本发明提供了一种肿瘤组织内空间分布信息的动态分析方法及其应用，本发明属于肿瘤空间分布技术领域。本发明提供的动态分析方法，包括如下步骤：(1)取待分析肿瘤组织，进行荧光渗透，根据荧光渗透的结果，将肿瘤组织分为外、中、内三层；(2)将外、中、内三层分割开，得到不同层肿瘤组织；(3)所述不同层肿瘤组织分别进行消化、分散，得到不同层肿瘤组织的分散细胞；(4)将不同层肿瘤组织的分散细胞放入微流控芯片的高通量阵列腔体内培养，形成肿瘤微球及肿瘤微球阵列；(5)对所述肿瘤微球及肿瘤微球阵列进行分析，获得需要的信息。以此方法为基础，研究肿瘤内免疫细胞的空间分布与活性变化，并用于有效药物筛选和药效评价。