技术领域
[0001] 本发明属于胡桃醌分离纯化技术领域，具体涉及一种核桃楸中胡桃醌分离纯化的方法。
相关背景技术
[0002] 胡桃醌是从核桃楸中提取分离出的一种萘醌类活性物质，能够抑制肿瘤细胞的生长并可以直接杀伤肿瘤细胞，可抑制柳叶栅锈病、杨树烂皮病、侧柏枯枝病、落叶松杨锈病等孢子的萌发，同时对水稻稻瘟病、稻纹枯病、棉花枯萎病、黄瓜蔓割病、茄子褐纹病和茄子黄萎病菌丝的生长也有明显的抑制作用。此外，胡桃醌还能够抑制其他植物的生长发育，具有很好的化感作用。
[0003] 胡桃醌的多种生物活性，使其在医学和农林业等方面都有非常广泛的应用前景，它的提取制备正在吸引越来越多的研究者，现有的分离提纯工艺操作不便，稳定性较差。
具体实施方式
[0021] 下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0022] 实施例1
[0023] 请参阅图1‑3，本发明提供以下技术方案：一种核桃楸中胡桃醌分离纯化的方法，包括以下步骤：
[0024] 步骤一、原料为供试核桃楸采自于吉林省通化市白鸡峰海拔400‑500米处，对切片阴干后的核桃楸粉碎，过筛备用，试剂为95％乙醇，甲醇为色谱纯，超纯水。
[0025] 步骤二、准确称取核桃楸粉末10g，加入200mL的95％乙醇进行溶解，使用萃取仪对溶液进行提取处理，通过旋转蒸发仪按照80℃20r/min真空抽滤2次。
[0026] 步骤三、弃掉药渣，取滤液，然后通过旋转蒸发仪按照50℃20r/min进行减压浓缩，去溶剂，保留浓缩液，移置10mL容量瓶中，加入甲醇溶解，定容至10mL，振荡摇匀，置于10mL离心管中。
[0027] 步骤四、使用高速离心机按照3000r/min的速度进行离心，离心时间为3min，取上清液，于10mL容量瓶中，用甲醇定容，静置备用。
[0028] 步骤五、采用甲醇和水按照70:30的比例为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0mL/min，紫外检测波长为261nm，色谱柱柱温为30℃。
[0029] 具体的，步骤一中筛网采用40目筛。
[0030] 具体的，步骤二中核桃楸粉末与95％乙醇的比例为1:20g/mL。
[0031] 具体的，步骤二中萃取仪采用超声‑微波协同萃取/反应仪。
[0032] 具体的，步骤五中色谱柱选用C18柱(250nm)。
[0033] 通过采用微波辅助提取法、超声法和超声‑微波协同反应法比较实验测定结果可知，F＞Ft，P＝0.0012＜0.01差异极显著，超声‑微波协同反应法显著性高于其他两种方法，为胡桃醌的最佳提取方法。
[0034] 在提取条件相同时，超声‑微波协同反应法提取到胡桃醌含量33.83ug/mL高于单独的微波辅助提取和超声法提取含量，分析原因可能是超声波超声提取热效应不强，难以达到提取温度，易破坏有机物分子的结构等缺陷；微波使细胞内部温度剧烈上升、急剧膨胀、细胞壁破裂，溶质流向有机溶剂，而超声法、微波辅助提取法仅能受到上述一种或几种效应的作用，不能同时受到微波、超声同时协同所产生的全部效应，采用超声‑微波协同反应法提取胡桃醌含量，此方法结合了超声空化效应所起的振荡和搅拌作用和微波热效应所起的加热作用，相互取长补短达到优势互补，因而对植物的有效成分能快速高效的提取，因此选取超声‑微波协同反应法为最佳提取方法。
[0035] 实施例2
[0036] 请参阅图1‑3，本发明提供以下技术方案：一种核桃楸中胡桃醌分离纯化的方法，包括以下步骤：
[0037] 步骤一、原料为供试核桃楸采自于吉林省通化市白鸡峰海拔400‑500米处，对切片阴干后的核桃楸粉碎，过筛备用，试剂为95％乙醇，甲醇为色谱纯，超纯水。
[0038] 步骤二、准确称取核桃楸粉末10g，加入200mL的95％乙醇进行溶解，使用萃取仪对溶液进行提取处理，通过旋转蒸发仪按照80℃20r/min真空抽滤2次。
[0039] 步骤三、弃掉药渣，取滤液，然后通过旋转蒸发仪按照50℃20r/min进行减压浓缩，去溶剂，保留浓缩液，移置10mL容量瓶中，加入甲醇溶解，定容至10mL，振荡摇匀，置于10mL离心管中。
[0040] 步骤四、使用高速离心机按照3000r/min的速度进行离心，离心时间为3min，取上清液，于10mL容量瓶中，用甲醇定容，静置备用。
[0041] 步骤五、采用甲醇和水按照70:30的比例为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0mL/min，紫外检测波长为261nm，色谱柱柱温为30℃。
[0042] 具体的，步骤一中筛网采用40目筛。
[0043] 具体的，步骤二中核桃楸粉末与95％乙醇的比例为1:20g/mL。
[0044] 具体的，步骤二中萃取仪采用超声‑微波协同萃取/反应仪。
[0045] 具体的，步骤五中色谱柱选用C18柱(250nm)。
[0046] 实验所得数据经SPSS23.0分析处理得出回归方程曲线y＝‑4.9171x2+25.407x‑2
2.002，相关指数R＝0.9406，P＜0.01回归极显著性，说明作用时间对胡桃醌含量的提取具有极其显著的影响，由趋势线可知，作用时间在100‑300s范围内提取到胡桃醌含量随作用时间的增加逐渐增大，说明作用时间对胡桃醌的提取有促进作用，根据方程预测，作用时间为258s时，提取到胡桃醌含量为30.82ug/mL，作用时间高于300s最佳作用时间时，随作用时间延长胡桃醌含量逐渐减少，线性呈下降趋势。
[0047] 最后应说明的是：以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
