[0001] 本实用新型涉及黑色素瘤基因检测技术领域，具体为一种黑色素瘤基因表达检测试剂盒。

[0002] 黑色素瘤是一种恶性肿瘤，由黑色素细胞恶化形成，是恶性肿瘤中增长速度最快的肿瘤之一。目前，黑色素瘤相关基因表达的检测方法主要是通过RNAseq的方法，该方法受限于高通量测序平台，周期较长成本较高，且是在全基因转录组组水平分析基因表达情况，不能特异性针对黑色素瘤相关基因(NFE2L2，HMOX1，CEP290，TP53，GPX4，TOMM20，EZH2，SLC1A5，GLS2，GOT1，BRAF)的表达。实用新型内容

[0003] 本实用新型的目的在于提供一种黑色素瘤基因表达检测试剂盒，可特异性检测与黑色素瘤相关的11个基因(NFE2L2，HMOX1，CEP290，TP53，GPX4，TOMM20，EZH2，SLC1A5，GLS2，GOT1，BRAF)的表达情况。

[0004] 为实现上述目的，本实用新型提供如下技术方案：一种黑色素瘤基因表达检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内放置有：装有NFE2L2引物与探针混合液的第一试管；装有HMOX1引物与探针混合液的第二试管；装有CEP290引物与探针混合液的第三试管；装有TP53引物与探针混合液的第四试管；装有GPX4引物与探针混合液的第五试管；装有TOMM20引物与探针混合液的第六试管；装有EZH2引物与探针混合液的第七试管；装有SLC1A5引物与探针混合液的第八试管；装有GLS2引物与探针混合液的第九试管；装有GOT1引物与探针混合液的第十试管；装有BRAF引物与探针混合液的第十一试管；装有GAPDH引物与探针混合液的第十二试管；装有β‑actin引物与探针混合液的第十三试管；装有GUSB引物与探针混合液的第十四试管；装有ABL1引物与探针混合液的第十五试管；装有2×Probe Master Mix的第十六试管；装有50×ROX Reference Dye1的第十七试管；装有50×ROX Reference Dye2的第十八试管。

[0005] 优选的，所述盒体包括盒身和盒盖，盒身和盒盖均为透明塑料材质，盒身的上表面向内部凹陷形成容置槽，盒盖的一边铰接在容置槽上端一侧边缘处，盒盖的另一边与容置槽的对侧上端边缘通过卡扣扣合。

[0006] 优选的，所述盒身内部填充有橡胶垫，在橡胶垫上开设有18个放置槽，分别用于放置第一试管至第十八试管。

[0007] 优选的，所述盒身的侧壁和底壁、以及盒盖的内部均为中空。

[0008] 优选的，在放置槽的槽壁上自放置槽的上端至其下端开设有导流槽，所述放置槽的底部设有漏斗状的集液槽，导流槽的底部连通至集液槽，在橡胶垫的下表面对应每个放置槽的位置均设有观察槽，观察槽与盒身的底壁围成密闭的观察腔，集液槽的底部与观察腔之间开设有通道。

[0009] 优选的，所述观察腔的底部固定有水分检测试纸。

[0010] 优选的，所述集液槽的底部设有弹性体，所述盒盖的内侧壁上设有密封体。

[0011] 与现有技术相比，本实用新型的有益效果如下：

[0012] 本试剂盒使用Taqman探针进行荧光定量检测，可同时检测11个与黑色素瘤相关的基因(NFE2L2，HMOX1，CEP290，TP53，GPX4，TOMM20，EZH2，SLC1A5，GLS2，GOT1，BRAF)和4个内参基因(GAPDH，β‑actin，GUSB，ABL1)，扩大了检测范围，可同时及检测多种相关基因的表达，并且在一定程度降低检测成本。

[0016] 下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。

[0017] 本试剂盒采用TaqMan荧光定量的方法可特异性检测与黑色素瘤相关的11个基因(NFE2L2，HMOX1，CEP290，TP53，GPX4，TOMM20，EZH2，SLC1A5，GLS2，GOT1，BRAF)和4个内参基因(GAPDH，β‑actin，GUSB，ABL1)的表达情况。

[0018] 请参阅图1至图2，本实用新型提供一种技术方案：一种黑色素瘤基因表达检测试剂盒，包括盒体，在盒体内放置有：装有NFE2L2引物与探针混合液的第一试管1；装有HMOX1引物与探针混合液的第二试管2；装有CEP290引物与探针混合液的第三试管3；装有TP53引物与探针混合液的第四试管4；装有GPX4引物与探针混合液的第五试管5；装有TOMM20引物与探针混合液的第六试管6；装有EZH2引物与探针混合液的第七试管7；装有SLC1A5引物与探针混合液的第八试管8；装有GLS2引物与探针混合液的第九试管9；装有GOT1引物与探针混合液的第十试管10；装有BRAF引物与探针混合液的第十一试管11；装有GAPDH引物与探针混合液的第十二试管12；装有β‑actin引物与探针混合液的第十三试管13；装有GUSB引物与探针混合液的第十四试管14；装有ABL1引物与探针混合液的第十五试管15；装有2×Probe Master Mix的第十六试管16；装有50×ROX Reference Dye1的第十七试管17；装有50×ROX Reference Dye2的第十八试管18。

[0019] 本试剂盒采用荧光RT‑PCR技术以与黑色素瘤相关的11个基因和4个内参基因为靶位点设计特异性引物和探针，每条检测探针的3’端标记淬灭基团，5’端标记报告基团，在RT‑PCR扩增过程中，当探针完整时，由于淬灭基团靠近报告基团，报告基团发出来的荧光被淬灭基团吸收，不发出荧光信号，当引物延伸时，与模板结合的荧光探针被Taq酶切断，报告基团与淬灭基团分离，产生荧光信号。

[0020] 该盒体包括盒身19和盒盖20，盒身19和盒盖20均为透明塑料材质，如PVC材质，盒身19的上表面向内部凹陷形成容置槽，盒盖20的一边铰接在容置槽上端一侧边缘处，盒盖20的另一边与容置槽的对侧上端边缘通过卡扣21扣合，在盒身19内部填充有橡胶垫22，在橡胶垫22上开设有多个放置槽24，本申请中为18个，用于放置试管，为了增强保温效果，盒身19的侧壁和底壁、以及盒盖20的内部均为中空。

[0021] 为了便于观察盒体内试管的保存情况，判断是否存在漏液的试管，在放置槽24的槽壁上自放置槽24的上端至其下端开设有导流槽25，所述放置槽24的底部设有漏斗状的集液槽27，导流槽25的底部连通至集液槽27，在橡胶垫22的下表面对应每个放置槽24的位置均设有观察槽，观察槽与盒身19的底壁围成密闭的观察腔29，集液槽27的底部与观察腔29之间开设有通道28，若试管存在漏液的情况，漏出的液体能够沿着导流槽25流至集液槽27内，接着从通道28处进入观察腔29，由于盒身19采用的是透明塑料材质，所以可以直接从盒身19的底壁处查看各观察腔29内是否有漏液，以此判断各试管是否保存完整。

[0022] 为了进一步便于观察漏液情况，在观察腔29的底部固定有水分检测试纸30，所述水分检测试纸30采用能够遇水溶液显色的试纸，如ph试纸、氯化亚钴试纸等，通过水分检测试纸30的颜色状态能够更加直观的查看试管是否漏液。

[0023] 为了能够保护试管，防止其发生破裂，或者因放置不牢固等情况导致漏液，在集液槽27的底部设有弹性体26，如弹簧，盒盖20的内侧壁上设有密封体23，如橡胶块，当试管放入放置槽24内时，试管的下端被弹性体26支撑，使试管的上端稍微高于放置槽24的上端面，便于拿取试管，当盒盖20合盖后，密封体23下压，将试管向下压入放置槽24，通过弹性体26与密封体23对试管进行固定，使其放置更加稳固，同时，密封体23与橡胶垫22的上端面紧密贴合，对各放置槽24的上端开口进行密封，防止漏液窜至其他放置槽24。

[0024] 尽管已经示出和描述了本实用新型的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本实用新型的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本实用新型的范围由所附权利要求及其等同物限定。