技术领域
[0001] 本发明涉及一种获得比色皿中生物样品的图像的方法。
相关背景技术
[0002] 确定比色皿内包含的样品的光学性质的分析装置是已知的。在此类装置中，比色皿至少部分装填有用于分析的样品，然后放置在所述装置中。光学（或其他）辐射穿过所述样品，以允许测量所述样品的特性，例如特定组分的存在。
[0003] 在分析装置中检查的常见样品是生物样品，例如血液样品。血液分析用于广泛的医学监测方法，例如监测系统性抗癌疗法的进展。例如，光学分析装置可以分析血液样品以确定白细胞（例如粒细胞和无颗粒白细胞）的存在、不存在和/或量，其存在、不存在和/或量通常用于监测系统性抗癌疗法的进展。血液样品的分析通常需要首先对样品进行离心。在离心过程中，血液被分层。所述层是：（a）含有红细胞的红细胞层；（b） 含有白细胞（例如粒细胞和无颗粒白细胞）的血沉棕黄层；（c）血小板（凝血细胞）层；以及（d）血浆层。然后用光学（或其他辐射）分析血液以获得所述层的图像。典型的光学辐射源是LED灯。然后可以从所述图像计算每层的像素计数，以确定每层的细胞计数。
[0004] 比色皿是分析装置的一次性部件，通常每次测量都需要新的比色皿。重要的是，用户可以快速容易地将样品装入比色皿。同样重要的是，比色皿可以低成本制造，可以容易地装载样品并固定在光学分析装置的支架上，并且一旦分析完成，可以容易地从所述支架上取下。已知类型的比色皿的实例可以在例如GB2555403A、EP2096444A1、EP1055112A1、WO2007/008137、US6365104B1和WO2018078324A1（其公开内容各自通过引用并入本文）中看到。
[0005] 其中含有样品的比色皿可以用组合物包被。所述组合物有三个目的。所述组合物（a）有助于所述比色皿收集样品；（b）确保一旦样品被收集，所述样品仍然可处理；以及（c）有助于产生所述样品的清晰图像。传统上，所述包被比色皿的组合物包含草酸钾、吖啶橙、肝素钠和乙二胺四乙酸二钾盐脱水物。用于比色皿的已知组合物的实例可以在例如US6365104B1（其公开内容通过引用并入本文）中看到。
[0006] 需要一种改进的方法来获得比色皿中样品的图像。具体而言，需要一种改进的方法来获得比色皿中血液样品的图像，其中所述图像清楚地显示了血沉棕黄层。
具体实施方式
[0072] 下文将参考附图更全面地描述本公开的实施方式，其中在几张附图中，相似的数字表示相似的元件，并且其中示出了示例性实施方式。然而，权利要求的实施方式可以以许多不同形式体现，并且不应被解释为限于本文阐述的实施方式。
[0073] 词语“包含”、“具有”、“含有”和“包括”及其其他形式在含义上旨在是等效的，并且是开放式的，因为在这些词中的任一者后面的一个或多个项目并不意味着是此类项目的详尽清单，也不意味着仅限于所列出的项目。还必须注意的是，除非上下文另有明确规定，否则在本文和随附的权利要求中使用的没有具体数目的指称包括复数指称物。尽管与本文所述类似或等效的任何系统和方法可以在本公开的实施方式的实践或测试中使用，但现在描述了优选的系统和方法。
[0074] 用于描述本发明的一些术语如下所述：
[0075] “吖啶橙”是指一种成像染料。吖啶橙使细胞在暴露于光辐射时发出荧光。通常，吖啶橙在200至460 nm的波长下被激发。吖啶橙可以区分细胞的机制被称为异染性。凭借异染性，吖啶橙与样品中的不同组分结合，在激发后在光谱中的不同波长处产生峰。例如，当吖啶橙与DNA结合时，细胞在用蓝光激发后会发出最大发射为530 nm的绿色荧光。当吖啶橙与RNA结合时，得到的组合会凝结（即转变为固态），然后沉淀。得到的组分在用蓝光激发后会发出磷光或最大发射为640 nm的红光。吖啶橙的浓度也会影响样品的颜色发射，因为浓度会影响可用遗传物质的形式。众所周知，吖啶橙在RNA选择方面不如DNA敏感。例如，高浓度吖啶橙导致DNA变性，同时也将DNA染为红色。这是因为高浓度吖啶橙导致DNA变成单链。因此，高浓度吖啶将导致大量红光发射。相反，低浓度吖啶橙导致RNA不完全变性，并导致部分RNA染为绿色。因此，低浓度吖啶橙将导致大量绿光发射。此外，使用吖啶橙与细胞的结合产生的颜色取决于细胞的结构，可以帮助区分不同的细胞。例如，粒细胞在颗粒中染为橙色，在核中染为红色，导致粒细胞在红色光谱中显著发射，而无颗粒白细胞在核中染为黄绿色，在细胞质中染为红色，使无颗粒白细胞在绿色光谱中发射。
[0076] “凝集剂”是指一种有助于粒子聚集在一起的材料。例如，凝集剂可以帮助细胞例如细菌或红细胞的聚集。具体而言，凝集剂可以通过直接作用于红细胞，例如但不限于通过减少红细胞之间的排斥力，将红细胞聚集在一起。凝集剂的实例包括但不限于凝集素蛋白，或血凝素蛋白，或聚乙烯吡咯烷酮，含有聚乙烯吡咯烷烷酮K12的溶液，蛋白酶例如菠萝蛋白酶、胃蛋白酶和/或胰蛋白酶，或聚乙二醇。
[0077] “无颗粒白细胞”是指一种没有明显颗粒的白细胞。无颗粒白细胞的实例包括但不限于淋巴细胞和单核细胞。
[0078] “醇溶剂”是指基于醇的溶剂。醇溶剂包括但不限于苯甲醇、1,4‑丁二醇、1,2,4‑丁三醇、丁醇、1‑丁醇、2‑丁醇、叔丁醇和乙醇。
[0079] “抗凝血剂”是指一种防止血液凝固的材料。抗凝血剂确保血液样品在分析所述样品之前不发生显著变化。抗凝血剂的实例包括但不限于乙二胺四乙酸二钾盐脱水物、草酸钾、草酸钾铵、肝素、柠檬酸盐和水蛭素。
[0080] “血沉棕黄层”是指抗凝血的血液样品的一个级分。血沉棕黄层含有离心血液样品中的大部分白细胞和血小板。
[0081] “收集溶液”是指包含抗凝血剂、凝集剂和润湿剂的溶液。收集溶液可以另外包含水。收集溶液的目的通常是提高样品被分析装置（例如比色皿）摄取的容易性和效率。
[0082] “比色皿”是指在分析装置中使用的容器，特别是用于分析离心下样品的容器。比色皿的实例被描述在GB2555403A和英国申请GB2108004.9中（其公开内容通过引用并入本文）。
[0083] “Entia LibertyTM装置”是指由Entia Ltd.制造的利用光辐射测量样品中组分的浓度的装置。具体而言，所述装置用于测量从正经历系统性抗癌疗法进展监测的患者获取的血液样品中白细胞的存在（通过测量白细胞的量）。
[0084] “流体”是指没有固定形状且容易屈服于外部压力的任何材料。流体的实例包括但不限于血液样品。
[0085] “粒细胞”是指一种具有小颗粒的白细胞。这些颗粒含有蛋白质。粒细胞的实例是中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。
[0086] “均质的”是指整体具有均匀组成和性质的物质。
[0087] “成像溶液”是指包含成像剂的溶液。成像剂的实例包括但不限于吖啶橙、季铵盐型阳离子异染性染料例如Greifswalder蓝、包柔蓝、罗丹宁蓝、甲苯胺蓝、夜蓝、霍夫曼紫、碱性橙21、持久性染料例如细胞持久性花青染料、SYTO染料、oxayne染料、菲啶（嵌入）染料、吲哚染料或咪唑染料。成像溶液还可以包含水。成像溶液的目的是确保可以通过光学（或其他来源）辐射获得待分析样品的图像。
[0088] “多通道移液器”是指一种在实验室中使用的电子装置，用于准确测量液体并一次用液体装填多个小瓶。多通道移液器的实例包括但不限于Eppendorf Research plus多通道移液器、CappAero多通道移液器和VIAFLO多通道移液器。优选地，可以使用移液器头之间的距离为4 mm或更小并且可以分配至少0.5 µL液体的多通道移液器。
[0089] “混合物”是指通过将两种或更多种不同组分混合在一起制成的材料。混合物整体可以是均匀的，也可以是不均匀的。
[0090] “室温”是指18至25℃、优选地20至22℃、优选为20℃的温度。
[0091] “样品”是指用于分析的物质。样品在流体相中进行分析。
[0092] “润湿剂”是指通过降低液体的表面张力来提高所述液体的扩散和渗透性能的材料。润湿剂的实例包括但不限于公知的表面活性剂（即离子型、非离子型和/或阳离子型）、普朗尼克P‑123（也被称为聚乙二醇‑嵌段聚丙二醇‑嵌段聚乙二醇）、silwet L600、脂肪醇乙氧基化物、烷基酚乙氧基化物或脂肪酸烷氧基化物。
[0093] 组合物
[0094] 本发明提供了一种组合物。具体而言，所述组合物用于包被整个或一部分比色皿。所述组合物相比于现有的用于包被比色皿的组合物有所改进。本发明的组合物至少具有下述优点：提高了比色皿摄取样品的容易性和效率；改进了保持在比色皿内的样品的成像；通过允许可视化血液样品的血沉棕黄层的不同层，改进了保持在比色皿内的样品的成像。
[0095] 所述组合物包括收集溶液和成像溶液。
[0096] 所述收集溶液包含抗凝血剂、凝集剂和润湿剂。所述收集溶液还可以包含水或任何适合的有机或无机溶剂例如醇溶剂。
[0097] 所述抗凝血剂包括乙二胺四乙酸二钾盐脱水物、草酸钾、草酸钾铵、肝素、柠檬酸盐、水蛭素中的一者或多者或其任何组合。
[0098] 所述凝集剂包括聚乙烯吡咯烷酮、含有聚乙烯吡咯烷酮K12的溶液、蛋白水解酶例如菠萝蛋白酶、胃蛋白酶和/或胰蛋白酶、聚乙二醇中的一者或多者或其任何组合。有利的是，在所述收集溶液中包含凝集剂减少了将血液样品在包含所述收集溶液的比色皿中离心后的血液松弛。这有利地延长了可用于对所述样品成像的时间段。更有利的是，所述凝集剂可以充当血液样品的血浆扩容剂，使血浆体积和沉降率增加，同时降低血细胞比容。
[0099] 所述润湿剂包括普朗尼克P‑123、silwet L600、脂肪醇乙氧基化物、烷基酚乙氧基化物、脂肪酸烷基化物中的一者或多者或其任何组合。
[0100] 优选地，所述收集溶液的pH为酸性。优选地，所述收集溶液的pH为3至6、或3.5至4.5、或4（正负0.2）。
[0101] 所述成像溶液包含成像剂。所述成像溶液还可以包含水或任何适合的有机或无机溶剂例如醇溶剂。
[0102] 所述成像剂包括吖啶橙、季铵盐型阳离子异染性染料例如Greifswalder蓝、包柔蓝、罗丹宁蓝、甲苯胺蓝、夜蓝、霍夫曼紫、碱性橙21、持久性染料例如细胞持久性花青染料、SYTO染料、oxayne染料、菲啶（嵌入）染料、吲哚染料、咪唑染料中的一者或多者或其任何组合。有利情况下，所述染料带正电荷，因此能够穿过血细胞的细胞膜。因此，所述染料可以对血细胞进行化学染色。对血细胞进行可视染色可以使血细胞可视化。进一步有利的是，所述染料可以在大的pH范围、温度范围内使用，并且所述染料的染色性能不受浓度变化的影响。所述染料被固定到位（因为将所述染料在比色皿表面上干燥），而不需要将细胞固定到位。
相反，细胞可以自由流动。自由流动的细胞对于成像是理想的，因为当细胞被固定时，细胞倾向于丢失重要信息例如生化信息。
[0103] 优选地，所述成像溶液的pH为酸性。优选地，所述成像溶液的pH为3至6、或3.5至4.5、或4（正负0.2）。
[0104] 比色皿
[0105] 在一些实例中，本发明还涉及完全或部分包被在所述组合物中的比色皿。
[0106] 在一些实例中，所述比色皿是在2021年6月4日提交的英国专利申请GB2108004.9（其公开内容通过引用并入本文）中描述的比色皿。
[0107] 在一些实例中，所述比色皿由两个部分（下文中被称为比色皿部分）形成，这两个部分是分开制造并彼此附连的。一个部分可以包括比色皿的上表面，另一部分包括其下表面。一个或两个部分可以在其内表面上形成由凹陷，使得当将所述两个部分固定在一起时，在所述比色皿的主体内存在一个或多个区室。优选地，所述比色皿的主体具有形成在其中的样品区室，所述样品区室通过形成在主体外部的开口与比色皿的外部连通，其中所述样品区室包括收集区室和分析区室。图3示出了具有收集区室（340）和分析区室（350）的比色皿部分（300）。所述收集区室具有与所述开口流体连通的第一端和与所述分析区室流体连通的第二端。所述分析区室具有与所述收集区室流体连通的第一端和第二封闭端。所述分析区室仅通过所述收集区室与比色皿的外部流体连通。然而应当理解，本发明不限于这种比色皿的制造方法，并且比色皿可以以任何其他适合或方便的方式形成。
[0108] 在一些实例中，在所述比色皿的一个部分的内表面上形成凹陷，而另一部分的内表面是基本上光滑和/或平坦的。在其他实例中，两个部分可能在其内表面上形成有凹陷，并且当所述比色皿被组装时，至少一些所述凹陷彼此对齐以形成所述区室。正如所讨论的，各种区室可以通过在比色皿的一个或两个部分的内侧上形成的凹陷来产生。专业读者会意识到还有许多其他可能性。
[0109] 在一些实例中，所述收集区室和分析区室具有相同或大致相同的深度。
[0110] 在一些实例中，所述收集区室具有四个彼此平行的相对侧壁。所述收集区室从与形成在主体外部的开口流体连通的第一端和与所述分析区室流体连通的第二端延伸。在一些实例中，所述分析区室优选地沿其长度具有一致的宽度，具有四个彼此平行的相对侧壁。优选地，当比色皿由两个比色皿部分制成时，其中一个比色皿部分具有凹陷以形成所述区室，而第二比色皿部分是基本上光滑或平坦的，一个比色皿部分上的凹陷形成所述收集和分析区室的四个相对侧壁中的三个，而第二比色皿部分的基本上光滑或平坦的表面形成第四个相对壁。所述分析区室优选地沿其长度具有恒定的深度。所述分析区室朝向比色皿的与所述收集区室相对的一端延伸，并终止于封闭端处，所述封闭端不允许与比色皿外部的任何连通。所述分析区室的封闭端优选地具有方形形状，包括与所述分析区室的长度成直角或基本上成直角的端面。所述封闭端可以被称为端壁。
[0111] 在一些实例中，所述比色皿包含排气口，允许空气从所述比色皿逸出。
[0112] 在一些实例中，所述比色皿包括收集区室与分析区室之间的过渡区室。所述过渡区室的功能是防止所述比色皿过度填充，同时避免细胞损伤和/或激活。
[0113] 在一些实例中，所述收集区室用本发明的收集溶液包被（完全或部分地）。在其他实例中，所述分析区室用所述成像溶液包被（完全或部分地）。在其他实例中，所述收集区室用所述收集溶液包被（完全或部分地），并且所述分析区室用所述成像溶液包被（完全或部分地）。
[0114] 制备组合物的方法
[0115] 本发明还涉及一种制备用于包被比色皿（完全或部分地）的组合物的方法。所述方法包括下述步骤：
[0116] （a）提供收集溶液；和
[0117] （b）提供成像溶液。
[0118] 本发明还提供了一种用于制备所述收集溶液的方法。所述方法包括下述步骤：
[0119] （a）提供抗凝血剂、凝集剂和润湿剂；
[0120] （b）制备所述抗凝血剂、凝集剂和润湿剂的储用溶液；和
[0121] （c）合并所述储用溶液。
[0122] 在步骤（b）期间，所述储用溶液被分别制备。
[0123] 在一些实例中，将所述抗凝血剂、凝集剂和润湿剂分别称重到单独容器中。优选的单独容器的实例是一次性托盘。每个容器在使用前用清洁剂例如异丙醇清洁。
[0124] 在一些实例中，将所述抗凝血剂、凝集剂和润湿剂分别转移到单独的小瓶中，并向所述小瓶中添加溶剂。优选地，所使用的溶剂是水。优选地，使用任何适合的有机或无机溶剂例如醇溶剂。优选地，通过以700 rpm至900 rpm、或800 rpm搅拌所述溶液，将所述抗凝血剂、凝集剂和润湿剂溶解在所述溶剂中。优选地，通过将所述溶液搅拌5至15分钟、或10分钟，将所述抗凝血剂、凝集剂和润湿剂溶解在所述溶剂中。优选地，在10至30℃、或15至25℃的温度下将所述抗凝血剂、凝集剂和润湿剂溶解在所述溶剂中。
[0125] 在一些实例中，所述收集溶液包含两种抗凝血剂：第一抗凝血剂和第二抗凝血剂。优选地，所述第一抗凝血剂和第二抗凝血剂不同。优选地，包含第一抗凝血剂的储用溶液被制备成具有浓度为25至75 mg/mL、或35至65 mg/mL、或45至55 mg/mL、或50 mg/mL的所述第一抗凝血剂。优选地，包含第二抗凝血剂的储用溶液被制备成具有浓度为50至150 mg/mL、或75至125 mg/mL、或90至110 mg/mL、或100 mg/mL的所述第二抗凝血剂。
[0126] 在一些实例中，包含所述凝集剂的储用溶液被制备成具有浓度为25至75 mg/mL、或35至65 mg/mL、或45至55 mg/mL、或50 mg/mL的所述凝集剂。
[0127] 在一些实例中，包含所述润湿剂的储用溶液被制备成具有浓度为0.005 mg/mL至0.015 mg/mL、或0.0075 mg/mL至0.0125 mg/mL、或0.009至0.011 mg/mL、或0.01 mg/mL的所述润湿剂。
[0128] 在一些实例中，包含第一抗凝血剂的储用溶液被制备成具有浓度为50 mg/mL的所述第一抗凝血剂；包含第二抗凝血剂的储用溶液被制备成具有浓度为100 mg/mL的所述第二抗凝血剂；包含凝集剂的储用溶液被制备成具有浓度为50 mg/mL的所述凝集剂；并且包含所述润湿剂的储用溶液被制备成具有浓度为0.01 mg/mL的所述润湿剂。优选地，包含草酸钾的储用溶液被制备成具有浓度为50 mg/mL的草酸钾；包含乙二胺四乙酸二钾盐脱水物的储用溶液被制备成具有浓度为100 mg/mL的乙二胺四乙酸二钾盐脱水物；包含聚乙烯吡咯烷酮的储用溶液被制备成具有浓度为50 mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮；并且包含普朗尼克P‑123的储用溶液被制备成具有浓度为0.01 mg/mL的普朗尼克P‑123。
[0129] 在一些实例中，所述储用溶液可以从制备所述储用溶液的那天起储存长达4周。
[0130] 在步骤（c）中，将所述储用溶液合并以形成所述收集溶液。
[0131] 在一些实例中，所述收集溶液包含两种抗凝血剂：第一抗凝血剂和第二抗凝血剂。优选地，所述第一抗凝血剂和第二抗凝血剂不同。优选地，所述收集溶液包含2至10 mg/mL、或4至8 mg/mL、或5至7 mg/mL、或6 mg/mL的所述第一抗凝血剂。优选地，所述收集溶液包含
3至11 mg/mL、或5至9 mg/mL、或6至8 mg/mL、或7 mg/mL的所述第二抗凝血剂。
[0132] 在一些实例中，所述收集溶液包含5至25 mg/mL、或7.5至20 mg/mL、或9至11 mg/mL、或10 mg/mL的所述凝集剂。
[0133] 在一些实例中，所述收集溶液包含0.050至0.250 mg/mL、或0.075至0.120 mg/mL、或0.900至0.125 mg/mL、或0.1 mg/mL的所述润湿剂。
[0134] 在一些实例中，所述收集溶液包含6 mg/mL的第一抗凝血剂、7 mg/mL的第二抗凝血剂、10 mg/mL的凝集剂和0.1 mg/mL的润湿剂。优选地，所述收集溶液包含6 mg/mL的草酸钾、7 mg/mL的乙二胺四乙酸二钾盐脱水物、10 mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮和0.1 mg/mL的普朗尼克P‑123。
[0135] 在一些实例中，所述收集溶液具有七天的存储寿命。一旦七天过去，制备新鲜的收集溶液。
[0136] 本发明还提供了一种制备所述成像溶液的方法。所述方法包括下述步骤：
[0137] （a）提供成像剂；和
[0138] （b）制备所述成像剂的储用溶液。
[0139] 在步骤（b）中，制备所述储用溶液。在一些实例中，所述成像剂是固体，并被称重到容器中。优选容器的一个实例是一次性托盘。所述容器在使用前用清洁剂例如异丙醇进行清洁。在另一个实例中，所述成像剂是液体，并在量筒中测量所述成像剂的所需量。所述量筒在使用前用清洁剂例如异丙醇进行清洁。
[0140] 在一些实例中，将所述成像剂转移到小瓶中，并向所述小瓶添加溶剂。优选地，所使用的溶剂是水。优选地，使用任何适合的有机或无机溶剂例如醇溶剂。优选地，通过以700 rpm至900 rpm、或800 rpm搅拌所述溶液，将所述成像剂溶解在所述溶剂中。优选地，通过将所述溶液搅拌5至15分钟、或10分钟，将所述成像剂溶解在所述溶剂中。优选地，在10至30℃、或15至25℃的温度下将所述成像剂溶解在所述溶剂中。
[0141] 在一些实例中，包含所述成像剂的储用溶液被制备成具有浓度为0.01至0.030 mg/mL、或0.015至0.025 mg/mL、或0.019至0.021 mg/mL、或0.020 mg/mL的所述成像剂。
[0142] 在一些实例中，包含所述成像剂的储用溶液被制备成具有浓度为0.020 mg/mL的所述成像剂。优选地，包含吖啶橙的储用溶液被制备成具有浓度为0.020 mg/mL的吖啶橙。
[0143] 在一些实例中，所述成像溶液具有长达一个月的存储寿命。一旦一个月过去，必须制备新鲜的成像溶液。优选地，所述成像溶液避光储存。优选地，所述成像溶液储存在10℃或更低、或5℃或更低、或4℃或更低的温度下。
[0144] 在一些实例中，将所述收集溶液和成像溶液合并以形成一种溶液。
[0145] 将比色皿在组合物中包被的方法
[0146] 本发明还包括一种将比色皿在所述组合物中包被的方法。所述方法包括下述步骤：
[0147] （a）提供包含收集区室和分析区室的比色皿；
[0148] （b）提供收集溶液；
[0149] （c）提供成像溶液；
[0150] （d）用所述收集溶液包被（完全或部分地）所述比色皿的收集区室；
[0151] （e）用所述成像溶液包被（完全或部分地）所述比色皿的分析区室；
[0152] （f）干燥在所述收集区室上所述收集溶液的涂层；和
[0153] （g）干燥在所述分析区室上所述成像溶液的涂层。
[0154] 在用所述收集溶液或成像溶液包被所述比色皿之前，检查每种溶液的存储寿命。
[0155] 在一些实例中，在用所述收集溶液包被所述比色皿的收集区室之前，将所述收集溶液充分混合。优选地，将所述收集溶液混合至均质。然后用移液器将所述收集溶液分配到所述收集区室上。优选地，将10至20 µL、或12.5至17.5 µL、或15 µL的所述收集溶液分配到所述收集区室上。优选地，分配到所述比色皿的收集区室上的收集溶液从所述收集溶液的中间取出。
[0156] 在一些实例中，在用所述成像溶液包被所述比色皿的分析区室之前，将所述成像溶液充分混合。优选地，将所述成像溶液混合至均质。然后用移液器将所述成像溶液分配到所述分析区室上，优选地，将10至20 µL、或12.5至17.5 µL、或15 µL的所述成像溶液分配到所述分析区室上。优选地，分配到所述比色皿的分析区室上的成像溶液从所述成像溶液的中间取出。
[0157] 在一些实例中，使用多通道移液器将所述成像溶液分配到所述分析区室上。优选地，调节所述多通道移液器，使得所述比色皿的第二区室的1至60%的表面积、或10至50%的表面积、或20至40%的表面积、或30至40%的表面积、或35%的表面积被所述成像溶液包被。优选地，调节所述多通道移液器，使得所述分析区室的40至99%的表面积、或50至90%的表面积、或80至40%的表面积、或70至60%的表面积、或65%的表面积未被包被在所述成像溶液中。优选地，调节所述多通道移液器，使得所述成像溶液被放置在所述分析区室的第一端和所述分析区室的第二封闭端处，而所述分析区室的存在于所述分析区室的第一端与所述分析区室的第二封闭端之间的一部分不分配成像溶液。优选地，存在于所述分析区室的第一端处的成像溶液的比例大于存在于所述分析区室的第二封闭端处的成像溶液的比例。优选地，存在于所述分析区室的第一端处的成像溶液与存在于所述分析区室的第二封闭端处的成像溶液的比例为5:3至5:4。优选地，所述分析区室具有四个相对侧壁，并且所述成像溶液存在于所述四个相对侧壁中的至多一者上。优选地，所述分析区室具有四个相对侧壁，并且所述成像溶液存在于所述四个相对侧壁中的至多一者上，其中所述成像溶液存在于所述分析区室的第一（开口）端处的侧壁上，存在于所述分析区室的第二（封闭）端处的侧壁上，并且不存在于所述分析区室的第一（开口）端与第二（封闭）端之间的侧壁的中间区域处。
[0158] 在可选实例中，使用单个移液器将所述成像溶液分配到所述分析区室上。优选地，调节所述单个移液器，使得所述比色皿的第二区室的1至60%的表面积、或10至50%的表面积、或20至40%的表面积、或30至40%的表面积、或35%的表面积被所述成像溶液包被。优选地，调节所述单个移液器，使得所述分析区室的40至99%的表面积、或50至90%的表面积、或80至40%的表面积、或70至60%的表面积、或65%的表面积未被包被在所述成像溶液中。优选地，调节所述单个移液器，使得所述成像溶液被放置在所述分析区室的第一端和所述分析区室的第二封闭端处，而所述分析区室的存在于所述分析区室的第一端与所述分析区室的第二封闭端之间的一部分不分配成像溶液。优选地，存在于所述分析区室的第一端处的成像溶液的比例大于存在于所述分析区室的第二封闭端处的成像溶液的比例。优选地，存在于所述分析区室的第一端处的成像溶液与存在于所述分析区室的第二封闭端处的成像溶液的比例为5:3至5:4。优选地，所述分析区室具有四个相对侧壁，并且所述成像溶液存在于所述四个相对侧壁中的至多一者上。优选地，所述分析区室具有四个相对侧壁，并且所述成像溶液存在于所述四个相对侧壁中的至多一者上，其中所述成像溶液存在于所述分析区室的第一（开口）端处的侧壁上，存在于所述分析区室的第二（封闭）端处的侧壁上，并且不存在于所述分析区室的第一（开口）端与第二（封闭）端之间的侧壁的中间区域处。
[0159] 在一些实例中，在将所述收集溶液分配到所述收集区室上之后，将所述收集溶液和收集区室干燥。优选地，通过将所述收集溶液和收集区室暴露于热来进行干燥。优选地，将所述收集溶液和收集区室在40至80℃、或50至70℃、或60℃的温度下暴露于热。优选地，将所述收集溶液和收集区室暴露于热1至20分钟、或5至15分钟、或10分钟的时间段。
[0160] 在一些实例中，在将所述成像溶液分配到所述分析区室上之后，将所述成像溶液和分析区室干燥。优选地，通过将所述成像溶液和分析区室暴露于热来进行干燥。优选地，将所述成像溶液和分析区室在40至80℃、或50至70℃、或60℃的温度下暴露于热。优选地，将所述成像溶液和分析区室暴露于热1至20分钟、或5至15分钟、或10分钟的时间段。
[0161] 在一些实例中，将所述收集溶液和成像溶液同时在所述收集区室和分析区室上干燥。优选地，通过将所述收集溶液、成像溶液、收集区室和分析区室暴露于热来进行干燥。优选地，将所述收集溶液、成像溶液、收集区室和分析区室在40至80℃、或50至70℃、或60℃的温度下暴露于热。优选地，将所述收集溶液、成像溶液、收集区室和分析区室暴露于热1至20分钟、或5至15分钟、或10分钟的时间段。
[0162] 在一些实例中，所述包被的比色皿可以存放在无尘环境中。优选地，储存温度为10至30℃、或15至25℃。优选地，储存的相对湿度为20%至70%相对湿度、或30%至60%相对湿度。
[0163] 在一些实例中，所述比色皿由固定在一起形成比色皿的两个部分组成。通过将比色皿作为两个部分提供，在包被收集区室和分析区室的过程中可以容易地接近所述收集区室和分析区室。有利的是，这允许在所述分析区室中形成所述成像溶液的均质涂层。
[0164] 使用组合物包被的比色皿的方法
[0165] 所述组合物包被的比色皿可用于样品例如血液样品的光学分析。为了对样品进行光学分析，将遵循下述步骤：
[0166] （a）将样品置于比色皿内；
[0167] （b）将样品与收集溶液混合；
[0168] （c）将来自步骤1的混合物引入到成像溶液中；
[0169] （d）对来自步骤2的混合物施加离心力；
[0170] （e）将所述混合物暴露于光辐射；和
[0171] （f）获得所述混合物的光学图像。
[0172] 在一些实例中，在步骤（b）之前从所述样品的中间取出一部分样品。
[0173] 在一些实例中，在步骤（b）期间所述收集溶液存在于所述比色皿的收集区室上，并且步骤（b）在所述比色皿的收集区室中进行。在一些实例中，在步骤（c）期间所述成像溶液存在于所述比色皿的分析区室上，并且步骤（c）在所述比色皿的分析区室中进行。
[0174] 在一些实例中，在步骤（d）期间，所述混合物在Entia LibertyTM装置中经受离心力。优选地，所述混合物经受1000至2000 rpm、或1500 rpm的离心力。优选地，所述混合物在室温下经历离心力。优选地，所述混合物在15至40℃、或16至30℃、或18至25℃、或20至22℃、或20℃下经历离心力。优选地，所述混合物经历离心力至多30分钟、或至多25分钟、或至多20分钟、或至多15分钟、或至多10分钟。优选地，所述混合物在室温下，在提供1500 rpm的TM离心力的Entia Liberty 装置中经历至多20分钟的离心力。
[0175] 在一些实例中，在步骤（e）期间，将所述混合物暴露于来自LED光源的波长为460 nm的光辐射。优选地，将所述混合物在室温下暴露于光辐射。优选地，将所述混合物暴露于光辐射至多15分钟、或至多10分钟、或至多5分钟。优选地，将所述混合物在室温下暴露于来自LED光源的波长为460 nm的光辐射至多5分钟。
[0176] 在一些实例中，步骤（e）和（f）在所述样品在比色皿内时进行。
[0177] 在一些实例中，分析所述光学图像以将所述在步骤（f）中获得的图像的像素计数转变成细胞计数。
[0178] 实施例
[0179] 下面是参考表格和附图讨论本发明的至少一些优点的非限制性实施例。本文阐述的实施例是非限制性实例，仅仅是其他可能实例中的实例。
[0180] 实施例1：制备组合物
[0181] 在下面的非限制性实施例中，制备了包含收集溶液和成像溶液的组合物。所述收集溶液和成像溶液分别制备。
[0182] 在这个非限制性实施例中，制备了包含聚乙烯吡咯烷酮、草酸钾、乙二胺四乙酸二钾盐脱水物、普朗尼克P‑123和水的收集溶液。所述收集溶液从每种组分的储用溶液制备。
[0183] 在这个非限制性实例中，制备了包含吖啶橙和水的成像溶液。所述成像溶液从吖啶橙的储用溶液制备。
[0184] 在所述收集和成像溶液中使用的每种组分的储用溶液均单独制备。为了制备所述储用溶液，将所述收集和成像溶液的每种组分在单独的一次性托盘中分别称重，然后在单独的干净空小瓶中与相应体积的水混合。一旦将所述收集和成像溶液的每种组分加入水中，通过称量托盘来验证每种储用溶液的浓度，以确保没有留下残留物（留下的残留物的最大量为0.005 g）。
[0185] 通过充分搅拌，任何粉末状试剂都完全溶解在水中。
[0186] 组分普朗尼克P‑123最初是凝胶块。为了将普朗尼克P‑123溶解在水中，将普朗尼克P‑123在15至25℃的室温和30至60%RH的相对湿度下以800 rpm搅拌10分钟。稀释度随着温度升高而增加，然而仔细地监测温度以确保它不超过35℃。
[0187] 表1阐述了制备的每种储用溶液的浓度。
[0188] 表1：用于制备收集溶液和成像溶液的每种储用溶液的浓度（conc.）。
[0189]
[0190] 通过将聚乙烯吡咯烷酮、草酸钾、乙二胺四乙酸二钾盐脱水物、普朗尼克P‑123的储用溶液与水合并以获得表2中阐述的浓度，来制备所述收集溶液。在将所述储用溶液合并后，将所述溶液混合，使得得到的收集溶液整体均质。
[0191] 通过用水将吖啶橙的储用溶液稀释至所需浓度来制备所述成像溶液。在所述储用溶液被稀释后，将所述溶液混合，使得得到的成像溶液整体均质。
[0192] 所述收集溶液和成像溶液中每种组分的浓度列于表2中。
[0193] 表2：在收集溶液和成像溶液中使用的每种组分的浓度（conc.）。每种组分源自储用溶液。
[0194]
[0195] 在形成后，将所述收集溶液和成像溶液分别保存（即不混合），直至使用。
[0196] 实施例2：用收集溶液包被比色皿的收集区室
[0197] 在下面的非限制性实施例中，用所述收集溶液包被所述比色皿的收集区室。所述比色皿由两个部分形成，它们固定在一起形成所述比色皿。
[0198] 在这个非限制性实施例中，遵照下述方法将所述比色皿部分的收集区室在所述收集溶液中包被：
[0199] （a）搅拌所述收集溶液；
[0200] （b）用移液器从所述收集溶液的中间抽取15 µL收集溶液；
[0201] （c）将来自步骤（b）的15 µL收集溶液分配到所述比色皿部分的收集区室的表面上，所述表面在图1中描绘和下文描述的接受限度内；和
[0202] （d）然后将所述收集溶液和所述比色皿的收集区室干燥。
[0203] 图1示出了具有收集溶液涂层（150）的比色皿部分的收集区室（160）。图1示出了具有可接受的收集溶液涂层的两张图像（110、120）。如图1中所示，将收集溶液分配到收集区室上的可接受限度是整个所述收集区室被包被（110）或所述收集区室的整个长度被包被（120）。通过将收集溶液置于可接受的限度内，确保了样品的轻松收集。图1还示出了具有不可接受的收集溶液涂层的两张图像（130、140）。如图1中所示，不可接受的限度是所述收集溶液不覆盖所述收集区室的第一端和第二端（130）。所述收集溶液需要存在于可以帮助收集样品并有助于保持样品完整性的区域中。所述收集溶液不覆盖所述收集区室的第一端和/或第二端时，所述收集溶液无法执行此功能。第二个不可接受的限度是所述收集溶液延伸到超过所述收集区室的第二端（140）。所述收集溶液延伸到超过所述收集区室的第二端时，所述收集溶液堵塞所述比色皿中的排气口，从而阻止样品进入所述分析区室：样品将只进入所述收集区室。
[0204] 为了干燥所述收集溶液和收集区室，将所述收集溶液和收集区室在通用烘箱中暴露于60℃温度下的热10分钟。在所述干燥步骤中，不将比色皿堆叠在其他比色皿顶上，并进行保护以免灰尘粒子污染。
[0205] 在将所述收集溶液包被在所述比色皿部分的收集区室上之后，可以将成像溶液包被在所述比色皿部分的分析区室上。或者，在将收集溶液包被在所述比色皿部分的收集区室上之前，可以将成像溶液包被在所述比色皿部分的分析区室上。在所述比色皿部分的收集和分析区室已分别用所述收集和成像溶液包被后，将所述两个比色皿部分固定在一起，形成完整的比色皿。
[0206] 实施例3：用成像溶液包被比色皿的分析区室
[0207] 在下述非限制性实施例中，用所述成像溶液包被所述比色皿的分析区室。所述比色皿由两个部分形成，它们固定在一起形成所述比色皿。一个部分在其内表面上具有凹陷，形成了所述分析区室的四个相对侧壁中的三个；这三个侧壁中只有中间壁被所述成像溶液部分包被。另外两个壁和另一个比色皿部分未被包被。另一个比色皿部分是基本上光滑或平坦的。在所述一个比色皿部分的内表面上的凹陷使得当将所述两个部分固定在一起时，所述收集区室和分析区室存在于所述比色皿的主体内。通过将所述比色皿分为两个部分提供，可以在包被过程中容易地接近所述分析区室。
[0208] 在这个非限制性实施例中，遵照下述方法将所述比色皿的分析区室在所述成像溶液中包被：
[0209] （a）搅拌所述成像溶液；
[0210] （b）打开多通道移液器VIAFLO多通道移液器；
[0211] （c）将所述比色皿待包被的部分放置在所述多通道移液器的包被夹具（所述多通道移液器被设计用于放置待包被表面的区域）中；
[0212] （d）将GRIPTIP移液器头以下述顺序插入到所述多通道移液器中（使（4）最靠近所述分析区室的第一端，（1）最靠近所述分析区室的第二封闭端），总共8个移液器头；图2提供了GRIPTIP的下述排序的描绘：
[0213] （1）2个移液器头（210）;
[0214] （2）3个空位（220）；
[0215] （3）6个移液器头（230）；
[0216] （4）5个空位（240）；
[0217] （e）将GRIPTIPS浸没在所述成像溶液中，并通过所述GRIPTIPS收集3 µL所述成像溶液；
[0218] （f）目视检查所述GRIPTIPS，以确保对于所有GRIPTIPS来说收集到的成像溶液体积是均匀的；
[0219] （g）将所述GRIPTIPS在所述包被夹具上方对齐并降低，以便轻轻触碰所述比色皿部分的分析区室的三个侧壁的中间壁的表面；
[0220] （h）每个GRIPTIP将含有0.94 µL成像溶液的第一液滴分配到所述表面上；
[0221] （i）通过将所述GRIPTIPS在所述分析区室的第二封闭端的方向上移动2 mm，将所述GRIPTIPS重新对齐；
[0222] （j）每个GRIPTIP将含有0.94 µL成像溶液的第二液滴分配到所述表面上；和[0223] （k）然后将所述成像溶液和所述比色皿部分的分析区室干燥。
[0224] 在所述移液器已分配所述第二液滴（步骤（j））后，将所述比色皿部分和GRIPTIPS从所述包被夹具上取下。将所述GRIPTIPS放置在吸水纸巾上方，从所述移液器中除去任何剩余的样品。
[0225] 图3提供了具有收集区室（340）和分析区室（350）的比色皿部分（300）的图像。在图3中，突出了所述分析区室（350）被所述成像溶液包被的区域。如图3中所示，所述分析区室（350）被所述成像溶液包被的部分被标记为310和330，并且所述分析区室未被所述成像溶液包被的部分被标记为320。所述分析区室被所述成像溶液包被的两个部分的长度为22 mm（310）和10 mm（330）。使用15 µL成像溶液，所述分析区室被所述成像溶液包被的总面积为表面积的35%。
[0226] 为了干燥所述成像溶液和分析区室，将所述成像溶液和分析区室在通用烘箱中暴露于60℃温度下的热10分钟。在所述干燥步骤中，不将比色皿堆叠在其他比色皿顶上，并进行保护以免灰尘粒子污染。有利的是，将所述成像溶液包被在所述分析区室上确保所述成像溶液在整个离心时间过程中与所述样品发生接触。结果，将所述成像溶液包被到所述分析区室上降低了样品对所述成像溶液的吸收的可变性。所述成像溶液存在于所述分析区室中，并且由于所述成像溶液被干燥在所述分析区室的表面上，因此不进入所述收集区室。
[0227] 在将所述成像溶液包被在所述比色皿部分的分析区室上之后，可以将收集溶液包被在所述比色皿部分的收集区室上。或者，在将所述成像溶液包被在所述比色皿部分的分析区室上之前，可以将收集溶液包被在所述比色皿部分的收集区室上。在所述比色皿部分的收集和分析区室已分别用所述收集和成像溶液包被后，将所述两个比色皿部分固定在一起，形成完整的比色皿。
[0228] 实施例4：用成像溶液包被比色皿的分析区室
[0229] 在下述非限制性实施例中，用所述成像溶液包被所述比色皿的分析区室。所述比色皿由两个部分形成，它们固定在一起形成所述比色皿。一个部分在其内表面上具有凹陷，形成了所述分析区室的四个相对侧壁中的三个；这三个侧壁中只有中间壁被所述成像溶液部分包被。另外两个壁和另一个比色皿部分未被包被。另一个比色皿部分是基本上光滑或平坦的。在所述一个比色皿部分的内表面上的凹陷使得当将所述两个部分固定在一起时，所述收集区室和分析区室存在于所述比色皿的主体内。通过将所述比色皿分为两个部分提供，可以在包被过程中容易地接近所述分析区室。
[0230] 在这个非限制性实施例中，遵照下述方法将所述比色皿的分析区室在所述成像溶液中包被：
[0231] （a）搅拌所述成像溶液；
[0232] （b）提供单个移液器；
[0233] （c）将所述单个移液器浸没在所述成像溶液中，并通过所述单个移液器收集15 µL所述成像溶液；
[0234] （d）将所述单个移液器置于所述比色皿部分的分析区室的三个侧壁的中间壁的表面上，并将15 µL所述成像溶液分配在横跨所述表面的液滴中，以便实现所述分析区室的包被，其中所述分析区室被所述成像溶液包被的总面积为表面积的35%，并且其中所述涂层在形成所述分析区室的四个侧壁中的一者上，并且所述成像溶液的涂层仅存在于所述分析区室的第一（开口）端处的侧壁末端处和所述分析区室的第二（封闭）端处的侧壁末端处，并且不存在于所述分析区室的第一（开口）端与第二（封闭）端之间的中间区域处；
[0235] （f）然后将所述成像溶液和所述比色皿部分的分析区室干燥。
[0236] 为了干燥所述成像溶液和分析区室，将所述成像溶液和分析区室在通用烘箱中暴露于60℃温度下的热10分钟。在所述干燥步骤中，不将比色皿堆叠在其他比色皿顶上，并进行保护以免灰尘粒子污染。有利的是，将所述成像溶液包被在所述分析区室上确保所述成像溶液在整个离心时间过程中与所述样品发生接触：将所述成像溶液包被到所述分析区室上降低了样品对所述成像溶液的吸收的可变性。所述成像溶液存在于所述分析区室中，并且由于所述成像溶液被干燥在所述分析区室的表面上，因此不进入所述收集区室。
[0237] 在将所述成像溶液包被在所述比色皿部分的分析区室上之后，可以将收集溶液包被在所述比色皿部分的收集区室上。或者，在将所述成像溶液包被在所述比色皿部分的分析区室上之前，可以将收集溶液包被在所述比色皿部分的收集区室上。在所述比色皿部分的收集和分析区室已分别用所述收集和成像溶液包被后，将所述两个比色皿部分固定在一起，形成完整的比色皿。
[0238] 实施例5：分析溶液中凝集剂浓度的影响
[0239] 在下面的非限制性实施例中，分析了溶液中存在的凝集剂对获得的图像的影响。在本实施例中分析的凝集剂是聚乙烯吡咯烷酮。
[0240] 在这个非限制性实施例中，制备包含聚乙烯吡咯烷酮、吖啶橙和水的溶液。所述溶液从聚乙烯吡咯烷酮和吖啶橙的储用溶液制备。所述储用溶液如实施例1中所述来制备。
[0241] 制备了具有三种不同浓度的聚乙烯吡咯烷酮的三种不同溶液。所述聚乙烯吡咯烷酮的三种不同浓度是10.00、20.00和30.00 mg/mL。聚乙烯吡咯烷酮浓度为10.00 mg/mL的溶液被标记为溶液1，聚乙烯吡咯烷酮浓度为20.00 mg/mL的溶液被标记为溶液2，聚乙烯吡咯烷酮浓度为30.00 mg/mL的收集溶液被标记为溶液3。然后通过将聚乙烯吡咯烷酮、吖啶橙的储用溶液与水合并以达到表3中阐述的浓度来制备所述溶液。在将所述储用溶液合并后，将所述溶液混合，使得得到的溶液整体均质。
[0242] 表3：溶液中每种组分的浓度
[0243]
[0244] 将玻璃毛细管（Microslide 0.3×0.5 mm玻璃毛细管）在所述溶液中包被。不同的溶液使用不同的玻璃毛细管。玻璃毛细管通过下述方法包被：
[0245] （a）搅拌所述溶液；
[0246] （b）用移液器从所述溶液的中间抽出50 µL所述溶液；
[0247] （c）将来自步骤（b）的50 µL溶液分配到所述玻璃毛细管上；并且
[0248] （d）将所述溶液和玻璃毛细管干燥。
[0249] 为了将所述溶液在所述玻璃毛细管上干燥，将所述溶液和玻璃毛细管在通用烘箱中暴露于60℃温度下的热10分钟。
[0250] 在所述玻璃毛细管已在所述溶液中包被后，将静脉血样品插入到用溶液1包被的玻璃毛细管中。将所述玻璃毛细管与所述血液样品一起放置在实验室离心机中，在室温下以3000G运行5分钟。在所述离心过程中，所述血液样品分离成血小板、无颗粒白细胞、粒细胞和红细胞层。使用Nikon D5100相机拍摄分离的血液样品的图像。所述图像使用在室温下以460 nm的波长运行LED灯产生。对用溶液2或溶液3包被的每个玻璃毛细管进行相同的程序。然后对16个样品重复所述实验。
[0251] 分析结果示出在图4中。标记为410的图像对应于溶液1，标记为420的图像对应于溶液2，标记为430的图像对应于溶液3。
[0252] 实施例6：分析溶液中抗凝血剂浓度的影响
[0253] 在下面的非限制性实施例中，分析了溶液中的抗凝血剂对获得的图像的影响。在本实施例中分析的抗凝血剂是乙二胺四乙酸二钾盐。
[0254] 在这个非限制性实施例中，制备包含乙二胺四乙酸二钾盐脱水物、聚乙烯吡咯烷酮、吖啶橙和水的溶液。所述溶液从每种组分的储用溶液制备。所述储用溶液如实施例1中所述来制备。制备含有聚乙烯吡咯烷酮的储用溶液，使得聚乙烯吡咯烷酮以3.0 mg/mL的浓度存在，并制备含有吖啶橙的储用溶液，使得吖啶橙以0.02 mg/mL的浓度存在。
[0255] 分析了具有两种不同浓度的乙二胺四乙酸二钾盐脱水物的两种不同溶液。所述乙二胺四乙酸二钾盐脱水物的两种不同浓度是7.00和19.00 mg/mL。所述乙二胺四乙酸二钾盐脱水物浓度为7.00 mg/mL的溶液被标记为溶液4，所述乙二胺四乙酸二钾盐脱水物浓度为19.00 mg/mL的溶液被标记为溶液5。然后通过将乙二胺四乙酸二钾盐脱水物、聚乙烯吡咯烷酮、吖啶橙的储用溶液与水合并以达到表4中阐述的浓度来制备所述溶液。在将所述储用溶液合并后，将所述溶液混合，使得得到的溶液整体均质。
[0256] 表4：溶液中每种组分的浓度
[0257]
[0258] 将玻璃毛细管（Microslide 0.3×0.5 mm玻璃毛细管）在所述溶液中包被。不同的溶液使用不同的玻璃毛细管。玻璃毛细管通过下述方法包被：
[0259] （a）搅拌所述溶液；
[0260] （b）用移液器从所述溶液的中间抽出50 µL所述溶液；
[0261] （c）将来自步骤（b）的50 µL溶液分配到所述玻璃毛细管上；并且
[0262] （d）将所述溶液和玻璃毛细管干燥。
[0263] 为了将所述溶液在所述玻璃毛细管上干燥，将所述溶液和玻璃毛细管在通用烘箱中暴露于60℃温度下的热10分钟。
[0264] 在所述玻璃毛细管已在所述溶液中包被后，将静脉血样品插入到用溶液4包被的玻璃毛细管中。将所述玻璃毛细管与所述血液样品一起放置在实验室离心机中，在室温下以3000G运行5分钟。在所述离心过程中，所述血液样品分离成血小板、无颗粒白细胞、粒细胞和红细胞层。使用Nikon D5100相机拍摄分离的血液样品的图像。所述图像使用在室温下以460 nm的波长运行LED灯产生。对用溶液5包被的每个玻璃毛细管进行相同的程序。然后对12个样品重复所述实验。
[0265] 结果显示，包含高浓度乙二胺四乙酸二钾盐脱水物的溶液损伤所分析样品中的细胞。
[0266] 实施例7：比较本发明的组合物与不同的组合物（不根据本发明）
[0267] 在这个非限制性实施例中，将包被在比色皿上的与本发明的组合物类似的溶液与用不同组合物（不根据本发明）包被的比色皿进行比较。
[0268] 所述不根据本发明的溶液是在US6365104B1中描述的溶液。所述在US6365104B1中描述的溶液包含肝素钠、乙二胺四乙酸二钾盐脱水物、吖啶橙和草酸钾。表5阐述了来自US6365104B1的溶液中每种组分的质量和相应的浓度。
[0269] 表5：US6365104B1中的溶液中存在的每种组分的质量和相应的浓度
[0270]
[0271] 然后使用下述浓度制备复制US6365104B1中溶液的溶液：6.000 mg/mL的草酸钾、76.0 USP/mL的肝素钠、7.0 mg/mL的乙二胺四乙酸二钾盐脱水物和10 mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮，以及0.110 mg/mL的吖啶橙。将聚乙烯吡咯烷酮包含在复制US6365104B1中的组合物的组合物中，因为聚乙烯吡咯烷酮存在于本发明的组合物中。
[0272] 然后以溶液中存在的下述浓度制备与本发明的组合物类似的溶液：6.000 mg/mL的草酸钾、7.0 mg/mL的乙二胺四乙酸二钾盐脱水物、10 mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮和0.110 mg/mL的吖啶橙。
[0273] 所述溶液从实施例1中所阐述的储用溶液制备。然后通过将每种组分的储用溶液合并以达到上述浓度来制备所述溶液。在将所述储用溶液合并后，将所述溶液混合，使得得到的收集溶液整体均质。
[0274] 然后将玻璃毛细管（Microslide 0.3×0.5 mm玻璃毛细管）在所述溶液中包被。不同的溶液使用不同的玻璃毛细管。玻璃毛细管通过下述方法包被：
[0275] （a）搅拌所述溶液；
[0276] （b）用移液器从所述溶液的中间抽出50 µL所述溶液；
[0277] （c）将来自步骤（b）的50 µL溶液分配到所述玻璃毛细管上；并且
[0278] （d）将所述溶液和玻璃毛细管干燥。
[0279] 为了将所述溶液在所述玻璃毛细管上干燥，将所述溶液和玻璃毛细管在通用烘箱中暴露于60℃温度下的热10分钟。
[0280] 在所述玻璃毛细管已在所述溶液中包被后，将静脉血样品插入到用来自US6365104B1的溶液包被的玻璃毛细管中。将所述玻璃毛细管与所述血液样品一起放置在实验室离心机中，在室温下以3000G运行5分钟。在所述离心过程中，所述血液样品分离成血小板、无颗粒白细胞、粒细胞和红细胞层。使用Nikon D5100相机拍摄分离的血液样品的图像。所述图像使用在室温下以460 nm的波长运行LED灯产生。对用与本发明的组合物类似的溶液包被的玻璃毛细管进行相同的程序。
[0281] 分析的结果如图5中所示。来自US6365104B1的溶液被标记为510，与本发明的组合物类似的溶液被标记为520。如图5中所示，与本发明的组合物类似的溶液提高了获得的血液样品图像的清晰度。
[0282] 实施例8：分析将成像溶液放置在分析区室的第一端和第二封闭端处（而不是中间）的影响
[0283] 在这个非限制性实施例中，分析了将所述成像溶液放置成朝向或在所述分析区室的第一（开口）端处和朝向或在第二（封闭）端处（而不是中间部分）的影响。
[0284] 在这个非限制性实施例中，所述收集和成像溶液如实施例1中所述制备，并且比色皿如实施例2和3中所述包被。所述比色皿由两个部分形成，它们固定在一起形成所述比色皿。
[0285] 将另一个比色皿用所述收集和成像溶液包被。所述比色皿由两个部分形成，它们固定在一起形成所述比色皿。一个部分在其内表面上具有凹陷，所述凹陷形成所述收集和分析区室的四个相对侧壁中的三者。另一个部分是基本上光滑或平坦的，并形成所述收集和分析区室的第四个相对侧壁。将所述收集区室如实施例2中所述用所述收集溶液包被。然后，用所述成像溶液包被所述比色皿的分析区室。所述具有凹陷的比色皿部分上的成像溶液涂层不限于仅存在于所述比色皿部分的分析区室的三个侧壁的中间壁的第一（开口）端和第二（封闭）端处，而不存在于其中间部分处（如实施例3所述）。通过不限制所述成像溶液涂层在所述比色皿部分上的位置，当将所述比色皿的两个部分固定在一起时，一部分成像溶液可能会被捕获在所述比色皿部分之间。因此，当血液样品进入所述分析区室时，所述成像溶液被捕获的部分不能进入所述血液样品，而是仍然被捕获在所述比色皿的两个部分之间。
[0286] 然后将静脉血样品插入到每个组装的比色皿中，并分别将每个比色皿与血液样品TM一起放置在Entia Liberty 装置中。对于每个比色皿和血液样品而言，所述装置在室温下以1500 rpm运行20分钟。所述样品被分离为血小板、无颗粒白细胞、粒细胞和红细胞层。然TM
后将仍然在Entia Liberty 装置中的血液样品在室温下暴露于以460 nm的波长运行的LED光源五分钟，并获得所述样品的图像。
[0287] 图6示出了为成像溶液涂层不限于仅存在于所述比色皿部分的分析区室的三个侧壁的中间壁的第一（开口）端和第二（封闭）端处，而不存在于其中间部分处的比色皿获得的图像（610、620和630）。正如可以在图6中看到的，在得到的图像中存在光束。
[0288] 有利的是，通过将所述成像溶液放置成朝向或在所述比色皿部分的分析区室的三个侧壁的中间壁的第一（开口）端处和朝向或在第二（封闭）端处（而不是中间部分），从所述血沉棕黄层的所需图像中除去了光束。所述分析区室未被所述成像溶液包被的部分对应于所分离的血液样品的血沉棕黄层的位置。包被所述比色皿的过程是手动过程，它不能确保在所述侧壁上没有涂层，因此所述成像溶液在所述三个侧壁的中间壁上的位置受到限制。光束（在610、620和630中）对应于在用于将两个比色皿部分固定在一起的固定过程中被胶黏剂捕获的成像溶液。通过（a）仅将所述成像溶液放置在所述具有凹陷的比色皿部分的分析区室的三个侧壁的中间壁上，以及（b）不将所述成像溶液放置在所述分析区室的中间壁的中间部分中，可以去除或减少获得的样品图像中的光束。
[0289] 进一步有利的是，将所述成像溶液包被在所述分析区室上。因此，在整个离心和成像过程中，所述成像溶液与所述生物样品接触，从而允许所述成像剂的工作机制高效工作。
[0290] 进一步有利的是，通过不用所述成像溶液包被所述收集区室，不会在所述收集区室中留下所述成像溶液的残留物，从而减少了在获得的图像之间观察到的可变性。
[0291] 在上面的描述或下面的权利要求书或附图中公开，以其特定形式或根据执行所公开的功能的手段或实现所公开的结果的方法或过程来表述的特点，视情况而定可以单独地或以这些特点的任何组合用于实现本发明的各种形式。
[0292] 尽管已经描述了本发明的某些示例性方面，但随附的权利要求的范围并不意图仅限于这些实例。权利要求书应按字面意思、有目的地解释和/或涵盖等效物。
