例置于饮用水中，煮沸保持30min，过滤，得何首乌水提液和何首乌水提渣；

[0079] 步骤三，合并水提液，60～80℃减压旋蒸浓缩，得浸膏，真空干燥，真空干燥的条件为50～60℃，真空度为10～20kPa，干燥时间为24h，得水提液颗粒，均匀喷入包埋液，置于50～60℃烘干2h，包埋过程中的芯材：壁材为1:6，包埋液包括质量比为1:3:6:90的糊精、阿拉伯胶、碳酸氢钠、水的混合溶液，包埋的条件为喷洒速度为3～5kg/min，搅拌速率为5000r/min，搅拌时间为20min，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1000～1200W，得水提液干颗粒；

[0080] 步骤四，合并水提渣，置于60～80℃、30～50kPa下保持60min，破碎至粒径不超过1cm，破碎成颗粒，微波干燥至含水率低于10％，微波干燥的功率为1200W，得水提渣干颗粒；

[0081] 步骤五，将水提液干颗粒、水提渣干颗粒合并，粉碎成粒径不超过1mm的粗粉，然后再将粗粉粉碎成粒径不超过200μm的细粉，再将细粉进行超微粉碎成不超过20μm的何首乌超微粉。

[0082] <何首乌有效成分的含量鉴定>

[0083] 1、何首乌的有效成分是蒽醌和二苯乙烯苷，其中蒽醌分为结合蒽醌、游离蒽醌，主要为结合与游离的大黄素、大黄素甲醚，二苯乙烯苷主要为2,3,5,4‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷，可采用HPLC法测定。

[0084] (1)蒽醌的含量测定

[0085] 色谱条件：采用ZORBAX SB‑C18色谱柱，流动相甲醇‑0.1％磷酸溶液(80:20)，流速1.0mL/min，柱温30℃，进样量10μL，检测波长为254nm。

[0086] 对照品溶液的制备：分别取干燥至恒重的大黄素对照品、大黄素甲醚对照品3mg、2mg，精密称定，加甲醇定容至10mL，得到含大黄素300μg/1mL，大黄素甲醚200μg/1mL的混合溶液，备用。依次稀释成浓度为150μg/mL、75μg/mL、30μg/mL、15μg/mL、1μg/mL和100μg/mL、
50μg/mL、20μg/mL、10μg/mL的大黄素及大黄素甲醚混合对照品溶液，按色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标绘制大黄素标准曲线混合大黄素甲醚标准曲线。

[0087] 供试品溶液的制备：取何首乌生品粉末(过四号筛)、实施例3、对比例1‑2制备的何首乌超微粉lg，置于50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定质量，加热回流1h，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足，静置，取滤液5mL作为供试品溶液A(测游离蒽醌用)。另精密量取滤液25mL，置于具塞锥形瓶中，水浴蒸干，精密加入8％盐酸溶液超声处理5min，加三氯甲烷20mL，水浴中加热回流1h，取出，立即冷却，置于分液漏斗中，用三氯甲烷少量多次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷振摇提取3次，每次15mL，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，滤过，取滤液，作为供试品溶液B(测总蒽醌用)。测量结果如表1所示。

[0088] (2)二苯乙烯苷的含量测定

[0089] 色谱条件：采用ZORBAX SB‑C18色谱柱，流动相乙腈‑水(20:80)，流速1.0mL/min，柱温30℃，进样量10μL，检测波长为320nm。

[0090] 对照品溶液的制备：取干燥至恒重的2,3,5,4’‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷对照品5mg，加乙醇定容至10mL，得到0.5mg/lmL的溶液，备用。依次稀释至250μg/mL、125μg/mL、25μg/mL、1μg/mL，按色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。

[0091] 供试品溶液的制备：取何首乌生品粉末(过四号筛)、实施例3、对比例1‑2制备的何首乌超微粉0.2g，置于50mL具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25mL，称定质量，加热回流30min，放冷至室温，再称定重量，用乙醇补足，静置，取滤液，过0.45μm微孔滤膜，即得，测量结果如表1所示。

[0092] 表1

[0093]

[0094] 何首乌中蒽醌、二苯乙烯苷被认为是其主要有效成分，在制备超微粉过程中，结合蒽醌、二苯乙烯苷含量下降，游离蒽醌含量上升，可能为结合蒽醌转变为游离蒽醌，二苯乙烯苷含量下降可能为结构破坏转变成其他物质(顺式‑二苯乙烯苷或水解成苷元)。

[0095] 蒽醌、二苯乙烯苷为何首乌的药效成分，也可能为其不良反应或毒性成分。结合蒽醌是游离蒽醌与苷以结合的形式存在，在制备超微粉过程中，生成游离蒽醌和糖，结合蒽醌泻下作用和肝毒性均大于游离蒽醌。结合蒽醌、二苯乙烯苷含量的变化，可能会降低其峻烈性，减小副反应，从而使何首乌药性温和，达到增效减毒的效果。

[0096] 2、卵磷脂的含量测定可采用光度计测定。

[0097] 磷标准溶液的制备：取干燥至恒重的磷酸二氢钾0.136g，加水定容至100mL，作为磷储备液，吸取磷储备液1.0mL，稀释至10mL，得磷标准液。

[0098] 显色剂的制备：a液：取干燥至恒重的钼酸铵1.25g与无水醋酸钠4.1g，用蒸馏水溶解，并稀释至500mL。b液：10％抗坏血酸水溶液。a液与b液9:1混合。

[0099] 标准曲线的制备：精密吸取磷标准液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL，分别置于10mL具塞比色管中，加2.5mol/L硫酸溶液1.2ml、0.8mL10％盐酸，再加显色剂4.0mL，最后加水至刻度，摇匀，沸水浴5min，冷却后以试剂空白调零，于820nm处测定吸光度。以磷质量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制曲线，得到线性回归方程。

[0100] 供试液的制备：取实施例3、6、对比例3制备的何首乌超微粉2g，精密加入20mL氯仿‑甲醇(2:1)溶剂，超声提取35min，冷却后补足失重，取续滤液。精密吸取2mL续滤液置于坩埚内水浴挥干溶剂，于600℃马福炉中灰化约1h，残渣用1mL10％盐酸溶解，转移至5mL容量瓶中。精密吸取2mL于10mL具塞比色管中，加入2.5mol/L硫酸溶液1.2ml、显色剂4.0ml，最后加水至刻度，摇匀，于沸水中加热5min，于820nm处测定吸光度，测量结果如表2所示。

[0101] 表2

[0102]组别 卵磷脂含量(mg/g)
实施例3 0.1520
实施例6 0.2076
对比例3 0.1739

[0103] 何首乌的成分卵磷脂具有降低血清胆固醇的作用。卵磷脂在水提渣中的含量不容忽视。在制备超微粉过程中，保留水提渣并进行除湿、脆化处理，能够增加中药材细胞的破壁率，提高卵磷脂的释放。

[0104] <何首乌超微粉贮藏试验>

[0105] 本发明实施例1‑6制备得到的何首乌超微粉粒径分布均匀，比表面积和空隙率大。粉体干燥疏松、能在水或醇溶液中全部溶解。在20‑30℃、湿度40‑50％环境中密封保存9个月，进行细菌总数(CFU/g)的测定，本发明实施例1‑6制备得到的何首乌超微粉无吸潮结块现象，细菌未检出。

[0106] 这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。

[0107] 尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的细节。