[0001] 本发明涉及活性成分提取和应用技术领域，尤其涉及一种降血糖的中药制剂及其制备方法。

[0002] 糖尿病是目前威胁全球人类健康的常见的慢性常见内分泌代谢疾病之一。随着经济的持续发展和生活方式的改变，糖尿病已成为我国面临的重大公共卫生问题之一，中国目前已成为全球糖尿病患者最多的国家，约占全球糖尿病总数的四分之一，近年来糖尿病的发病呈年轻化趋势。目前主要采用药物治疗，西药制剂降糖效果显著，但副作用比较大，尤其是糖尿病人需要终身服药，副作用会更大，长期服用西药降糖药可能会造成肝脏和肾脏的损害。鉴于糖尿病的慢性特点，进行长期的辅助治疗对于控制病情和降低药物副作用至关重要。当前全球范围内对于糖尿病的治疗策略，普遍重视饮食疗法，再配合运动治疗和药物治疗，共同构成全面的治疗方案。其中饮食治疗对糖尿病控制尤为重要。天然降血糖食品具有来源广泛，副作用小，价格低廉等特点，容易被普通人接受，是日常保健、自我调养的重要手段。

[0003] 番木瓜(Carica papaya L.)，为番木瓜科番木瓜属的常绿软木质小乔木，番木瓜果实营养丰富，富含木瓜凝乳蛋白酶A和B、木瓜肽酶A、溶菌酶、脂肪酶、木瓜蛋白酶、过氧化氢酶、酚氧化酶等酶类，酶类以未成熟果实乳汁中含量最多，约占干重的40％；还含有较多的氨基酸、维生素和微量元素，还含有糖、脂肪、蛋白质、有机酸、皂苷、黄酮类、钙盐等多种活性物质。本发明人早期研究发现番木瓜具有降血糖作用，在公开号为CN 101810750 A的专利申请中公开了一种含番木瓜乳汁粉的降血糖的中药制剂，将番木瓜乳汁过100目筛或离心除杂，微孔滤膜超滤除引湿性杂质成分，减压干燥和灭菌(65～70℃，0.08～0.09Mpa)制得番木瓜乳汁粉，将番木瓜乳汁粉单独或者与其他中药成分组合制备成降血糖制剂，具有较好的降血糖作用。该专利申请中对于番木瓜乳汁粉的利用存在以下问题：一是用法比较粗放，没有进行成分精炼，里面含有一些对于降血糖没有作用的成分，尤其是含有树胶、果胶、粘液汁等易吸潮的成分，会导致成品吸潮、降低产品稳定性，效用没有良好的针对性，降血糖活性不显著；二是采用高温灭菌会降低番木瓜乳汁粉中的酶活性，影响到降血糖功效。

[0029] 下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。

[0030] 实施例1乳汁粉的制备

[0031] 本实施例的乳汁粉的制备方法包括：

[0032] (1)选取无病虫害果树上个大饱满、生长足月的番木瓜青果，用刀划6～8条2～3毫米深度的划痕，果下方用容器接收番木瓜乳汁；在收集到的番木瓜乳汁中加入加入番木瓜乳汁重量的0.08％依地酸二钠钙和0.05％茶多酚作为稳定剂，采用磷酸二氢钾‑‑氢氧化钠溶液调节乳汁pH为7；然后将番木瓜乳汁进行40目振筛机粗滤，再进入板框压滤装置进行压滤，压滤采用专用的200目涤纶压滤布；

[0033] 将过滤得到的乳汁放入胶体磨进行研磨一次；然后采用离心机在转速为8000r/min条件下进行离心分离10min，收集上层液体，得到预处理的番木瓜乳汁；

[0034] (2)将步骤(1)得到的预处理的番木瓜乳汁通过分子量为45000Dal的超滤膜系统，压力为0.3MPa，收集透过超滤膜的乳汁；

[0035] (3)将步骤(2)得到的乳汁通过分子量为20000Dal的超滤膜系统，压力为0.2MPa，收集超滤膜截留的乳汁；

[0036] (4)将步骤(3)得到的乳汁进行多级冷冻干燥得到乳汁粉末，多级冷冻干燥依次为：‑45℃下保持20min，‑25℃下保持30min，‑10℃下保持3h。

[0037] 以上过滤、离心、超滤都是在常温下进行，制备过程中未能及时(超过2小时)进行下一道工序，需要将乳汁放入10℃以下的环境中进行保存。

[0038] 对比例1

[0039] 本对比例与实施例1不同在于：不包含步骤(2)和步骤(3)，直接将预处理的番木瓜乳汁进行冷冻干燥，其他同实施例1。

[0040] 对比例2

[0041] 本对比例与实施例1不同在于：步骤(3)中采用分子量为10000Dal的超滤膜系统，其他同实施例1。

[0042] 对比例3

[0043] 本实施例与实施例1不同在于：步骤(2)中采用分子量为65000Dal的超滤膜系统，其他同实施例1。

[0044] 对比例4

[0045] 本对比例与实施例1不同在于：步骤(1)中采用0.2％胱氨酸、0.1％乙二胺四乙酸、0.5％亚硫酸钠替换0.08％依地酸二钠钙和0.05％茶多酚，不调节pH(乳汁的pH为5)，其他同实施例1。

[0046] 测试实施例1和对比例1～4制备的乳汁粉的酶含量和活力测试，采用紫外分光光度法进行测试。

[0047] 表1实施例1和对比例1～4制备的乳汁粉的酶含量和活力

[0048] 项目 总酶含量 总酶活力(u/g)实施例1 97％ 340万
对比例1 52％ 160万
对比例2 92％ 320万
对比例3 86％ 280万
对比例4 94％ 300万

[0049] 实施例2降血糖组合物的制备

[0050] 降血糖组合物，按照重量份计，由以下原料组成：将乳汁粉末1份、苍术18份、川芎12份、玄参8份、山药4份。乳汁粉末为实施例1制备的乳汁粉末。

[0051] 本实施例的降血糖组合物的制备方法包括以下步骤：

[0052] S1.将药材除去杂质，切片；将6份川芎粉碎过60目筛；

[0053] S2.取切片苍术、剩余川芎、玄参、山药共同放入中药提取罐，加药材8倍量水饮用水，煎煮提取2次，第一次煎煮前先浸泡1小时，每次煎煮1.5小时，两次煎煮液均用120目筛网过滤，合并，得煎煮液。煎煮液转移到单效蒸发浓缩器中减压浓缩，浓缩至相对密度为1.25(60℃)的稠浸膏。减压浓缩条件：温度为60℃，压力0.06Mpa。

[0054] S3.将稠浸膏减压干燥，干燥设备为真空干燥器，干燥条件：温度85℃，真空度0.08Mpa；干至浸膏块水分≤5％。取出，用高效粉碎机粉碎，细粉过60目筛，备用。

[0055] S4.将配方量的乳汁粉和川芎粉与干浸膏粉混合均匀，混合设备为二维或三维混合机，混合时间20分钟，至细粉色泽一致、均匀，得降血糖组合物。

[0056] 实施例3

[0057] 本实施例的降血糖组合物，按照重量份计，由以下原料组成：将乳汁粉末1份、苍术20份、川芎4份、玄参13份、山药2份。乳汁粉末为实施例1制备的乳汁粉末。

[0058] 本实施例的降血糖组合物制备方法与实施例1不同之处在于：步骤(1)用2kg川芎粉碎外，其余实施例2。

[0059] 实施例4

[0060] 降血糖组合物，按照重量份计，由以下原料组成：将乳汁粉末1份、赤芍10份。乳汁粉末为实施例1制备的乳汁粉末。

[0061] 本实施例的降血糖组合物的制备方法包括以下步骤：

[0062] S1.将赤芍除去杂质，切片；

[0063] S2.取切片赤芍置中药提取罐，加药材8倍量水饮用水，煎煮提取2次，第一次煎煮前先浸泡1小时，每次煎煮1.5小时，两次煎煮液均用120目筛网过滤，合并，得煎煮液。煎煮液转移到单效蒸发浓缩器中减压浓缩，浓缩至相对密度为1.25(60℃)的稠浸膏。减压浓缩条件：温度为80℃，压力0.09MPa；

[0064] S3.将稠浸膏减压干燥，干燥设备为真空干燥器，干燥条件：温度85℃，真空度0.08MPa；干至浸膏块水分≤5％。取出，用高效粉碎机粉碎，细粉过60目筛，得到赤芍干浸膏粉；

[0065] S4.将配方量的乳汁粉与干浸膏粉混合均匀，混合设备为二维或三维混合机，混合时间20分钟，至细粉色泽一致、均匀，得降血糖组合物。

[0066] 降血糖的中药制剂的制备

[0067] 将实施例1制备的乳汁粉末、实施例2、实施例3或实施例4制备的降血糖组合物，加入或者不加入药学上可接受的辅料，制成胶囊剂、片剂或颗粒剂，得到降血糖的中药制剂。

[0068] 实施例5

[0069] 将实施例1制备的乳汁粉末填充胶囊，得到降血糖的胶囊剂。

[0070] 实施例6

[0071] 将实施例2制备的降血糖组合物填充胶囊，得到降血糖的胶囊剂。

[0072] 实施例7

[0073] 将实施例4制备的降血糖组合物填充胶囊，得到降血糖的胶囊剂。

[0074] 实施例8

[0075] 将实施例2制备的降血糖组合物与柠檬酸按重量比100:1进行混合，填充胶囊，得到降血糖的胶囊剂。

[0076] 以下试验委托广西疾病预防控制中心进行。

[0077] 实验例有助于维持血糖健康水平的动物试验

[0078] 检测依据为《保健食品功能检验与评价方法》(2023年版)。

[0079] 1.1实验材料和条件

[0080] 试验样品：乳汁粉A(实施例1)、乳汁粉B(对比例1)、乳汁粉C(对比例2)，降血糖组合物A(实施例2)、降血糖组合物B(实施例4)、赤芍干浸膏粉(按照实施例4中的制备方法制备得到的)。

[0081] 试验动物：(Ⅱ级)健康成年昆明种雄性小鼠，体重为23～28克。

[0082] 试验环境条件：实验动物室温度:22～25℃，相对湿度:55～70％。

[0083] 1.2试验方法

[0084] (1)剂量选择与受试物给予方式：

[0085] 根据该样品的人体推荐用量(折合计量为50mg/kg BW)，设0.5、1、1.5g/kg BW(分别相当于人体推荐用量的10、20、30倍)低、中、高3个剂量的降血糖组合物A试验组，同时设中剂量的乳汁粉A试验组、乳汁粉B试验组、乳汁粉C试验组、降血糖组合物B试验组、赤芍干浸膏粉试验组，设一个模型对照组，每组13只小鼠；另设一个正常动物的受试样品组(高剂量降血糖组合物A)和空白对照组，每组13只小鼠。用蒸馏水和降血糖组合物A配成浓度为25、50、75mg/mL的降血糖组合物A溶液，分别配制50mg/mL浓度的乳汁粉A水溶液、乳汁粉B水溶液、乳汁粉C水溶液、降血糖组合物B水溶液和赤芍干浸膏粉水溶液，分别给予相应剂量组动物灌胃，灌胃体积为0.2mL/10gBW，模型对照组及正常动物对照组给予等体积的蒸馏水，正常动物的受试样品组给予等体积的浓度75mg/mL降血糖组合物A溶液，每天灌胃一次，连续灌胃30天。

[0086] (2)高血糖模型动物造模：

[0087] 小鼠禁食24小时后给予四氧嘧啶(100mg/kg BW)一次腹腔注射造模。5天后禁食4小时，眼内眦取血测血糖，血糖值为10～25mmo1/L为造高血糖模成功小鼠。

[0088] (3)高血糖模型动物降血糖试验：

[0089] 选高血糖模型小鼠按禁食4小时的血糖水平随机分组，设1个模型对照组和8个试验组(组间差不大于1.1mmol/L)。实验组给与相应浓度的样品溶液，模型对照组给予蒸馏水，连续30天，测空腹血糖值(禁食同实验前)，比较各组动物血糖值。

[0090] (4)高血糖模型动物糖耐量试验：

[0091] 选高血糖模型小鼠按禁食4小时的血糖水平随机分组，设1个模型对照组和3个试验组(组间差不大于1.1mmol/L)；实验组给予相应浓度的样品溶液，模型对照组给予蒸馏水，连续30天。第31天将小鼠禁食4小时，试验组给予相应浓度的样品溶液，模型对照组给予蒸馏水。15分钟后，各组经口给予葡萄糖溶液(2.0g/kg BW)，测定给葡萄糖后各组0、0.5、2小时的血糖值，观察模型对照组与试验组给葡萄糖时间点(0、0.5、2小时)血糖值及血糖曲线下面积的变化。

[0092] 血糖曲线下面积＝0.25×(0小时血糖值+4×0.5小时血糖值+3×2小时血糖值)[0093] (5)正常动物试验

[0094] 选取26只小鼠，按禁食4小时血糖水平随机分组，分为受试样品组(高剂量降血糖组合物A)和空白对照组，每组13只。受试样品组给予相应浓度的样品溶液，模型对照组给予蒸馏水，连续30天。测空腹血糖值(禁食同实验前)，比较各组动物血糖值及血糖下降百分率。

[0095] 试验结果：

[0096] 表1为正常动物试验小鼠空腹血糖结果。由表可知，实验组第30天血糖值与试验前无明显差别，与空白对照组无明显差别，表明该样品对正常小鼠的空腹血糖基本没有影响。

[0097] 表1正常小鼠空腹血糖结果

[0098]

[0099] 高血糖模型动物降血糖试验结果见表2，由表可知，与模型组相比，降血糖组合物A低中高剂量组均能使高血糖模型大鼠的血糖水平降低，其中降血糖组合物A中高剂量组大鼠的血糖值显著降低。本发明制备的乳汁粉本身能够降低高血糖模型大鼠的血糖水平，苍术、川芎、玄参、山药或赤芍配伍使用，降血糖效果得到提升，说明降血糖组合物中各成分具协同作用，能够增强了其降血糖的作用。

[0100] 表2高血糖模型小鼠空腹血糖结果

[0101]

[0102]

[0103] 高血糖模型小鼠糖耐量试验结果见图1和表3，从图可以看出，从0min开始，各组小鼠的血糖均先升高后降低，与模型对照组小鼠相比，降血糖组合物组和乳汁粉组的血糖水平2h时均有所降低，从表3可知，与模型对照组相比，高、中剂量降血糖组合物A实验组小鼠的血糖曲线下面积有明显降低，表明高、中剂量降血糖组合物均能抑制由葡萄糖诱导的血糖升高。

[0104] 表3高血糖模型小鼠糖耐量试验结果

[0105]

[0106] 前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证本发明的技术方案。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。