[0001] 本发明涉及一种调控中华鳖胚胎发育的方法。属于生物技术领域。

[0002] 胚蛋给养是通过注射将外源营养物质补充到孵化期胚蛋中的给养方式，也称卵内给养。目前，胚蛋给养主要应用与家禽中，大量研究结果表明，卵内给养可改善雏鸡肠道健康，增加肌肉和肝脏糖原储备，促进器官发育，提高机体免疫力。其中维生素和氨基酸在胚蛋给养中改善生长发育的研究较多。如卵内注射精氨酸对家鸽(Columba livia)的孵化性能和生长发育具有影响；家鸽卵内注射组氨酸可以提高孵化率、缩短孵化周期、有利于肠道发育，但对后期生长性能几乎无影响。

[0003] 胚胎期是中华鳖优良性状和个体生长发育的重要时期，易受到外界环境的影响。胚胎发育期间的营养限制可能妨碍胚胎发育，目前常见的方法是于大规模喷淋、饲喂等方式，虽然在一定程度上也可以干预胚胎发育过程，促进胚蛋发育，但存在用料不够精准、时机把握不佳等因素，无法充分发挥功效。

[0024] 以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。

[0025] 实施例，首先用75％乙醇对中华鳖卵(发育在第15期的胚蛋)表面进行消毒，接着用钻孔器在中华鳖卵气室位置开注射孔，通过微量进样器将脯氨酸的氯化钠溶液注射到卵气室内，注射完毕后用封口膜封住注射孔。注射量5μL，脯氨酸的浓度为20mg/mL，氯化钠百分比浓度为0.9％。实施例中选用12个中华鳖卵。

[0026] 对比例，首先用75％乙醇对中华鳖卵(发育在第15期的胚蛋)表面进行消毒，接着用钻孔器在中华鳖卵气室位置开注射孔，通过微量进样器将脯氨酸的氯化钠溶液注射到卵气室内，注射完毕后用封口膜封住注射孔。注射量5μL氯化钠水溶液，氯化钠百分比浓度为0.9％。对比例中选用12个中华鳖卵。

[0027] 表一为实施例和对比例中华鳖卵重量统计：

[0028]序号 实施例重量g 对比例重量g
1 2.3528 2.4497
2 2.3293 2.9630
3 2.7579 2.4859
4 2.6311 2.839
5 2.6773 2.3836
6 2.8366 3.4061
7 2.5693 2.6942
8 2.8936 2.3290
9 3.2660 2.6440
10 2.9804 2.6797
11 2.8077 3.2055
12 3.6806 3.6419
平均值和标准差 2.8152±0.3757 2.8101±0.4193

[0029] 结果：

[0030] 存活率：由试验结果可知，实施例中中华鳖卵第22期孵化率为51％，对比例中中华鳖卵第22期的孵化率为42％，同等条件下实施例中的孵化率显著高于正常组(P＜0.05)。

[0031] 对胚胎期中华鳖外部形态的影响：对实施例和对比例中胚胎在第22期进行取样，用游标卡尺对胚胎长、背甲长、背甲宽、裙边宽进行测量，用电子天平测定胚胎重，背甲重以及裙边重。试验结果结合图1～6所示，注射Pro后，中华鳖胚胎更重，背甲裙边发育更好，总的来说，胚胎生长发育优于正常组。

[0032] 对裙边组织I型胶原基因表达的影响：结合图7和图8所示，实施例中I型胶原基因表达量更高，有利于I型胶原的合成。

[0033] 对裙边组织天狼星红染色的影响：结合图9～图11所示，对比例裙边组织折光性不是很强，胶原纤维呈现亮红色，实施例胶原纤维也呈现亮红色，折光性更加明显。并且I型胶原蛋白百分占比结果表明，实施例显著高于对比例(P＜0.01)。