背景技术 抗癌剂紫杉醇，由Bristol Myers Squibb以商标销售，目 前批准用于治疗几种癌症，包括卵巢、肺和乳腺癌。使用紫杉醇的主 要限制在于其差的溶解度。因此，制剂包含EL作为 增溶载体，但是在该制剂中的存在已经与动物(Lorenz等， Agents Actions 7，63-67，1987)和人类(Weiss等，J.Clin.Oncol. 8，1263-1268，1990)中严重的超敏性联系起来。因此，接受 的患者需要术前用药糖皮质激素(地塞米松)和抗组胺以降低由于 的存在引起出现的超敏性和过敏性。 与此相反，也称为ABI-007，为由Abraxis Oncology 出售的紫杉醇的不含的白蛋白-纳米颗粒制剂。当用生理盐 水重建时，使用白蛋白纳米颗粒作为载体引起胶体的形成。基于临床 研究，已经显示与相比的特征在于降低的超敏性反 应。因此，对于接受的患者不需要术前用药。 白蛋白-纳米颗粒制剂的另一优点在于通过排除有毒的乳化剂， 可以比目前使用更可能地以更频繁的间隔给药更高剂量的紫杉 醇。潜力存在于作为以下原因在实体瘤中可以看到增强的功效：(i)更 高的耐受剂量(300mg/m2)，(ii)更长的半衰期，(iii)延长的局部 肿瘤可利用性和/或(iv)持续的体内释放。降低超敏性反应 同时维持或改进药物的化疗效果。 分泌蛋白，酸性，富含半胱氨酸(SPARC)，也称为骨粘连蛋白， 为促进活性的基质细胞糖蛋白。SPARC对各种配体具有亲和 力，包括阳离子(例如，Ca2+，Cu2+，Fe2+)，生长因子(例如，血小板衍 生生长因子(PDGF)，和血管内皮生长因子(VEGF))，细胞外基质(ECM) 蛋白(例如，胶原蛋白I-V和胶原蛋白IX，玻连蛋白，和血小板反 应素-1)，内皮细胞，血小板，羟基磷灰石，并且对于目前应用最重要 的是白蛋白。SPARC表达是发育上调节的，并且主要在正常发育期间或 应答于损伤的经受重构的组织中表达(参见，例如，Lane等，FASEB J.，8，163-173(1994))。高水平的SPARC蛋白在正在发育的骨和牙 齿中表达。SPARC还在几种侵袭性癌中上调，但是在大多数正常组织中 不存在(Porter等，J.Histochem.Cytochem.，43，791(1995)， 并且参见以下)。实际上，SPARC表达包含于各种肿瘤(例如，膀胱，肝， 卵巢，肾，肠，和乳腺)中。 仍然存在治疗人类和其它哺乳动物肿瘤，以及其它增殖性、增生 性、重构性和炎症性疾病的更好的治疗方法的需要。 发明内容 本发明提供用于治疗哺乳动物肿瘤的组合物，包括治疗有效量的 SPARC多肽和治疗有效量的疏水性化疗剂，例如微管抑制剂比如紫杉 烷，任选地以及合适的载体。此外，本发明提供用于治疗哺乳动物肿 瘤的方法，包括给药哺乳动物以治疗有效量的包括SPARC多肽和疏水性 化疗剂(例如微管抑制剂比如紫杉烷)的组合物。 本发明还提供用于治疗哺乳动物肿瘤的组合物，包括治疗有效量 的SPARC多肽、治疗有效量的血管生成抑制剂和治疗有效量的微管抑制 剂例如紫杉烷，任选地以及合适的载体。此外，本发明提供用于治疗 哺乳动物肿瘤的方法，包括治疗有效量包括SPARC多肽、血管生成抑制 剂和微管抑制剂例如紫杉烷的组合物。 本发明还提供用于治疗哺乳动物肿瘤的组合物和方法，包括治疗 有效量的SPARC多肽、治疗有效量的血管生成抑制剂和治疗有效量的合 适化疗剂。 合适的微管抑制剂包括紫杉烷，例如，紫杉烷多西紫杉醇 (docetaxel)和紫杉醇。在优选的实施方式中微管抑制剂例如紫杉烷为 以纳米颗粒形式的具有50％紫杉醇的白蛋白结合紫杉醇。在优选的实施 方式中血管生成抑制剂为阿瓦斯丁(avastin)、索坦(sutent)或索拉非 尼(sorafenib)。 附图说明 图1描述了与白蛋白的竞争性SPARC结合。 图2描述了在MX1肿瘤异种移植物(tumor xenografts)中的白蛋 白和SPARC的染色。 图3描述了紫杉醇胞吞转运穿过内皮细胞单层。 图4比较肿瘤异种移植物的生长，比较在存在或不存在 下表达或不表达野生型SPARC(SEQ ID NO：1)的癌细胞。 图5A比较在存在或不存在外源野生型SPARC(SEQ ID NO：1)下和 在存在或不存在5-氟尿嘧啶下肿瘤异种移植物的生长。 图5A比较在存在或不存在外源野生型SPARC(SEQ ID NO：1)下和 在存在或不存在5-氟尿嘧啶下小鼠的重量变化。 图6描述在新血管生成(neoangiogensis)上的SPARC浓度依赖性 效果。 图7比较在存在或不存在外源野生型SPARC(SEQ ID NO：1)下、 在存在或不存在血管生成抑制剂阿瓦斯丁下和在存在或不存在 下，乳腺癌异种移植物的生长。 图8比较在存在或不存在外源Q3突变体SPARC(SEQ ID NO：3)下、 在存在或不存在血管生成抑制剂阿瓦斯丁下和在存在或不存在 下，乳腺癌异种移植物的生长。 图9比较在存在或不存在外源野生型SPARC(SEQ ID NO：1)下、 在存在或不存在血管生成抑制剂阿瓦斯丁下和在存在或不存在 下，结肠癌异种移植物的生长。 图10比较在存在或不存在外源Q3突变体SPARC(SEQ ID NO：3) 下、在存在或不存在血管生成抑制剂阿瓦斯丁下和在存在或不存在 下，结肠癌异种移植物的生长。 图11比较在存在或不存在外源Q3突变体SPARC(SEQ ID NO：3) 下、在存在或不存在作为血管生成抑制剂的索坦下和在存在或不存在 下，结肠癌异种移植物的生长。 具体实施方式 I治疗组合物和方法 虽然不想要被任何特定理论限制，使用血管生成抑制剂的本发明 方面的有效性可以与发明人的意想不到和令人惊奇的以下发现有关： 外源SPARC的血管生成活性以浓度依赖性的方式从促血管生成向抗血 管生成变化，并且在低浓度时，外源SPARC的促血管生成活性可以屏蔽 其其它抗肿瘤活性。这样，血管生成抑制剂可以基于其它机制暴露 SPARC抗肿瘤活性。 人类SPARC基因编码303个氨基酸的SPARC蛋白，而成熟SPARC为 285个氨基酸的糖蛋白。裂解信号序列后，产生32-kD的分泌形式，由 于糖基化，其在SDS-PAGE上移动在43kD处。完整SPARC成熟蛋白的氨 基酸序列记载于SEQ ID NO：1，并且编码此类SPARC蛋白的RNA的核酸 序列记载于SEQ ID NO：2(表现为cDNA序列，即用RNA的尿嘧啶(″U″) 作为胸腺嘧啶(″T″))。已经发现SPARC的另一形式，Q3突变体(SEQ ID NO： 3)，其具有相应于人类SPARC蛋白的成熟形式中第三个谷氨酰胺的缺失 的突变。SEQ ID NO：4为编码Q3突变体多肽的核酸。参见，美国专利No. 7,332,568。 如本文所用，术语″多肽″和″蛋白质″可相互替换地使用。本发明 提供SPARC多肽或蛋白质(例如，比如包括SEQ ID NO：1或3的氨基 酸序列的多肽或蛋白质)的用途、产生、检测和定量。本发明还提供 SPARC多肽的用途、产生、检测和定量，其中所述多肽包括来自SEQ ID NO：1或3的至少约10个连续氨基酸，优选来自SEQ ID NO：1或3 序列的至少约15个连续氨基酸，更优选来自SEQ ID NO：1或3序列 的至少约20个连续氨基酸，并且最优选来自SEQ ID NO：1或3序列 的至少约100个连续氨基酸的氨基酸序列。此外，本发明提供SPARC多 肽的检测，所述SPARC多肽包括其中序列与SEQ ID NO：1或3的相应 序列有至少约80％同一性，优选与SEQ ID NO：1或3的相应序列有至 少约90％同一性，更优选与SEQ ID NO：1或3的相应序列有至少约95％ 同一性，更优选与SEQ ID NO：1或3的相应序列有至少约99％同一性 的多肽。 例如，提及″SEQ ID NO：1的相应序列″，是指，将其与SEQ ID NO： 1的序列比对的序列，其中比对区域至少约10个氨基酸长，优选至少约 15个氨基酸长，更优选至少约20个氨基酸长，更优选至少约30个氨基 酸长，更优选至少约40个氨基酸长，更优选至少约50个氨基酸长，并 且更优选至少约100个氨基酸长。″SEQ ID NO：2的相应序列″定义为 将其与SEQ ID NO：3的序列比对的序列，其中比对区域至少约10个氨 基酸长，优选至少约15个氨基酸长，更优选至少约20个氨基酸长，更 优选至少约30个氨基酸长，更优选至少约40个氨基酸长，更优选至少 约50个氨基酸长，并且更优选至少约100个氨基酸长。序列比对的各种 方法在生物技术领域是已知的(参见，例如，Rosenberg，BMC Bioinformatics 6：278(2005)；Altschul等，FEBS J.272(20)： 5101-5109(2005))。 根据本发明使用的合适的SPARC多肽还可以由如本文所述的与 SEQ ID NO：1或3具有显著的序列同一性的多肽，以及在其氨基和/ 或羧基末端的另外约5个，优选另外约10个，更优选另外约25个，更优 选另外约50个，或最优选另外约100个氨基酸组成。 本发明提供SPARC RNA(例如，比如包括与SEQ ID NO：2或4的 cDNA相应的核酸序列的RNA)的用途、克隆、表达、检测和定量。本发 明还提供SPARC RNA的检测，其中所述RNA包括来自SEQ ID NO：2或4 序列的至少约15个连续的核苷酸，优选来自SEQ ID NO：2序列的至少 约20个连续的核苷酸，更优选来自SEQ ID NO：2或4序列的至少约 30个连续的核苷酸的核酸序列。此外，本发明提供SPARC RNA的检测， 所述SPARC RNA包括其中序列与SEQ ID NO：2或4的相应序列有至少 约80％同一性，优选与SEQ ID NO：2或4的相应序列有至少约90％ 同一性，更优选与SEQ ID NO：2或4的相应序列有至少约95％同一 性，并且更优选与SEQ ID NO：2或4的相应序列有至少约99％同一 性的核酸。例如，提及″SEQ ID NO：2的相应序列″，是指将其与SEQ ID NO：2的序列比对的序列，其中比对区域至少约15个核苷酸长，优选至 少约20个核苷酸长，更优选至少约30个核苷酸长，更优选至少约60个 核苷酸长，更优选至少约120个核苷酸长，更优选至少约150个核苷酸 长，更优选至少约200个核苷酸长。序列比对的各种方法在生物技术领 域是已知的(参见，例如，Rosenberg，BMC Bioinformatics 6：278 (2005)；Altschul等，FEBS J.272(20)：5101-5109(2005))。提 及SPARC RNA，是指任何SPARC RNA，包括但不限于，SPARC mRNA，hnRNA， 初级转录产物或剪接变体。 提及″治疗有效量″，是指缓解(在某种程度上，由熟练的开业医 生判断)哺乳动物中疾病或状况的一种或多种症状的组合物的量。此 外，提及组合物的″治疗有效量″，是指返回正常的(部分或全部地)与 疾病或状况的原因相关的生理或生化参数的量。当例如静脉内地、皮 下地、腹膜内地、口服地或通过吸入给药时，在本领域中熟练的临床 医师可以确定组合物的治疗有效量，以治疗或预防特定的疾病状况， 或紊乱。除了许多患者特异性考虑之外，需要为治疗上有效的组合物 的精确量将依赖于许多因素，例如，比如活性剂的比活性，所用的递 送装置、试剂的物理特性、给药的目的。但是，当了解本文提出的内 容时，将在普通的熟练临床医师的技能内。 如本文所用，″人类或其它哺乳动物肿瘤对化疗剂的应答″是指由 于化疗剂患者临床上改善或肿瘤在大小或侵袭性上降低的程度或量。 据说患者可以基于客观标准，例如，比如，性能状况、身体检查、成 像研究或实验室测试结果临床上改善。据说患者还基于由患者报告的 主观标准，例如，比如，疼痛、窘迫、疲劳或精神面貌临床上改善。 肿瘤大小上的降低可以基于通过本领域已知的合适方法测定的原发性 肿瘤或总体肿瘤(overall tumor)负荷，例如，身体检查、成像研究或 实验室值。提及″肿瘤大小上的降低″是指至少约10％的变化。此外，期 望表现为至少约20％的变化，优选至少约25％的变化，更优选至少约 33％的变化，更优选至少约50％的变化，更优选至少约90％的变化， 更优选至少约95％的变化，并且最优选至少约99％的变化。提及在″ 肿瘤侵袭性″上的降低，是指例如降低组织学级别(histologic grade)，肿瘤中的％活细胞，肿瘤中的％增殖细胞，肿瘤的侵袭力，肿 瘤转移的能力，或本领域中已知的肿瘤侵袭性的其它度量。提及″在肿 瘤侵袭性上的降低″是指在医学领域技术人员常用的在与肿瘤侵袭性 相关的可测量参数上至少约10％的降低，例如但不限于，阶段、级别、 肿瘤负荷、转移传播的程度、血管分布、DNA含量和增殖分数。此外， 期望在医学领域技术人员常用的在与肿瘤侵袭性相关的可测量参数上 表现为至少约20％的变化，优选至少约25％的变化，更优选至少约 33％的变化，更优选至少约50％的变化，更优选至少约90％的变化， 更优选至少约95％的变化，并且最优选至少约99％的变化。本发明还 提供用于预测或确定人类或其它哺乳动物肿瘤或其它增殖性疾病对化 疗剂或其它抗癌剂的应答。该方法包括：(a)从人类或其它哺乳动物 中分离生物样品，(b)检测在生物样品中SPARC蛋白的表达，和(c)定 量在生物样品中SPARC蛋白的量。一旦确定由肿瘤表达的SPARC的量， 可以通过例如，将SPARC的表达与给药的治疗剂的剂量关联来预测或确 定化疗剂的效力。本发明还提供针对作为治疗剂或显像剂的SPARC产生 的抗体的用途，以用于其中SPARC起主要作用或相对于正常组织过度表 达的疾病。 如本文所用术语″治疗(treating)″、″治疗(treatment)″、″ 治疗(therapy)″和″治疗性治疗(therapeutic treatment)″是指治 愈性治疗、预防性治疗(prophylactic therapy)或预防性治疗 (preventative therapy)。″预防性治疗(preventative therapy)″的 实例为预防或减少靶向疾病(例如，癌或其它增殖性疾病)或其相关状 况的机会。需要治疗的那些包括已经患有疾病或状况的那些以及倾向 于患有要预防的疾病或状况的那些。如本文所用术语″治疗 (treating)″、″治疗(treatment)″、″治疗(therapy)″和″治疗性 治疗(therapeutic treatment)″还描述管理和护理哺乳动物以旨在与 疾病或相关状况战斗，并且包括给药组合物以减轻疾病、状况的症状、 副作用或其它并发症。用于癌症的治疗性治疗包括，但不限于，手术、 化学治疗、放射治疗、基因治疗和免疫治疗。 如本文所用，术语″试剂″或″药物″或″治疗剂″是指化学化合物、 化学化合物的混合物、生物大分子、或从生物材料例如怀疑具有治疗 性质的细胞、植物、真菌或动物(特别是哺乳动物)细胞或组织中制造 的提取物。试剂或药物可以是纯的、基本纯或部分纯的。根据本发明， ″试剂″还包括放射治疗剂。如本文所用，术语″化疗剂″是指具有针对 癌症、瘤和/或增殖性疾病的试剂。 本发明提供组合物，其中SPARC多肽，血管生成抑制剂，和化疗剂 (例如，微管抑制剂比如紫杉烷，优选白蛋白结合紫杉醇)中任何一种 或全部被冻干以在床旁护理时(at the bedside)重建成液体剂型。根 据本发明的剂型包括：其中SPARC多肽，血管生成抑制剂，和微管抑制 剂例如紫杉烷包括在单剂型(single dosage form)中。 本发明提供的组合物包括，例如，具有约10mg/ml至约100 mg/ml，优选约1mg/ml至约10mg/ml，更优选约0.1mg/ml至约1 mg/ml微管抑制剂(例如紫杉烷)浓度的约0.5ml至约4ml水性或有 机液体。此类组合物可以具有约10μg/ml至约400mg/ml，优选约 100μg/ml至约100mg/ml，更优选约1mg/ml至约10mg/ml的 SPARC多肽浓度。血管生成抑制剂可以以任何合适和治疗上有效的浓度 存在，例如阿瓦斯丁(avastin)以约10mg/ml至约50mg/ml的浓度。 在优选的实施方式中，本发明提供用于治疗哺乳动物肿瘤的组 合物和方法，包括治疗有效量的SPARC多肽、治疗有效量的微管抑制剂 例如紫杉烷，任选地，和血管生成抑制剂，SPARC多肽为包括SEQ ID NOS. 1，3的氨基酸序列或其组合的多肽。在特别优选的实施方式中，SPARC 多肽为包括SEQ ID NO：1的氨基酸序列的多肽。 SPARC多肽以约40μg至约40mg每剂量的剂量给药，给药周期 至少约1周。换句话说，SPARC剂量为约40μg/kg至约40mg/kg，优选 约0.1mg/kg至约100mg/kg，更优选约1mg/kg至约20mg/kg。 根据本发明使用的合适的血管生成抑制剂包括，例如mTOR的抑制 剂、极光激酶(Aurora kinase)、VEGFR激酶的抑制剂、PDGFR激酶的抑 制剂、索拉非尼(sorafenib)、索坦(sutent)、阿西替尼(axitinib)、 阿瓦斯丁(avastin)、马立马司他(marimastat)、贝伐单抗 (bevacizumab)、羧胺三唑、TNP-470、CM101、IFN-α、IL-12、 血小板因子-4、苏拉明(suramin)、SU5416、血小板反应素、VEGFR拮 抗剂、血管稳定类固醇(angiostatic steroids)、软骨-衍生的血管生 成抑制剂因子、基质金属蛋白酶抑制剂、血管生成抑制素 (angiostatin)、内皮抑制素(endostatin)、2-甲氧基雌二醇、替可 加兰(tecogalan)、血小板反应素、催乳素、ανβ3抑制剂、替可加 兰(tecogalan)、BAY 12-9566，AG3340、CGS27023A、COL-3、vitaxin、 ZD0101、TNP-40、沙利度胺(thalidomide)、角鲨胺(squalamine)、 IM862，PTK787、夫马洁林、夫马洁林的类似物、BB-94、BB-2516、 linomid、针对血管生长因子的抗体、针对血管生长因子受体的抗体或 其组合。 可以使用任何合适剂量的血管生成抑制剂，例如阿瓦斯丁以约5 mg/ml至约15mg/ml的剂量给药，给药周期至少一周。 疏水性化疗剂具有1.0以下，优选2.0以下，最优选5.0以下的HLB (HLB为亲水/疏水平衡值)，并且包括，例如试剂埃坡霉素 (epothilone)、多西紫杉醇、紫杉醇。微管抑制剂例如紫杉烷包括埃 坡霉素、多西紫杉醇、紫杉醇或其组合。″其组合″是指给药包括多于 一种药物的剂型，例如多西紫杉醇和紫杉醇，以及连续的，但时间上 不同的给药埃坡霉素、多西紫杉醇和紫杉醇(例如，在一周期使用多西 紫杉醇，在下一周期使用紫杉醇)。特别优选的化疗剂包括蛋白质-结 合药物的颗粒，包括但不限于，其中构成蛋白质-结合药物颗粒的蛋白 质包括白蛋白，所述白蛋白包括其中超过50％的化疗剂为纳米颗粒形 式。最优选化疗剂包括白蛋白结合紫杉醇的纳米颗粒，例如，比如 合适的纳米颗粒制剂不限于包括至少约50％的活性剂以纳米颗 粒形式的那些。其它合适的纳米颗粒制剂包括至少约60％，优选至少 约70％，更优选至少约80％，或更优选至少约90％的活性剂以纳 米颗粒形式。此外，此类纳米颗粒制剂最优选包括至少约95％到至少约 98％的活性剂以纳米颗粒形式。 根据本发明优选方面治疗哺乳动物肿瘤的方法不限制性地包括， 其中紫杉醇剂量从约30mg/m2至约1000mg/m2，给药周期约一周一 次；优选紫杉醇剂量从约1mg/m2至约30mg/m2，给药周期约一周一 次；更优选紫杉醇剂量从约0.3mg/m2至约1mg/m2，给药周期约一 周一次；最优选紫杉醇剂量从约0.01mg/m2至约0.3mg/m2，给药周 期约一周一次。合适的紫杉醇给药周期还可以包括约2周一次或约2周 一次。 根据本发明治疗哺乳动物肿瘤的方法不限制性地包括，其中将 SPARC多肽在微管抑制剂例如紫杉烷给药之前，一起或之后给药。类似 地，血管生成抑制剂可以在微管抑制剂例如紫杉烷给药之前，一起或 之后给药。提及之前或之后，是指至少约2周，优选至少约1周，更优 选至少约3天，更优选至少约1天，更优选至少约12小时，更优 选至少约8小时，更优选至少约6小时，最优选至少约1小时的时 间差。提及″基本上同时地″是指两个事件发生在约3天内，优选约1天 内，更优选约12小时内，更优选约8小时内，更优选约6小时内，最优 选约1小时内。 根据本发明的方案包括，约每周一次给药，其中： (a)SPARC多肽为约40μg/kg至约40mg/kg每剂量的剂量，血 管生成抑制剂为以约15μg/kg至约15mg/kg剂量的阿瓦斯丁，微 管抑制剂例如紫杉烷为以约30mg/m2至约1000mg/m2剂量的白蛋白 结合紫杉醇 (b)其中SPARC多肽为约40μg/kg至约40mg/kg每剂量的剂 量，血管生成抑制剂为以约15μg/kg至约15mg/kg剂量的阿瓦斯 丁，微管抑制剂例如紫杉烷为以约1mg/m2至约30mg/m2剂量的白蛋 白结合紫杉醇，给药周期至少一周.. (c)其中SPARC多肽为约40μg/kg至约40mg/kg每剂量的剂 量，血管生成抑制剂为以约15μg/kg至约15mg/kg剂量的阿瓦斯 丁，微管抑制剂例如紫杉烷为以约0.3mg/m2至约1mg/m2剂量的白 蛋白结合紫杉醇，给药周期至少一周.. (d)其中SPARC多肽为约40μg/kg至约40mg/kg每剂量的剂 量，血管生成抑制剂为以约15μg/kg至约15mg/kg剂量的阿瓦斯 丁，微管抑制剂例如紫杉烷为以约0.1mg/m2至约0.3mg/m2剂量的 白蛋白结合紫杉醇，给药周期至少一周.. 方案(a)-(d)中的SPARC多肽可以具有由SEQ ID NO：1，2或任何 其它合适的SPARC或其组合构成的序列。与微管抑制剂例如紫杉烷单独 相比，这些组合可以在肿瘤生长速率上产生约50％的降低。 其它治疗可以与SPARC多肽，血管生成抑制剂、微管抑制剂例如 紫杉烷一起或代替微管抑制剂使用，包括合适的化疗剂，例如，酪氨 酸激酶抑制剂(染料木黄酮)、生物上的活性剂(tTF或TNF)、放射性核 素(131I，90Y，111In，211At，32P和其它已知的治疗放射性核素)、亚德里 亚霉素(adriamycin)、安莎霉素抗生素、天冬酰胺酶、博莱霉素、白 消安、顺铂、卡铂、卡莫司汀、卡培他滨、苯丁酸氮芥、阿糖胞苷、 环磷酰胺、喜树碱、氮烯唑胺、更生霉素、柔红霉素、右雷佐生、多 西紫杉醇、多柔比星(doxorubicin)、依托泊苷、埃坡霉素、氟尿苷、 氟达拉滨、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、 依立替康、洛莫司汀、氮芥、巯嘌呤、美法仑、甲氨蝶呤、雷帕霉素(西 莫罗司)及衍生物、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、硝基脲(nitrosurea)、 帕米膦酸、喷妥司汀、普利霉素、丙卡巴肼、利妥昔单抗、链佐星、 替尼泊甙、硫鸟嘌呤、塞替派、紫杉烷、长春碱、长春新碱、长春瑞 滨、考布他汀(combretastatins)、盘皮海绵内酯(discodermolides) 和反铂(transplatinum)。因此，根据本发明使用的合适的化疗剂不 限制地包括，抗代谢药(例如，天冬酰胺酶)，抗有丝分裂物(例如，长 春花生物碱)，DNA损伤剂(例如，顺铂)、促凋亡剂(诱导程序化细胞死 亡或细胞凋亡的试剂)(例如，表鬼臼毒素(epipodophylotoxins))、 分化诱导剂(例如，维甲类(retinoids))、抗生素(例如，博莱霉素) 和激素(例如，他莫西芬，己烯雌酚)。此外，根据本发明使用的合适 化疗剂包括抗血管生成剂(血管生成抑制剂)例如，比如，INF-α、 夫马洁林、血管生成抑制素、内皮抑制素、沙利度胺等。″其它抗癌剂 ″还不限制地包括，生物活性多肽、抗体、凝集素和毒素。根据本发明 使用的合适的抗体不限制地包括，缀合(偶合)或未缀合(未偶合)的抗 体、单克隆或多克隆抗体、人源化或非人源化抗体，以及Fab′，Fab 或Fab2片段、单链抗体等。 本发明可以用于的疾病包括异常状况或增殖、组织重构、增生、 在任何身体组织(包括软组织、结缔组织、骨、实体器官、血管等)中 的异常的伤口治愈。通过本发明组合物可治疗或可诊断的疾病的实例 包括癌症、糖尿病性或其它视网膜病、炎症、关节炎、血管再狭窄 (restenosis in blood vessels)或人工血管移植物或血管内装置等。 本发明还提供将治疗组合物穿过内皮屏障从血管转运到肿瘤间 质的方法。抗体治疗和化疗中的主要障碍在于穿过内皮屏障到肿瘤间 质的转移。白蛋白利用白蛋白受体转运机制来穿过内皮屏障。该转运 机制可与通过文献(gp60和白蛋白激活蛋白(albondin))报道的那些或 通过其它未发现的机制相同。之前已经报道捎带(piggy backed)到白 蛋白上的治疗剂显示增强的肿瘤吸收(Desai，N.等Increased endothelial transcytosis of nanoparticle albumin-bound paclitaxel(ABI-007)by endothelial gp60 receptors：a pathway inhibited by27th Annual San Antonio Breast Cancer Symposium(SABCS)(2004)，abstract#1071)。此外，穿过内皮屏 障的增强转移可以使用生理学上白蛋白转运机制实现(Schnitzer， J.E.；Oh，P.J.Biol.Chem.269，6072-6082(1994)。 对于小分子，例如比如＜1,000-5,000道尔顿，可以进行改性以使 针对白蛋白的药物亲和力增加。对于小分子的制剂，可以除去防止药 物与白蛋白结合的溶剂。作为选择，小分子可以连接至白蛋白、针对 白蛋白的抗体、其片段或例如下文所述的白蛋白受体的配体。 对于生物分子例如蛋白质、抗体及其片段，可以用白蛋白结合肽 设计生物制剂(biologics)，以使生物制剂显示对白蛋白的亲和力。该 肽可以为白蛋白结合序列、针对白蛋白的抗体或抗体片段、针对白蛋 白载体的抗体或抗体片段(例如gp60/白蛋白激活蛋白(albondin)/ 清道夫受体/或TGF-β受体)、或细胞质膜微囊(caveolae)中发现的任 何蛋白的抗体、白蛋白的转运体。 SPARC可以使用已知技术合成和纯化。表达外源SPARC的细胞可以 通过以下产生：将SPARC结构基因/cDNA置于强启动子的控制下/翻译开 始以及将载体转染入哺乳动物细胞以在这些细胞中驱动SPARC的表达。 作为选择，SPARC可以使用杆状病毒(bacculovirus)或其它病毒例如腺 病毒来表达。由这些细胞表达的SPARC可以通过传统的纯化方法例如离 子交换、尺寸排阻、或C18色谱来纯化。纯化的SPARC可以与防腐剂一 起配制在生理盐水中，并且静脉内地、通过气溶胶、通过皮下注射或 其它方法给药。 本发明进一步提供包括核酸序列编码的重组载体，其中，例如所 述载体还包括控制SPARC多肽编码核酸序列的表达的启动子。此外，本 发明提供包括权利要求3的核酸分子的细胞，其中所述细胞为原核细胞 或真核细胞。组织培养的方法对本领域技术人员是已知的。(参见，例 如，Sambrook & Russell，Molecular Cloning：A Laboratory Manual， Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York(2001)，pp. 16.1-16.54)。因此，本发明进一步提供制造权利要求1所述多肽的方 法，包括：(a)用编码权利要求1所述多肽的的核酸转化细胞；(b)诱 导通过转化细胞的多肽的表达；和(c)纯化所述多肽。 SPARC多肽可以从重组宿主细胞中表达和纯化。重组宿主细胞可 以为原核或真核的，包括但不限于细菌例如大肠杆菌(E.coli)、真菌 细胞例如酵母、昆虫细胞包括但不限于果蝇和蚕源细胞系、以及哺乳 动物细胞和细胞系。当在细胞例如人类细胞中表达SPARC多肽时，无论 在体外或体内，可以针对给定的细胞类型(即，物种)优化对于此类编 码SPARC的多肽选择的密码子。许多用于密码子优化的技术在本领域是 已知的(参见，例如，Jayaraj等，nucleic acids Res.33(9)：3011-6 (2005)；Fμglsang等，Protein Expr.Purif.31(2)：247-9(2003)； Wu等，″The Synthetic Gene Designer：a Flexible Web Platform to Explore Sequence Space of Synthetic Genes for Heterologous Expression，″csbw，2005IEEE Computational Systems Bioinformatics Conference-Workshops(CSBW′05)，pp.258-259 (2005))。 本发明还提供核酸构建体，包括控制元件和本文所述的SPARC多 肽核酸分子，其与控制元件(例如，合适的启动子)操作地(operatively) 连接，以用于表达SPARC多肽或本文所述在SPARC多肽上具有保守氨基 酸变化的多肽。蛋白质表达依赖于RNA转录的水平，其接下来受DNA信 号的调控。类似地，mRNA的翻译在最低限度上需要ATG起始密码子，其 通常位于信使5′末端的10至100个核苷酸内。侧翼于ATG起始密码子的 序列已经显示通过真核核糖体影响其识别，与引起最佳翻译的完美 Kozak共有序列(consensus sequence)一致(参见，例如，Kozak，J. Molec.Biol.196：947-950(1987))。同样，在细胞中外源核酸的 成功表达可能需要所得蛋白的翻译后修饰。因此，本发明提供编码 SPARC多肽的质粒，其中所述载体为例如pCDNA3.1或其衍生物，且包括 但不限于本文所述的pVT1000Q3质粒。 本文所述的核酸分子优选包括与合适的启动子操作地连接的编 码区域，所述启动子优选在真核细胞中起作用。病毒启动子，不限制 地例如，RSV启动子和腺病毒主要晚期启动子可用于本发明。合适的非 病毒启动子包括，但不限于，磷酸甘油激酶(PGK)启动子和延伸因子 1.α.启动子。非病毒启动子期望为人类启动子。其它合适的基因元件， 其许多在本领域是已知的，也可连接至、附着至或插入发明的核酸或 构建体，以提供额外的功能、表达水平或表达模式。还可使用表达SPARC 家族基因的天然启动子，在该事件中优选不将它们用于天然编码它们 的染色体，除非通过实质上改变该染色体的过程改性。此类实质上改 变的染色体可以包括通过逆转录病毒载体或类似过程转染或改变的染 色体。作为选择，此类实质上改变的染色体可以包括人工染色体例如 HAC，YAC或BAC。 此外，本文所述的核酸分子可以操作地连接至增强子以促进转 录。增强子可以为DNA的顺式作用元件，其刺激相邻基因的转录。在来 自许多物种的许多不同细胞类型中对连接的基因赋予高水平的转录的 增强子的实例不限制地包括，来自SV40和RSV-LTR的增强子。此类增 强子可以与具有细胞类型特异性作用的其它增强子组合，或者可以单 独使用任何增强子。 为了优化蛋白质生产，发明的核酸分子还可包括在核酸分子的编 码区域之后的多聚腺苷化作用位点。同样，优选所有适当的转录信号 (或翻译信号，在合适的情况下)将正确地排列，以使外源核酸在将其 导入的细胞中适当地表达。如果需要，外源核酸还可以引入剪接位点 (即剪接受体和剪接供体位点)以促进mRNA生产同时维持框架中 (inframe)的全长转录产物。此外，发明的核酸分子还可以包括用于加 工、分泌、细胞内定位等的合适序列。 还可以将所述核酸分子插入任何合适的载体。合适的载体不限制 地包括，病毒载体。合适的病毒载体不限制地包括，逆转录病毒载体、 α病毒、牛痘、腺病毒、腺病毒相关病毒、疱疹病毒和鸡痘病毒(fowl pox viral)载体。所述载体优选具有转化真核细胞，例如，293细胞的 天然的或设计的能力。此外，在本发明上下文中所用的载体可以为″ 裸″核酸载体(即几乎不具有或不具有包封其的蛋白质、糖和/或脂质 的载体)例如质粒或附加体，或所述载体可以与其它分子络合。可以与 发明的核酸合适的组合的其它分子不限制地包括病毒外壳(viral coats)、阳离子脂质、脂质体、多胺、金颗粒和靶向部分例如靶向细 胞分子的配体、受体或抗体。 可以将本文所述的核酸分子转化入任何合适的细胞，典型的真核 细胞，例如，比如HEK、293或BHK，期望引起SPARC多肽，例如，比如 由本文所述的SEQ ID NO：2或其变体组成的多肽的表达。所述细胞可 以培养以提供核酸分子的表达，以及因此，SPARC多肽，例如，比如包 括本文所述的SEQ ID NO：2或其变体的多肽的生产。 所以，本发明提供用本文所述的发明的核酸分子转化或转染的细 胞。用外源DNA分子转化或转染细胞的方法在本领域是已知的。不限制 地例如，使用本领域已知的标准转化或转染技术例如磷酸钙或DEAE- 右旋糖苷-介导的转染、原生质体融合、电穿孔、脂质体和直接显微注 射(参见，例如，Sambrook & Russell，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York(2001)，pp.1.1-1.162，15.1-15.53，16.1-16.54)将DNA导入 细胞。用于转化的广泛使用的方法为通过磷酸钙或DEAE-右旋糖苷介导 的转染。依赖于细胞类型，达20％的培养细胞的群体可以在任何时间被 转染。 转化方法的另一实例为原生质体融合法，将源自携带大量目的质 粒拷贝的细菌原生质体直接与培养的哺乳动物细胞混合。细胞膜融合 (通常用聚乙二醇)后，细菌的内含物递送至哺乳动物细胞的细胞质， 并且质粒DNA转移到细胞核。对于许多常用于瞬时表达检测的细胞系， 细胞系原生质体融合不如转染有效，但对于其中DNA的胞吞作用无效率 地出现的细胞系是有用的。原生质体融合经常产生随机整合到宿主染 色体的质粒DNA的多个拷贝。 电穿孔，将短、高压的电脉冲应用到各种哺乳动物和植物细胞， 导致在质膜中纳米大小的孔的形成。DNA通过这些孔或作为伴随所述孔 的封闭的膜组分的重新分布的结果，直接摄入细胞的细胞质。电穿孔 可以极其有效，并且可用于克隆基因的瞬时表达和用于建立携带目的 基因的整合拷贝的细胞系二者。 脂质体转化包括将DNA和RNA包封在脂质体内，然后将脂质体与细 胞膜融合。此外，包被有合成阳离子脂质的DNA可以通过融合引入细胞。 作为选择，直链和/或支链聚乙烯亚胺(PEI)可用于转染。 将DNA分子直接显微注射入细胞核具有不将DNA分子暴露到细胞 区室例如低pH的内体(endosome)的优点。因此，显微注射主要用作建 立携带目的DNA的整合拷贝的细胞系的方法。 此类技术可用于真核细胞的稳定或瞬时转化。稳定转化细胞的分 离需要连同用目的基因转化一起引入筛选标记。此类筛选标记包括赋 予对新霉素抗性的基因以及在HPRT阴性细胞中的HPRT基因。选择可能 需要在选择培养基上延长的培养，至少约2-7天，优选至少约1-5周(参 见，例如，Sambrook & Russell，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York(2001)， pp.16.1-16.54)。 用于本发明的核酸序列还可部分或全部地通过化学合成来生产， 例如通过由Beaucage，等所述的亚磷酰胺法(Tetra.Letts.22： 1859-1862(1987))，或三酯法(Matteucci等，J.Am.Chem.Soc.103 3185(1981))，其可在商业上的自动化寡核苷酸合成仪上进行。双链 片段可以通过以下从化学合成的单链产物获得：合成互补链并且将所 述链在合适条件下一起退火，或通过使用合适的引物序列，使用DNA 聚合酶合成互补链。 SPARC多肽可以通过任何合适的重组方法形成，包括将载体设计 以过度表达外源SPARC。任何合适的细胞，包括细菌、酵母、昆虫或哺 乳动物细胞可以被转染以表达SPARC。非洲绿猴-293对于外源SPARC 表达是优选的哺乳动物细胞。尽管可以使用任何合适的培养系统，对 于SPARC生产而言中空纤维细胞系统是优选的培养系统。 由于SPARC是分泌的，其可如下从培养基中分离：(a)从生物反 应器(例如，100ml/大滤筒(large cartridge))每天收集两次条件培 养基；(b)将培养基离心和过滤通过0.22微米过滤器，在加载到亲和 柱之前将滤液的ph调整至7.8。令人惊奇的是，发现血清保护分泌的 SPARC免遭降解，3％的血清提供该保护的足够浓度。 可以使用任何合适的纯化方法。例如，Ni-亲和柱对于组氨酸标 记的SPARC是理想的。首先，将柱用50mM Na-P，0.5M NaCl，pH 7.8 平衡。然后加载样品，并且用相同的缓冲液洗涤该柱直至基线。将该 柱用相同但是pH为6.0的缓冲液洗涤直至基线。接着用相同但是pH为 5.3的缓冲液洗涤直至基线。结合蛋白如下用咪唑(immidazole)梯度液 洗脱：(a)将该柱用2倍柱体积的缓冲液A(1X PBS，300mM NaCl，pH 7.9)洗涤，(b)以达10倍柱体积应用缓冲液B(1X PBS，300mM NaCl， 500mM咪唑，pH 7.9)的10％梯度液，(c)缓冲液B的100％梯度液用于 洗脱结合的蛋白质。通过Western印迹分析咪唑梯度液的洗脱峰(Peak fraction)。 任选地，Mono-Q离子交换色谱用于进一步的纯化。将包含Ni-柱 的级分(fraction)的SPARC集中，然后浓缩和使用Amicon centricon 缓冲改变成20mM MOPS，200mM LiCl2，pH 6.5。将该样品加载到用相 同缓冲液预平衡的Mono-Q柱。结合蛋白用20mM Mops，200mM LiCl2，pH 6.5的线性梯度液洗脱。 每次柱色谱后，包含级分的SPARC通过Western印迹分析。包含 SPARC的集中级分进一步浓缩并使用Amicon centricon缓冲变化(即 Ni-柱后，缓冲液与Mono-Q交换，并且Mono-Q纯化后，与PBS交换)。该 纯化蛋白通过SDS-PAGE分析，就纯度扫描带。内毒素水平通过比色法 确定。 在某些细菌实施方式中，当表达和纯化SPARC多肽时，使用用于 提高蛋白质溶解度的技术以防止细菌包涵体(其为不可溶级分)的形 成，并因此获得大量的多肽。包涵体中累积的SPARC为不保留其生理活 性的失活型SPARC。 纯化的SPARC多肽的溶解度可以通过本领域已知的方法改进。例 如，溶解度还可以通过表达功能性片段，但不是全长SPARC多肽来改进。 此外，为了增加表达的蛋白(例如，在大肠杆菌中)的溶解度，如 Georgiou & Valax所述(Current Opinion Biotechnol.7：190-197 (1996))，可以通过降低生长温度、使用较弱的启动子、使用较低拷贝 数的质粒、降低诱导剂浓度、改变生长培养基来降低蛋白质合成的速 率。这降低了蛋白质合成的速率，并且获得更可溶的蛋白。还可以添 加对于正确折叠和对于蛋白质稳定性必需的辅基或辅因子，或添加缓 冲液以控制生长期间培养基中的pH波动，或添加1％葡萄糖以抑制通过 乳糖的lac启动子的诱导，其存在于大多数丰富培养基中(例如LB， 2xYT)。还可以将多元醇(例如，山梨醇)和蔗糖添加至培养基，这是因 为由这些添加物引起的渗透压上的增加导致细胞中渗透保护剂 (osmoprotectants)的累积，其使天然蛋白结构稳定。可以添加乙醇， 低分子量硫醇和二硫化物，以及NaCl。此外，伴侣蛋白(chaperones)和 /或折叠酶可以与所需的多肽一起共表达。分子伴侣通过与折叠中间体 的瞬时相互反应促进正确的异构化和细胞内靶向。大肠杆菌伴侣蛋白 系统包括，但不限于GroES-GroEL，DnaK-DnaJ-GrpE，CIpB。 折叠酶沿着折叠途径加速速率-限制步骤。三种类型的折叠酶起 重要作用：肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI′s)、二硫键氧化还原酶(DsbA) 和二硫键异构酶(DsbC)、蛋白质二硫键异构酶(PDI)，其为催化蛋白质 半胱氨酸氧化和二硫键异构化的真核蛋白。一种或多种这些蛋白与靶 蛋白的共表达可以导致更高水平的可溶靶蛋白。 SPARC多肽可以作为融合蛋白生产，以改进其溶解度和生产。融 合蛋白包括SPARC多肽和框架中(in frame)融合在一起的第二多肽。第 二多肽可以为本领域已知的融合伴侣以改进与其融合的多肽的溶解 度，例如多聚组氨酸标记、NusA、细菌铁蛋白(BFR)、GrpE、硫氧还蛋 白(TRX)和谷胱甘肽-S-转移酶(GST)。Novagen Inc.(Madison，Wis.) 提供pET 43.1载体系列，其允许形成NusA-靶融合。当作为融合伴侣时， DsbA和DsbC也显示对表达水平的积极作用，因此可用于与SPARC多肽 融合以实现更高的溶解度。 在一个实施方式中，SPARC多肽作为包括SPARC多肽和融合伴侣硫 氧还蛋白的融合多肽生产，如美国专利NO：6,387,664所述，在此将其 全文引入以作参考。硫氧还蛋白-SPARC融合可以在大肠杆菌中生产作 为大量的容易配制的可溶性蛋白，而不丧失生理活性。虽然美国专利 NO：6,387,664提供具有融合至硫氧还蛋白的C末端的SPARC的融合 SPARC蛋白，应该理解，对于本发明的目的而言，SPARC多肽可以融合 到第二多肽的N末端或C末端，只要保留其敏化功能。 除了增加溶解度之外，可以构建包括SPARC多肽的融合蛋白以用 于容易检测细胞中SPARC多肽的表达。在一个实施方式中，融合至SPARC 多肽的第二多肽为报告多肽(reporter polypeptide)。当用于此类检 测目的时，报告多肽不必须与SPARC多肽融合。其可由还编码SPARC多 肽的相同多核苷酸(例如，载体)编码并共导入靶细胞和在靶细胞中共 表达。 优选地，用于本发明的报告多肽为自发荧光蛋白(例如，GFP， EGFP)。自发荧光蛋白提供用于鉴定目的多核苷酸(及其多肽产物)表达 的容易检验。由于报告多肽的活性(和通过推断其表达水平)可以使用 流式细胞分选仪定量地监视，易于连续或批量地(in bulk population) 检测许多独立的转染子。然后具有最佳表达的细胞可以被筛选或从群 体中选择。当选择包括SPARC多肽或根据本发明的用于敏化治疗的多核 苷酸的重组细胞时其是有用的。 本发明提供SPARC分子，包括SPARC多肽和缀合至聚乙二醇(PEG) 的蛋白。PEG缀合可以增加蛋白质的循环半衰期，降低蛋白质的免疫原 性和抗原性，以及改进生物活性。可以使用任何合适的缀合方法，包 括但不限于，例如，使甲氧基-PEG与SPARC蛋白的可用氨基或其它反应 位点例如，比如，组氨酸或半胱氨酸反应。此外，重组DNA方法可用于 将具有PEG-反应基团的氨基酸添加到发明的SPARC分子。可以在将其与 发明的SPARC蛋白反应之前处理PEG，例如连接基团可以添加至PEG。此 外，根据本发明可使用可释放(releasible)和杂交PEG化策略，例如， 比如，PEG化SPARC以使添加至SPARC分子中的特定位点的PEG分子在体 内释放。此类PEG缀合方法在本领域是已知的(参见，例如，Greenwald 等，Adv.Drug Delivery Rev.55：217-250(2003))。 此外，本发明提供SPARC融合蛋白，包括，不限制地例如，SPARC 序列融合诊断上有用的蛋白结构域(例如半抗原，GFP)、免疫上活性 蛋白结构域(例如，TF或TNF)或毒性结构域的上游或下游。 此外，本发明提供使用化疗剂或其它抗癌剂治疗哺乳动物中肿瘤 或其它增殖性疾病的方法，包括：(a)从哺乳动物分离生物样品，(b) 检测生物样品中SPARC蛋白或RNA的表达，(c)将生物样品中SPARC蛋白 或RNA的量定量，(d)确定SPARC蛋白或RNA是否以指示化疗剂或其它抗 癌剂的使用的水平存在，和(e)基于SPARC蛋白或RNA水平，如果指示， 则给药治疗有效量的化疗剂或其它抗癌剂。 II.诊断实施方式 提及″预测人类或其它哺乳动物肿瘤或其它增殖性疾病对化疗剂 的应答″，是指在给药化疗剂之前关于应答的可能性，基于测试结果与 临床经验，进行判断。提及″确定人类或其它哺乳动物肿瘤对化疗剂的 应答″，是指关于给药化疗剂之后，但是在可以在临床上或通过医疗领 域普通技术人员已知的传统实验室或成像研究确定应答之前的应答的 可能性，基于测试结果与临床经验，进行判断。提及肿瘤，是指细胞 的克隆增殖，其可以或不必具有恶性性质(不限制地例如，诱导血管发 生的能力、入侵、不接触或缺血性或受抑制的生长、转移或具有受损 的DNA修复)。 如本文所用，术语″抗性″或″对化疗剂或其它抗癌剂的抗性″是指 癌症样品或哺乳动物对治疗的获得性或天然抗性，即对治疗性治疗不 应答或具有降低的或受限的应答，例如，对治疗性治疗具有降低25％ 或以上的降低的应答。此外，抗性还可以通过例如30％，40％，50％，60％， 70％，80％，或以上，至2倍，3倍，4倍，5倍，10倍，15倍，20倍或 以上的降低的应答。应答上的降低通过与在获得抗性之前相同的癌症 样品或哺乳动物比较，或通过与已知对治疗性治疗无抗性的不同癌症 样品或哺乳动物比较来测定。如本文所用，术语″敏感″或″对化疗剂 或其它抗癌剂敏感″是指抗性的缺失。 本发明提供预测或确定哺乳动物肿瘤或其它增殖性疾病对化疗 剂或其它抗癌剂的应答的方法，所述方法包括以下步骤：(a)从哺乳 动物分离生物样品，(b)检测生物样品中SPARC蛋白或RNA的表达，(c) 将生物样品中SPARC蛋白的量定量。根据本发明的其它和相关方面可以 使用该方法，其中SPARC蛋白或RNA在肿瘤中相对于相应的正常组织过 度表达或表达不足(underexpressed)。提及″相应的正常组织″是指其 中原发性肿瘤发育的不存在肿瘤的组织，或包含已经转化或突变成肿 瘤的瘤细胞的细胞或干细胞类型的不存在肿瘤的组织。本发明提供以 下实施方式，其中生物样品分离自肿瘤(或涉及增殖性疾病的组织)或 来自体液，例如，比如，脑脊髓液、血液、血浆、血清或尿。本发明 提供预测或确定哺乳动物肿瘤或其它增殖性疾病对化疗剂或其它抗癌 剂的应答的方法，其中所述哺乳动物为人类。 此外，本发明提供使用化疗剂或其它抗癌剂治疗哺乳动物中肿瘤 或其它增殖性疾病的方法，包括：(a)从哺乳动物，例如，比如人类， 分离生物样品，(b)检测生物样品中SPARC蛋白或RNA的表达，(c)将 生物样品中SPARC蛋白或RNA的量定量，(d)确定SPARC蛋白或RNA是否 以指示化疗剂或其它抗癌剂应该给药的水平存在，和(e)基于SPARC蛋 白或RNA水平，如果指示，则给药治疗有效量的化疗剂或其它抗癌剂。 特别是，本发明提供治疗哺乳动物肿瘤的方法，包括用SPARC和白蛋白 结合紫杉醇组合治疗。 此外，本发明提供用于预测哺乳动物肿瘤，例如，比如，人类肿 瘤，或其它增殖性疾病对化疗剂或其它抗癌剂的应答的试剂盒，包括 用于从肿瘤分离蛋白质的装置，SPARC蛋白检测和定量装置，对照蛋白， 以及用于预测肿瘤的应答的规则。本发明还提供用于预测哺乳动物肿 瘤或其它增殖性疾病对化疗剂或其它抗癌剂的应答的试剂盒，包括用 于从肿瘤分离RNA的装置，SPARC RNA检测和定量装置，对照RNA，以及 用于基于肿瘤中SPARC RNA的水平预测肿瘤的应答的规则。 本发明还提供用于预测或确定哺乳动物肿瘤对化疗剂的应答的 方法，以及用化疗剂治疗哺乳动物肿瘤的方法，其中所述化疗剂为例 如埃坡霉素、多西紫杉醇、紫杉醇(例如)或其组合。本发明 还提供其中哺乳动物肿瘤对化疗剂的应答的预测与SPARC水平正相关 或负相关的实施方式。 此外，本发明提供将化疗剂递送至哺乳动物中的肿瘤的方法，其 中所述方法包括给药哺乳动物以治疗有效量的药物组合物，其中所述 药物组合物包括与能够结合白蛋白的SPARC蛋白偶合的化疗剂以及药 学上可接受的载体。发明的组合物可以包括小分子、大分子或蛋白质。 提及″确定SPARC蛋白或RNA是否以指示化疗剂的使用的水平存在 ″，是指基于SPARC水平和治疗应答的比较历史相关数据，在来自患有 肿瘤的哺乳动物的试样中存在的SPARC蛋白或RNA的定量水平足够高， 以指示可以合理地预期肿瘤对化疗剂应答。提及″指示(indicating)″ 或″指示(indicated)″，是指考虑到SPARC水平和基于合理的医学判 断，应该使用所述化疗剂。不限制地例如，肿瘤的活组织检查可以通 过制备在显微镜载玻片上的活组织检查的薄切片来为使用抗-SPARC抗 体的免疫组织学作准备。然后，使用抗-SPARC免疫组织学策略将活组 织检查载玻片，同时与包含来自其它肿瘤的已知SPARC水平的活组织检 查切片的对照载玻片一起，染色(参见，例如，Sweetwyne等，J. Histochem.Cytochem.52(6)：723-33(2004)；Tai等，J.Clin. Invest.115(6)：1492-502(2005))，所述其它肿瘤对考虑使用的化 疗剂敏感和有抗性。使用光学显微镜将免疫组织学染色的强度分级， 在本领域是公知常识。普通技术人员(例如，病理学家)可以基于与对 照载玻片的染色的比较，指定肿瘤活组织检查的染色级别(例如，0，1+， 2+，3+，4+)。如果肿瘤活组织检查的染色分级在例如，3+或4+， 可以″指示″使用化疗剂的治疗。染色级别的此类比较和指定在治疗具 有肿瘤的哺乳动物的普通熟练医护人员(例如，医生、病理学家、肿瘤 学家、兽医)的技能内。 根据本发明实施的方法要求可以通过任何合适的方法从涉及增 殖性疾病的肿瘤或组织中分离的生物样品，所述任何合适的方法不限 制地包括，切除术、活组织检查、抽吸、静脉穿刺或其组合。作为选 择，根据本发明实施的方法要求可以来自体液，例如，比如，脑脊髓 液、血液、血浆、血清和尿的生物样品。此外，包括肿瘤和体液材料 的对照或参考生物样品可以获自相同哺乳动物、无肿瘤或增殖性疾病 的其它个体的正常组织，或来自具有已知SPARC水平和已知对给定化疗 剂敏感或有抗性的其它肿瘤。此外，可以实施本发明的方法，其中所 述遭受肿瘤或增殖性疾病的哺乳动物为人类。 此外，本发明提供用于预测哺乳动物肿瘤或其它增殖性疾病对化 疗剂或其它抗癌剂的应答的试剂盒，包括用于从肿瘤分离蛋白质的装 置，SPARC蛋白检测和定量装置，对照蛋白，以及用于预测肿瘤的应答 的规则。本发明还提供用于预测哺乳动物肿瘤或其它增殖性疾病对化 疗剂或其它抗癌剂的应答的试剂盒，包括用于从肿瘤分离RNA的装置， SPARC RNA检测和定量装置，对照RNA，以及用于基于肿瘤中SPARC RNA 的水平预测肿瘤的应答的规则。例如，肿瘤活组织检查中的SPARC蛋白 或RNA可以通过将肿瘤活组织检查的薄切片置于显微镜载玻片上来″ 分离″。然后任何存在的SPARC蛋白或RNA可以通过使用抗-SPARC抗体的 免疫组织学染色(参见，例如，Sweetwyne等，J.Histochem. Cytochem.52(6)：723-33(2004)；Tai等，J.Clin.Invest.115(6)： 1492-502(2005))和使用与SPARC RNA互补的核酸探针的原位杂交(参 见，例如，Thomas等，Clin.Can.Res.6：1140-49(2000))来检测 和定量。同时，阳性和阴性对照载玻片将就SPARC蛋白或RNA染色。普 通技术人员可以容易地使用光学显微镜来将肿瘤活组织检查中的 SPARC染色强度分级(例如，0，1+，2+，3+，4+)。发明的试剂盒还包 括用于基于肿瘤中SPARC蛋白或RNA的水平预测肿瘤的应答的规则，例 如，比如，″如果肿瘤活组织检查的染色分级在例如，3+或4+，指 示使用化疗剂的治疗″或″具有3+或4+染色的肿瘤具有高应答率″。 与本发明试剂盒的具体实施方式相关的特定规则可以通过进行回顾的 或预期的相关研究来容易地产生，其在本领域是例行的，并且其将不 需要过度的试验。 如本文所用提及″定量″，是指确定存在的量或浓度。本发明提供 定量SPARC蛋白或RNA的水平的方法，其中SPARC蛋白或RNA在肿瘤中相 对于正常组织(包括，但不限于，在肿瘤起源的相应正常组织中发现的 水平)过度表达或表达不足。作为选择，本发明提供定量SPARC蛋白或 RNA的水平的方法，其中SPARC蛋白或RNA在肿瘤中相对于其它肿瘤(包 括，但不限于，相同组织或组织结构的肿瘤)过度表达或表达不足。此 外，本发明提供定量SPARC蛋白或RNA的水平的方法，其中SPARC蛋白或 RNA在肿瘤中相对于其它肿瘤(包括，但不限于，对化疗剂或化疗剂的 组合敏感或有抗性的肿瘤)过度表达或表达不足。提及过度表达或表达 不足，是指SPARC蛋白或RNA的水平在两种试样或样品之间至少差约5％。 此外，期望在两种试样或样品之间的差异为至少约10％，更优选至少约 20％，更优选至少约50％，更优选至少约100％，更优选至少约3倍，更 优选至少约5倍，最优选至少约10倍。 本发明提供定量SPARC蛋白或RNA的水平的方法，其中SPARC蛋白 或RNA在测试生物流体(biological fluid)中相对于来自其它无肿瘤 患者的相应流体过度表达或表达不足。作为选择，本发明提供定量 SPARC蛋白或RNA的水平的方法，其中SPARC蛋白或RNA在测试生物流体 中相对于来自具有肿瘤(包括，但不限于，对化疗剂或化疗剂的组合敏 感或有抗性的肿瘤)的另一患者的相应流体过度表达或表达不足。提及 过度表达或表达不足，是指SPARC蛋白或RNA的水平在两种试样之间至 少差约5％。此外，期望存在至少约10％，更优选至少约20％，更优选至 少约50％，更优选至少约100％，更优选至少约3倍，更优选至少约5倍， 最优选至少约10倍的差异。 本发明提供预测或确定肿瘤对化疗剂或其它抗癌剂的应答的方 法，治疗肿瘤的方法，以及预测哺乳动物肿瘤对化疗剂或其它抗癌剂 的应答的试剂盒，其中所述肿瘤选自以下：口腔肿瘤、咽肿瘤、消化 系统肿瘤、呼吸系统肿瘤、骨肿瘤、软骨肿瘤、骨转移、肉瘤、皮肤 肿瘤、黑色素瘤、乳腺肿瘤、生殖系统肿瘤、尿道肿瘤、眶瘤、脑和 中枢神经系统肿瘤、神经胶质瘤、内分泌系统肿瘤、甲状腺肿瘤、食 道肿瘤、胃肿瘤、小肠肿瘤、结肠肿瘤、直肠肿瘤、肛门肿瘤、肝肿 瘤、胆囊肿瘤、胰肿瘤、喉肿瘤、肺的肿瘤、支气管肿瘤、非小细胞 肺癌、小细胞肺癌、子宫颈肿瘤、子宫体肿瘤、卵巢肿瘤、外阴肿瘤、 阴道肿瘤、前列腺肿瘤、前列腺癌、睾丸肿瘤、阴茎的肿瘤、膀胱肿 瘤、肾的肿瘤、肾盂的肿瘤、输尿管的肿瘤、头和颈肿瘤、甲状旁腺 癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、急性淋巴 细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、慢性髓性 白血病。此外，本发明提供预测或确定肿瘤对化疗剂的应答的方法， 治疗肿瘤的方法，以及预测哺乳动物肿瘤对化疗剂的应答的试剂盒， 其中所述肿瘤为肉瘤、腺癌、鳞状细胞癌、大细胞癌、小细胞癌、基 底细胞癌、透明细胞癌、嗜酸细胞瘤或其组合。此外，本发明提供预 测或确定肿瘤对化疗剂的应答的方法，治疗肿瘤的方法，以及预测哺 乳动物肿瘤对化疗剂的应答的试剂盒，其中所述肿瘤为良性肿瘤或恶 性肿瘤。此外，本发明预测或确定增殖性疾病对化疗剂的应答的方法， 或治疗增殖性疾病的方法，包括但不限于，其中，所述增殖性疾病为， 例如，良性前列腺增生、子宫内膜异位、动脉粥样硬化、牛皮癣或增 殖性肾小球病。本发明还提供其中肿瘤或增殖性疾病在哺乳动物中的 实施方式，包括，但不限于其中所述哺乳动物为人类。 任何合适的生物样品可以从本发明方法上下文的哺乳动物中分 离，并用于多肽和/或RNA检测和定量。优选地，所述生物样品例如通 过肿瘤活组织检查分离自肿瘤。生物样品使用本领域已知的方法从哺 乳动物分离。作为选择，生物样品分离自哺乳动物的体液，包括，例 如，脑脊髓液、血液、血浆、血清或尿。特别是，许多蛋白纯化技术 在本领域是已知的(参见，例如，Harlow & Lane，Antibodies，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor，pp.421-696(1988))。 根据本发明可以使用用于检测和定量SPARC蛋白的任何合适的方 法，包括但不限于，使用抗-SPARC抗体(例如，Western印迹，ELISA) (参见，例如，Sweetwyne等，J.Histochem.Cytochem.52(6)：723-33 (2004)；Tai等，J.Clin.Invest.115(6)：1492-502(2005))， 使用SPARC-特异结合蛋白(例如，放射性标记的SPARC配体，ELISA-类 检验)，二维电泳，质谱或其组合(参见，例如，Nedelkov D等，Proc. Natl.Acad.Sci.U.S.A.102(31)：10852-7(2005)；Chen等，Proc. Natl.Acad.Sci.U.S.A.101(49)：17039-44(2004))。此外，免 疫组织学可用于分离、检测和定量样品中的SPARC蛋白(参见，例如， Sweetwyne等，J.Histochem.Cytochem.52(6)：723-33(2004)；Tai 等，J.Clin.Invest.115(6)：1492-502(2005))。 本发明提供其中检测和定量SPARC RNA的方法。在本领域已知许 多方法以分离RNA，例如由Chomczynski(美国专利NO：5,945,515)或 由DiMartino等(Leukemia 20(3)：426-32(2006))所述的那些。作 为选择，RNA可以以适合根据本发明检测和定量的形式通过制备包含组 织切片的显微镜载玻片来分离(参见，例如，Thomas等，Clin.Can. Res.6：1140-49(2000))。SPARC RNA可以通过本领域已知的任何合 适的方法检测和定量，包括但不限于，原位杂交(参见，例如，Thomas 等，Clin.Can.Res.6：1140-49(2000))，Northern印迹(参加例 如，Wrana等，Eur.J.Biochem.197：519-28(1991))，实时RT-PCR (参见，例如，DiMartino等，Leukemia 20(3)：426-32(2006))，基 于实时核酸序列的扩增(参见，例如，Landry等，J.Clin.Microbiol. 43(7)：3136-9(2005))，微阵列分析(参见，例如，Tai等，J.Clin. Invest.115(6)：1492-502(2005)；DiMartino等，Leukemia 20(3)：426-32(2006))及其组合。 本发明还提供预测或确定人类或其它哺乳动物肿瘤或其它增殖 性疾病对化疗剂或其它抗癌剂的应答的方法，其中所述哺乳动物肿瘤 对化疗剂的应答与SPARC水平正相关或负相关。提及″与SPARC水平相关 ″，是指，例如，肿瘤对给定化疗剂的应答与检测的SPARC蛋白或RNA 水平之间的相互或交互的关系。即，肿瘤应答的质量、程度、量级或 水平随着检测的SPARC蛋白或RNA的水平变化。当肿瘤应答的质量、程 度、量级或水平随着检测的SPARC蛋白或RNA的水平增加而增加时，存 在″正相关″。当肿瘤应答的质量、程度、量级或水平随着检测的SPARC 蛋白或RNA的水平增加而降低时，存在″负相关″。肿瘤应答的水平和检 测的SPARC蛋白或RNA的水平之间关系可以呈现阶跃函数、线性函数或 对数函数的形式或近似形式。提及″相关″是指建立相关性或考虑已知 相关性的影响。 此外，本发明提供通过将检测的SPARC蛋白或RNA的水平与在已知 参考样品中所检测的比较，预测或确定人类或其它哺乳动物肿瘤或其 它增殖性疾病对化疗剂或其它抗癌剂的应答的方法。此类参考样品可 以来自，例如，正常组织或体液。作为选择，参考样品为具有已知SPARC 水平、应答、对给定化疗剂或其它抗癌剂敏感性或抗性或其组合的肿 瘤。 此外，预测的应答可以表征为有效或无效，以便使用给定的化疗 剂或使用另一化疗剂。同样地，预测的应答可以表征为由使用一种化 疗剂对使用另一化疗剂产生的应答的比，例如由产生的应 答与由产生的应答的比。 因此，本发明提供预测哺乳动物肿瘤或其它增殖性疾病对化疗剂 或其它抗癌剂的应答的试剂盒，包括用于从肿瘤分离蛋白质或RNA的装 置，SPARC蛋白或RNA检测和定量装置，对照蛋白质或RNA，以及用于预 测肿瘤的应答的规则。此类试剂盒可以，不限制地例如，用于预测乳 腺、卵巢或头和颈癌对包括白蛋白结合紫杉醇的纳米颗粒的化疗剂的 应答。用于分离蛋白质或RNA以及SPARC蛋白或RNA检测和定量的合适装 置已经在本文描述。合适的对照蛋白质或RNA应该包括阳性对照例如， 比如，来自患有肿瘤的哺乳动物的肿瘤材料或生物流体或来自肿瘤材 料或来自从患有肿瘤的哺乳动物收获的生物流体的分离蛋白或RNA。合 适的对照蛋白质或RNA包括阴性对照例如，比如，来自无肿瘤的哺乳动 物的正常组织或生物流体或来自从无肿瘤的哺乳动物收获的正常组织 或生物流体的分离蛋白或RNA。试剂盒中的对照还包括用于建立定量 SPARC蛋白或RNA的标准曲线的材料，或来自敏感或抗性肿瘤的材料。 本发明的试剂盒还包括用于确定肿瘤的Her2状态的装置。 本发明的试剂盒将还包括用于预测肿瘤的应答的规则。此类规则 将使对给定化疗剂的应答的预测基于按照本文所述检测的SPARC蛋白 或RNA的水平，其与预测或确定对化疗剂的应答相关。例如，基于以往 经验，SPARC蛋白或RNA的特定水平可以指示应该使用化疗剂。其在本 领域技术人员的技能内，无需过度试验，产生足够的数据(通过预期的 研究、回顾的研究或其组合)，从而确定预测对给定化疗剂的应答的 SPARC蛋白或RNA的水平。 SPARC蛋白在特定人类肿瘤中负责白蛋白的累积。由于白蛋白为 化疗药物的主要载体，SPARC的表达水平指示渗透并被肿瘤保留的化疗 药物的量。因此，SPARC的表达水平预测肿瘤对化疗的应答性。 任何合适的生物样品可以从本发明方法上下文的目的哺乳动物 分离。优选地，所述生物样品例如通过肿瘤活组织检查从肿瘤分离。 作为选择，生物样品可以分离自哺乳动物的体液，包括，例如，脑脊 髓液、血液、血浆、血清、或尿。用于分离生物样品的技术和方法对 本领域技术人员是已知的。 要检测的、其对化疗的应答要预测或确定的、其可根据本发明被 治疗的肿瘤的类型通常为在人类或其它哺乳动物中发现的那些。肿瘤 可以为同样，例如在实验室动物中接种的结果。肿瘤的许多类型和形 式在人类和其它动物条件中遭遇到，并且不旨在将本方法的应用限制 到任何特定的细胞类型或种类。已知，肿瘤包括大量异常的由不受控 性和进行性细胞分裂产生的组织，并且典型地称为″瘤″。本发明方法 用于例如人类中的肿瘤细胞和相关基质细胞、实体肿瘤和软组织相关 的肿瘤，例如软组织瘤。肿瘤或癌可以位于口腔和咽，消化系统，呼 吸系统，骨和关节(例如，骨转移)，软组织，皮肤(例如，黑色素瘤)， 乳腺，生殖系统，泌尿系统，眼睛和眼眶，脑和中枢神经系统(例如，神 经胶质瘤)，或内分泌系统(例如，甲状腺)，并且不必要限制至原发性 肿瘤或癌。与口腔相关的组织包括但不限于，舌和嘴的组织。癌症可 以在消化系统的组织中产生，包括，例如，食道、胃、小肠、结肠、 直肠、肛门、肝、膀胱和胰。呼吸系统的癌症可以影响喉、肺和支气 管，并且包括，例如，非小细胞肺癌。肿瘤可以产生在子宫颈、子宫 体、卵巢外阴、阴道、前列腺、睾丸和阴茎，其构成男性和女性生殖 系统；以及膀胱、肾、肾盂和输尿管，其组成泌尿系统。肿瘤或癌可 以位于头和/或颈(例如，喉癌和甲状旁腺癌)。肿瘤或癌还可以位于造 血系统或淋巴系统，以及包括，例如淋巴瘤(例如，霍奇金病和非霍奇 金淋巴瘤)、多发性骨髓瘤，或白血病(例如，急性淋巴细胞性白血病、 慢性淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病等)。优选 地，肿瘤位于膀胱、肝、卵巢、肾、肠、脑或乳腺。 III靶向实施方式 本发明还提供用于将化疗剂递送至人类或其它哺乳动物中的肿 瘤的方法。所述方法包括：给药人类或其它哺乳动物以治疗有效量的 递送剂(delivery agent)，例如药物组合物，其中所述递送剂(例如药 物组合物)包括与SPARC多肽偶合的化疗剂。药物组合物优选地包括与 SPARC识别基团偶合的化疗剂以及药学上可接受的载体。与本发明其它 实施方式相关的本文提出的化疗剂、肿瘤、哺乳动物，以及其组分的 描述还适用于将化疗剂递送至肿瘤的前述方法的那些相同方面。 在其它实施方式中，本发明提供用于将药学上的活性剂借助于 SPARC多肽递送至表达SPARC结合部分的疾病的位置。此类疾病包括体 内组织(例如，软组织，结缔组织，骨，实体器官，血管等)中增殖、 组织重构、增生的异常状况以及异常的伤口愈合。通过给药包括与能 够结合SPARC蛋白，或另一白蛋白结合蛋白的化合物或配体偶合的治疗 剂的药物组合物可治疗或可诊断的疾病的实例包括，癌症、糖尿病性 或其它视网膜病、炎症、关节炎、血管再狭窄、人工血管移植物或血 管内装置等。与本发明其它实施方式相关的本文提出的药学上的活性 剂、肿瘤、哺乳动物和其组分的描述还适用于将递送药学上的活性剂 的前述方法的那些相同方面。 本发明还提供将化疗剂递送至哺乳动物中的肿瘤的方法。所述方 法包括给药哺乳动物以治疗有效量的药物组合物，其中所述药物组合 物包括与能够结合白蛋白的SPARC蛋白偶合的化疗剂以及药学上可接 受的载体。与本发明其它实施方式相关的本文提出的化疗剂、肿瘤、 哺乳动物，以及其组分的描述还适用于将化疗剂递送至肿瘤的前述方 法的那些相同方面。 将合适的治疗物质、化疗物质、放射性核素、多肽等偶合或缀合 至抗体或其片段的方法在本领域已经良好地描述。例如，本发明提供 SPARC多肽，例如，比如，SPARC-放射性核素、SPARC-药物、SPARC- 免疫调节剂或SPARC-毒素缀合物。根据本发明可使用任何合适的方法 以形成SPARC缀合物。不限制地例如，SPARC蛋白中的游离氨基，比如 赖氨酸的ε-氨基，可以与试剂例如碳二亚胺或异双功能试剂缀合。作 为选择，例如，SPARC巯基(suflhydryl groups)可用于缀合。此外， 与SPARC糖蛋白结合的糖部分，可以被氧化以形成在本领域已知的许多 偶合过程中有用的醛基。根据本发明形成的缀合物可以在体内稳定或 不稳定，例如酶促可降解的四肽键或酸不稳定的顺式乌头酰基 (cis-aconityl)或腙键。 为了体内使用，与能够结合SPARC蛋白的化合物或配体偶合的化 疗剂期望地配制成包括生理学上可接受的载体的药物组合物。任何合 适的生理学上可接受的载体可用于本发明的背景，并且此类载体在本 领域是已知的。 载体典型地为液体，但是还可为固体，或液体和固体组分的组合。 载体期望地为生理学上可接受的(例如，药学上或药理学上可接受的) 载体(例如，赋形迹或稀释剂)。生理学上可接受的载体是已知的并且 易于获得。载体的选择可以至少部分通过靶组织和/或细胞的位置、用 于给药组合物的特定方法来确定。 IV.给药治疗剂(Therapeutic)的模式和靶向实施方式 典型地，此类组合物可以制成可注射的液体溶液或悬浮液；还可 以制备在注射之前当添加液体时适合用于制备溶液或悬浮液的固体形 式；以及制剂还可以被乳化。适合可注射使用的药物制剂包括无菌水 溶液或分散液；包含已知蛋白稳定剂和冻干保护剂的制剂、包括芝麻 油、花生油或水性丙二醇的制剂，以及用于即时制备无菌注射液或分 散液的无菌粉末。在所有情况下，制剂必须是无菌的，并且必须流化 至显示容易注射性的程度。其必须在制造和贮存条件下是稳定的，并 且必须被保护防止微生物，例如细菌和真菌的污染作用。作为游离碱 或药学上可接受的盐的活性化合物的溶液可以在水中与表面活性剂例 如羟基纤维素(hydroxycellulose)适当地混合来制备。分散液还可以 在甘油、液体聚乙二醇及其混合物以及在油中制备。在贮存和使用的 普通条件下，这些制剂包含防腐剂以防止微生物的生长。 与SPARC蛋白偶合的化疗剂(例如，SPARC治疗剂)可以配置成中 性或盐形式的组合物。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与蛋白质的游 离氨基形成)，并且其与无机酸例如，比如盐酸或磷酸，或比如有机酸 如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等形成。与游离羧基形成的盐也可衍 生自无机碱例如，比如，钠、钾、铵、钙或铁氢氧化物，以及有机碱 例如异丙胺、三甲胺、组胺、普鲁卡因等。 该组合物还可以包括特别用于增强组合物的稳定性和/或其最终 用途的任何合适的组分。因此，存在各种本发明组合物的合适制剂。 以下制剂和方法仅仅是示例性的，绝不是限制。 适合通过吸入给药的制剂包括气溶胶制剂。气溶胶制剂可以置于 加压的可接受的推进剂，例如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气等。它们还 可配置成非加压制剂，用于从喷雾器或雾化器递送。 适合胃肠外给药的制剂包括水性或非水性的、等渗无菌的注射 液，其可包含抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和赋予制剂与目的受体的血 液等渗的溶质；以及水性或非水性的无菌的悬浮液，其可包括悬浮剂、 增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。该制剂可以存在于单剂量或多剂 量密封的容器中，例如安瓿和小瓶(vial)，并且可贮存在冷冻干燥(冻 干)条件下，其仅需要添加无菌液体赋形剂，例如水以在使用之前立即 用于注射。即时注射液和悬浮液可以从之前所述种类的无菌粉末、颗 粒和片剂制备。 适合肛门给药的制剂可以通过将和活性成分与各种基质例如乳 化基质或水溶性基质混合来制成栓剂。适合阴道给药的制剂可以呈现 为，阴道栓剂(pessaries)、卫生棉条(tampons)、霜剂、凝胶、糊剂、 泡沫剂、或喷射制剂，其除了活性成分之外，还包含例如本领域已知 的合适的载体。 此外，组合物可以包括其它治疗学上或生物学上的活性剂。例如， 可以存在用于治疗特定适应症的治疗因子。控制炎症的因子，例如异 丁苯丙酸或类固醇可以为组合物的部分以降低与体内给药药物组合物 有关的肿胀和炎症以及生理上的胁迫。 以下实施例进一步描述本发明，但不以任何方式解释为限制其范 围。 实施例1 该实施例证明抗SPARC抗体与SPARC的特异结合。 全细胞提取物通过超声波处理从HUVEC细胞制备。蛋白在s5-15％ SDS-PAGE上分离，转移至PVDF膜上并用针对SPARC的多克隆抗体和针对 SPARC的单克隆抗体可视化。两种抗体都与38kDa(SPARC的正确分子量) 处的单带反应。当MX-1肿瘤细胞系通过相同方法分析时，SPARC在澄清 的细胞裂解物(clarified cell lysate)或富膜级分的膜(membrane rich membrane fraction)中都检测到。 实施例2 该实施例证明SPARC表达在正常组织中的缺失。 将正常人类和小鼠组织免疫染色并且使用肿瘤和正常组织阵列 就SPARC染色记分(0-4)。使用多克隆兔抗-SPARC抗体进行免疫染色。 SPARC不在任何正常组织中表达，除了食道之外。同样地，SPARC不在 任何正常小鼠组织中表达，除了雌性小鼠的肾之外。然而，可能该表 达为由与SPARC相同的卵泡抑素导致。 表1人类正常组织中的SPARC表达 胃 0/8 结肠 0/9 直肠 0/15 肝 0/14 脾 0/10 肺 0/14 肾 1/14 脑 1/14 睾丸 0/8 前列腺 0/3 心脏 0/9 扁桃腺 0/10 淋巴结 0/10 阑尾 0/10 食道 5/5 胰 0/5 眼球 0/5 卵巢 0/5 表2小鼠正常组织中的SPARC表达 肝 0/19 肾(M) 0/8 肾(F) 6/8 肺 0/16 肌肉 0/20 脑 0/20 心脏 0/18 胃 0/20 脾 0/20 实施例3 该实施例描述在MX-1肿瘤细胞中的SPARC表达。 MX-1细胞在盖玻片上培养，并用针对人类SPARC的抗体使用本领域 已知的方法染色。观察染色的抗体，其证明MX-1表达SPARC。这些结果 暗示在MX-1肿瘤细胞中检测到的SPARC表达为通过MX-1肿瘤细胞的 SPARC分泌的结果。对于MX-1肿瘤细胞，比正常原代细胞例如HUVEC(人 脐静脉内皮细胞)，HLMVEC(人肺微血管内皮细胞)，以及HMEC(人 乳腺上皮细胞)染色更加强烈。尽管大多数染色的SPARC为内部SPARC， 表面SPARC的显著水平通过共焦显微镜和不渗透化细胞 (unpermeabilized cell)的染色证明检测到。 实施例4 该实施例证明通过直接结合荧光标记的白蛋白使SPARC与白蛋白 结合来过滤固定的SPARC。 纯化的SPARC固定在PVDF膜上，并与增加浓度的已经被Alexa 488 荧光色素标记的人血清白蛋白/胎牛血清白蛋白(HSA/BSA)反应。结合 被约等价于5％(重量/体积)HSA的血浆浓度的IC50证明(图1)。 具体地使用以下策略： 1)使用来自Millipore(分类号：MSIPS4510)的Sterile MultiScreen(HTS)96孔过滤系统，用30％甲醇将膜孵育5分钟； 2)用Hanks平衡盐溶液(HSBS)洗涤2次； 3)用100μl 5μg/100μl的纯化SPARC的HSBS溶液孵育； 4)在25℃下1小时后，用HSBS冲洗2次； 5)在4℃下用5％牛奶阻断过夜(在1x TBS中的5％脱脂奶粉 (Carnation))； 6)用HSBS洗涤2次； 7)用白蛋白(用1ml 25％HSA注射液，BAXTER，悬浮5mg BSA-Alexa fluor 488(分子探针))； 8)1小时后，用HSBS洗涤3次； 9)使用对于Alexa fluor 488的波长用荧光计读数； 10)特异结合为总结合减去与无SPARC的膜的结合；以及 11)就特异结合对HSA浓度(％)绘图 结果还证明在肿瘤中累积的SPARC可以用作HSA的汇点(sink)。 实施例5 该实施例描述SPARC与白蛋白在MX-1肿瘤异种移植物中的共定位。 紫杉醇白蛋白纳米颗粒(Abraxane，ABX或ABI-007)已经显示在3 期转移性乳腺癌试验中对Taxol(TAX)具有改进的应答率(33％vs.19％， p＜0.0001)(参见，例如，O′Shaμghnessy，SABCS)。最近证明了紫 杉醇(P)的白蛋白介导的跨内皮转运和对于ABX比TAX的紫杉醇增加的 肿瘤内累积(参见，例如，Desai，SABCS 2003)。白蛋白与SPARC结合 (参见，例如，Schnitzer，J.Biol.Chem.，269，6072-82(1994))。 MX-1肿瘤细胞系衍生自人类乳腺癌。将人类MX-1肿瘤异种移植物、 人类原发性乳腺肿瘤组织(n＝141)、和正常人类乳腺组织(n＝115)的系 列冷冻切片免疫染色并就白蛋白、SPARC(使用抗-SPARC抗体)和微囊 蛋白(caveolin)-1记分(0-4)。培养的MX-1细胞还就SPARC免疫染 色。紫杉醇白蛋白纳米颗粒(Abraxane，ABX or ABI-007)和Taxol (TAX)用放射性的紫杉醇(P)(20mg/kg IV)制备，并且用于确定紫杉 醇在无胸腺小鼠的正常组织中的生物分布。 将在MX-1肿瘤中染色的白蛋白与SPARC一起聚焦和共定位(图2)。 微囊蛋白-1染色确认在含白蛋白区域中的血管密度与不含白蛋白区域 无差异。通过MX-1培养细胞的SPARC表达通过具有抗-SPARC抗体的阳性 染色确认。在正常组织(SPARC阴性)中的紫杉醇累积相比对于7/10组 织而言，ABX比TAX(p＜0.004)显著低。46％的人类原发性乳腺肿瘤显示 强烈的SPARC染色(分数＞2)，与正常组织的1％相比(p＜0.0001)。在50 个肿瘤组织的子集中，SPARC表达与阶段、ER状态或PgR状态不相关； 然而，在p53-阴性肿瘤中存在高SPARC表达的趋势。 白蛋白与SPARC的共定位暗示，通过其白蛋白结合活性，SPARC可 以表现为乳腺肿瘤中白蛋白结合的肿瘤内靶。由于ABX中紫杉醇的转运 依赖于白蛋白(参见，例如，Desai SABCS，2003)，这可以解释与TAX 相比ABX的提高的肿瘤累积。正常组织中的ABX累积低于TAX，与在正常 组织中SPARC表达的缺乏一致。就SPARC筛选患者允许鉴定对ABX应答更 高的患者。在这些肿瘤中SPARC的存在允许使用抗-SPARC抗体靶向和 治疗。 实施例6 该实施例描述紫杉醇白蛋白纳米颗粒(ABI-007)的内皮受体 (gp60)-介导的微囊胞吞转运(caveolar transcytosis)。 紫杉醇(P)白蛋白纳米颗粒(Abraxane，ABX或ABI-007)证明在 III期转移性乳腺癌试验中对Taxol上的改进的应答率(33％vs 19％， p＜0.0001)(SABCS，O′Shaughnessy et al，2003)。Taxol(TAX)中 的聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor)俘获血浆中的胶束中的P，降低细胞分 配可获得的紫杉醇(参见，例如，Sparreboom等，Cancer.Res.，59， 1454(1999))。无胸腺小鼠中的已经研究显示，使用ABX比相同剂量的 TAX，肿瘤内紫杉醇浓度高30-40％(SABCS，Desai et al，2003)。白 蛋白通过特定受体(gp60)-介导的微囊胞吞转运来转运穿过内皮细胞 (EC)(参见，例如，John等，Am.J.Physiol.，284，L187(2001))。 假设ABX中的白蛋白结合紫杉醇可以通过gp60转运穿过肿瘤微血管EC， 并且该机制对于ABX比TAX特别起作用。 进行一系列试验来对ABX和TAX评价通过人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)，人肺微血管内皮细胞(HLMVEC)的紫杉醇的结合和转运。荧光 紫杉醇(FP)用作探针，将荧光ABX和TAX与FP一起配制来探测紫杉醇 穿过在体外侵袭设备(transwell apparatus)上生长的EC单层的结合 和转运。 紫杉醇与细胞(HUVEC)的结合对于ABX比TAX高10X。紫杉醇从ABX 穿过EC单层的转运对于HUVEC和HMVEC比TAX分别增强2-3倍和2-4 倍。转运依赖于白蛋白。紫杉醇从ABX的转运被抗-SPARC抗体的存在 抑制，已知抗-SPARC抗体结合gp60(对于微囊白蛋白微囊胞吞转运需 要的受体)。微囊胞吞转运已知的抑制剂，NEM和β-甲基环糊精(BMC)， 也抑制紫杉醇从ABX穿过内皮单层的转运(图3)。微囊转运(caveolar transport)的抑制降低了P从ABX的转运至TAX转运的水平。 这些结果证明来自ABX的紫杉醇通过gp60-介导的微囊胞吞转运主 动地转运穿过EC，而来自TAX的P似乎主要地通过细胞旁路(非微囊的) 机制以2-4倍较低的速率转运。该通路部分负责从ABX相对于TAX看出的 紫杉醇增加的肿瘤内浓度。TAX中的聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor)抑制 紫杉醇穿过内皮细胞的胞吞转运。 实施例7 该实施例描述标记的白蛋白内在化进入MX-1肿瘤细胞，并且与细 胞内SPARC表达一起在MX-1细胞内共定位。 MX-1细胞在盖玻片上培养并且用合适的试剂渗透。将细胞暴露到 荧光白蛋白，洗涤后暴露到SPARC抗体。然后暴露到具有与白蛋白不同 荧光标记的第二抗体。令人惊奇地观察到标记的白蛋白随着细胞内 SPARC的存在而共同定位(colocalised)，指示白蛋白快速地内在化并 且靶向细胞内SPARC。 实施例8 该实施例证明与Taxol相比，包含紫杉醇和白蛋白的药物组合物通 过gp60(白蛋白受体)的内皮胞吞转运上的增加。 人肺微血管内皮细胞(HLMVEC)生长至在侵袭设备(transwell) 上铺满(confluence)。将包含紫杉醇和白蛋白的本发明的药物组合物， 或以20μg/mL的浓度包含荧光紫杉醇(Flutax)的Taxol，添加至上部 体外侵袭小室(transwell chamber)。 紫杉醇通过胞吞转运从上部小室至下部小室的转运使用荧光计连 续地监视。还使用仅包含Flutax没有白蛋白的对照。具有Flutax的对 照不显示转运，确认了铺满HLMVEC单层的完整性。在5％HSA(生理浓 度)存在下，紫杉醇从白蛋白-紫杉醇组合物的转运比紫杉醇从Taxol 快得多。对于白蛋白-紫杉醇组合物和Taxol的转运速率常数(Kt)分 别为1.396h-1和0.03h-1。转运穿过单层的紫杉醇的总量对于白蛋白 -紫杉醇组合物比Taxol高3倍。这样，使用白蛋白和其它合适的模拟物 (包括针对gp60受体或其它内皮细胞受体的抗体或片段)，可以有助于 所期望的治疗剂穿过内皮屏障进入肿瘤间质的转运。 实施例9 该实施例描述SPARC蛋白在人类乳腺癌细胞中的过度表达。 在人类乳腺癌细胞中的SPARC表达使用来自Cybrdi，Inc. (Gaithersburg，MD)的肿瘤阵列确定。该分析的结果示于表1。将染 色的强度从″阴性″至4+记分，更高的数值对应于更高强度的过度表达。 49％的乳腺癌对于SPARC染色阳性(2+和之上)，而正常组织为1％ (p＜0.0001)。 表3乳腺癌中的SPARC表达 实施例10 该实施例使用纳米颗粒白蛋白结合紫杉醇(ABI-007)证明在具 有高应答率的鳞状细胞头和颈癌中的SPARC过度表达。 在患有头和颈(H&N)以及肛管的鳞状细胞癌(SCC)的患者的I和II 期临床研究中，就动脉内递送的纳米颗粒白蛋白结合紫杉醇 (ABX或ABI-007)，分别观察到78％和64％的应答率(参见， 例如，Damascelli等，Cancer，92(10)，2592-2602(2001)，和 Damascelli等，AJR，181，253-260(2003))。在比较ABX和Taxol (TAX)的体外细胞毒性时，我们观察到鳞状子宫颈(A431)系证明对于 ABX(0.004(μg/ml)比TAX(0.012μg/ml)的改进的IC50。近期 证明了紫杉醇(P)的白蛋白介导的跨内皮微囊转运以及对于ABX比TAX 增加的P的肿瘤内累积(参见，例如，Desai，SABCS 2003)。 使用肿瘤和正常组织阵列将人类H&N肿瘤组织(n＝119)和正常人 类H&N组织(n＝15)免疫染色并且就SPARC染色记分(0-4+)。使用多克隆 兔抗-SPARC抗体进行免疫染色。在新的I期剂量递增研究中(ABX given IV over 30 minutes q3w)，就对ABX的应答分析头和颈癌患者 的子集(n＝3)。 SPARC在60％(72/119)的H&N肿瘤对0％(0/15)的正常组织 (p＜0.0001)中过度表达(p＜0.0001)。在I期研究中，2/3H&N患者在 以135mg/m2(1pt)和225mg/m2(1pt)的剂量水平治疗2周期后实 现部分应答(PR)。在260mg/m2三分之一的患者取得进展。 发现SPARC在60％的鳞状细胞H&N肿瘤中过度表达。这可以解释之 前在鳞状细胞H&N癌中看到的由于白蛋白结合紫杉醇与在这些肿瘤中 表达的SPARC的结合导致的ABX的高单试剂活性。2/3患有鳞状细胞H&N 肿瘤的患者在新的I期研究中实现PR。使用肿瘤和正常组织阵列将人类 H&N肿瘤组织(n＝119)和正常人类H&N组织(n＝15)免疫染色并且就 SPARC染色记分(0-4+)。使用多克隆兔抗-SPARC抗体进行免疫染色。 SPARC在60％(72/119)的H&N肿瘤(记分＞2+)对0％(0/15)的正常组织 中过度表达(p＜0.0001)。这可以解释之前在鳞状细胞H&N癌中看到的由 于白蛋白结合紫杉醇与在这些肿瘤中表达的SPARC的结合导致的ABX的 高单试剂活性。 在新的I期剂量递增研究中(ABX given IV over 30minutes q3w)， 就对ABX的应答分析头和颈癌患者的子集(n＝3)。在I期研究中，2/3H&N 患者在以135mg/m2(1pt)和225mg/m2(1pt)的剂量水平治疗2周 期后实现部分应答(PR)。在260mg/m2三分之一的患者取得进展。将来 自这些患者的肿瘤组织就SPARC染色，并且应答患者中的1个显示对于 SPARC的强过度表达。 实施例11 该实施例使用纳米颗粒白蛋白结合紫杉醇(ABI-007)在鳞状头 和颈癌中证明SPARC过度表达与高应答率的相关性。 在用动脉内ABX治疗的具有头和颈的鳞状细胞癌的54名患者的另 一II期临床研究中，注意到78％的总应答率。就SPARC表达以及与临床 应答的相关性评价来自接受动脉内ABX的该研究中的16名患者的癌症 活组织检查。使用抗-SPARC多克隆抗体(R&D Systems，Minneapolis， MN，USA)的染色在0-4等级上记分(0＝无染色，4+＝强阳性)。阳性 SPARC表达鉴定为＞2+染色，阴性SPARC表达鉴定为＜2+染色。ABX-应 答者比无应答者(2/5，40％)显示更高发生率的SPARC表达(10/11， 91％)(p＝0.06.)。ABX-应答对于SPARC-阳性患者(10/12＝83％)比 SPARC-阴性患者(1/4＝25％)显著更高(p＝0.06)。此外，SPARC-阴性 患者显示比在研究(包括用ABX或其它化疗剂治疗的患者)中的总应答 率显著低的应答率(1/4，25％vs.42/54，78％；p＜0.05))。 实施例12 该实施例证明表达SPARC的肿瘤细胞比不表达SPARC的肿瘤细胞 对更敏感。 将具有驱动SPARC表达的CMV启动子的表达载体转染入PC3细胞。 具有高SPARC表达的稳定的整合体通过G418(在500μg/ml的培养基) 选择。这些克隆之一，HN104，通过RT-PCR和通过Western印迹显示高 的SPARC表达。使该克隆生长于无胸腺裸小鼠作为异种移植物。将HN104 对的生长和应答(图4中的″ABX″)与亲本细胞系PC3对 的生长和应答比较。当肿瘤以15mg/kg每天的剂量水平5天 达到100mm3时，给药 HN104显示比亲本PC3异种移植物更长的滞后期。当滞后期结束 时，生长是类似的，因为当将HN104向左移动2周时(图4)，PC3和 HN104的肿瘤曲线是类似的。如图4所示(图4描述了在转染细胞中通过 将HN104曲线向左移动20天就SPARC-诱导的滞后期调整的肿瘤体积)， 过度表达SPARC的细胞系比亲本细胞系显示对的更高敏感 性。对于肿瘤体积100-800mm3，在治疗对未治疗的中分离相同大小肿 瘤体积的平均天数对于PC3为25天，对于HN104为36天。这样，SPARC 使前列腺癌细胞对敏感。 实施例13 为了进一步探究敏化SPARC活性的化疗，使用无胸腺小鼠 (athymic mouse)肿瘤异种移植物系统来评价HT 29人结肠癌细胞对5- 氟尿嘧啶(″5-FU″)的敏感性。 将癌细胞同时地两侧地移植到无胸腺小鼠中。将该小鼠用生理盐 水或25mg/kg的5-FU(参见表4)治疗。这些接受SPARC的动物用野 生型多肽(SEQ ID NO：1)以4mg/kg，6mg/kg或8mg/kg(参见表4) 的剂量治疗。监视所述动物的存活率和异种移植物生长作为功效的测 定，以及体重变化作为毒性的测定。结果总结于下表。 表4 5-FU单独和与BIO1组合在裸鼠中的s.c.人HT29结肠癌异种 移植物模式中的抗-肿瘤活性 a5-FU，IP：Q2Dx3/2周(2周期)；BIO1，IP；Q3Dx2/6周 bTGI，肿瘤生长抑制 c治疗后25天 [0102]图5显示对于用野生型SPARC(″BIO1″)和其对照治疗 的动物组的肿瘤体积曲线。野生型SPARC在所用的任何SPARC浓度下都 不能使癌细胞对5-FU敏感。 [0103]该实施例证明SPARC不是通用的敏化剂，并且其敏化活 性可能依赖于癌细胞的生物和/或所给药的治疗。 实施例14 体外血管发生检验(TSC CellWorks Angiokit)用于评估SPARC的 血管发生活性，其令人惊奇地显示SPARC的血管发生活性为浓度依赖性 的。 在该系统中，将人脐静脉内皮细胞(″HUVEC″)与其它人类细胞(成 纤维细胞)在胶原基质中共培养。HUVEC最初形成在培养基质中的小岛。 HUVEC分化、增殖和进入迁移期(migratory phase)，期间它们运动通 过基质并且形成线状管形结构(9-11天)。这些逐渐地接合(join up) 并且形成类似毛细血管床的网络。 在三维基质上生长的HUVEC细胞用各种浓度的野生型SPARC多肽 (SEQ ID NO：1)或Q3突变体SPARC多肽(SEQ ID NO：3)治疗。培养 12天后使用用于CD31的免疫染色使毛细微管可视化。图6描述SPARC对 新血管生成的浓度依赖效应，显示在不存在SPARC(0μg/ml)、10μ g/ml的野生型或Q3 SPARC、以及100μg/ml的野生型或Q3 SPARC下 毛细微管密度的特性实例。 令人惊奇地是，10μg/ml的SPARC是促血管生成的，而100μ g/ml的SPARC抑制血管生成。 实施例15 该实施例证明在肿瘤异种移植物模型中组合SPARC、公认的血管生 成抑制剂和的协同效应。 考虑到在实施例14中存在的令人惊奇的发现，即存在的SPARC的血 管生成活性为浓度依赖性的。申请人假定在较低浓度下SPARC的抗癌活 性可以被其强的促血管生成活性遮蔽。为了测试此，研究了添加血管 生成抑制剂至SPARC加的方案的效应。 人类乳腺癌(图7和8)和结肠癌细胞(图9和10)在无胸腺裸鼠中生 长作为如在实施例12和13中的异种移植物。在各治疗组中有5只小 鼠。当它们达到200mm3时治疗肿瘤。小鼠用以下治疗：生理盐水，作 为阴性对照；SPARC(150μg/kg 2x/周)，单独；血管生成抑制剂阿 瓦斯丁(4mg/kg两次每周)，单独；(15mg/kg每4天三 次治疗)，单独；SPARC和或SPARC，阿瓦斯丁和 评价野生型和(″BIO1″)和Q3突变体SPARC(″BIO2″)二 者。监视所述动物的存活和异种移植物生长作为功效的测定，以及体 重变化作为毒性的测定。结果总结于下表，显示肿瘤的百分比抑制率 超过了由单独引起的抑制率。 表5相对于单独Abraxane的肿瘤生长抑制(TGI) 阿瓦斯 丁 BIO1+ Abraxane BIO2+ Abraxane BIO1+ Abraxane+ 阿瓦斯丁 BIO2+ Abraxane+阿 瓦斯丁 乳腺癌 (MDA-MB-231) 16％ 82％ 69％ 92％ 86％ 结肠癌(HT29) ＜0％ 39％ 9％ 76％ 33％ 对于野生型SPARC和乳腺癌细胞，单一试剂治疗不比生理盐水对 照治疗好。如图8显示SPARC或SPARC和阿瓦斯丁的添加与研究的其它武 器相比在肿瘤生长上产生显著的降低。图9显示Q3突变体SPARC给出类 似的但是减弱的(blunted)结果。 对于野生型SPARC和结肠癌细胞，使用SPARC或阿瓦斯丁的单一 试剂治疗不比生理盐水对照治疗好。使用的单一试剂治疗比 对照导致肿瘤生长上的显著改进。如图10还显示SPARC或SPARC和阿瓦 斯丁的添加与单独相比，产生肿瘤生长上的进一步降低。然 而，图10显示Q3突变体SPARC不能使肿瘤生长降低到超出使用 所实现的，并且阿瓦斯丁和Q3 SPARC的添加仅导致在控制肿 瘤生长上的温和改进。基于体重的变化，没有方案比任何其它方案显 著地更有毒性。 在另一系统，索坦(Sutent)中，另一血管生成抑制剂产生相同的 结果。再次，5只无胸腺小鼠各自同时地用人乳腺癌细胞注射。当肿瘤 生长至100mm3时，开始治疗。治疗由索坦或索坦与野生型SPARC (″BIO1″)一起组成，结果示于表5(显示肿瘤生长的百分比抑制在由 单独引起的之下)和图11。 表6相对于Abraxane单独的肿瘤生长抑制(TGI) Abraxane+索坦 Abraxane+索坦+BIO1 MDA-MB-231 0％ 76％ 如阿瓦斯丁一样，使用作为血管生成抑制剂的索坦、SPARC和 的组合似乎具有协同效应。 本文引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利，在此 通过参考至似乎各参考文献单独地和特异指出通过参考引入以及此处 陈述其全部内容的程度将其引入。 本发明所述的上下文(特别是以下权利要求的上下文中)中术语 ″a″和″an″和″the″和类似的指示应该解释为包括所有的单数和复 数，除非本文指出或根据上下文清楚地矛盾。术语″包括 (comprising)″、″具有″、″包括(including)″和″包含″应该解释 为开放式术语(即表示″包括但不限于″)，除非另外注释。本文数值范 围的列举仅旨在用作提及落入该范围的各分别值的速记方法，除非本 文另外指出，将各分别值引入说明书如同其在本文单独地被引用。本 文所述的所有方法可以以任何合适的顺序进行，除非本文另外指出或 根据上下文清楚地矛盾。本文提供的任何和所有实施例，或例举性语 言(例如，″例如″)的使用，仅旨在更好的描述本发明，不对本发明的 范围造成限制，除非另外要求。在说明书中没有语言应该解释为指示 任何未要求的要素对实施本发明是必须的。 本发明的优选实施方式在本文中描述，包括发明人已知的对实施 本发明的最佳模式。当阅读前述说明书时，这些优选实施方式的变体 对本领域技术人员可以变得明显。发明人预期熟练的技术人员合适地 使用此类变体，并且发明人打算实施除本文具体所述之外的本发明。 因此，本发明包括适用法律所允许的附属权利要求所引用主题的所有 改进和等效物。此外，在所有可能变体中的上述要素的任何组合被本 发明包括，除非本文另外指出或根据上下文清楚地矛盾。 相关申请的交叉引用 本专利申请要求2007年4月17日提交的美国临时专利申请NO. 60/923,340的权益，将其全文引入以作参考。 序列表 <110>ABRAXIS BIOSCIENCE，INC. Trieu，Vuong Desai，Neil P. <120>SPARC及其使用方法 <130>702783 <150>US 60/923,340 <151>2007-04-13 <160>4 <170>PatentIn version 3.4 <210>1 <211>286 <212>PRT <213>智人(Homo sapiens) <400>1 Ala Pro Gln Gln Glu Ala Leu Pro Asp Glu Thr Glu Val Val Glu Glu 1 5 10 15 Thr Val Ala Glu Val Thr Glu Val Ser Val Gly Ala Asn Pro Val Gln 20 25 30 Val Glu Val Gly Glu Phe Asp Asp Gly Ala Glu Glu Thr Glu Glu Glu 35 40 45 Val Val Ala Glu Asn Pro Cys Gln Asn His His Cys Lys His Gly Lys 50 55 60 Val Cys Glu Leu Asp Glu Asn Asn Thr Pro Met Cys Val Cys Gln Asp 65 70 75 80 Pro Thr Ser Cys Pro Ala Pro Ile Gly Glu Phe Glu Lys Val Cys Ser 85 90 95 Asn Asp Asn Lys Thr Phe Asp Ser Ser Cys His Phe Phe Ala Thr Lys 100 105 110 Cys Thr Leu Glu Gly Thr Lys Lys Gly His Lys Leu His Leu Asp Tyr 115 120 125 Ile Gly Pro Cys Lys Tyr Ile Pro Pro Cys Leu Asp Ser Glu Leu Thr 130 135 140 Glu Phe Pro Leu Arg Met Arg Asp Trp Leu Lys Asn Val Leu Val Thr 145 150 155 160 Leu Tyr Glu Arg Asp Glu Asp Asn Asn Leu Leu Thr Glu Lys Gln Lys 165 170 175 Leu Arg Val Lys Lys Ile His Glu Asn Glu Lys Arg Leu Glu Ala Gly 180 185 190 Asp His Pro Val Glu Leu Leu Ala Arg Asp Phe Glu Lys Asn Tyr Asn 195 200 205 Met Tyr Ile Phe Pro Val His Trp Gln Phe Gly Gln Leu Asp Gln His 210 215 220 Pro Ile Asp Gly Tyr Leu Ser His Thr Glu Leu Ala Pro Leu Arg Ala 225 230 235 240 Pro Leu Ile Pro Met Glu His Cys Thr Thr Arg Phe Phe Glu Thr Cys 245 250 255 Asp Leu Asp Asn Asp Lys Tyr Ile Ala Leu Asp Glu Trp Ala Gly Cys 260 265 270 Phe Gly Ile Lys Gln Lys Asp Ile Asp Lys Asp Leu Val Ile 275 280 285 <210>2 <211>3178 <212>DNA <213>智人(Homo sapiens) <400>2 gttgcctgtc tctaaacccc tccacattcc cgcggtcctt cagactgccc ggagagcgcg 60 ctctgcctgc cgcctgcctg cctgccactg agggttccca gcaccatgag ggcctggatc 120 ttctttctcc tttgcctggc cgggagggcc ttggcagccc ctcagcaaga agccctgcct 180 gatgagacag aggtggtgga agaaactgtg gcagaggtga ctgaggtatc tgtgggagct 240 aatcctgtcc aggtggaagt aggagaattt gatgatggtg cagaggaaac cgaagaggag 300 gtggtggcgg aaaatccctg ccagaaccac cactgcaaac acggcaaggt gtgcgagctg 360 gatgagaaca acacccccat gtgcgtgtgc caggacccca ccagctgccc agcccccatt 420 ggcgagtttg agaaggtgtg cagcaatgac aacaagacct tcgactcttc ctgccacttc 480 tttgccacaa agtgcaccct ggagggcacc aagaagggcc acaagctcca cctggactac 540 atcgggcctt gcaaatacat ccccccttgc ctggactctg agctgaccga attccccctg 600 cgcatgcggg actggctcaa gaacgtcctg gtcaccctgt atgagaggga tgaggacaac 660 aaccttctga ctgagaagca gaagctgcgg gtgaagaaga tccatgagaa tgagaagcgc 720 ctggaggcag gagaccaccc cgtggagctg ctggcccggg acttcgagaa gaactataac 780 atgtacatct tccctgtaca ctggcagttc ggccagctgg accagcaccc cattgacggg 840 tacctctccc acaccgagct ggctccactg cgtgctcccc tcatccccat ggagcattgc 900 accacccgct ttttcgagac ctgtgacctg gacaatgaca agtacatcgc cctggatgag 960 tgggccggct gcttcggcat caagcagaag gatatcgaca aggatcttgt gatctaaatc 1020 cactccttcc acagtaccgg attctctctt taaccctccc cttcgtgttt cccccaatgt 1080 ttaaaatgtt tggatggttt gttgttctgc ctggagacaa ggtgctaaca tagatttaag 1140 tgaatacatt aacggtgcta aaaatgaaaa ttctaaccca agacatgaca ttcttagctg 1200 taacttaact attaaggcct tttccacacg cattaatagt cccatttttc tcttgccatt 1260 tgtagctttg cccattgtct tattggcaca tgggtggaca cggatctgct gggctctgcc 1320 ttaaacacac attgcagctt caacttttct ctttagtgtt ctgtttgaaa ctaatactta 1380 ccgagtcaga ctttgtgttc atttcatttc agggtcttgg ctgcctgtgg gcttccccag 1440 gtggcctgga ggtgggcaaa gggaagtaac agacacacga tgttgtcaag gatggttttg 1500 ggactagagg ctcagtggtg ggagagatcc ctgcagaacc caccaaccag aacgtggttt 1560 gcctgaggct gtaactgaga gaaagattct ggggctgtgt tatgaaaata tagacattct 1620 cacataagcc cagttcatca ccatttcctc ctttaccttt cagtgcagtt tcttttcaca 1680 ttaggctgtt ggttcaaact tttgggagca cggactgtca gttctctggg aagtggtcag 1740 cgcatcctgc agggcttctc ctcctctgtc ttttggagaa ccagggctct tctcaggggc 1800 tctagggact gccaggctgt ttcagccagg aaggccaaaa tcaagagtga gatgtagaaa 1860 gttgtaaaat agaaaaagtg gagttggtga atcggttgtt ctttcctcac atttggatga 1920 ttgtcataag gtttttagca tgttcctcct tttcttcacc ctcccctttt ttcttctatt 1980 aatcaagaga aacttcaaag ttaatgggat ggtcggatct cacaggctga gaactcgttc 2040 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cacagaaagt tctattggac agtgctcttc tagatcatca taagactaca gagcactttt 2940 caaagctcat gcatgttcat catgttagtg tcgtattttg agctggggtt ttgagactcc 3000 ccttagagat agagaaacag acccaagaaa tgtgctcaat tgcaatgggc cacataccta 3060 gatctccaga tgtcatttcc cctctcttat tttaagttat gttaagatta ctaaaacaat 3120 aaaagctcct aaaaaatcaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa 3178 <210>3 <211>285 <212>PRT <213>智人(Homo sapiens) <400>3 Ala Pro Gln Glu Ala Leu Pro Asp Glu Thr Glu Val Val Glu Glu Thr 1 5 10 15 Val Ala Glu Val Thr Glu Val Ser Val Gly Ala Asn Pro Val Gln Val 20 25 30 Glu Val Gly Glu Phe Asp Asp Gly Ala Glu Glu Thr Glu Glu Glu Val 35 40 45 Val Ala Glu Asn Pro Cys Gln Asn His His Cys Lys His Gly Lys Val 50 55 60 Cys Glu Leu Asp Glu Asn Asn Thr Pro Met Cys Val Cys Gln Asp Pro 65 70 75 80 Thr Ser Cys Pro Ala Pro Ile Gly Glu Phe Glu Lys Val Cys Ser Asn 85 90 95 Asp Asn Lys Thr Phe Asp Ser Ser Cys His Phe Phe Ala Thr Lys Cys 100 105 110 Thr Leu Glu Gly Thr Lys Lys Gly His Lys Leu His Leu Asp Tyr Ile 115 120 125 Gly Pro Cys Lys Tyr Ile Pro Pro Cys Leu Asp Ser Glu Leu Thr Glu 130 135 140 Phe Pro Leu Arg Met Arg Asp Trp Leu Lys Asn Val Leu Val Thr Leu 145 150 155 160 Tyr Glu Arg Asp Glu Asp Asn Asn Leu Leu Thr Glu Lys Gln Lys Leu 165 170 175 Arg Val Lys Lys Ile His Glu Asn Glu Lys Arg Leu Glu Ala Gly Asp 180 185 190 His Pro Val Glu Leu Leu Ala Arg Asp Phe Glu Lys Asn Tyr Asn Met 195 200 205 Tyr Ile Phe Pro Val His Trp Gln Phe Gly Gln Leu Asp Gln His Pro 210 215 220 Ile Asp Gly Tyr Leu Ser His Thr Glu Leu Ala Pro Leu Arg Ala Pro 225 230 235 240 Leu Ile Pro Met Glu His Cys Thr Thr Arg Phe Phe Glu Thr Cys Asp 245 250 255 Leu Asp Asn Asp Lys Tyr Ile Ala Leu Asp Glu Trp Ala Gly Cys Phe 260 265 270 Gly Ile Lys Gln Lys Asp Ile Asp Lys Asp Leu Val Ile 275 280 285 <210>4 <211>2956 <212>DNA <213>智人(Homo sapiens) <400>4 ctccacattc ccgcggtcct tcagactgcc cggagagcgc gctctgcctg ccgcctgcct 60 gcctgccact gagggttccc agcaccatga gggcctggat cttctttctc ctttgcctgg 120 ccgggagggc cttggcagcc cctcaagaag ccctgcctga 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