[0001] 本公开涉及轻度认知障碍的测试方法、轻度认知障碍的测试试剂以及轻度认知障碍的治疗药候选物质的筛选方法。

[0002] 随着老龄化社会，痴呆症、阿尔茨海默病等认知障碍或其前阶段的轻度认知障碍的患者数正在增加。这些认知障碍基于各疾病的诊断基准通过医生的问诊等进行诊断(非专利文献1)。

[0003] 现有技术文献

[0004] 非专利文献

[0005] 非专利文献1：一般社団法人日本老年医学会、「認知機能の評価法と認知症の診断」、[online]、一般社団法人日本老年医学会、[令和4年6月30日検索]、互联网

[0018] 在本说明书中，所述“MCI的测试”意味着例如MCI的检测、MCI的判定、MCI的预防效果的判定、MCI的治疗效果的判定、治疗药奏效的MCI患者的判定、对各个MCI患者奏效的治疗药的判定、用于MCI的诊断的检查方法、或用于MCI的治疗的检查等。所述“MCI的判定”例如既可以是MCI有无的判定、测试、检测或诊断，也可以是罹患MCI的可能性(风险度)的判定、测试、检测或诊断，也可以是MCI治疗后的预后的预测，还可以是MCI治疗药的治疗效果的判定，可被每一者替换。

[0019] 在本说明书中，所述“罹患”例如既可以意味着正在患该疾病的状态，也可以意味着该疾病的发病。

[0020] 在本说明书中，“处理”意味着治疗性处理和/或预防性处理。在本说明书中，“治疗”是指疾病、病症或障碍的治疗、治愈、防止、抑制、缓解、改善，或疾病、病症或障碍进展的停止、抑制、减少或延迟。在本说明书中，“预防”意味着疾病或病症的发病的可能性的降低，或疾病或病症的发病的延迟。所述“治疗”例如可以是对出现目标疾病的患者的治疗，也可以是对目标疾病的模型动物的治疗。

[0021] 在本说明书中，“轻度认知障碍”意味着例如在国际疾病分类第11版(ICD11)中被分类为ICD代码F06.7(轻度认知障碍)的疾病。所述MCI例如可以使用MoCA‑J(日语版MoCA)进行评价，在评分为25分以下的情况下，可以评价为MCI。在本说明书中，MCI例如也可以组合其他评价方法进行评价。作为其他评价方法，例如，可以列举日语版连线测试(Trail Making Test日语版，TMT‑J)、临床痴呆评定量表(Clinical Dementia Rating，CDR)、功能评定分期(Functional Assessment Staging，FAST)、改良长谷川痴呆量表(Hasegawa’sDementia Scal‑Revised，HDS‑R)、简易精神状态检查表(Mini‑Mental  State Examination，MMSE)、DASC‑21(社区综合护理系统中痴呆评定表(Dementia Assessment Sheet in Community‑based Integrated Care System)等。

[0022] 在本说明书中，“羟基自由基”是指与羟基相对应的自由基。所述羟基自由基在活性氧中也具有特别高的反应性。

[0023] 在本说明书中，“抗氧化物质”是指捕捉活性氧簇的物质。所述活性氧簇例如可以1
列举出自由基簇(自由基)，单线态氧(O2)、臭氧(O3)、过氧化氢(H2O2)等非自由基簇等。

[0024] 在本说明书中，“羟基自由基的消除能力”是指被检物质捕获羟基自由基的能力。

[0025] ＜MCI标志物＞

[0026] 在一方面，本公开公开了作为轻度认知障碍(MCI)的指标的标志物。本公开的MCI的标志物是羟基自由基的消除能力。本公开的轻度认知障碍的标志物的特征在于羟基自由基的消除能力，其他的结构以及条件没有特别限制。

[0027] 本发明人深入研究的结果发现，生物体中的羟基自由基的消除能力，特别是唾液中的羟基自由基的消除能力，与MCI的发病相关，从而确立了本公开。根据本公开，可以通过测量羟基自由基的消除能力来测试被检者罹患MCI的可能性(罹患风险度)等。另外，在本公开中，由于羟基自由基成为MCI的靶点，因此通过使用所述靶点的筛选，还可以得到MCI的治疗药候选物质。因此，本公开在临床领域以及生物化学领域极为有用。

[0028] 所述羟基自由基的消除能力可以作为MCI的标志物使用，并且可以特别适合作为由唐氏综合征引起的MCI的标志物、由肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)引起的MCI标志物使用。

[0029] 推测所述生物体中的羟基自由基的消除能力起因于所述生物体所含有的抗氧化物质。因此，在本说明书中，作为所述MCI的标志物，除了所述羟基自由基的消除能力之外还可以使用所述抗氧化物质，或也可以使用所述抗氧化剂来替代所述羟基自由基的消除能力。

[0030] 如后文所述，所述MCI的标志物也可以作为例如用于诊断或检测MCI的标志物、预测MCI的预后的标志物、预测或判定MCI的治疗效果的标志物使用。

[0031] ＜MCI的测试方法＞

[0032] 另一方面，本说明书公开了测试MCI的可能性的方法。如上所述，本公开的MCI的测试方法包括：测量步骤，在所述测量步骤中测量被检者的生物样本中的羟基自由基的消除能力。本公开的测试方法的特征在于，测量作为MCI标记物的所述被检者的生物样本中的羟基自由基的消除能力，其他步骤以及条件没有特别限制。对于本公开的测试方法，可以引用所述本公开的MCI的标志物的说明。

[0033] 根据本公开的测试方法，可以实施例如MCI的可能性的测试。所述“MCI的测试”例如意味着MCI的检测、MCI的判定、MCI的筛选、MCI的预防效果的判定、MCI的治疗效果的判定、治疗药奏效的MCI患者的判定、对各个MCI患者奏效的治疗药的判定、用于MCI的诊断的检查方法、或用于MCI的治疗的检查等。所述“MCI的判定”例如既可以是MCI有无的判定、测试、检测或诊断，也可以是罹患MCI的可能性(风险度)的判定、测试、检测或诊断，也可以是MCI治疗后的预后的预测，也可以是MCI治疗药的治疗效果的判定。

[0034] 所述被检者例如可以列举出人、除人以外的非人动物等，如上所述，所述非人动物例如可以列举出小鼠、大鼠、狗、猴、兔、羊、马等哺乳类，鸟类，鱼类等。

[0035] 对所述生物样本的种类没有特别限制，例如，可以列举出从生物体分离的体液、体液来源细胞、器官、组织或细胞等。所述体液可以列举出例如血液、唾液、尿、淋巴液、关节等的滑液、骨髓液、脑脊髓液等髓液等。作为所述血液的具体例，例如，可以列举出全血、血清、血浆等。所述体液来源细胞例如可以列举出血液来源细胞，具体地，可以列举出红细胞、白细胞、淋巴细胞等血细胞。另外，根据所述MCI的标志物，例如，可以通过唾液中的羟基自由基的消除能力测试被检者的MCI。因此，例如，由于能够减轻患者或医生的负担，因此所述生物样本优选唾液。

[0036] 对于羟基自由基的消除能力，例如，可以通过对所述生物样本测量羟基自由基的消除能力来实施，也可以通过在从所述生物样本中提取、粗提纯化或纯化抗氧化物质后对得到的抗氧化物质测量羟基自由基的消除能力来实施。抗氧化物质的羟基自由基的消除能力的测量方法没有特别限制，可以采用公知的方法。作为具体例，所述抗氧化物质的羟基自由基的消除能力的测量方法可以列举出以下方法：例如，将二价铁和H2O2用作羟基自由基的发生剂并使用自旋捕获剂的电子自旋共振(Electron spin resonance，ESR)自旋捕获法、3‑甲硫基丙醛(methional)法、对亚硝基二甲基苯胺(PNDMA)法、水杨酸盐法、硫代巴比妥酸(TBA)法、利用氢原子转移的方法等等，由于可以抑制过氧化氢、单态氧等其他活性氧簇的影响，可以特异性地检测羟基自由基，而且灵敏度好，因此优选ESR自旋捕获法。所述羟基自由基的消除能力的测量可以是定性的测量，也可以是定量的测量。在所述羟基自由基的消除能力的测量是定量的测量的情况下，羟基自由基的消除能力也可以称为羟基自由基的消除能力的测量值。

[0037] 本公开的测试方法例如还包括测试步骤，在所述测试步骤中通过将所述被检者的生物样本(以下也称为“被检生物样本”)中的羟基自由基的消除能力的测量值与阈值进行比较来测试所述被检者罹患MCI的可能性。所述阈值没有特别限制，例如，可以列举出从MCI非罹患者、MCI患者或从所述MCI非罹患者以及所述MCI患者的生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值计算出的阈值。在预后的评价的情况下，所述阈值也可以是例如在同一被检者的治疗之前或之后(例如，刚治疗之后)的羟基自由基的消除能力的测量值。另外，在本公开中，“MCI非罹患者”也可以换成“健康者”。然而，在本公开中，“MCI非罹患者”或“健康者”是指未罹患MCI的个体，且不论是否罹患MCI以外的疾病。即，在本公开中，“MCI非罹患者”或“健康者”包括罹患MCI以外的疾病的个体，也包括未罹患MCI以外的疾病的个体。

[0038] 所述阈值例如可以使用从如上所述的MCI非罹患者和/或MCI患者分离的生物样本(以下也称为“基准生物样本”)获得。另外，对于所述阈值，例如，可以在从多个MCI非罹患者以及多个MCI患者中分离出基准生物样本后，测量羟基自由基的消除能力，并基于得到的羟基自由基的消除能力进行统计学计算。在这种情况下，作为所述阈值，例如，可以使用诊断阈值(截止值)、治疗阈值、以及预防医学阈值等临床诊断值。另外，在预后的评价的情况下，例如，也可以使用从同一被检者治疗后分离的基准生物样本。所述阈值例如可以与所述被检者的被检生物样本同时测量，也可以预先测量。在后者的情况下，例如，由于不需要在每次测量所述被检者的被检生物样本时得到阈值，因此是优选的。优选的是，所述被检者的被检生物样本和所述基准生物样本例如在相同的条件下采集，并在相同的条件下进行羟基自由基的消除能力的测量。

[0039] 在所述测试步骤中，被检者罹患MCI的可能性的评价方法没有特别限制，可以根据所述阈值的种类适当决定。作为具体例，所述被检者的被检生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值在与所述MCI非罹患者的基准生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值相同的情况下(没有显著差异的情况下)，在比所述MCI非罹患者的基准生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值显著高的情况下，在比所述MCI患者的基准生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值显著高的情况下，和/或在比从所述MCI非罹患者以及所述MCI患者的生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值计算出的阈值高的情况下，所述被检者可以被评价为没有罹患MCI的可能性(也称为“风险性”或“风险度”，下同)或罹患MCI的可能性较低。另外，所述被检者的被检生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值在比所述MCI非罹患者的基准生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值显著低的情况下，在与所述MCI患者的基准生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值相同的情况下(没有显著差异的情况下)，在比所述MCI患者的基准生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值显著低的情况下，和/或在比从所述MCI非罹患者以及所述MCI患者的生物样本中的自由基的清除能力的测量值计算出的阈值低的情况下，所述被检者可以被评价为有罹患MCI的可能性或罹患MCI的可能性(风险性)高。另外，在所述测试步骤中，通过将所述被检者的被检生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值与所述MCI的各程度的MCI的患者的基准生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值进行比较，可以评价MCI的程度。具体地，所述被检者的被检生物样本在例如与MCI的所述基准生物样本具有相同程度的羟基自由基的消除能力的测量值的情况下(没有显著差异的情况下)，所述被检者可以被评价为具有所述MCI程度的可能性或具有所述MCI程度的可能性高。

[0040] 在所述测试步骤中，在评价预后的状态时，例如，可以与上述同样地进行评价，也可以使用同一被检者的治疗后的基准生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值作为阈值进行评价。作为具体例，所述被检者的被检生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值在与所述阈值相同的情况下(没有显著差异的情况下)，和/或在比所述阈值显著低的情况下，所述被检者可以被评价为在所述治疗后有复发或恶化的可能性或复发或恶化的可能性高。另外，在所述被检者的被检生物样本中的羟基自由基的消除能力的测定值比所述阈值显著高的情况下，所述被检者可以被评价为在所述治疗后没有复发或恶化的可能性或复发或恶化的可能性低。

[0041] 在所述测试步骤中，例如，也可以随时间地采集同一被检者的生物样本，比较所述生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值。由此，在所述测试步骤中，例如，如果测量值随时间而增加，则能够判断罹患的可能性变低或治愈等，如果测量值随时间而降低，则能够判断罹患的可能性变高等。

[0042] 本公开的测试方法例如也可以基于所述测试步骤的结果对所述被检者进行治疗。具体地，本公开的测试方法例如也可以包括施用步骤，在所述施用步骤中对在所述测试步骤中得到患有MCI的测试结果的被检者施用MCI的治疗药。所述MCI的治疗药的施用方式、施用时期、施用量、施用间隔等条件可以根据所述MCI的治疗药的种类适当设定。所述MCI的治疗药也可以是通过后述的筛选方法得到的治疗药候选物质。

[0043] 在本公开的测试方法中，虽然使用了作为所述MCI的指标(标志物)的所述羟基自由基的消除能力，但在本公开的测试方法中，除了所述羟基自由基的消除能力之外还可以使用所述抗氧化物质，或也可以使用所述抗氧化物质来替代所述羟基自由基的消除能力。在这种情况下，在所述本公开的测试方法中，可以将“羟基自由基的消除能力”解读为“抗氧化物质”，将“羟基自由基消除能力的测量值”解读为“抗氧化物质的量”，并引用对其的说明。

[0044] 所述被检者没有特别限制，例如，可以是MCI患者，也可以是不清楚是否患有MCI的个体，也可以是有患MCI嫌疑的个体。

[0045] 如上所述，本公开的测试方法例如可以作为诊断或检测MCI的方法、预测MCI的预后的方法、预测或判定MCI治疗的效果的方法使用。因此，本公开的测试方法也可以作为用于选择对MCI的治疗药响应的患者(响应者)，用作用于调整MCI的治疗药的施用量的协助诊断方法。

[0046] ＜测试试剂＞

[0047] 另一方面，本说明书公开了能够测试MCI的可能性的测试试剂。如上所述，本公开的测试试剂包括羟基自由基的消除能力的测量试剂。本公开的测试试剂的特征在于包括羟基自由基的消除能力的测量试剂，其他的结构以及条件没有特别限制。根据本公开的测试试剂，可以简便地实施所述本公开的测试方法。对于本公开的测试试剂，可以引用对所述本公开的MCI的标志物以及测试方法的说明。

[0048] 所述羟基自由基的消除能力的测量试剂例如可以根据所述羟基自由基的消除能力的测量方法适当决定。作为具体例，在通过ESR法测量所述羟基自由基的消除能力时，所述羟基自由基的消除能力的测量试剂可以列举出羟基自由基的产生剂以及羟基自由基的检测剂。所述羟基自由基的产生剂例如可以列举出二价铁和H2O2的组合等。所述羟基自由基的检测剂例如可以列举出5,5‑二甲基‑1‑吡咯啉‑N‑氧化物(5,5‑dimethyl‑1‑pyrroline‑N‑oxide，DMPO)、5‑(二乙氧基磷酰基)‑5‑甲基‑1‑吡咯啉‑N‑氧化物(5‑(diethoxyphosphoryl)‑5‑methyl‑1‑pyrroline‑N‑oxide，DEPMPO)、5‑(2,2‑二甲基‑1,3‑丙氧基环磷酰基)‑5‑甲基‑1‑吡咯啉‑N‑氧化物(5‑(2,2‑dimethyl‑1,3‑propoxy cyclophosphoryl)‑5‑methyl‑1‑pyrroline‑N‑oxide，CYPMPO)等。

[0049] 如上所述，本公开的测试试剂可以简便地实施所述本公开的测试方法。因此，本公开的测试试剂优选用于所述本公开的测试方法。

[0050] 本公开例如还可以是羟基自由基的消除能力的测量试剂用于测试MCI的可能性的应用。

[0051] 各试剂例如可以混合配置，也可以单独配置其一部分或全部。在后者的情况下，本公开的测试试剂也可以称为测试试剂盒。

[0052] 本公开的测试试剂例如也可以包括其它结构。所述其它结构例如可以列举出生物样本的前处理试剂、使用说明书等。

[0053] 本公开的测试试剂也可以包括抗氧化物质的测量试剂以代替所述羟基自由基的消除能力的测量试剂。所述抗氧化物质的测量试剂例如可以根据所述抗氧化物质的种类适当决定。在所述抗氧化物质为蛋白质的情况下，所述测试试剂例如可以是所述抗氧化物质蛋白质的测量试剂，也可以是编码所述抗氧化物质蛋白质的mRNA的测量试剂。作为所述抗氧化物质蛋白质的测量试剂，例如，可以使用针对抗氧化物质的抗体等。在所述抗氧化物质为核酸的情况下，对于编码所述抗氧化物质蛋白质的mRNA的测量试剂，例如，可以列举出逆转录酶、脱氧核糖三磷酸(deoxynucleotide triphosphate，dNTP)、聚合酶、引物等。对于所述抗氧化物质的量的测量试剂，例如，在氧自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity，ORAC)法中，可以列举出作为标准物质的高纯度Trolox标准品等。

[0054] ＜MCI的诊断方法以及诊断试剂＞

[0055] 另一方面，本说明书公开了诊断MCI的可能性的方法以及诊断试剂。本公开的MCI的诊断方法包括测量被检者的生物样本中的羟基自由基的消除能力的步骤。另外，本公开的MCI的诊断试剂包括羟基自由基的消除能力的测量试剂。另外，对于本公开，可以引用所述本公开的测试方法以及测试试剂的说明。

[0056] ＜筛选方法＞

[0057] 另一方面，本说明书公开了筛选MCI的治疗药候选物质的方法。如上所述，本公开的MCI的治疗药候选物质的筛选方法包括选择步骤，在所述选择步骤中从被检物质中选择使羟基自由基的消除能力提高的活性物质作为MCI的治疗药候选物质。本公开的特征在于MCI的治疗药候选物质的靶点是羟基自由基的消除能力，其他步骤以及条件没有特别限制。对于本公开的筛选方法，可以引用对所述本公开的MCI的标志物、测试方法以及测试试剂的说明。

[0058] 所述被检物质例如可以列举出低分子化合物、肽、蛋白质、核酸等。对于所述低分子化合物，例如，可以列举出公知的低分子化合物的文库等。所述肽例如是直链、支链或环状的肽，构成肽的各氨基酸是天然氨基酸、修饰氨基酸、人工氨基酸或其组合。所述蛋白质可以是天然蛋白质或人工蛋白质中的任一者。对于所述蛋白质，例如，可以列举出抗体、生长因子、增殖因子、或它们的变体等。

[0059] 所述选择步骤例如包括：测量步骤，在所述测量步骤中，使所述被检物质共存于羟基自由基的产生体系来测量羟基自由基的消除能力；和选择步骤，在所述选择步骤中，在所述测量步骤中得到的羟基自由基的消除能力比所述被检物质不共存的对照共存体系高时，将所述被检物质选择作为所述治疗药候选物质。在所述测量步骤中，对于所述羟基自由基的消除能力的测量，例如，可以引用对所述的羟基自由基的消除能力的测量方法的说明。所述羟基自由基的产生体系例如包括MCI患者来源的细胞。

[0060] ＜检测方法＞

[0061] 另一方面，本说明书公开了可用于检测有MCI嫌疑的被检者中的MCI的可能性的羟基自由基的消除能力的检测方法。本公开的检测方法是有MCI嫌疑的被检者中的羟基自由基的消除能力的检测方法，包括检测步骤，在所述检测步骤中使用羟基自由基的消除能力的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的羟基自由基的消除能力。本公开的检测方法的特征在于检测所述被检者的生物样本中的羟基自由基的消除能力，其他步骤以及条件没有特别限制。对于本公开的检测方法，可以引用对所述MCI的标志物、测试方法以及测试试剂的说明。

[0062] 所述有MCI嫌疑的被检者例如可以是被检者本人主观上抱有怀疑的个体，也可以是医生等诊察的结果判断为有MCI嫌疑或者有罹患MCI的可能性的个体。对于所述被检者本人主观上抱有怀疑的个体，例如，可以列举出有某种主观症状的个体、希望接受预防检查的个体等。

[0063] 【实施例】

[0064] 下面对本公开的实施例进行说明。但是，本公开不限于下面的实施例。除非有特别的说明，否则市售的试剂都是基于其规定使用的。

[0065] (1)被检者

[0066] 确认了来自MCI患者的唾液中的羟基自由基的消除能力降低。

[0067] 以获得书面同意的27名被检者为对象，进行认知功能测试(日语版MoCA，MoCA‑J)，检测认知功能(视觉空间、执行功能、命名、记忆、注意力、复述、语言想起、抽象概念、延迟再生、以及方向感)。将MoCA‑J的结果为25分以下的被检者作为MCI患者(MCI组，n＝24，平均认知功能为17.25)，将26分以上的被检者作为MCI非罹患者(MCI非罹患者组，n＝3，平均认知功能为27)。在被检者的选择中，长期服用肾上腺皮质激素或免疫抑制剂的个体、过去3个月内有抗生素服用史的个体、过去6周内接受过抗真菌药治疗的个体除外。

[0068] (2)唾液的采集

[0069] 唾液的采集使用市售的唾液采集用管(Salikids(注册商标)，Sarstedt株式会社制造)如下进行。首先，使各受试者将附属于Salikids(注册商标)的棉卷含在口腔内5分钟，使棉卷充分吸收被检者的唾液。然后，将含有唾液的棉卷插入到Sarikids(注册商标)的悬挂插入物中，盖上盖子后，在3000×g、3分钟的条件下离心分离。分离后，将管内的上清液部分作为各被检者的唾液样品，在‑40℃下保存。另外，在采集唾液时，对各受检者从采集1小时前开始禁止饮食、口服药物、刷牙以及专业口腔清洁(Professional Mechanical Tooth Cleaning，PMTC)。

[0070] (3)唾液的羟基自由基的消除能力的测量

[0071] 通过将5,5‑二甲基‑1‑吡咯啉‑N‑氧化物(5,5‑dimethyl‑1‑pyrroline‑N‑oxide，DMPO)作为自旋捕获剂使用的电子自旋共振(Electron spin resonance；ESR)自旋捕获法确认了各唾液样品的羟基自由基的消除能力。羟基自由基的产生体系为二价铁和H2O2产生体系。具体地，通过在包含50mmol/l的DMPO 20μl和20μmol/l的二价铁20μl的10mmol/l的磷酸缓冲生理盐水(pH7.2)180μl中添加20mmol/l的H2O2 20μl，生成羟基自由基。然后，将混合物(200μl)转移到平池(flat cell)中，使用X波段ESR自旋捕获法测量DMPO‑OH自旋加合物，确认羟基自由基的生成。ESR的测量条件如后文所述。

[0072] 如下式(A)所示，生成的羟基自由基与添加到反应体系中的DMPO反应，生成可以通过ESR检测的稳定自由基硝基氧(DMPO‑OOH)。在向所述反应体系中添加唾液样品时，ESR得到的信号强度发生变化。图1示出ESR法中的DMPO－OH自旋加合物。

[0073] [化学式A]

[0074]

[0075] 对于ESR的测量，将电子自旋共振装置(JES‑RE3X，X波段光谱仪，日本电子公司制造)连接至WIN‑RAD ESR数据分析仪(Radical Research，东京，日本)，测量条件如下。超精细耦合常数是使用微波频率计数器测量的共振频率和电场测量器ES‑FC5(日本电子公司制造)测量的共振电场来计算的。检测到的自旋加合物根据氧化锰标准物质的ESR频谱进行定量。实际测量的信号强度用归一化为氧化锰标准物质的ESR频谱的信号强度的相对高度表示。另外，对于羟基自由基的消除能力，所述唾液样品是从各受试者分别采集的4个至6个样品，测量多个样品的羟基自由基的消除能力，计算平均值，并将所述平均值作为各受试者的羟基自由基的消除能力。

[0076] (ESR的测量条件)

[0077] 装置：

[0078] 电子自旋共振装置(JES‑RE3X，X波段光谱仪，日本电子公司制造)

[0079] 测量条件：

[0080] 微波输出：8.00mW

[0081] 扫描时间：1分钟

[0082] 扫描宽度：334.8±5mT

[0083] 磁场调制：100kHz 0.079mT

[0084] Gain：×400

[0085] 扫描时间：1分钟

[0086] 时间常数：0.03秒

[0087] 这些结果示于下表1。如下表1所示，发现MCI组的唾液与MCI非罹患者组的唾液相比，羟基自由基的清除能力大幅降低。

[0088] [表1]

[0089]

[0090] 从上述可知，由于MCI患者的唾液中的羟基自由基的消除能力降低，因此羟基自由基的消除能力作为针对MCI的标志物发挥作用。

[0091] 以上参照实施方式和实施例对本公开进行了说明，但是本公开不限于上述实施方式和实施例。本公开的构成和细节可以在本公开的范围内做出本领域技术人员能够理解的各种改变。并且，各实施方式能够适当地与其他实施方式组合。

[0092] <附记>

[0093] 上述的实施方式以及实施例的一部分或全部可以记载为以下附记，但不限于以下。

[0094] (附记1)

[0095] 一种轻度认知障碍(MCI)的测试方法，所述测试方法包括：测量步骤，在所述测量步骤中测量被检者的生物样本中的羟基自由基的消除能力。

[0096] (附记2)

[0097] 根据附记1所述的测试方法，其中在所述测量步骤中测量羟基自由基的消除能力的测量值。

[0098] (附记3)

[0099] 根据附记2所述的测试方法，其中所述测试方法包括：

[0100] 测试步骤，在所述测试步骤中通过将所述被检者的生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值与阈值进行比较来测试所述被检者罹患MCI的可能性，

[0101] 所述阈值是从MCI非罹患者的生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值或从MCI患者的生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值计算出的阈值。

[0102] (附记4)

[0103] 根据附记3所述的测试方法，其中在所述测试步骤中，所述被检者的生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值在比所述MCI非罹患者的生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值低的情况下，在与所述MCI患者的生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值相同的情况下，或在比所述MCI患者的生物样本中的羟基自由基的消除能力的测量值低的情况下，所述被检者评价为具有罹患MCI的可能性。

[0104] (附记5)

[0105] 根据附记1‑4中任一项所述的测试方法，其中所述生物样本是唾液。

[0106] (附记6)

[0107] 根据附记1‑5中任一项所述的测试方法，其中所述MCI的测试是MCI的检测、MCI的判定、MCI的预防效果的判定、MCI的治疗效果的判定、MCI的筛选、治疗药奏效的MCI患者的判定、对各个MCI患者奏效的治疗药的判定、用于MCI的诊断的检查方法、或用于MCI的治疗的检查。

[0108] (附记7)

[0109] 根据附记1‑6中任一项所述的测试方法，其中所述测试方法包括施用步骤，在所述施用步骤中对得到患有MCI的测试结果的被检者施用MCI治疗药。

[0110] ＜MCI的测试试剂＞

[0111] (附记8)

[0112] 一种轻度认知障碍的测试试剂，所述测试试剂包括羟基自由基的消除能力的测量试剂。

[0113] (附记9)

[0114] 根据附记8所述的测试试剂，其中所述测试试剂包括羟基自由基的产生剂和羟基自由基的检测剂。

[0115] (附记10)

[0116] 根据附记8或9所述的测试试剂，所述测试试剂用于根据附记1‑7中任一项所述的测试方法。

[0117] <治疗药的筛选方法>

[0118] (附记11)

[0119] 一种轻度认知障碍的治疗药候选物质的筛选方法，包括：选择步骤，在所述选择步骤中从被检物质中选择使羟基自由基的消除能力提高的活性化物质作为轻度认知障碍的治疗药候选物质。

[0120] (附记12)

[0121] 根据附记11所述的筛选方法，其中所述筛选方法包括：

[0122] 测量步骤，在所述测量步骤中使所述被检物质共存于羟基自由基的产生体系来测量羟基自由基的消除能力；和

[0123] 选择步骤，在所述选择步骤中，在所述测量步骤中得到的羟基自由基的消除能力比所述被检物质不共存的对照共存体系高时，将所述被检物质选择作为所述治疗药候选物质。

[0124] (附记13)

[0125] 根据附记11或12所述的筛选方法，其中所述被检物质是从由低分子化合物、肽、蛋白质以及核酸组成的组中选择的至少一个。

[0126] <羟基自由基的消除能力的检测方法>

[0127] (附记14)

[0128] 一种检测方法，所述检测方法是有轻度认知障碍嫌疑的被检者中的羟基自由基的消除能力的检测方法，所述检测方法包括：

[0129] 检测步骤，在所述检测步骤中使用羟基自由基的消除能力的测量试剂检测所述被检者的生物样本中的羟基自由基的消除能力。

[0130] (附记15)

[0131] 根据附记14所述的检测方法，其中所述生物样本是唾液。

[0132] <应用>

[0133] (附记16)

[0134] 羟基自由基的消除能力的测量试剂用于测试轻度认知障碍的可能性的应用。

[0135] 工业可用性

[0136] 如上所述，根据本公开，可以通过测量羟基自由基的消除能力来测试被检者罹患MCI的可能性(罹患风险度)等。另外，在本公开中，由于羟基自由基的消除能力成为MCI的靶点，因此通过使用所述靶点的筛选，也可以得到MCI的治疗药候选物质。因此，本公开在临床领域以及生物化学领域极为有用。

[0137] 该申请要求以2022年6月30日申请的日本申请特愿2022‑106269为基础的优先权，将其公开的全部并入此处。