技术领域
[0001] 本发明属于饲料添加剂技术领域，具体地说是特定分子量甘露多糖在制备饲料中的应用及饲料添加剂的制备方法。
相关背景技术
[0002] 抗生素在禽类养殖中的过量使用，一方面可能使病原微生物产生抗药性，增加产生超级致病菌和病毒的风险；另一方面，抗生素的不当添加还会引发禽类肠道菌群失衡，造成肠道损伤，进而不利于禽类肠道营养吸收和饲料消化，影响产量，甚至危害食品安全。因此，寻找抗生素的替代物或者开发增强禽类免疫力的饲料添加剂成为研究热点方向。
[0003] 在众多饲料添加剂中，甘露多糖在促进肠道健康和增强免疫力方面具有突出作用，其中的低分子量甘露多糖常用作饲料免疫增强剂，例如公开号为CN118901908A的中国发明专利申请，公开了一种含低分子量甘露多糖的虾类饲料增效剂。然而，不同分子量甘露多糖分子结构方面的差异，使其作用不完全相同，用于虾类饲料的低分子量甘露多糖直接应用于禽类养殖也由于不同饲喂对象在进食环境、生理结构和营养需求方面的差异，不能得到相似效果，此外，一些低分子量甘露多糖是由甘露多糖酶解制得，存在制备成本较甘露多糖更高的问题。
具体实施方式
[0030] 下面通过附图和具体实施例对本发明做进一步详细说明，应当理解所描述的实施例仅用于解释本发明，并不限定本发明。
[0031] 实施例1特定分子量甘露多糖饲料添加剂MOS‑1及其制备方法
[0032] 特定分子量甘露多糖饲料添加剂MOS‑1是重均分子量为170kDa的甘露多糖。其制备方法具体如下：
[0033] (1)取市售酵母粉加入去离子水形成质量分数为30％的菌悬液，放入37℃培养箱静置50h，使其进行自溶；自溶结束后，离心收集沉淀，用去离子水洗涤3次后，加入去离子水形成菌悬液，于121℃进行高温抽提8h；高温抽提结束后，离心收集上清液，得到粗甘露多糖，即甘露多糖粗提液；
[0034] (2)除蛋白：向甘露多糖粗提液中加入占粗甘露多糖重量6％的三氯乙酸，在60℃下搅拌40min去除蛋白质；
[0035] (3)脱色：向甘露多糖粗提液中加入1％活性炭，在40℃下搅拌50min进行脱色处理；
[0036] (4)喷雾干燥：将处理完的甘露多糖溶液进行喷雾干燥，得甘露多糖固体粉末；
[0037] (5)醇沉：取甘露多糖固体粉末加入去离子水，得到质量体积比为20％的甘露多糖水溶液(即甘露多糖固体质量/去离子水体积＝20％)，向其中加入无水乙醇，使乙醇在溶液中的体积分数为50％(即乙醇体积/(乙醇体积+甘露多糖水溶液体积)＝50％)，在4℃环境下静置过夜；
[0038] (6)层析纯化：离心收集沉淀，加入去离子水搅拌均匀，加至装有葡聚糖凝胶G‑150的凝胶柱进行层析纯化，得到重均分子量为170kDa的甘露多糖，即为特定分子量甘露多糖饲料添加剂MOS‑1。
[0039] 实施例2特定分子量甘露多糖饲料添加剂MOS‑2及其制备方法
[0040] 特定分子量甘露多糖饲料添加剂MOS‑2是重均分子量为96kDa的甘露多糖。其制备方法与实施例1基本相同，不同之处仅在于步骤(2)中，三氯乙酸用量为占粗甘露多糖重量5％；在步骤(5)中，加入无水乙醇使溶液中体积分数为60％。
[0041] 实施例3特定分子量甘露多糖饲料添加剂MOS‑3及其制备方法
[0042] 特定分子量甘露多糖饲料添加剂MOS‑3是重均分子量为19kDa的甘露多糖。其制备方法与实施例1基本相同，不同之处仅在于步骤(2)中，三氯乙酸用量为占粗甘露多糖重量4％；在步骤(5)中，加入无水乙醇使溶液中乙醇体积分数为70％。
[0043] 对比例1甘露多糖饲料添加剂MOS‑4及其制备方法
[0044] 甘露多糖饲料添加剂MOS‑4是重均分子量为291kDa的甘露多糖。其制备方法与实施例1基本相同，不同之处仅在于步骤(5)中，加入无水乙醇使溶液中乙醇体积分数为30％。
[0045] 对比例2甘露多糖饲料添加剂MOS‑5及其制备方法
[0046] 甘露多糖饲料添加剂MOS‑5是重均分子量为7.7kDa的甘露多糖。其制备方法与实施例1基本相同，不同之处仅在于步骤(5)中，加入无水乙醇使溶液中乙醇体积分数为90％。
[0047] 实施例4特定分子量甘露多糖饲料添加剂的应用
[0048] 分别将重均分子量为19kDa、96kDa和170kDa的特定分子量甘露多糖饲料添加剂MOS‑1～MOS‑3作为添加剂，按照禽类饲料总重的0.5％，添加至肉鸡基础日粮饲料。
[0049] 其中，基础日粮组成为：玉米63.45％、豆粕28％、麸皮0.5％、玉米蛋白粉1.83％、磷酸氢钙1.55％、贝壳粉1.4％、大豆油2.2％、食盐0.2％、蛋氨酸0.17％以及预混料0.7％。
[0050] 对比例3甘露多糖饲料添加剂的应用
[0051] 分别将重均分子量为291kDa和7.7kDa的甘露多糖饲料添加剂MOS‑4和MOS‑5作为添加剂，按照禽类饲料总重的0.5％，添加至肉鸡基础日粮饲料。
[0052] 应用效果检测实验：
[0053] 对实施例1‑3以及对比例1‑2制备的饲料添加剂，通过肉鸡模型试验，分析其对肉鸡生长性能、生化免疫指标的影响。具体如下：
[0054] 选用体重接近且健康状况良好的3周龄SPF+肉鸡，按照体重相近公母平均分配原则分成6个组，分别为CK组(基础日粮中不添加甘露多糖)、MOS‑1组(基础日粮+0.5％MOS‑1)、MOS‑2组(基础日粮+0.5％MOS‑2)、MOS‑3组(基础日粮+0.5％MOS‑3)、MOS‑4组(基础日粮+0.5％MOS‑4)、MOS‑5组(基础日粮+0.5％MOS‑5)，每组五个重复。室内保持通风良好，室温维持在22℃‑25℃，自由采食饮水。每日记录肉鸡体重和采食量，并计算出料重比。饲喂结束后对肉鸡血清进行生化和免疫指标测定。
[0055] 结果如下：
[0056] (1)料重比检测结果
[0057] 表1肉鸡料重比
[0058]组别 料重比
CK 6.89±0.13
MOS‑1 6.3±0.1
MOS‑2 6.22±0.08
MOS‑3 6.26±0.03
MOS‑4 7.06±0.11
MOS‑5 6.43±0.15
[0059] 如表1所示，通过MOS‑1、MOS‑2、MOS‑3组与其他组相比可以看出，饲料中添加特定分子量甘露多糖(分子量为19～170kDa)能够降低肉鸡料重比，使料重比≤6.4，促进肉鸡生长发育，提高饲料转化率。
[0060] (2)生化指标和免疫指标测定结果
[0061] 表2生化和免疫指标测定结果
[0062]
[0063] 肉鸡血清生化指标和免疫指标测定结果如表1和图1‑图6所示，其中，图1为AST含量检测结果图，图2为TG含量检测结果图，图3为ALT含量检测结果图，图4为GLU含量检测结果图，图5为IgG含量检测结果图，图6为IgA含量检测结果图。图中*代表P≤0.05；**代表P≤0.01。
[0064] 由图1至图6可知，与对照组和对比例相比，本发明实施例1～3制得的特定分子量甘露多糖饲料添加剂MOS‑1、MOS‑2、MOS‑3能够极显著地降低生化指标AST和TG水平，能够显著降低ALT水平和显著提高免疫指标IgG水平；MOS‑1、MOS‑2、MOS‑3组相较于对照组能够提高GLU水平和IgA水平。应用本发明实施例1～3使肉鸡血清中天门冬氨酸氨基转移酶的含量≤232.52U/G，甘油三酯的含量≤0.43mmol/L，丙氨酸氨基转移酶的含量≤23.22U/G，免疫球蛋白G的含量≥3.03mg/ml。
[0065] 上述结果表明，饲料中添加一定量的特定分子量而非其他分子量的甘露多糖能够促进肉鸡生长性能以及免疫能力，对肉鸡的生长发育起到了积极作用。因此，本发明选用对肉鸡生长作用显著的一种特定分子量甘露多糖与基础饲粮结合能够一定程度上代替抗生素，促进健康养殖发展。
[0066] 在其他实施方式中，特定分子量甘露多糖饲料添加剂为重均分子量为23kDa、76kDa、168kDa、165kDa或者169kDa的甘露多糖；由高温抽提的温度为110℃、115℃、118℃、
120℃或者125℃制得；按照添加量为禽类饲料总重的0.6％、0.8％、0.75％、1％或者2％作为添加剂添加至禽类饲料。经验证，均取得与实施例1相似的应用效果。
[0067] 需要说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域技术人员来说，其依然可以对上述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明权利要求保护的范围之内。
