[0001] 本发明涉及一种药食同源植物饮品，尤其涉及一种降尿酸的葛根饮料及其制备方法。

[0002] 近年来，随着人们生活水平的提高、生活方式多元化和膳食结构多样性，海鲜和动物内脏等高嘌呤食物摄入量不断提高，大量嘌呤类化合物在体内转化为尿酸，提高机体尿酸水平，引发高尿酸血症。高尿酸血症已经成为仅次于糖尿病的第二大代谢疾病，严重威胁国民健康，为我国公共卫生医疗体系带来沉重的负担。

[0003] 目前临床上，使用别嘌呤醇和苯溴马隆等药物治疗高尿酸血症，然而，长期服用控制高尿酸血症的药物会引发一系列副作用。天然植物中的活性成分具有降尿酸作用，且安全有效。以天然植物为原料开发功能性食品对高尿酸血症进行膳食干预引起了许多学者的关注。

[0004] 葛根是药食同源的两用植物，具有极高的药用价值。《伤寒论》记载的千古名方“葛根汤”和“葛根岑连汤”便以葛根为君药治疗高尿酸血症流传至今。现代药理学表明，葛根富含葛根异黄酮，其主要活性物质为葛根素，具有降尿酸潜力。目前市场上未见具有降尿酸功效的葛根饮料，因此，开发一款具有降尿酸功效的葛根饮料，对于丰富葛根食品种类、促进葛根的加工利用、提升葛根的附加值有重要的意义。

[0028] 下面将提供实施例对本发明作进一步清楚、完整地描述，所提供的实施例仅是本发明的最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制。本领域技术人员将本发明与其他技术组合而得到的与本产品相近的产品，均属于本发明保护的范围

[0029] 下面通过实施例对本发明作进一步的说明。

[0030] 实施例1：一种降尿酸的葛根饮料的制备方法，包括以下步骤：

[0031] S1.将干燥的葛根清洗干净并粉碎，得到葛根粉。

[0032] S2.将葛根粉浸泡在7体积的70℃热水中，在超声功率为240W下，超声提取40min。离心过滤后，收集滤液，减压浓缩至原液的1/3，得到葛根浓缩液。

[0033] S3.按重量份，添加20‑60重量份所述葛根浓缩液(其中葛根素含量为0.54g/L)、0.001‑0.003重量份所述甜味剂三氯蔗糖、0.02‑0.04重量份所述酸味剂柠檬酸、1重量份所述食品增稠稳定剂和40‑80重量份所述生产用水，混合均匀即得产品。

[0034] S4.采用巴士杀菌法对葛根饮料进行杀菌消毒，杀菌温度为80℃，杀菌时间为40min。冷却后贴标，4℃保存。

[0035] 调整葛根饮料中葛根浓缩液、甜味剂、酸味剂的添加量，得到不同配方的葛根饮料，并对其进行感官评价，得到结果如表1所示。

[0036] 表1葛根饮料配方优化正交试验结果

[0037]

[0038] 测试例1：降尿酸实验

[0039] 材料与方法

[0040] 1.1实验材料

[0041] SPF级昆明小鼠36只，雄性，4‑6周龄，体重在18‑22g之间，购自三峡大学实验动物中心。

[0042] 1.2实验方法

[0043] 1.2.1高尿酸血症小鼠模型的建立及给药

[0044] 小鼠适应性饲养3天后，随机分为正常组和造模组，其中正常组(NC)6只，造模组30只。灌胃氧嗪酸钾和次黄嘌呤建立高尿酸血症小鼠模型。造模组每天灌胃400mg/kg氧嗪酸钾和300mg/kg次黄嘌呤混悬液，灌胃体积为0.1mL/10g，连续造模7天，正常组小鼠灌胃等量的0.5％羧甲基纤维素钠(CMC‑Na)溶液。将造模成功的36只小鼠分为模型组(MC)、别嘌呤醇组(AP)、低剂量葛根饮料组(PLB‑L)、中剂量葛根饮料组(PLB‑M)和高剂量葛根饮料组(PLB‑H)，每组6只小鼠。NC组继续灌胃等量0.5％ CMC‑Na溶液，其余各组灌胃400mg/kg氧嗪酸钾和300mg/kg次黄嘌呤混悬液，继续造模。给造模药1h后，AP组小鼠灌胃别嘌呤醇，给药量为15mg/kg/d，PLB‑L组、PLB‑M组和PLB‑H组给药量分别为0.5、1和2g/kg/d，MC组灌胃等量的
0.5％ CMC‑Na溶液。第21天给药1h后，从眼眶静脉取血，待测。

[0045] 1.2.2血液中尿酸浓度测定

[0046] 获得的血液室温放置2小时，于2‑8℃下离心15min(3000r/min)，取上清，按照尿酸试剂盒操作指南测定血液中尿酸浓度。

[0047] 1.2.3肝脏组织中黄嘌呤氧化酶活性的测定

[0048] 准确称取小鼠肝脏组织，与生理盐水按1:9比例(w/v)混合，使用高速匀浆机将肝脏组织在冰水浴下充分匀浆。样品匀浆后于4℃下离心10min(3000r/min)，取上清液，按照黄嘌呤氧化酶试剂盒操作指南测定肝脏组织中黄嘌呤氧化酶活性。

[0049] 1.2.4肾脏组织病理学检查

[0050] 取血后，处死小鼠，取出肾脏组织，用4％多聚甲醛溶液固定，随后进行石蜡包埋和H&E染色。

[0051] 组织石蜡包埋切片：新鲜肾脏组织除去表面筋膜后，用4％多聚甲醛固定24h以上。将组织从固定液取出后，在通风橱内用手术刀将目标部位组织修平整。将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内，按照图1所示的流程进行脱水和封蜡。

[0052] 在包埋机内将浸好蜡的组织进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，在凝固前取出脱水盒内的组织，放入包埋框并贴上对应的标签。在‑20℃冻台上冷却凝固，从包埋框中取出并平整蜡块，使用石蜡切片机上蜡块切成厚4μm的切片。组织切片在40℃摊片机上展平，用载玻片轻轻捞起，置于60℃烘箱内烤干。烤干后，按照图2步骤进行H&E染色。

[0053] 2试验结果

[0054] 2.1葛根饮料对血液中尿酸浓度的影响

[0055] 高尿酸血症主要表现为血液尿酸浓度过高。由图3可知，连续灌胃氧嗪酸钾和次黄嘌呤混悬液三周后，与NC组小鼠相比，MC组血液中尿酸浓度显著升高(P<0.05)，尿酸浓度比NC组提高了3.69倍，表明成功构建高尿酸血症小鼠模型。PLB干预高尿酸血症小鼠14天后，PLB‑L组、PLB‑M组和PLB‑H组小鼠血液中尿酸浓度分别降低16.42％、38.89％和59.92％，这说明PLB具有降尿酸作用，且随给药量增加血液中尿酸浓度逐渐降低。与MC组相比，AP组小鼠血液中尿酸浓度显著降低(P<0.05)，降低了64.91％。AP组和PLB‑H组小鼠血液中尿酸水平没有显著性差异(P>0.05)。

[0056] 2.2葛根饮料对黄嘌呤氧化酶活性的影响

[0057] 黄嘌呤氧化酶可以催化黄嘌呤转化为尿酸，是防治高尿酸血症的重要靶点，主要在肝脏中发挥作用，图4是PLB对肝脏中黄嘌呤氧化酶活性的影响。如图4所示，与NC组相比，MC组小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶活性显著升高(P<0.05)，其黄嘌呤氧化酶活性升高2.56倍，这归因于大量次黄嘌呤提高了机体内嘌呤化合物水平，诱导黄嘌呤氧化酶活性显著升高，以催化次黄嘌呤转化为尿酸。PLB干预高尿酸血症小鼠14天后，与MC组相比，AP组小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶活性显著降低(P<0.05)，其黄嘌呤氧化酶活性为MC组的47.95％。PLB‑L组、PLB‑M组和PLB‑H组小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶活性均显著降低(P<0.05)，分别为MC组的86.17％、80.48％和54.25％，其中，PLB‑H抑制黄嘌呤氧化酶活性的效果优于PLB‑L组和PLB‑M组(P<
0.05)，略低于AP组(P<0.05)。

[0058] 嘌呤食物摄入过多会诱导黄嘌呤氧化酶异常活跃，促进过多的尿酸生成，引发高尿酸血症。PLB可以通过抑制黄嘌呤氧化酶活性，降尿酸。

[0059] 2.3葛根饮料对肾脏病理改变的影响

[0060] 肾脏是尿酸排泄的主要器官，肾脏结构的完整性直接影响尿酸的排泄效率，图5是肾脏组织病理学切片。如图5(A)所示，NC组小鼠肾组织结构基本正常。视野内肾小球结构完整，囊腔未见扩张，肾小球内系膜细胞数量正常，毛细血管袢结构清晰；肾小管上皮细胞排列整齐，未见水肿，管腔呈不规则形；间质未见炎症细胞浸润。如图5(B)所示，MC组小鼠肾组织结构重度异常。视野内肾小球结构异常，皮质区域部分肾小球萎缩，毛细血管丢失，肾小球内系膜细胞数量减少，如红色箭头所示；肾小管大量上皮细胞可见轻度水肿，细胞肿胀，胞浆淡染，如蓝色箭头所示；部分肾小管可见明显颗粒管型，如绿色箭头所示；间质可见明显纤维化，纤维组织增生，如紫色箭头所示，并可见少量炎症细胞浸润，如黄色箭头所示。如图5(C)所示，AP组小鼠肾组织结构基本正常。视野内肾小球结构完整，囊腔未见扩张，肾小球内系膜细胞数量正常，毛细血管袢结构清晰；肾小管上皮细胞排列整齐，未见水肿，管腔呈不规则形；间质未见炎症细胞浸润。如图5(D)所示低剂量组小鼠肾组织结构重度异常。视野内肾小球结构完整，囊腔未见扩张，肾小球内系膜细胞数量正常，毛细血管袢结构清晰；部分肾小管上皮细胞可见轻度水肿，细胞肿胀，胞浆淡染，如蓝色箭头所示；部分肾小管可见明显颗粒管型，如绿色箭头所示；间质可见明显纤维化，纤维组织增生，如紫色箭头所示，并可见大量炎症细胞浸润，如黄色箭头所示。如图5(E)所示，中剂量组小鼠肾组织结构中度异常。视野内肾小球结构异常，部分肾小球可见明显分叶，如黑色箭头所示；部分肾小管可见明显扩张，上皮细胞萎缩，如绿色箭头所示；间质可见明显纤维化，纤维组织增生，如紫色箭头所示，并可见少量炎症细胞浸润，如黄色箭头所示。如图5(F)高剂量组小鼠肾组织结构轻度异常。视野内肾小球结构完整，囊腔未见扩张，肾小球内系膜细胞数量正常，毛细血管袢结构清晰；肾小管上皮细胞排列整齐，未见水肿，管腔呈不规则形；间质可见少量炎症细胞浸润，如黄色箭头所示。氧嗪酸钾联合次黄嘌呤诱导的高尿酸血症小鼠肾组织结构重度异常，使用别嘌呤醇和PLB干预可以显著修复肾小球和小管损伤、减少炎症细胞浸润、改善间质纤维化。

[0061] 综上所述，葛根饮料可从两方面发挥降尿酸作用：(1)抑制黄嘌呤氧化酶活性，减少尿酸生成；(2)保护肾脏，促进尿酸排泄。

[0062] 以上所述仅为本发明的最佳实施例，并不限制本发明的内容和保护范围，根据本发明的技术方案和发明构思所作的任何修改、等同替换、改进等，均属于本发明的保护范围之内。