[0001] 本发明属于琥珀酸酐淀粉纳米晶制备工艺技术领域，涉及一种十二烯基琥珀酸酐淀粉纳米晶的制备方法，还涉及一种十二烯基琥珀酸酐淀粉纳米晶用于制备活性薄膜液及其用于水果保鲜的用途。

[0002] 早酥梨、苹果等水果在生长、储藏过程中，容易收到入互隔交联孢子、青霉等真菌的侵染。通过食品包装是防止真菌侵染及繁殖的方法之一，但塑料包装已造成了严重的环境污染，因此亟需找到食品包装的替代方案。百里香酚是百里香、牛至精油等多种植物精油中常见的物质，具有抑菌和抗氧化作用，可在水果保藏过程中用于抑制水果的氧化和微生物的生长。但百里香酚具有高疏水性，并且容易挥发，短时间内大量的挥发会导致储藏环境中百里香酚浓度较高，导致被保藏的水果发生药害。

[0003] Pickering乳液是一种由固体颗粒代替表面活性剂稳定的稳定乳液体系。固体颗粒不可逆地吸附在乳液的油水界面上，可以有效地防止乳液液滴的聚集，并赋予Pickering乳液更好的物理稳定性。然而，它们的吸附机理是不同的，大多数固体颗粒并不是两亲性的，主要依靠水和油对固体颗粒表面的部分润湿性使固体颗粒稳定在乳液中，当固体颗粒被油相和水相均等润湿时时，脱吸附能最高，乳液稳定性最强。淀粉纳米晶（starch nanocrystals）可以通过物理处理或酸水解方法去除掉洋葱状的淀粉颗粒中的无定形部分而获得，是对酸具有一定抗性的纳米片层状晶体。淀粉纳米晶具有较好的刚性，适合于稳定Pickering乳液。尤其是两亲性的酯化淀粉纳米晶稳定的百里香酚Pickering乳液可以使疏水挥发性活性物质具有优异的稳定性，减少活性膜形成过程中百里香酚的损失，并限制其在活性膜中的突然性释放。

[0004] 本发明首先通过大气压等离子体（APPJ）协同处理十二西基琥珀酸酐（DDSA）酯化淀粉纳米晶（SNC）反应，提高了DDSA‑SNC的取代度，增强了其疏水性质，使其具有两亲性。制备的DDSA‑SNC可用于稳定百里香酚Pickering乳液，并将其均匀的分布在淀粉膜液中。膜液干燥后，对百里香酚起到固定作用，延缓了百里香酚的释放速率，延长了释放时间。该方法有效的控制了百里香酚的释放过程，延长了早酥梨的储藏时间。将百里香酚用Pickering乳液封装后，将其均匀的分布在涂膜液中。

[0005]

[0020]下面结合具体的实施例对本发明进行进一步介绍。

[0021] 实施例1：如图1‑29所示，一种十二烯基琥珀酸酐淀粉纳米晶的制备方法，该方法为：淀粉纳米晶制备为悬浮液后，加入十二烯基琥珀酸酐（DDSA）乙醇溶液与淀粉纳米晶发生酯化反应，在酯化反应的过程中同时进行常压等离子体射流（APPJ）处理，反应结束后，离心并洗涤，冷冻干燥后得到十二烯基琥珀酸酐淀粉纳米晶；具体方法为：取1g制备的SNC，加入30 mL50%乙醇溶液，水浴超声震荡30min得到SNC悬浮液。将1gDDSA在5mL容量瓶中用无水乙醇定容，配置成浓度为0.2g/mL的DDSA‑乙醇溶液。将400μL的DDSA‑乙醇溶液逐滴添加至SNC悬浮液中，在35℃下以200r/min的转速分别搅拌发生酯化反应，在加入DDSA‑乙醇溶液反应结束前的24min内用APPJ处理，其中，APPJ处理功率为300w，气流20mL/s，整个反应时间为3h，反应过程中用0.1mol/L的NaOH调节反应溶液pH，使反应溶液pH维持在8.5‑9.5之间，反应结束用0.1mol/L的HCl调节pH至6.8以结束反应，离心并用70%乙醇、无水乙醇分别洗涤3次，冷冻干燥后备用。

[0022] 实施例2：采用实施例1中制备的DDSA‑SNC来制备活性薄膜液的制备方法，该方法为：将DDSA‑SNC稳定的Pickering乳液与马铃薯淀粉成膜基质共混获得活性薄膜液。

[0023] 其中，DDSA‑SNC稳定的Pickering乳液的具体制备方法为：用十二烯基琥珀酸淀粉纳米晶作为稳定剂制备百里香酚混合液（THY），通过使用高速均质器（IKA T18 Ultra‑Turrax，Staufen，德国）在室温下以 10000 rpm 的转速混合 5 mL蒸馏水和5 mL百里香酚溶液，均质3次，每次1min，其中，百里香酚与无水乙醇质量比为1：2。均质前在百里香酚混合液THY中添加0.25g 十二烯基琥珀酸酐淀粉纳米晶，均质后制备得到Pickering乳液。

[0024] 其中，马铃薯淀粉膜液（ps）的制备方法为：将100g马铃薯淀粉与2mL甘油、100mL蒸馏水混合，并在90℃下水浴30min，并连续搅拌（200r/min）至完全糊化，后冷却备用。

[0025] 在马铃薯淀粉膜液中加入4% Pickering乳液搅拌均匀后得到成膜液。

[0026] 实施例3：制备的一种活性薄膜液溶液涂覆在水果表面保鲜的应用，具体的将早酥梨放入1.5%次氯酸钠中浸泡1分钟消毒，并用无菌水冲洗干净，将活性薄膜液溶液涂覆在早酥梨上形成活性薄膜。

[0027] 为了说明本发明的效果，进行如下实验验证：1实验方法
1.1淀粉纳米晶的制备
马铃薯淀粉纳米晶（SNC）的制备方法：将250g马铃薯淀粉与1000mL硫酸溶液
（3.16M）混合，并在40℃下以200r/min的转速搅拌7d。水解结束后离心，并用蒸馏水反复洗涤至洗涤液pH为7，冷冻干燥后得到SNC。

[0028] 1.2APPJ辅助制备DDSA‑SNC取1g制备的SNC，加入30 mL50%乙醇溶液，水浴超声震荡30min得到SNC悬浮液。将
1gDDSA在5mL容量瓶中用无水乙醇定容，配置成浓度为0.2g/mL的DDSA‑乙醇溶液。将400μL的DDSA‑乙醇溶液逐滴添加至SNC悬浮液中，在35℃下以200r/min的转速分别搅拌，反应得到的8�SA‑SNC标记为NT。在DDSA‑乙醇溶液的酯化反应结束前的0 24min用APPJ处理，得~
到的8�SA‑SNC标记为E‑24。APPJ处理功率为300w，气流20mL/s，整个反应时间为3h，且整个过程中用0.1mol/L的NaOH调节pH，使pH维持在8.5‑9.5之间。反应后用0.1mol/L的HCl调节pH至6.8以结束反应。反应结束后，离心并用70%乙醇、无水乙醇分别洗涤3次，冷冻干燥后备用。

[0029] 1.3Pickering乳液的制备使用十二烯基琥珀酸淀粉纳米晶作为稳定剂制备百里香酚混合液（THY），通过使用高速均质器在室温下以 10,000 rpm 的转速混合 5 mL蒸馏水、5 mL百里香酚溶液（百里香酚与无水乙醇质量比为1：2）均质3次，每次1min，得到样品THY。均质前在混合液中加入一定量的SNC、NT、E‑24，制备得到Pickering乳液SNC/THY、NT/THY、E‑24/THY。

[0030] 1.4复合薄膜液的制备马铃薯淀粉膜液（ps）的制备方法是将100g马铃薯淀粉与2mL甘油、100mL蒸馏水混合，并在90℃下水浴30min，并连续搅拌（200r/min）至完全糊化，后冷却备用。在ps中分别加入4% CE（粗乳液）、4% PE搅拌均匀后分别得到ps/ce、ps/pe膜液。

[0031] 粗乳液及Pickering乳液的制备方法为：使用十二烯基琥珀酸淀粉纳米晶作为稳定剂制备百里香酚混合液，通过使用高速均质器在室温下以 10,000 rpm 的转速混合 5 mL蒸馏水、5 mL百里香酚溶液（百里香酚与无水乙醇质量比为1：2）均质3次，每次1min。均质前分别在THY中添加0.25g E‑24与0.25g吐温，均质后制备得到PE（Pickering乳液）及CE（粗乳液）保存备用。

[0032] 1. 5水果涂膜应用将早酥梨放入1.5%次氯酸钠中浸泡1分钟消毒，并用无菌水冲洗干净。根据1.4的
方法制备了 3 种不同的成膜溶液用于早酥梨果实涂层。然后将所有早酥梨随机分为 3 组，即 PS、PS/CE和 PS/PE。分别于贮藏第0、1、7、14、21、28天取早酥梨果实赤道部、表皮下
1cm的果肉组织。将果实组织加入液氮中保存于‑80℃冰箱中，以供进一步的生理指标分析。

[0033] 2实验结果2.1 DDSA‑SNC特性分析
如图1a所示，DDSA酯化后纳米颗粒的粒径减小，当加入APPJ处理后，粒径显著降低了18.6%，粒径的分布逐渐从2个峰变转化为1个峰。说明大颗粒的DDSA‑SNC被APPJ处理后解聚，体积减小， PDI显著降低，而协同处理的作用效果更明显。这可能是由于等离子体生成过程中产生的高能物质轰击SNC的表面，造成颗粒表面刻蚀或解聚。E‑24的电位比NT显著增加了24%，这主要是由于APPJ处理使α‑1,6糖苷键断裂，暴露更多的反应位点，提高了DDSA的‑
取代度，颗粒表面带负电的‑COO 基团增加，导致颗粒负电位降低，另一方面是因为APPJ处理过程中，空气中的氧气电离并氧化DDSA‑SNC颗粒，使电位降低。不同处理的SNC、DDSA‑SNC‑1 ‑1
具有相似的FT‑IR光谱，SNC葡萄糖单元特征峰包括2878cm 处的伸缩振动、1 650 cm 处的‑1
C‑O的伸缩振动、1248cm 处的C‑H弯曲振动，在不同处理下基本保持不变，说明葡萄糖单元‑1
的结构相对稳定，APPJ处理不会破坏其结构。DDSA取代的SNC在1545、1363cm 处逐渐出现新的峰，这是由于DDSA基团引入后，‑COO‑、C=C基团的伸缩振动引起的，2930cm处的峰逐渐增加，是由于长脂肪连上的‑CH3伸缩振动产生的，而E‑24的1545cm处峰值的增加说明DDSA‑SNC中具有更多的‑COO‑基团，即反应后APPJ处理比反应前APPJ处理，对于提高取代度有更‑1
好的效果。SNC、DDSA‑SNC的FTIR图谱中‑OH伸缩振动引起的3000‑3600cm 处的峰都由于APPJ的处理逐渐变深、变宽，这可能是由于APPJ处理使糖苷键‑C‑O‑C‑断裂后引入‑OH基团‑1
导致的，928 cm 处‑C‑O‑C‑伸缩振动峰的减弱也证明了这一点，所以APPJ的处理均会导致葡萄糖单元‑C‑O‑C‑糖苷键的断裂而使SNC解聚，而APPJ与DDSA共同处理相比于APPJ反应前处理，可使糖苷键断裂的数量增多。

[0034] FTIR结果说明APPJ处理破坏了SNC的有序度，解聚SNC从而暴露出更多的取代位点，促进DDSA的取代反应，H‑NMR图谱的特征峰进一步量化了这一结果。如图2所示，5.5、5.38、4.57、3.76‑3.47ppm处的峰分别为OH2、OH3、OH1、H2‑H6处的特征峰，α‑1,4糖苷键上的异头H质子的峰出现在5.12ppm，可以作为与疏水性取代基的积分信号进行比较的参考。亚甲基峰出现在1.23ppm处，与1.3.2中的结果（1.02ppm）有偏移，可能是由于DDSA基团中的亚甲基脂肪链是疏水性的，它们可能在水性介质中缔合和聚集，导致峰发生偏移。0.85ppm处的峰为DDSA长脂肪链上的‑CH3。通过计算末端甲基上的3个质子与脱水葡萄糖单元(AGU)上的
4个质子的信号强度比，0.86 ppm 峰值处以及 4.5 至 5.5 ppm 之间的质子强度之比来确定。NT与E‑24的取代度分别为0.0208、0.0342，E‑24比NT的取代度增大了32%，取代效率提升了26.7%，采用滴定法测得的取代度值与NMR图谱分析得出的值基本一致。可能是由于当APPJ处理完后再进行DDSA酯化时，虽然糖苷键断裂后暴露出了更多的反应位点，但是由于空间位阻效应，阻止了反应的进一步进行，所以并不能提高取代度及取代效率；而在反应快结束时进行DDSA酯化及APPJ协同处理，本已反应平衡的体系又不断的暴露出更多的反应位点，从而使剩余的DDSA可以继续进行酯化反应，进一步提高了取代度及取代效率。4.60‑
4.62ppm处的峰为α‑1,6糖苷键上异头氢质子的特征峰，当APPJ处理后，DB（分支度）值从
7.229显著降低到5.330，说明APPJ处理主要通过破坏SNC的α‑1,6糖苷键，使‑C‑O‑C‑键断裂，导致SNC分支度降低并解聚，从而增加了‑OH含量，暴露更多的反应位点，从而提升了DDSA‑SNC的取代度，该结果与FTIR结果一致。

[0035] 图3所示，不同APPJ处理时间的样品在2θ= 17°、22°处有明显的峰，说明SNC经APPJ处理后依然保持了典型的B型晶体结构。但APPJ的处理显著的降低了DDSA‑SNC的相对结晶度，SNC‑24min的相对结晶度降低了SNC的 6.5%。相对结晶度的降低主要是由于APPJ处理的导致了晶体结构的断裂，而SNC的结晶区主要由α‑1,6糖苷键连接的支链淀粉侧链相互聚集形成的双螺旋结构通过氢键缔合形成，说明APPJ处理通过断裂结晶区的α‑1，6糖苷键，破坏双螺旋结构，从而降低了结晶度，导致淀粉有序性降低，这一结果与FTIR、NMR结果一致。SNC的RC值与NT没有差异，说明DDSA单独进行酯化作用时，不会破坏SNC的结晶区，因为DDSA的酯化作用主要发生在无定形区。所以E‑24的RC值显著的低于SNC、NT，则说明DDSA酯化与APPJ同时处理时，对SNC结晶区的破坏有协同作用，由于APPJ处理的能量输入后，SNC的结晶区受损，有利于DDSA基团渗透到晶体区域与SNC分子形成酯键，从而导致晶体结构的破坏。XRD反应结果与FTIR及取代度结果一致。不同APPJ处理时间对DDSA‑SNC吸热转变的特征温度如图4所示，所有样品均显示出一个吸热峰。E‑24D峰值温度及热焓值，分别显著的降低了
7℃、8.13 J/g。说明DDSA酯化及APPJ协同处理过程中破坏了SNC的晶体，并减少了双螺旋结构。这进一步的说明了APPJ对SNC的解聚发生在结晶区，与XRD结果一致；另一方面，ΔH的值往往表示破坏SNC晶体结构需要的热量，也是与晶体结构的完整性有关。

[0036] SEM结果（图5）也观察到了相同的结果，随着APPJ处理时间的增加，DDSA‑SNC颗粒表面出现了明显的刻蚀痕迹。尤其是由于DDSA取代度的提高，E‑24颗粒表面变的粗糙。

[0037] SNC酯化后的NT粒径有所增加，主要是由于接枝DDSA的特征结构后颗粒膨胀造成的，当APPJ协同处理后，E‑24的粒径相对于NT显著降低，粒径的分布从0min的2个峰变转化为1个峰，如图6‑7所示，说明大颗粒的SNC被APPJ处理后解聚，体积减小， PDI显著降低，而协同处理的作用效果更明显。E‑24的电位比NT显著增加了24%，这主要是由于APPJ处理使α‑1,6糖苷键断裂，暴露更多的反应位点，提高了DDSA的取代度，颗粒表面带负电的‑COO‑基团增加，导致颗粒负电位降低。另一方面，是由于APPJ处理过程中，空气中的氧气电离并氧化DDSA‑SNC颗粒，使电位降低。

[0038] 2.2DDSA‑SNC稳定的Pickering乳液特性及稳定性将不同纳米颗粒以10%（相对于THY添加量）的浓度加入THY混合液（THY酒精溶液与蒸馏水的体积比值为1:1），以制备乳液，稳定百里香酚的状态，防止其挥发。SNC无法形成稳定的Pickering乳液，在储存1w时，乳化指数显著下降，在4w时，外观及显微镜下照片已经观察不到液滴形态。这是因为SNC本身只具有非常多的‑OH亲水基团，不具备形成稳定的O/W的Pickering乳液的条件。根据乳液的液滴尺寸分布，乳液在放置过程中分布向大粒径的方向移动，且整个过程中，E‑24/THY乳液的粒径最小（图8），这主要是由于E‑24相比于NT具有更小的粒径（图9）、更多的DDSA取代基团、更高的绝对电位。较高的疏水基团可以改良SNC过高的亲水性，更有利于稳定Pickering乳液的油水界面层，而较小的粒径可以形成更小的乳液粒径，防止乳液聚集及奥氏熟化的发生，颗粒的绝对电位值越高，形成的乳液电位越高（图
10），可防止乳液之间的聚集。所以在储存4w后，E‑24/THY依然可以保持较低的粒径及较高的乳化指数，乳液外观依旧保持均匀的乳化层（图11‑12）。

[0039] 2.3 复合薄膜液的制备光学显微镜结果（图13‑14）表明，乳液、及其在涂膜液中的液滴均近似呈球形，PE乳液的液滴粒径最小，且有较好的分散性及稳定性，这一结果与放置24h后的宏观照片结果一致（乳液均一，未发生分层）。CE粒径小于PE，但在放置12h时就会出现明显的分层，这是由于CE绝对电位过低，乳液液滴之间容易相互聚集导致破乳分层。淀粉糊化液显微镜下呈均一状态，在分别加入乳液之后，ps/thy和ps/ce中的乳液液滴显著增大，而ps/pe中乳液粒径基本保持不变，这是由于，在乳液加入到淀粉膜液中时，由于THY及CE的绝对电位过低，乳液液滴发生了明显的聚集并且粒径增大，而pe保持了较高的绝对点位，在加入膜液中时，液滴之间相互排斥，避免了聚集，保持了原有的粒径。油相密度低，所以ps/ce宏观照片上观察到了液滴聚集后浮在膜液表面的现象，而ps/pe的宏观照片中并未观察到聚集现象。

[0040] 膜液的流变性是薄膜成膜性能、均匀性的重要参数。图15中可观察到淀粉膜液的剪切变稀行为，这是淀粉作为聚合物糊化后的典型特点，这是由于淀粉分子连接被破坏的速度比重新形成的速度更快。当乳液添加到淀粉膜液中时，膜液的粘度显著降低，这主要是由于THY乳液液滴阻断了糊化淀粉分子之间的交联，减小了膜液颗粒间的接触面积。尤其是ps/ce、ps/thy在加入淀粉膜液之后相互聚集，过多的THY对膜液中的淀粉颗粒起到了润滑‑1作用，加速了流动性，使粘度降低。但在较低的剪切速率下（<1s ），ps/pe的粘度高于ps/ce，这是由于PE乳液的粒度小，绝对电位高，使其在膜液中依然保持较小粒径且均匀的分散在淀粉糊化液中，减弱了对膜液颗粒结构的破坏作用。图16显示所有膜液的G`和G``都表现出频率依赖性，都随着角频率的增加而增加。所有样品的储能模量都小于损耗模量，表明样品的具有液态特点。Ps膜在7.94Hz处出现G`和G``的交点（COP)，表明粘性占主导地位的形变行为向弹性占主导地位的形变行为转变，而添加了PE之后，膜液的COP增加到了15.849Hz，表明PE降低了淀粉聚合物松弛和解缠所需的时间，这是由于两亲性E‑24颗粒THY液滴表面形成紧密界面层的同时，其亲水基团（‑OH）可以与淀粉糊化颗粒的羟基基团相互作用形成氢键，增强乳液油滴与淀粉颗粒之间的相互作用，形成了暂时的网络结构，减缓了淀粉膜液转换未弹性固体状态的时间。

[0041] 淀粉膜液的包封率的大小代表了成膜之后活性薄膜对THY的封装程度。从图17‑18可以得出，随着离心时间的增加，封装率逐渐降低，其中ps/pe的封装率显著高于ps/ce，这主要是由于THY通过Pickering乳液被E‑24封装，而E‑24的亲水基团与淀粉颗粒相互作用后，填充在淀粉糊液的网络结构中，形成了新的第二个外部保护层。

[0042] 分子动力学模拟是探究分子运动的有效工具，可以弥补常规研究方法难以在分子尺度对THY的扩散进行观察的缺点。根据之前的结果分析，以ps/ce及ps/pe两种膜液为研究对象，利用分子动力学模拟分析在分子层面膜液混合物中各个成分之间的相互作用。图18直观的反应了THY在膜液中的扩散情况，ps/ce模型中，10ns之前，THY分散在膜液介质中，20ns之后发生聚集，100ns完全聚集。而ps/pe模型在100ns过程中， THY与E‑24纳米颗粒吸附在一起，并均匀分散在膜液体系中，并没有发生THY的聚集，这一过程伴随着E‑24紧紧吸附THY的同时，与淀粉分子相互作用，紧密接触，维持了膜液体系的稳定性，防止了THY的聚集及扩散。模拟结果与显微镜观察及包封率结果一致，表明模拟体系用于研究真实膜液成分作用的可信度较高。为了更好的反应膜液中各个成分之间的相互作用力，将分子模拟过程中各物质的库仑力及范德华力进行比较，如图19‑22。随着模拟时间的延长，THY与淀粉之间的范德华力逐渐减小，THY之间的氢键作用保持不变。模型ps/ce中，THY与吸附物作用力不变，吸附物与淀粉之间的作用力逐渐减小，而THY与淀粉和吐温之间氢键作用不变，致THY发生聚集。模型ps/ce中，THY与E‑24颗粒的范德华力逐渐增大、氢键作用增强，而E‑24与淀粉的作用力保持不变，所以THY与E‑24在整个模拟时间内都紧密吸附并均匀分散在膜液中，未发生聚集。可见THY与淀粉、E‑24纳米颗粒之间的吸附主要是由于范德华力及氢键的相互作用。扩散系数（MSD）描述了膜液体系中THY的动态特性，从图23可以看出，E‑24的加入使 MSD 显著下降，表明E‑24有效的封装了THY，阻碍了THY的迁移和扩散。分子动力学模拟从理论上证实了膜液中THY的扩散作用。

[0043] 2.4早酥梨的涂膜保鲜图24是早酥梨果实在储藏过程中果实表皮的变化情况，可以看出涂膜处理可以延
缓早酥梨在储藏过程中果皮的转黄。PS‑THY涂膜处理会导致梨表面出现黑斑，这主要是由于THY无法与淀粉成膜机制形成稳定的结构，在涂膜液干燥过程中，大量的THY随水分迁移出膜液基质后与梨表面接触，产生要害，导致梨表面出现黑斑。相对的，PS‑PE并未产生类似的要害作用，也是由于Pickering乳液与膜基质产生了非常稳定的结构，大量的保存在了涂膜材料中，在涂膜液干燥后，可以持续少量的与梨接触，THY的抗氧化性可以起到使梨保绿的作用。从图25‑26可知，在后熟过程中色差值Δa*和Δb*都渐增大，但涂膜处理后色差值均小于对照组，这说明在储藏期间，早酥梨果实表皮有轻微转黄的现象，涂膜处理可延缓早酥梨转黄的速度。尤其是PS‑PE涂膜处理的保绿效果最好。这与图4aⅠ的结果相一致。

[0044] 由图27I可得，涂膜处理可有效的降低早酥梨的失重，尤其是PS‑PE涂膜处理，在储藏第7天的失重率，是PS‑THY处理的50%。这是由于PS‑PE成膜基质中，THY Pickering乳液均匀分散在淀粉糊化液中，并且与淀粉游离的支链结构相互穿插形成稳定结构，从而阻断或延长了水分子的渗透路径，进一步减少了早酥梨水分的蒸发，降低了失重率。图27Ⅱ中随着后熟时间的延长，果肉硬度呈现下降的趋势。在第0天时，所有组果肉硬度均无显著差异，这表明涂膜处理能抑制果实果肉硬度的下降。且PS‑PE处理更能够延缓早酥梨后熟过程中的软化，在第21天时硬度分别是对照组、PS‑THY处理的1.73、1.46倍。从图27Ⅲ中可以看出随着储藏天数的增加，早酥梨的脆性降低，但涂膜处理对梨的脆性几乎没有影响。

[0045] 在后熟过程中，早酥梨果实因果实内有机物转化为可溶性糖、氨基酸和维生素而导致TSS含量呈上升趋势。如图28I所示，不同涂膜处理对可溶性固形物含量没有明显的影响。然而，在21天的储藏过程中，PS‑PE涂膜液处理的TSS并没有显著的升高或降低，可能是由于PS‑PE膜液基质具有较好的阻氧、阻水性，降低了早酥梨的呼吸作用，延缓了果实的后熟过程，减慢了果实内淀粉等有机物的转化及降解。细胞膜通透性是衡量细胞内含物扩散到细胞外的一项重要生理指标，可以反映细胞膜完整性。如图28II所示，随着贮藏时间的延长，细胞衰老程度加剧，细胞膜通透性增大。所有处理的早酥梨的细胞膜通透性都随着贮藏时间的延长而增加。PS‑THY处理的早酥梨细胞膜通透性变化最大，第21天时升高到第1天的3.5倍，而PS‑PE处理的早酥梨在21天时细胞膜透率最低。这可能是由于PS‑THY涂膜处理之后对梨形成了药害，加速了果实的衰老，而PS‑PE中的百里香酚缓慢迁移，在涂膜处理降低呼吸强度的同时，对梨起到抗氧化的作用。在后熟期间，早酥梨果实的呼吸强度呈下降的趋势，如图28III所示。各处理组果实的呼吸强度均低于对照组，这可能是由于涂膜处理后表皮保护层增厚，且有效地封闭了果实表皮的皮孔，不但能阻止水分的蒸腾，而且减缓了果实内外进行的气体交换，造成气调环境，从而抑制了呼吸作用。在后熟过程中，早酥梨果实的乙烯释放量呈现先上升后下降的趋势，如图28IV所示，第1、7、14天时，PS‑THY乙烯含量高于对照组，可能是由于大量游离的百里香酚对早酥梨产生了药害，导致其产生大量乙烯。而PS‑PE处理产生的乙烯在所有时间都低于对照组，可能是由于低剂量持续释放的百里香酚降低了呼吸强度，延缓了果实的衰老和乙烯的释放，也可能是由于百里香酚抑制了乙烯合成相关酶的活性。

[0046] 图29中，早酥梨涂膜晾干后在赤道部位打孔并接种互隔交链孢孢子悬浮液，实验结果表明涂膜PS‑PE的早酥梨，对接种的互隔交链孢产生一定的抑制作用。在第15天时，PS‑PE处理的早酥梨病斑直径比CK减小了61.3%。其结果与体外抑菌实验相同。说明PS‑PE涂膜有效的保留了百里香酚，并可以持续释放达到长时间抑菌的目的。

[0047] 3. 结论DDSA酯化及APPJ协同处理可以提高DDSA对SNC的取代度，降低了DDSA‑SNC的临界
聚集浓度，提高了WCA。这主要是由于等离子体生成过程中产生的高能物质轰击SNC的表面，导致葡萄糖单元分子结构中的糖苷键尤其是α‑1,6糖苷键的C‑O‑C断裂，导致SNC分支度降低并解聚，从而增加了‑OH含量，暴露出更多的反应位点，提高了DDSA的取代度及取代效率。
SEM结果表明APPJ处理后颗粒表面出现刻蚀痕迹，而糖苷键的断裂使得结晶区被破坏，导致DDSA‑SNC的相对结晶度降低，DSC降解的峰值温度及热焓值降低。大颗粒的DDSA‑SNC被协同处理后解聚，体积减小，导致颗粒粒径及PDI降低。而APPJ处理过程中，空气中的氧气电离并氧化DDSA‑SNC颗粒，使电位降低，同时取代度增大后，颗粒表面带负电的‑COO‑基团增加，也导致颗粒负电位降低。说明DDSA酯化及APPJ协同处理可以提高DDSA‑SNC取代度，解决了DDSA对SNC取代效率低的问题，并且使颗粒粒径的减小、绝对电位增大，使得DDSA‑SNC作为纳米颗粒，更适合用于稳定Pickering乳液，是一种绿色、简便的改进方法。

[0048] 采用DDSA‑SNC制备Pickering乳液并将其混合在淀粉基薄膜中，得到了一种可行的抗氧化、抑菌涂膜。研究结果表明，活性涂膜液PS‑THY在干燥过程中，百里香酚随着水分的蒸发，逐渐迁移到淀粉膜表面。但PS‑PE涂膜液中，Pickering乳液与淀粉糊化液中游离的淀粉链之间相互交叉，嵌合在淀粉成膜的网络结构中，Pickering乳液与薄膜基质形成了稳定的结构，成膜后大部分百里香酚保留在淀粉膜中。又由于百里香酚Pickering乳液在成膜基质中的均匀分布，在干燥的淀粉膜中形成了致密均匀的小孔，使薄膜且具有持续释放的特点。此外活性涂膜液的应用对早酥梨产生了积极的影响，采后生理品质证实了这一点，如图30所示，包括较低的失重、较高的硬度较低的呼吸速率等。综上所述，Pickering乳液可以作为薄膜制备过程中活性物质载体的有效方法。

[0049] 以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内，因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。