技术领域
[0001] 本发明涉及化学物质的检测方法，尤其是孟鲁司特钠咀嚼片的质量检测方法，属于药品检测技术领域。
相关背景技术
[0002] 孟鲁司特钠咀嚼片用于成人和2岁及2岁以上儿童哮喘的预防和长期治疗，包括预防白天和夜间的哮喘症状，治疗对阿司匹林敏感的哮喘患者以及预防运动引起的支气管收缩；也用于减轻季节性过敏性鼻炎引起的症状。
[0003] 孟鲁司特钠咀嚼片主要成分为孟鲁司特钠，其化学名称为：(+)‑1‑[[[(1R)‑1‑[3‑[(1E)‑2‑(7‑氯‑2‑喹啉基)‑乙烯基]苯基]‑3‑[2‑(1‑羟基‑1‑甲基乙基)苯基]丙基]硫]甲基]环丙烷乙酸单钠盐。分子式：C35H35ClNNaO3S分子量：608.18。
[0004] 在完成孟鲁司特钠咀嚼片的制备后，需要对孟鲁司特钠咀嚼片产品进行质量检测，质量检测物质包括主成分含量和有关物质的量，主成分为孟鲁司特钠，有关物质为亚砜、顺式异构体、孟鲁司特酮等等，有关物质也称为杂质。主成分含量和杂质的量关系到产品质量的高低以及产品效果。
[0005] 目前，针对孟鲁司特钠咀嚼片中主成分含量和杂质的量的各项检测方法，还未能够准确、灵敏地检测出孟鲁司特钠咀嚼片中主成分含量和杂质的量，需保障高质量的注射用氯诺昔康合格产品的生产。
具体实施方式
[0056] 为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，将结合本发明的实施例及相关附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0057] 下面结合实施例和图1至图4对本发明做进一步详细说明：
[0058] 一种孟鲁司特钠咀嚼片的质量检测方法，质量检测包括含量检测和有关物质检测，质量检测采用高效液相色谱法进行检测；含量检测中检测的化学物质包括：孟鲁司特钠，有关物质检测中检测的化学物质包括：亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体。高效液相色谱法需要使用高效液相色谱仪进行检测操作，操作高效液相色谱仪进行不同物质的检测时需要设置不同的色谱条件，才能准确检测出待测物质的量。
[0059] 本发明以苯基键合硅胶为填充剂，针对不同的检测物质使用不同的流动相、不同的洗脱方式、不同的检测波长进行检测，分别能够准确、灵敏地检测出孟鲁司特钠咀嚼片中的孟鲁司特、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体的量。
[0060] (1)含量检测包括以下色谱条件：
[0061] 以苯基键合硅胶为填充剂(Agilent ZORBAX SB‑Phenyl 4.6mm×250mm，3.5μm或效能相当的色谱柱)；以0.2％三氟乙酸水溶液‑0.2％三氟乙酸乙腈溶液的混合溶液作为流动相，进行等度洗脱；流速为1.5ml/min；柱温为50℃；检测波长为358nm。
[0062] 其中，流动相中0.2％三氟乙酸水溶液：0.2％三氟乙酸乙腈溶液的体积比为3：1。
[0063] 含量检测的具体操作步骤：
[0064] 操作前准备：取甲醇500ml，加水100ml混匀备用，即得甲醇‑水溶液。
[0065] A1.供试品溶液：取10片孟鲁司特钠咀嚼片，置200ml棕色量瓶中，加入40ml水，放置5分钟或直到片剂完全崩解，加入120ml甲醇，超声处理20分钟，并振摇，用甲醇‑水溶液稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液2ml，置20ml棕色量瓶中，用甲醇‑水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
[0066] A2.对照品溶液：取孟鲁司特二环己胺对照品17mg，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇‑水溶液适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置20ml棕色量瓶中，用甲醇‑水溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
[0067] A3.含量测定：分别取对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0068] 上述孟鲁司特钠咀嚼片的规格为5mg(以孟鲁司特计)；
[0069] 上述甲醇‑水溶液中甲醇：水的体积比为5：1；
[0070] 上述滤器材质为Nylon，规格32mm，0.45um。
[0071] 含量计算公式：
[0072]
[0073] 式中：
[0074] WS为孟鲁司特二环己胺对照品称样量，mg；
[0075] AT为供试品溶液色谱图中主峰的峰面积；
[0076] AS为对照品溶液色谱图中主峰的峰面积；
[0077] DT为供试品溶液的稀释倍数；
[0078] DS为对照品溶液的稀释倍数；
[0079] n为供试品溶液中孟鲁司特钠咀嚼片的投样片数；
[0080] L为标示量；
[0081] 0.7638为孟鲁司特(M：586.18)与孟鲁司特二环己胺(M：767.50)的比值。
[0082] 含孟鲁司特钠(C35H35ClNNaO3S)以孟鲁司特(C35H35ClNNaO3S)计应为标示量的96.0％～104.0％。
[0083] (2)有关物质检测包括以下色谱条件：
[0084] 以苯基键合硅胶为填充剂(Agilent ZORBAX SB‑Phenyl 4.6×250mm，3.5μm或效能相当的色谱柱)；以0.2％三氟乙酸水溶液为流动相A；以甲醇‑乙腈为流动相B；进行线性梯度洗脱，柱温50℃；检测波长为250nm；流速为1.0ml/min。
[0085] 其中，流动相B中甲醇：乙腈的体积比为85：15。
[0086] 梯度洗脱程序：0min，63％A，37％B；10min，43％A，57％B；15min，63％A，37％B；25min，63％A，37％B；35min，70％A，30％B；53min，70％A，30％B；55min，40％A，60％B；
60min，40％A，60％B。
[0087] 有关物质检测的具体操作步骤：
[0088] C1.对照品混合溶液：取孟鲁司特峰鉴别杂质对照品2.5mg，精密称定，置10ml棕色量瓶中，加5ml甲醇‑水，再加入上述孟鲁司特酮杂质对照品溶液1ml，超声使溶解并用甲醇‑水稀释至刻度，摇匀，作为混合杂质对照溶液。量取混合杂质对照溶液5ml，置10ml无色量瓶中，自然光下放置1小时，即得。
[0089] C2.供试品3溶液：取10片孟鲁司特钠咀嚼片，置200ml棕色量瓶中，加入40ml水，放置5分钟或直到片剂完全崩解，加入120ml甲醇，超声处理20分钟，并振摇，用甲醇‑水稀释至刻度，摇匀，过滤，弃去至少1ml初滤液后取续滤液，精密量取1ml，置100ml棕色量瓶中，用甲醇‑水稀释至刻度，摇匀，即得。
[0090] C3.灵敏度溶液：精密量取对照品混合溶液5ml，置100ml棕色量瓶中，用甲醇‑水稀释至刻度，摇匀，即得。
[0091] C4.有关物质测定：分别取灵敏度溶液、供试品3溶液和对照品混合溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0092] 有关物质计算公式：
[0093]
[0094] 式中：
[0095] AT1为供试品3溶液色谱图中亚砜的峰面积；
[0096] AT2为供试品3溶液色谱图中孟鲁司特酮的峰面积；
[0097] AT3为供试品3溶液色谱图中顺式异构体的峰面积；
[0098] AT4为供试品3溶液色谱图中其他单个最大杂质峰的峰面积；
[0099] AT总杂质为供试品3溶液色谱图中各杂质峰面积的和(校正后的峰面积；与孟鲁司特甲基酮、甲基苯乙烯杂质峰一致的色谱峰，不计入本品有关物质中；小于灵敏度溶液主峰面积的峰忽略不计)；
[0100] AS1％为对照品混合溶液色谱图中主峰的峰面积；
[0101] 0.6为孟鲁司特酮杂质的校正因子。
[0102] 结果判定：供试品3溶液色谱图中如有杂质峰(相对主峰保留时间0.15倍之前的溶剂峰和辅料峰除外)，与孟鲁司特甲基酮峰和甲基苯乙烯峰保留时间一致的杂质峰，不计入本品有关物质中，这些杂质为孟鲁司特钠原料药控制的杂质，不是片剂的潜在降解产物。与亚砜保留时间一致的色谱峰峰面积不得大于对照品混合溶液主峰面积的0.5倍(0.5％)，与顺式异构体保留时间一致的色谱峰峰面积不得大于对照品混合溶液主峰面积的0.1倍(0.1％)，与孟鲁司特酮保留时间一致的色谱峰峰面积乘以校正因子0.6后不得大于对照品混合溶液主峰面积的0.1倍(0.1％)，其他单个杂质峰面积不得大于对照品混合溶液主峰面积0.1倍(0.1％)，各杂质峰面积的和(按校正后的峰面积计算)不得大于对照品混合溶液主峰面积的0.8倍(0.8％)。供试品3溶液色谱图中小于灵敏度溶液主峰面积的峰忽略不计。
[0103] 实施例1
[0104] 1、实验前准备
[0105] 对实验需要使用的仪器设备、试剂耗材和样品、对照品进行准备工作，具体如下：
[0106] 表1：仪器设备信息
[0107]仪器设备 设备型号 设备厂家
色谱仪 高校液相色谱仪1260系列 安捷伦
色谱柱 Agilent ZORBAX SB‑Phenyl 4.6×250mm，3.5μm 安捷伦
分析天平 / /
[0108] 表2：试剂耗材信息
[0109]
[0110]
[0111] 表3：样品和对照品信息
[0112]名称 供应商 批号 含量/浓度
孟鲁司特钠咀嚼片 海南锦瑞制药有限公司 230503 N/A
孟鲁司特 TLC 1909‑040A4 97.2％
孟鲁司特酮 TLL 3616‑094A4 99.8％
孟鲁司特二环己胺 EP 4.0 100％
[0113] 备注：N/A表示“不适用”。
[0114] 2、实验检测
[0115] 孟鲁司特钠咀嚼片的质量检测分两次进行，第一次进行主成分含量的检测，检测孟鲁司特钠咀嚼片中的孟鲁司特钠含量，第二次进行有关物质的检测，检测孟鲁司特钠咀嚼片中的亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体杂质，和其他单杂以及总杂质的量，从而达到监测、控制孟鲁司特钠咀嚼片产品质量的目的。
[0116] 2.1含量检测
[0117] 表4：含量检测的仪器检测参数信息
[0118]
[0119] 含量检测的具体操作步骤：
[0120] 甲醇‑水溶液的制备：取甲醇500ml，加水100ml混匀备用，即得甲醇‑水溶液。
[0121] A1.供试品溶液：取10片孟鲁司特钠咀嚼片，置200ml棕色量瓶中，加入40ml水，放置5分钟或直到片剂完全崩解，加入120ml甲醇，超声处理20分钟，并振摇，用甲醇‑水溶液稀释至刻度，摇匀，滤过(滤器材质为Nylon，规格32mm，0.45um)，精密量取续滤液2ml，置20ml棕色量瓶中，用甲醇‑水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0122] A2.对照品溶液：取孟鲁司特二环己胺对照品17mg，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇‑水溶液适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置20ml棕色量瓶中，用甲醇‑水溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
[0123] A3.含量测定：分别取对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0124] 含量计算公式：
[0125]
[0126] 式中：
[0127] WS为孟鲁司特二环己胺对照品称样量，mg；
[0128] AT为供试品溶液色谱图中主峰的峰面积；
[0129] AS为对照品溶液色谱图中主峰的峰面积；
[0130] DT为供试品溶液的稀释倍数；
[0131] DS为对照品溶液的稀释倍数；
[0132] n为供试品溶液中孟鲁司特钠咀嚼片的投样片数；
[0133] L为标示量；
[0134] 0.7638为孟鲁司特(M：586.18)与孟鲁司特二环己胺(M：767.50)的比值。
[0135] 含孟鲁司特钠(C35H35ClNNaO3S)以孟鲁司特(C35H35ClNNaO3S)计应为标示量的96.0％～104.0％。
[0136] 含量检测结果：根据图1和图2计算出孟鲁司特钠咀嚼片中孟鲁司特的含量为100.7％，含量数值在规定的范围内，含量控制符合规定。
[0137] 2.2有关物质检测
[0138] 表5：有关物质检测的仪器检测参数信息
[0139]
[0140] 有关物质检测的具体操作步骤：
[0141] C1.对照品混合溶液：取孟鲁司特峰鉴别杂质对照品2.5mg，精密称定，置10ml棕色量瓶中，加5ml甲醇‑水溶液，再加入孟鲁司特酮杂质对照品溶液1ml，超声使溶解并用甲醇‑水溶液稀释至刻度，摇匀，作为混合杂质对照溶液。量取混合杂质对照溶液5ml，置10ml无色量瓶中，自然光下放置1小时，即得。
[0142] C2.供试品3溶液：取10片孟鲁司特钠咀嚼片，置200ml棕色量瓶中，加入40ml水，放置5分钟或直到片剂完全崩解，加入120ml甲醇，超声处理20分钟，并振摇，用甲醇‑水溶液稀释至刻度，摇匀，过滤，弃去至少1ml初滤液后取续滤液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml棕色量瓶中，用甲醇‑水溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
[0143] C3.灵敏度溶液：精密量取对照品混合溶液5ml，置100ml棕色量瓶中，用甲醇‑水溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
[0144] C4.有关物质测定：分别取灵敏度溶液、供试品3溶液和对照品混合溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0145] 有关物质计算公式：
[0146]
[0147] 式中：
[0148] AT1为供试品3溶液色谱图中亚砜的峰面积；
[0149] AT2为供试品3溶液色谱图中孟鲁司特酮的峰面积；
[0150] AT3为供试品3溶液色谱图中顺式异构体的峰面积；
[0151] AT4为供试品3溶液色谱图中其他单个最大杂质峰的峰面积；
[0152] AT总杂质为供试品3溶液色谱图中各杂质峰面积的和(校正后的峰面积；与孟鲁司特甲基酮、甲基苯乙烯杂质峰一致的色谱峰，不计入本品有关物质中；小于灵敏度溶液主峰面积的峰忽略不计)；
[0153] AS1％为对照品混合溶液色谱图中主峰的峰面积；
[0154] 0.6为孟鲁司特酮杂质的校正因子。
[0155] 有关物质检测检测结果：根据图3和图4分别计算出孟鲁司特钠咀嚼片的亚砜为0.1％，顺式异构体为未检出，孟鲁司特酮为未检出，总杂质为0.1％，各杂质量均低于标准值，有关物质控制符合规定。
[0156] 3、方法验证
[0157] 3.1系统适应性
[0158] 接受标准：(1)系统干净稳定，在各组分的出峰位置没有干扰。若有干扰，干扰峰的峰面积应不大于灵敏度溶液中主峰的峰面积。(2)灵敏度溶液中，目标峰的信噪比(S/N)应不小于10。(3)连续5针目标峰峰面积的RSD应不大于10.0％，保留时间RSD应不大于1.0％。
[0159] 配制100％限度的对照品溶液连续进样5次，以20％限度的对照品溶液作为灵敏度溶液，以溶剂作为空白溶液，并上机测试。
[0160] 结果显示：系统干净稳定，在各自目标峰的出峰位置无明显干扰，灵敏度溶液测试结果信噪比不小于10，连续5针目标峰峰面积的RSD不大于10.0％，保留时间RSD不大于1.0％。系统适应性符合要求，具体结果如下表所示：
[0161] 表6：系统适应性测试结果1
[0162]
[0163] 表7：系统适应性测试结果2
[0164]
[0165]
[0166] 备注：表中浓度(STD ug/mL)为实际配制的进样溶液的浓度。
[0167] 3.2专属性
[0168] 接受标准：(1)空白溶液色谱图中在目标峰处无干扰，若有干扰，干扰峰的峰面积应不大于灵敏度溶液中主峰面积。(2)100％限度的对照品溶液显示目标峰。(3)100％限度的加标样品溶液中显示目标峰，所有大于灵敏度溶液的相邻峰与目标峰的分离度应不小于1.5。
[0169] 配制100％限度的对照品溶液和100％限度的加标样品溶液，即在样品溶液中加入100％限度的对照品溶液混合均匀得100％限度的加标样品溶液，以溶剂作为空白溶液，并上机测试。结果见表8。
[0170] 结果显示：(1)孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体空白溶液无干扰。(2)100％限度的对照品溶液显示目标峰孟鲁司特钠RT＝15.737min，亚砜RT＝6.899min，孟鲁司特酮＝12.249min，顺式异构体＝14.422min。(3)孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮100％限度的加标样品溶液中显示目标峰，无相邻峰；顺式异构体限度的加标样品溶液中显示目标峰，有相邻峰，相邻峰与目标峰的分离度均大于1.5，符合要求。专属性试验符合要求，本方法具有专属性。
[0171] 表8：专属性试验结果
[0172]
[0173]
[0174] 3.3检测限
[0175] 接受标准：每针LOD溶液的信噪比(S/N)不小于3。
[0176] 配制1份10％限度的对照品溶液作为LOD溶液(参照灵敏度溶液的制备方法)，并上机测试，进样3次。结果显示：得到测试结果信噪比S/N均大于3。检测限试验符合要求，具体结果如下表所示，待测化合物的浓度和在样品中的相对含量：
[0177] 表9：待测化合物的浓度和在样品中的相对含量数据
[0178]名称 浓度(ug/mL) 样品中的相对含量(ppm)
孟鲁司特钠 2.5 0.3804ng
亚砜 15 0.0038ng
孟鲁司特酮 2.5 0.1509ng
顺式异构体 2.5 0.3745ng
[0179] 备注：浓度为实际配制的进样溶液的浓度。
[0180] 测试结果的信噪比S/N结果，见表10：
[0181] 表10：测试结果的信噪比S/N数据
[0182]名称 孟鲁司特钠 亚砜 孟鲁司特酮 顺式异构体
LOD‑1 3.2 4.2 4.0 5.6
LOD‑2 3.5 4.7 4.6 5.2
LOD‑3 3.0 4.3 4.2 5.5
[0183] 3.4定量限
[0184] 接受标准：每针LOQ溶液的信噪比(S/N)≥10；连续6针LOQ中目标峰峰面积的RSD不大于15.0％。
[0185] 配制1份20％限度的对照品溶液作为LOQ溶液(参照灵敏度溶液的制备方法)，并上机测试，进样6次。结果显示：得到测试结果信噪比均大于10；连续6针LOQ中目标峰峰面积的RSD不大于15.0％。定量限试验符合要求，附验证结果如下表11：
[0186] 表11：待测化合物的浓度和在样品中的相对含量数据
[0187]
[0188]
[0189] 备注：表11中浓度为实际配制的进样溶液的浓度。
[0190] 定量限结果，见表12：
[0191] 表12：目标峰峰面积的数据
[0192]
[0193] 3.5线性和范围
[0194] 接受标准：回归系数(r)≥0.990。
[0195] 配制从LOQ到200％限度浓度的一系列线性测试溶液(20％，50％，100％，150％，200％)，每份溶液进样分析一次，计算方程和回归系数(r)，结果显示：得到回归系数(r)≥
0.990。线性结果符合要求，验证结果如下表13：
[0196] 表13：线性数据信息
[0197]
[0198]
[0199] 备注：表13中浓度为实际配制的进样溶液的浓度。
[0200] 5.12结论
[0201] 综合上述试验可知：系统适应性符合要求，因此本发明方法使用的系统是有效的，适用的；专属性试验符合要求，说明本发明方法能够准确地、选择性地分析检识出残留物质；检测限试验符合要求，说明本发明方法检测限设定合理，且检测方法灵敏度较高；定量限试验符合要求，说明本发明方法能够准确的测定残留物质的残留量，具备灵敏的定量检测能力。
[0202] 上述各验证项目均符合要求，本发明的方法可用于检测孟鲁司特钠咀嚼片中的孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体的量。
[0203] 对比例1
[0204] 取实施例1中孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体的对照品溶液各1ml，采用高效液相色谱法进行测定分析，检测条件：
[0205] 色谱柱：苯基键合硅胶；
[0206] 流动相A：0.1％甲酸水溶液；
[0207] 流动相B：0.1％甲酸乙腈溶液；
[0208] 流速：1.0ml/min；
[0209] 进样量：10μl；
[0210] 检测波长：250nm；
[0211] 梯度洗脱程序：0min，63％A，37％B；10min，43％A，57％B；15min，63％A，37％B；25min，63％A，37％B；35min，70％A，30％B；53min，70％A，30％B；55min，40％ A，60％B；
60min，40％ A，60％B。
[0212] 结论：对比例1是实施例1的对比试验，对比例1和实施例1采用的同样是高效液相色谱法进行检测，不同的是有关物质检测的色谱检测条件中流动相物质及流动相组合不同。对比例1结果：未能检出待测物质色谱图，该色谱检测条件不适用。实施例1采用的流动相物质及流动相组合与对比例1的试验结果对比可知：在相同检测方法中，使用不同的流动相物质及流动相组合，能够检测出来的化合物不相同，未能检出待测物质。相比之下，实施例1采用的流动相物质及流动相组合能够检测出孟鲁司特钠咀嚼片中的孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体的量，灵敏度高，基线分离，分离度好。
[0213] 对比例2
[0214] 取实施例1中孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体的对照品溶液各1mL，采用高效液相色谱法进行测定分析，检测条件：
[0215] 色谱柱：苯基键合硅胶；
[0216] 流动相A：0.2％三氟乙酸水溶液；
[0217] 流动相B：甲醇‑乙腈(体积比85：15)；
[0218] 流速：1.0ml/min；
[0219] 进样量：10μl；
[0220] 检测波长：250nm；
[0221] 梯度洗脱程序：0min，65％A，35％B；10min，75％A，25％B；30min，85％A，15％B；60min，75％A，25％B；70min，65％，35％B。
[0222] 结论：对比例2是实施例1的对比试验，对比例2和实施例1采用的同样是高效液相色谱法进行检测，不同的是有关物质检测的色谱检测条件中梯度洗脱程序不同。对比例2的检测结果：未检出。根据对比例2的检测结果与实施例1对比可知：在相同检测方法中，改变梯度洗脱程序，检测得到的物质明显不同。相比之下，实施例1采用的梯度洗脱程序能够更好的将孟鲁司特钠咀嚼片中的孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体物质分离，准确检测出待测物质，获得相应的色谱图，基线分离，分离度好。
[0223] 对比例3
[0224] 取实施例1中孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体的对照品溶液各1mL，采用高效液相色谱法进行测定分析，检测条件：
[0225] 色谱柱：苯基键合硅胶；
[0226] 流动相A：0.2％三氟乙酸水溶液；
[0227] 流动相B：甲醇‑乙腈(体积比85：15)；
[0228] 流速：1.0ml/min；
[0229] 进样量：10μl；
[0230] 检测波长：330nm；
[0231] 梯度洗脱程序：0min，63％A，37％B；10min，43％A，57％B；15min，63％A，37％B；25min，63％A，37％B；35min，70％A，30％B；53min，70％A，30％B；55min，40％ A，60％B；
60min，40％ A，60％B。
[0232] 结论：对比例3是实施例1的对比试验，对比例3和实施例1采用的同样是高效液相色谱法进行检测，不同的是有关物质检测的色谱检测条件中检测波长不同。对比例3的检测结果：未检出。根据对比例3的检测结果与实施例1对比可知：不同的检测波长，能够在波长范围内检测出相应的物质，波长以外的物质则无法检出。相比之下，实施例1通过设置相应的检测波长，准确检测出孟鲁司特钠咀嚼片中的孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体物质，避免检测波长以外的物质干扰，从而获得相应的色谱图，基线分离，分离度好。
[0233] 对比例4
[0234] 取实施例1中孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体的对照品溶液各1mL，采用高效液相色谱法进行测定分析，检测条件：
[0235] 色谱柱：苯基键合硅胶；
[0236] 流动相A：1.0％三氟乙酸水溶液；
[0237] 流动相B：甲醇‑乙腈(体积比50：50)；
[0238] 流速：1.0ml/min；
[0239] 进样量：10μl；
[0240] 检测波长：250nm；
[0241] 梯度洗脱程序：0min，63％A，37％B；10min，43％A，57％B；15min，63％A，37％B；25min，63％A，37％B；35min，70％A，30％B；53min，70％A，30％B；55min，40％ A，60％B；
60min，40％ A，60％B。
[0242] 结论：对比例4是实施例1的对比试验，对比例4和实施例1采用的同样是高效液相色谱法进行检测，不同的是流动相的物质浓度结合不同。对比例4的检测结果：检出色谱图存在干扰。根据对比例4的检测结果与实施例1对比可知：不同的流动相浓度，在进行洗脱过程中的洗脱能力不同，无法将待检物质完全洗脱，也会在待检物质中出现洗脱干扰，造成最终检出的色谱图存在干扰，不能够精准地检出待测物质色谱图。相比之下，实施例1通过设置合适的流动相及物质浓度相匹配，精准检测出的待测物质色谱图不存在干扰，获得的色谱图，基线分离，分离度好，精准度高。
[0243] 综上可知，采用相同的色谱柱，区别在于流动相的选择和洗脱方式的结合，相同的流动相与不同的洗脱方式结合，能够检测到的物质不相同；相同的洗脱方式与不同的流动相相结合，同样，能够检测到的物质也不相同。因此，针对不同的检测物质，只能采用特定的流动相与洗脱方式相结合，并调节适当的检测波长以及流动相物质的浓度比例，才能准确检测到指定的物质。
[0244] 由上述对比例1‑4可知：
[0245] 第一，在相同检测方法中，改变流动相物质及流动相组合，能够检测出来的化合物不相同，本发明采用的流动相物质及流动相组合能够更好的将孟鲁司特钠咀嚼片中的孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体分离，检测出物质的量，从而获得相应的色谱图，准确度高。
[0246] 第二，在相同检测方法中，改变梯度洗脱程序，能够检测出来的化合物不相同，通过洗脱避免检测中出现干扰，本发明采用的梯度洗脱方式和洗脱程序能够更好的将孟鲁司特钠咀嚼片中的孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体分离，避免出现干扰，准确检出物质的量，从而获得相应的色谱图，基线分离，分离度好。
[0247] 第三，在相同检测方法中，改变检测波长，能够在不同的波长范围内检测出相应的物质，波长以外的物质则无法检出，本发明通过设置相应的检测波长，准确检测出孟鲁司特钠咀嚼片中的孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体物质，避免检测波长以外的物质干扰，从而获得相应的色谱图，基线分离，分离度好。
[0248] 第四，在相同检测方法中，改变流动相的物质浓度比例，不同的物质浓度在洗脱过程中的洗脱能力不同，在检测过程中，不同浓度物质洗脱的结果会存在差异，导致出现干扰问题，本发明通过设置相应的流动相浓度比例，对待测物质进行完全洗脱，精准检测出孟鲁司特钠咀嚼片中的孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体物质，避免洗脱过程出现干扰，从而获得相应的色谱图，基线分离，分离度好，精准度高。
[0249] 综上可知，本实施例证实采用高效液相色谱法，并通过限定色谱条件中的流动相与洗脱方式相结合，并调节适当的检测波长以及流动相的物质浓度比例，能够准确检测出孟鲁司特钠咀嚼片中的含量和有关物质，即准确检测出孟鲁司特钠、亚砜、孟鲁司特酮、顺式异构体的量，而且检测方法灵敏度高，分离度好。
[0250] 以上所述实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围，均属于本发明的保护范围。
