技术领域
[0001] 本实用新型属于生物检测领域，尤其涉及一种迟缓爱德华氏菌检测试剂盒。
相关背景技术
[0002] 迟缓爱德华氏菌是一种革兰氏阴性短杆菌，属于肠杆菌科，爱德华氏菌属，宿主范围亦十分广泛，可感染鱼类、两栖类、爬行类，以及包括人类在内的哺乳动物等。该菌普遍存在于淡水和海水环境中，经水传播是迟缓爱德华氏菌的一个重要传播途径，水体环境的恶化容易导致该病的爆发。鱼类是迟缓爱德华氏菌最常见的宿主，可感染包括牙鲆、大菱鲆、鳗鲡、鲤鱼、罗非鱼等在内的20多种海水和淡水鱼类，导致出现体表浓疡、皮肤溃烂、腹腔胀气、腹水、肝脏囊肿等症状，对养殖经济鱼类危害巨大。目前，对于迟缓爱德华氏菌的鉴定仍以常规的病原生物学手段结合生理生化分析等为主，该类方法耗时、费力，常常延误疫病的最佳防控时间，远不能满足实际生产的需要。因此，建立快速、准确、灵敏的检测迟缓爱德华氏菌的新方法，对于疾病的早期诊断和预警、实时监测，及时治疗具有重要的意义。实用新型内容
[0003] 本实用新型所要解决的技术问题是提供一种检测速度快，检测成本低，检测灵敏度和准确性高的迟缓爱德华氏菌检测试剂盒。
[0004] 为实现上述目的，本实用新型采用的技术方案为：一种迟缓爱德华氏菌检测试剂盒，包括盒体，盒盖，内衬，其特征在于，内衬中盛放荧光PCR缓冲液，引物组，Bst DNA聚合酶大片段，探针，LFD试纸条，阳性对照质控品，阴性对照质控品以及产品使用说明书；
[0005] 所述的内衬与盒体可拆卸组装在一起，内衬底部与盒体底部设有空隙，用以放置产品使用方法手册；
[0006] 所述的内衬内设容器盛放槽，盛放着上述试剂品；
[0007] 所述的荧光PCR缓冲液是buffer、dNTP、SYBR green I、硫酸铵、硫酸镁、水的混合物；
[0008] 所述的引物组包括：
[0009] 正向外引物F3：5’-GACTTCGTCGGGATAGTTGTGACCACG-3’；
[0010] 反向外引物B3：5’-CCGTTGAGGCGCTTCCGATAGCTGTTCCG-3’；
[0011] 正向内引物FIP：5’-AAGTTGAATTCAGAGTTGAGGTCTGCTTGGAAGTCCGTTCCG-3’；
[0012] 反向内引物BIP：5’-TTCGGGAAGTAGCAACTGAATTGAGGAGCTTGCAGTTGCATTACT-3’；
[0013] 所述的阴性对照质控品为双蒸水；
[0014] 所述的探针为：5’-GGCTTAGTTGATTCGCGGTTACGGCTGAATTGG-3’。
[0015] 与现有技术相比，本实用新型的有益效果为：本实用新型提供的试剂盒检测时间短，扩增反应只需25min，从样品基因组DNA的提取到完成结果判断，整个检测流程仅需70min；本实用新型提供的试剂盒操作简单，结果明显，整个检测过程不涉及复杂仪器和设备，稍具分子生物学基础的人员即可完成操作；检测结果清晰明显，肉眼观察即可判断。
具体实施方式
[0017] 下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型其中一个实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。
[0018] 如图1所示，一种迟缓爱德华氏菌检测试剂盒，包括盒体1，盒盖2，内衬3，其特征在于，内衬中盛放荧光PCR缓冲液4，引物组5，Bst DNA聚合酶大片段6，探针7，LFD试纸条8，阳性对照质控品9，阴性对照质控品10以及产品使用说明书11；
[0019] 所述的内衬3与盒体2可拆卸组装在一起，内衬3底部与盒体2底部设有空隙，用以放置产品使用方法手册；
[0020] 所述的内衬3内设容器盛放槽，盛放着上述试剂品；
[0021] 所述的荧光PCR缓冲液4是buffer、dNTP、SYBR green I、硫酸铵、硫酸镁、水的混合物；
[0022] 所述的引物组5包括：
[0023] 正向外引物F3：5’-GACTTCGTCGGGATAGTTGTGACCACG-3’(SEQ ID NO:1)；
[0024] 反向外引物B3：5’-CCGTTGAGGCGCTTCCGATAGCTGTTCCG-3’(SEQ ID NO:2)；
[0025] 正向内引物FIP：5’-AAGTTGAATTCAGAGTTGAGGTCTGCTTGGAAGTCCGTTCCG-3’(SEQ ID NO:3)；
[0026] 反向内引物BIP：5’-TTCGGGAAGTAGCAACTGAATTGAGGAGCTTGCAGTTGCATTACT-3’(SEQ ID NO:4)；
[0027] 所述的阴性对照质控品10为双蒸水；
[0028] 所述的探针7为：5’-GGCTTAGTTGATTCGCGGTTACGGCTGAATTGG-3’(SEQ ID NO:5)。
[0029] 本实用新型的操作步骤为：
[0030] 1、提取样品组织DNA；
[0031] 2、迟缓爱德华氏菌LAMP反应：
[0032] 2.1 LAMP反应体系，各成分的终浓度分别为：3pmol/μL外引物SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、3pmol/μL内引物SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4、0.6μL Bst DNA聚合酶大片段以及10μL荧光PCR缓冲液的混合物；
[0033] 2.2 LAMP反应扩增：反应扩增反应温度为70℃，扩增反应时间为30min；
[0034] 3、探针杂交和LFD检测：扩增后将20pmol的SEQ ID NO:5探针加入LAMP反应体系中，70℃温育5min，进行杂交，将LFD试纸条浸入加入杂交液中显色，判断LAMP的扩增情况。
[0035] 以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。
