[0001] 本发明属于原生动物养殖技术领域，特别是涉及一种具有捕食线虫能力的淡水小型涡虫的低成本连续养殖方法。

[0002] 涡虫是扁形动物门的代表动物，广泛存在于自然环境中，其可再生能力在生态系统的地位具有重要的科研价值，由于环境污染的影响，自然界的涡虫数量逐渐变少，捕捉难度增大，难以获得足够涡虫材料进行应用方向的研究。

[0003] 涡虫为肉食性动物，自然条件下以生活的蠕虫、小型甲壳类以及昆虫的幼虫等为食物，20世纪初，科学家即开始探索涡虫的人工养殖方法，目前人工饲养可用新鲜的猪肝、牛肝、鱼脾脏或熟鸡蛋黄等喂食，然上述饲养方法由于饲料在水体中易腐烂发臭，严重影响水质，食源量难以控制，而涡虫对水质要求较高，因此该方法需频繁进行换水和更换饲料，而导致人工养殖成本较高。

[0004] 因此本领域技术人员致力于开发一种低成本连续养殖涡虫的方法。

[0023] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

[0024] 本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了相互排斥的特质和/或步骤以外，均可以以任何方式组合，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换，即，除非特别叙述，每个特征之一系列等效或类似特征中的一个实施例而已。

[0025] 在以下实施例中，所采用的化学或食品试剂规格及来源如下：食品级琼脂粉为河南圣德实业有限公司生产，1000g包装；玉米粉为黑龙江北纯农产品开发有限公司生产，1.5Kg包装；液体纯牛奶为内蒙古伊利实业股份有限公司乌兰察布乳品厂生产，250ml包装；
酵母粉为天津希恩思生化科技有限公司生产，纯度为95％，500g包装；

[0026] 在以下实施例中，用到的线虫培养装置和涡虫培养装置如下：线虫培养装置包括线虫培养箱12，线虫培养箱12内由上至下依次层叠设置有海绵保水层13、固体培养基6和棉花滤过层14，所述线虫培养箱12的底部设置有若干个贯穿的线虫通过孔16，海绵保水层主要材质为吸水海绵，用于水分控制；固体培养基用于线虫培养；棉花滤过层主要材质为棉花，用于过滤除线虫外的其他杂质；所述固体培养基6和棉花滤过层14之间还设置有目数为200～400目的筛网15，在本实施例中，所述筛网15的目数为350目，用于隔开线虫固体培养基和棉花吸附层。

[0027] 所述涡虫培养装置1包括养殖槽2、培养基支架3和滴水管4，所述养殖槽2内灌注有水5，所述培养基支架3安装在所述养殖槽2中且高于水面，将含有所述线虫的固体培养基6的线虫培养箱12放置在所述培养基支架3的顶部，所述滴水管4的出口位于所述固体培养基6的正上方，入口外接水源，在本实施例中，所述滴水管4的入口连接一水泵7的出水口，所述水泵7放置在所述养殖槽2且浸没在水中。所述养殖槽2中位于所述水泵7和培养基支架3之间还安装有涡虫防逃网8。所述养殖槽2中还设置有通气管9，所述通气管9的入口连接有气泵10，出口连接有气泵11。将沉淀后的自来水加入到养殖槽2中，保持水位高度为6至7cm，打开水泵7，缓慢释放固体培养基中的线虫，将涡虫接种至养殖槽，打开充气泵，保持水体溶氧量10mg/L以上。

[0028] 在本技术方案中，所述缓释调节体可以为切片机、挤压机或水流，这类机器能将固体培养基6和线虫分割成多个小份，使其缓慢释放进入养殖槽2，但优选的采用水流，即由水泵或阀门控制水流的大小，水流冲刷或滴在固体培养基6上，将固体培养基6和线虫缓慢溶解入养殖槽2，成本相较于切片机或挤压机更加低廉，且水流循环可进一步去除养殖池内杂质和增加水体溶氧量。

[0029] 以下实施例中饲养的涡虫为泥栖节中口涡虫，拉丁文名称为Dochmiotrema limicola。

[0030] 实施例1，采用小杆线虫进行饲养，包括以下步骤：

[0031] S1.制作固体培养基，采用如下方法制作固体培养基，按重量比，将玉米粉：牛奶：食品级琼脂粉：纯水＝6.5:5:3:85.5配置(即玉米粉6.5％、牛奶5％、食品级琼脂粉3％、纯水85.5％)，实际为称取食品级琼脂粉3g，玉米粉6.5g，纯牛奶5mL，加入250mL三角瓶中，加纯水定容至三角瓶100mL刻度，高压灭菌锅121℃灭菌30分钟，倒入52cm×32cm×10cm的容器中冷凝，厚度控制在1cm左右。

[0032] S2.将小杆线虫及小杆线虫的线虫卵放置在固体培养基中，在黑暗条件、控制温度在28℃至30℃，培养15天成可饲喂用线虫成虫。

[0033] S3.将含有可饲用成虫的固体培养基6放入线虫培养装置中，线虫培养装置放在涡虫培养装置1中，根据海绵保水层大小调节水泵抽水量，打开气泵10供氧。在线虫培养箱中加入培养好的线虫固体培养基500g，将沉淀后的自来水加入到养殖槽2中，保持水位高度在6至7cm，打开水泵，通过控制水流速度来控制固体培养基中的线虫释放量，将涡虫接种至养殖槽2，打开气泵，保持水体溶氧量10mg/L以上，控制环境温度在28至30℃。

[0034] 实施例2，采用全齿复活线虫进行饲养，包括以下步骤：

[0035] S1.制作固体培养基，采用如下方法制作固体培养基，按重量比，将玉米粉：牛奶：食品级琼脂粉：纯水＝6.5:5:3:85.5配置(即玉米粉6.5％、牛奶5％、食品级琼脂粉3％、纯水85.5％)，实际为称取食品级琼脂粉3g，玉米粉6.5g，纯牛奶5mL，加入250mL三角瓶中，加纯水定容至三角瓶100mL刻度，高压灭菌锅121℃灭菌30分钟，倒入52cm×32cm×10cm的容器中冷凝，厚度控制在1cm左右。

[0036] S2.将全齿复活线虫及全齿复活线虫的线虫卵放置在固体培养基中，在无光条件、控制室温在28℃至30℃下培养15天成可饲用成虫。

[0037] S3.将含有可饲用成虫的固体培养基6放入线虫培养装置中，将线虫培养装置放在涡虫培养装置1中，根据海绵保水层大小调节水泵抽水量，打开气泵10供氧。在线虫培养箱加入线虫固体培养基500g，将沉淀后的自来水加入到养殖槽2中，保持水位高度为6至7cm，打开水泵，缓慢释放固体培养基中的线虫，将涡虫接种至养殖槽2，打开气泵，保持水体溶氧量10mg/L以上，控制环境温度在28至30℃。

[0038] 实施例3，采用全齿复活线虫进行饲养，包括以下步骤：

[0039] S1.制作固体培养基，采用如下方法制作固体培养基，按重量比，将玉米粉：牛奶：食品级琼脂粉：纯水＝6.5:5:1.5:87配置(即玉米粉6.5％、牛奶5％、食品级琼脂粉1.5％、纯水87％)，实际为称取食品级琼脂粉1.5g，玉米粉6.5g，纯牛奶5mL，加入250mL三角瓶中，加纯水定容至三角瓶100mL刻度，高压灭菌锅121℃灭菌30分钟，倒入52cm×32cm×10cm的容器中冷凝，厚度控制在1cm左右。

[0040] S2.将全齿复活线虫及全齿复活线虫的线虫卵放置在固体培养基中，在无光条件、控制室温在28℃至30℃下培养15天成可饲用成虫。

[0041] S3.将含有可饲用成虫的固体培养基6放入线虫培养装置中，将线虫培养装置放在涡虫培养装置1中，根据海绵保水层大小调节水泵抽水量，打开气泵10供氧。在线虫培养箱加入线虫固体培养基500g，将沉淀后的自来水加入到养殖槽2中，保持水位高度为6至7cm，打开水泵，缓慢释放固体培养基中的线虫，将涡虫接种至养殖槽2，打开气泵，保持水体溶氧量10mg/L以上，控制环境温度在28至30℃。

[0042] 实施例4，采用小杆线虫进行饲养，包括以下步骤：

[0043] S1.制作固体培养基，采用如下方法制作固体培养基，按重量比，将玉米粉：牛奶：食品级琼脂粉：纯水＝6.5:5:1.5:87配置(即玉米粉6.5％、牛奶5％、食品级琼脂粉1.5％、纯水87％)，实际为称取食品级琼脂粉1.5g，玉米粉6.5g，纯牛奶5mL，加入250mL三角瓶中，加纯水定容至三角瓶100mL刻度，高压灭菌锅121℃灭菌30分钟，倒入52cm×32cm×10cm的容器中冷凝，厚度控制在1cm左右。

[0044] S2.将小杆线虫及小杆线虫的线虫卵放置在固体培养基中，在无光条件、控制室温在28℃至30℃下培养15天成可饲用成虫。

[0045] S3.将含有可饲用成虫的固体培养基6放入线虫培养装置中，将线虫培养装置放在涡虫培养装置1中，根据海绵保水层大小调节水泵抽水量，打开气泵10供氧。在线虫培养箱加入线虫固体培养基500g，将沉淀后的自来水加入到养殖槽2中，保持水位高度为6至7cm，打开水泵，缓慢释放固体培养基中的线虫，将涡虫接种至养殖槽2，打开气泵，保持水体溶氧量10mg/L以上，控制环境温度在28至30℃。

[0046] 实施例5，采用小杆线虫进行饲养，包括以下步骤：

[0047] S1.制作固体培养基，采用如下方法制作固体培养基，按重量比，将玉米粉：牛肉浸膏：食品级琼脂粉：纯水＝6.5:2:1.5:85.5配置(即玉米粉6.5％、牛肉浸膏2％、食品级琼脂粉1.5％、纯水87％)，实际为称取食品级琼脂粉1.5g，玉米粉6.5g，牛肉浸膏2g，加入250mL三角瓶中，加纯水定容至三角瓶100mL刻度，高压灭菌锅121℃灭菌30分钟，倒入52cm×32cm×10cm的容器中冷凝，厚度控制在1cm左右。

[0048] S2.将小杆线虫及小杆线虫的线虫卵放置在固体培养基中，在无光条件、控制室温在28℃至30℃下培养15天成可饲用成虫。

[0049] S3.将含有可饲用成虫的固体培养基6放入线虫培养装置中，将线虫培养装置放在涡虫培养装置1中，根据海绵保水层大小调节水泵抽水量，打开气泵10供氧。在线虫培养箱加入线虫固体培养基500g，将沉淀后的自来水加入到养殖槽2中，保持水位高度为6至7cm，打开水泵，缓慢释放固体培养基中的线虫，将涡虫接种至养殖槽2，打开气泵，保持水体溶氧量10mg/L以上，控制环境温度在28至30℃。

[0050] 在上述5个实施例中，每隔一周利用手电筒观察养殖槽内涡虫数量和线虫数量，如出现大量线虫，而涡虫数量较少，则降低水流速度，反之则提高水流速度；每隔一周利用吸管挑取固体培养基置于显微镜下观察，如线虫数量＜1000条/g，应更换已培养好的线虫固体培养基或新鲜固体培养基；如出现固体培养基发臭现象，应立即更换已培养好的线虫固体培养基，并清洗线虫培养箱。

[0051] 本发明通过水泵将养殖槽的水通过滴水管滴入线虫培养箱的海绵保水层上，由于海绵的吸水饱和特性，在持续滴水至海绵上时，海绵吸水逐步达到饱和，多余的水将向下渗透至线虫固体培养基上，由于固体培养基无保水能力，向下渗透的水将携带固体培养基中的线虫和粘稠状杂质(主要为淀粉、蛋白质颗粒和死线虫)缓慢通过350目筛网而进入棉花吸附层，大部分杂质和死线虫将被粘附在棉花上，而大部分活体线虫将顺着水流滴入养殖槽，实现涡虫线虫饵料的自动投喂，且经过棉花吸附层后再进入养殖槽，解决了过量的杂质造成养殖槽水体污染的问题。同时，由于线虫在培养基中培养繁殖存在大量线虫和卵块，缓慢的水流无法将固体培养基中的线虫完全释放，而是仅释放少量线虫，大部分线虫和卵块仍保留在固体培养基内，在其上部的海绵保水层可以保持固体培养基水分，适宜线虫生存，大幅度延长了线虫固体培养基使用时间，实现了固体培养基、线虫、涡虫的三级生态养殖，大幅度减少了投喂次数，从而降低人工成本。在养殖槽中设计350目涡虫防逃网，既可以防止养殖槽内涡虫外溢而进入水泵，造成涡虫死亡，又可以通过将养殖槽内水泵入滴水管，进入线虫释放循环，而形成循环水，保证了养殖槽内水位稳定，泵出水增加了水体蒸发量，在养殖过程中可通过固定养殖槽水位控制器而稳定养殖槽水位，充气泵的作用是保持养殖槽水体溶氧量不低于10mg/L，而环境温度控制，常规操作即可，控制环境温度在28至30℃。

[0052] 将以上5个实施例与分别用猪肝、牛肝、鱼脾脏和熟鸡蛋黄饲养的涡虫进行对比，进行饲养比对试验，分别用2000条涡虫起始喂养30天，在分别用猪肝、牛肝、鱼脾脏和熟鸡蛋黄喂养时的步骤与上述实施例的步骤相同，只是将固体培养基6替换成猪肝、牛肝、鱼脾脏和熟鸡蛋黄，试验结果如下：

[0053]

[0054]

[0055] 从以上表格看出，本方法的线虫培养方式所得到的涡虫数量均多于传统的猪肝、牛肝、鱼脾脏和熟鸡蛋黄喂养方式，且水体质量也较传统方式优良，在线虫的培养方法中，实施例1、实施例2、实施例3和实施例4的饲养方法是最优的，涡虫繁育数量多且水质较好，不会发臭，所以说明此方法是适合涡虫的繁养；而实施例5的方法由于牛肉浸膏的蛋白质含量较高，培养基内细菌繁殖过快，培养基易发臭，培养后期线虫出现大面积死亡，从而也导致涡虫吃不到活体线虫，也同样造成涡虫数量的减少。

[0056] 水流速度与线虫的释放关系实验

[0057] (1)以实施例1的方案进行水流速度与线虫的释放关系实验；

[0058] (2)试验方案：通过夹子控制水流速度，设计60滴/min、90滴/min、120滴/min、150滴/min、180滴/min、210滴/min共6个处理(每滴水为0.05mL)，各个处理取500g固体培养基置于线虫培养箱中，将滴水管置于线虫培养箱上方3cm处，打开水泵，将整个装置置于28℃黑暗环境中。

[0059] (3)调查指标：收集线虫数：每隔2小时关闭水泵，调查下方塑料盒收集到的线虫数，连续调查5次；培养基线虫数：每隔2小时关闭水泵，将培养基混匀后取0.1g培养基置于培养皿，于显微镜下观察，计数，连续调查5次；

[0060] (4)结论：如表1所示，在前2个小时，水被海绵吸收，未渗透至固体培养基，而导致前2小时内线虫收集量小，但随着水流量增加，固体培养基线虫中线虫减少量(第一次培养基线虫数‑第2次培养线虫数)增加，第2小时至4小时，海绵已吸水饱和，随着水流量增加，收集线虫量呈递增趋势，且固体培养基减少量同样呈递增趋势，第4小时至6小时，收集线虫量呈递增趋势，且固体培养基减少量同样呈递增趋势，第6小时至8小时，收集线虫量呈递增趋势，且固体培养基减少量同样呈递增趋势，而收集线虫数在60滴/min和90滴/min在第4小时至8小时间，每隔两小时间收集线虫数差异较小，在水流速度到120滴/min后，第4小时至8小时间，每隔两小时收集线虫数逐步降低。

[0061] 表1不同水流速度与线虫在固体培养基中的释放

[0062]

[0063] 说明：线虫释放量与水流速度间存在明显的相关性，水流速度较小时(90滴/min以下)，收集线虫数相对较小(即线虫释放量较小)，培养基线虫数下降慢，且线虫释放量较为稳定，而水流速度继续加快，收集线虫数量呈下降趋势，这是由于培养基中线虫数下降的原因，随着水流速度到达210滴/min，收集线虫数量下降趋势明显。综上：本实例中线虫释放量主要影响因素为水流速度和培养基中线虫数，在低水流速度时，线虫释放量关键控制因素为水流速度，而高水流速度线虫释放量的关键控制因素为培养基线虫数。

[0064] 在实际应用中，为保证线虫释放量趋于稳定，同时保持线虫在固体培养基中的繁殖能力，应尽量控制水流速度较小，通过控制水流速度来控制线虫释放量与线虫繁殖量在固体培养基高线虫量时即趋于动态平衡，使得固体培养基使用时长延长，然在高水流速度情况下，虽释放量逐步降低，由于该装置无法完全释放固体培养基中的线虫，在培养基线虫数量低于一定水平时，仍可使线虫释放量与线虫繁殖量在固体培养基低线虫量时趋于动态平衡，但后期线虫释放量无法满足涡虫养殖要求，而导致固体培养基使用时长较短。

[0065] 以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思做出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。