具体技术细节
[0004] 本发明的目的在于提供一种优化杨树性状的PagSUPb基因及其应用，有效提高杨树总生物量和杨树中木质素含量。
[0005] 本发明提供了一种优化杨树性状的PagSUPb基因，所述PagSUPb基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0006] 优选的，所述PagSUPb基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0007] 本发明还提供了一种沉默上述技术方案所述PagSUPb基因的gRNA，所述gRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
[0008] 本发明还提供了一种优化杨树性状的重组载体，所述重组载体包括基础载体和插入所述基础载体的gRNA；所述gRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
[0009] 本发明还提供了上述技术方案所述的重组载体的构建方法，包括以下步骤：
[0010] 将用于合成gRNA的退火引物退火，得到退火产物；
[0011] 将所述退火产物插入基础载体，得到所述重组载体；
[0012] 所述退火引物由PagSUPb‑T2‑F和PagSUPb‑T2‑R组成；所述PagSUPb‑T2‑F的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述PagSUPb‑T2‑R的核苷酸序列如SEQ IDNo.5所示。
[0013] 优选的，所述基础载体为pYLCRISPR/Cas9‑DH；所述退火的温度为90℃，时间为30s；
[0014] 所述退火的体系包括：pYLgRNA‑AtU3d/U3b 1μL，BsaI 0.5μL，NEB rCutsmartbuffer 1μL，靶点接头0.5μL，T4 DNAligase 0.1μL，T4 DNAligase buffer0.5μL，ddH2O 6.4μL。
[0015] 本发明还提供了一种优化杨树性状的重组工程菌，所述重组工程菌包括上述技术方案所述的重组载体和基础菌株。
[0016] 本发明还提供了一种优化杨树性状的方法，包括：将上述技术方案所述的重组工程菌导入杨树受体后培养。
[0017] 优选的，利用所述重组工程菌侵染杨树受体10～20min后在黑暗条件下进行培养；所述培养的温度为22～26℃，时间为2～3d；所述杨树受体包括杨树愈伤组织。
[0018] 本发明还提供了所述PagSUPb基因或上述技术方案所述的gRNA或上述技术方案所述的重组载体或上述技术方案所述的重组工程菌在优化杨树性状中的应用。
[0019] 有益效果
[0020] 本发明提供了一种优化杨树性状的PagSUPb基因，所述PagSUPb基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。经实施例验证，在杨树中敲除PagSUPb基因，能使杨树植株的总生物量和木质素含量得到显著提升，适于培育改良林木品种，保证林木速生丰产，对满足工业不同用材的需要具有重要意义。
法律保护范围
涉及权利要求数量10：其中独权5项，从权-5项
1.一种优化杨树性状的PagSUPb基因，所述PagSUPb基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.根据权利要求1所述的PagSUPb基因，其特征在于，所述PagSUPb基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
3.一种沉默权利要求1或2所述PagSUPb基因的gRNA，所述gRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
4.一种优化杨树性状的重组载体，其特征在于，所述重组载体包括基础载体和插入所述基础载体的gRNA；
所述gRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
5.权利要求4所述的重组载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
将用于合成gRNA的退火引物退火，得到退火产物；
将所述退火产物插入基础载体，得到所述重组载体；
所述退火引物由PagSUPb‑T2‑F和PagSUPb‑T2‑R组成；所述PagSUPb‑T2‑F的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述PagSUPb‑T2‑R的核苷酸序列如SEQ IDNo.5所示。
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述基础载体为pYLCRISPR/Cas9‑DH；
所述退火的温度为90℃，时间为30s；
所述退火的体系包括：pYLgRNA‑AtU3d/U3b 1μL，BsaI 0.5μL，NEB rCutsmartbuffer 1μL，靶点接头0.5μL，T4 DNAligase 0.1μL，T4 DNAligase buffer0.5μL，ddH2O 6.4μL。
7.一种优化杨树性状的重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌包括权利要求4所述的重组载体和基础菌株。
8.一种优化杨树性状的方法，其特征在于，包括：将权利要求7所述的重组工程菌导入杨树受体后培养。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，利用所述重组工程菌侵染杨树受体10～
20min后在黑暗条件下进行培养；
所述培养的温度为22～26℃，时间为2～3d；
所述杨树受体包括杨树愈伤组织。
10.权利要求1或2所述PagSUPb基因或权利要求3所述的gRNA或权利要求4所述的重组载体或权利要求7所述的重组工程菌在优化杨树性状中的应用。
