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一种应用于棒杆菌的启动子有效专利 发明

具体技术细节

[0005] 本发明提供了一种棒杆菌的启动子,将其连接到表达载体上,或者将其插入棒杆菌染色体上待表达基因的前面,构建重组菌,可用于表达相关的基因,催化相关代谢产物的合成。
[0006] 所述启动子,包括SEQ ID NO.1所示的PodhI。
[0007] 所述启动子PodhI是谷氨酸棒杆菌中编码包含FHA结构域的蛋白的odhI基因上游的序列,odhI基因是与中心代谢相关的基因,其编码产物OdhI是α-酮戊二酸脱氢酶复合体(ODHC)的OdhA亚基的抑制蛋白。
[0008] 所述启动子PodhI可用于构建各种表达载体,例如用于表达载体pJYW-4,pJYW-5,pDXW-8,pDXW-10等。所得表达载体可以用于在各种棒杆菌属中表达基因或合成特定代谢产物,例如谷氨酸棒杆菌,黄色短杆菌等。
[0009] 所述启动子PodhI可以应用于在谷氨酸棒杆菌中表达谷氨酸脱羧酶基因(gadB2)。例如,以谷氨酸高产的谷氨酸棒杆菌为宿主,以PodhI作为gadB2的启动子表达谷氨酸脱羧酶。可以pJYW-5为载体,将其已有PtacM启动子切掉替换为启动子PodhI,构建重组表达载体。
[0010] 本发明有益效果:所述启动子PodhI在发酵的前期,转录水平很高,而后期转录水平会降低,适合于前期高表达,后期弱表达的基因及前期大量积累代谢产物,后期微弱积累代谢产物的发酵,而常用的启动子如Psod,Ptuf等均属于组成型表达,而诱导启动子需添加诱导剂,增加生产成本且不安全。

法律保护范围

涉及权利要求数量9:其中独权4项,从权-4项

1.一种启动子,其特征在于,核苷酸序列如SEQ ID NO.1。
2.携带权利要求1所述启动子的载体。
3.携带权利要求1所述启动子或权利要求2所述载体的细胞。
4.权利要求1所述启动子在表达基因或合成特定代谢产物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,以谷氨酸棒杆菌等棒杆菌属为宿主。
6.权利要求2所述载体在表达基因或合成特定代谢产物中的应用。
7.权利要求3所述细胞在表达基因或合成特定代谢产物中的应用。
8.一种生产谷氨酸脱羧酶的重组谷氨酸棒杆菌,其特征在于,以核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示序列为启动子,替换pJYW-5-PtacM原有启动子PtacM,用于表达谷氨酸脱羧酶基因(gadB2)。
9.权利要求8所述重组谷氨酸棒杆菌在生产γ-氨基丁酸中的应用。

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