[0001] 本发明涉及一种高稳定性天然蓝色素的制备及其在儿童休闲食品中的应用，属于食品添加剂新技术领域。

[0002] 天然蓝色素具有极高的应用价值，现已广泛应用于医药、化妆品、印染及食品等多个领域。但其实在常见的天然色素中，蓝色素的自然来源非常有限，这就导致消费者看到相关的蓝色食品后往往会给其贴上“人造蓝”的标签，认为其可能具有潜在的健康风险，此外，色彩往往会使消费者产生相应的视觉心理效应，过去，曾有研究者对黄薯和蓝薯的消费情况进行过比较，用以验证蓝色食物给消费者带来的心理影响和消费选择，结果显示只有28%的消费者选择了蓝薯，其原因仅仅出于他们对新产品的好奇心理，然而，近几年这种现象基本消失了，市场上蓝色冰激凌、蓝色蛋糕以及深受儿童喜爱的蓝色糖果随处可见。

[0003] 栀子是茜草科的常青树，在我国广泛栽培，果实小、橙色、椭圆形，长1.25 2.5厘~米，栀子苷是存在于栀子果实中的主要环烯醚萜苷类化合物之一，可作为天然黄色着色剂使用，栀子苷从植物原料中提取后，被β‑葡萄糖苷酶水解，释放出京尼平和葡萄糖，当京尼平与氨基酸等伯胺类化合物反应时，就会生成蓝色素，而当京尼平与不同的氨基酸缩合反应时，则会生成不同的蓝色素，栀子蓝色素主要用于硬糖、饮料、果汁等的着色，此外，由于栀子蓝色素溶解性好，着色力强，常见的金属离子、酸、碱对其色调基本无影响，因此还广泛应用于药品、化妆品和生物材料方面，桅子蓝色素是采用生物工程技术制得的一种安全、无毒副作用的天然食用色素，为深蓝色粉末，易溶于水，我国于1990年在制定新增食品添加剂的使用卫生标准时将其列入，用于蛋白质、糖和淀粉等食品染色，特别是在配制酒的生产中，桅子蓝是石榴红等复配色素中不可缺的成分。

[0022] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

[0023] 若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。此外，实施例中所使用的所有各组分原料均为已知的市售产品。
实施例1

[0024] 步骤（1）京尼平苷的制备取5g栀子粗粉，于75℃条件下，对提取时间0.5h、液固比6∶1和乙醇浓度（质量分数
30%）进行正交实验提取京尼平苷。

[0025] 步骤（2）京尼平苷的提纯802
对FD 树脂进行预处理湿法装柱，装柱量为30mL，将提取液浓缩脱醇至体积1/4用
802
蒸馏水稀释成不同的料液浓度，料液浓度和上柱流速0.5Bv／h脱色栀子蓝色素，将FD 树脂过柱液经减压浓缩至浸膏以乙酸乙酯为萃取溶剂，温度效应30℃、液固体积比0.5和萃取时间10min对京尼平苷萃取，萃取液真空浓缩至干，加入5g丙酮进行热溶，当完全溶解后慢慢滴加与乙酸乙酯等体积的丙酮后静置冷却24h，过滤烘干，得白色针状结晶，制得的京尼平苷备用。

[0026] 步骤（3）天然蓝色素的制备将制得的30g京尼平苷溶于400mL水中，加入2gβ‑葡萄糖苷酶45℃加热酶解8h，取离心、过滤后的上清液蒸发浓缩当温度达到125℃在搅拌下逐滴加入铵盐的饱和液然后保持物料140℃左右至色素生成，制得的栀子蓝色素备用。

[0027] 步骤（4）含有栀子蓝色素果冻的制备将魔芋胶、卡拉胶、琼脂按照比例1:2:1与8%白砂糖均匀混合，将魔芋粉、卡拉胶、琼脂、缓慢加到200mL冷水中浸泡30min，使复配凝胶剂充分吸水溶胀，以便更好地发挥出胶体的凝胶性能，在80℃恒温水浴锅中加热胶体，用勺子不断搅拌，避免受热不均匀导致结块，当胶体全部溶解在水中并无结块时，将水浴锅升温至100℃，按照0.07%比例加入栀子蓝色素，加热沸腾溶解10min，搅拌均匀，去除搅拌过程中所产生的气泡，当混合胶溶液温度降至75℃时，边搅拌边按照0.2%、0.04%的比例加入柠檬酸和氯化钾混合溶液，使用60目滤网布对糖胶混合溶液进行过滤，然后将其分装到提前灭菌的果冻杯中并封口，在80℃温度下将封口完成后的果冻杯进行30min灭菌灭菌，冷却后即为栀子蓝果冻成品。

[0028] 步骤（5）含有栀子蓝色素奶茶的制备用100℃沸水冲泡5g茯砖茶，再用纱布将茶叶过滤一遍，弃掉茶汤，保留茶叶，熬制过滤后的茶叶，分别加入350ml的100℃沸水中，经过预熬煮2.5min，用100目纱布过滤茶汤，弃掉茶叶，保留茶汤，加纯牛奶前称量熬制的剩余茶汤量，再按剩余的茶汤量加入相应的
0.5%栀子蓝色素和8%纯牛奶，将熬煮好的奶茶称量剩余量再添加相应0.5%的食盐，即为栀子蓝奶茶成品。
实施例2

[0029] 步骤（1）京尼平苷的制备取6g栀子粗粉，于80℃条件下，对提取时间1.0h、液固比9∶1和乙醇浓度质量分数
50%进行正交实验提取京尼平苷。

[0030] 步骤（2）京尼平苷的提纯802
对FD 树脂进行预处理湿法装柱，装柱量为40mL，将提取液浓缩脱醇至体积1/5用
802
蒸馏水稀释成不同的料液浓度，液浓度和上柱流速1.0Bv／h脱色栀子蓝色素，将FD 树脂过柱液经减压浓缩至浸膏以乙酸乙酯为萃取溶剂，温度效应40℃、液固体积比1.0和萃取时间
20min对京尼平苷萃取，萃取液真空浓缩至干，加入6g丙酮进行热溶，当完全溶解后慢慢滴加与乙酸乙酯等体积的丙酮后静置冷却24h，过滤烘干，得白色针状结晶，制得的京尼平苷备用。

[0031] 步骤（3）天然蓝色素的制备将制得的40g京尼平苷溶于450mL水中，加入3gβ‑葡萄糖苷酶50℃加热酶解10h，取离心、过滤后的上清液蒸发浓缩当温度达到135℃在搅拌下逐滴加入铵盐的饱和液然后保持物料145℃左右至色素生成，制得的栀子蓝色素备用。

[0032] 步骤（4）含有栀子蓝色素果冻的制备将魔芋胶、卡拉胶、琼脂按照比例1:2:1与10%白砂糖均匀混合，将魔芋粉、卡拉胶、琼脂、缓慢加到250mL冷水中浸泡40min，使复配凝胶剂充分吸水溶胀，以便更好地发挥出胶体的凝胶性能，在85℃恒温水浴锅中加热胶体，用勺子不断搅拌，避免受热不均匀导致结块，当胶体全部溶解在水中并无结块时，将水浴锅升温至110℃，按照0.08%比例加入栀子蓝色素，加热沸腾溶解15min，搅拌均匀，去除搅拌过程中所产生的气泡，当混合胶溶液温度降至80℃时，边搅拌边按照0.3%、0.05%的比例加入柠檬酸和氯化钾混合溶液，使用70目滤网布对糖胶混合溶液进行过滤，然后将其分装到提前灭菌的果冻杯中并封口，在85℃温度下将封口完成后的果冻杯进行40min灭菌灭菌，冷却后即为栀子蓝果冻成品。

[0033] 步骤（5）含有栀子蓝色素奶茶的制备用100℃沸水冲泡6g茯砖茶，再用纱布将茶叶过滤一遍，弃掉茶汤，保留茶叶，熬制过滤后的茶叶，分别加入400ml的100℃沸水中，经过预熬煮3.5min，用100目纱布过滤茶汤，弃掉茶叶，保留茶汤，加纯牛奶前称量熬制的剩余茶汤量，再按剩余的茶汤量加入相应的1%栀子蓝色素和10%纯牛奶，将熬煮好的奶茶称量剩余量再添加相应1%的食盐，即为栀子蓝奶茶成品。
实施例3

[0034] 步骤（1）京尼平苷的制备取7g栀子粗粉，于85℃条件下，对提取时间2.0h、液固比12∶1和乙醇浓度质量分数
70%进行正交实验提取京尼平苷。

[0035] 步骤（2）京尼平苷的提纯802
对FD 树脂进行预处理湿法装柱，装柱量为50mL，将提取液浓缩脱醇至体积1/6用蒸馏水稀释成不同的料液浓度，考察料液浓度和上柱流速2.0、Bv／h脱色栀子蓝色素脱色，
802
将FD 树脂过柱液经减压浓缩至浸膏以乙酸乙酯为萃取溶剂，温度效应50℃、液固体积比
2.0和萃取时间30min对京尼平苷萃取，萃取液真空浓缩至干，加入7g丙酮进行热溶，当完全溶解后慢慢滴加与乙酸乙酯等体积的丙酮后静置冷却48h，过滤烘干，得白色针状结晶，制得的京尼平苷备用。

[0036] 步骤（3）天然蓝色素的制备将制得的50g京尼平苷溶于500mL水中，加入4gβ‑葡萄糖苷酶55℃加热酶解12h，取离心、过滤后的上清液蒸发浓缩当温度达到145℃在搅拌下逐滴加入铵盐的饱和液然后保持物料150℃左右至色素生成，制得的栀子蓝色素备用。

[0037] 步骤（4）含有栀子蓝色素果冻的制备将魔芋胶、卡拉胶、琼脂按照比例2:4:2与12%白砂糖均匀混合，将魔芋粉、卡拉胶、琼脂、缓慢加到300mL冷水中浸泡50min，使复配凝胶剂充分吸水溶胀，以便更好地发挥出胶体的凝胶性能，在90℃恒温水浴锅中加热胶体，用勺子不断搅拌，避免受热不均匀导致结块，当胶体全部溶解在水中并无结块时，将水浴锅升温至120℃，按照0.09%比例加入栀子蓝色素，加热沸腾溶解20min，搅拌均匀，去除搅拌过程中所产生的气泡，当混合胶溶液温度降至85℃时，边搅拌边按照0.4%、0.06%的比例加入柠檬酸和氯化钾混合溶液，使用80目滤网布对糖胶混合溶液进行过滤，然后将其分装到提前灭菌的果冻杯中并封口，在90℃温度下将封口完成后的果冻杯进行50min灭菌灭菌，冷却后即为栀子蓝果冻成品。

[0038] 步骤（5）含有栀子蓝色素奶茶的制备用120℃沸水冲泡7g茯砖茶，再用纱布将茶叶过滤一遍，弃掉茶汤，保留茶叶，熬制过滤后的茶叶，分别加入450ml的120℃沸水中，经过预熬煮4.5min，用120目纱布过滤茶汤，弃掉茶叶，保留茶汤，加纯牛奶前称量熬制的剩余茶汤量，再按剩余的茶汤量加入相应的
1.5%栀子蓝色素和12%纯牛奶，将熬煮好的奶茶称量剩余量再添加相应1.5%的食盐，即为栀子蓝奶茶成品。
实施例4

[0039] 步骤（1）京尼平苷的制备取8g栀子粗粉，于90℃条件下，对提取时间2.0h、液固比12∶1和乙醇浓度（质量分数70%）进行正交实验提取京尼平苷。

[0040] 步骤（2）京尼平苷的提纯802
对FD 树脂进行预处理湿法装柱，装柱量为60mL，将提取液浓缩脱醇至体积1/7用
802
蒸馏水稀释成不同的料液浓度，料液浓度和上柱流速3.0、Bv／h脱色栀子蓝色素，将FD 树脂过柱液经减压浓缩至浸膏以乙酸乙酯为萃取溶剂，温度效应60℃、液固体积比3.0和萃取时间40min对京尼平苷萃取，萃取液真空浓缩至干，加入8g丙酮进行热溶，当完全溶解后慢慢滴加与乙酸乙酯等体积的丙酮后静置冷却48h，过滤烘干，得白色针状结晶，制得的京尼平苷备用。

[0041] 步骤（3）天然蓝色素的制备将制得的60g京尼平苷溶于550mL水中，加入5gβ‑葡萄糖苷酶60℃加热酶解14h，取离心、过滤后的上清液蒸发浓缩当温度达到155℃在搅拌下逐滴加入铵盐的饱和液然后保持物料160℃左右至色素生成，制得的栀子蓝色素备用。

[0042] 步骤（4）含有栀子蓝色素果冻的制备将魔芋胶、卡拉胶、琼脂按照比例2:4:2与14%白砂糖均匀混合，将魔芋粉、卡拉胶、琼脂、缓慢加到350mL冷水中浸泡60min，使复配凝胶剂充分吸水溶胀，以便更好地发挥出胶体的凝胶性能，在95℃恒温水浴锅中加热胶体，用勺子不断搅拌，避免受热不均匀导致结块，当胶体全部溶解在水中并无结块时，将水浴锅升温至130℃，按照0.1%比例加入栀子蓝色素，加热沸腾溶解25min，搅拌均匀，去除搅拌过程中所产生的气泡，当混合胶溶液温度降至90℃时，边搅拌边按照0.5%、0.07%的比例加入柠檬酸和氯化钾混合溶液，使用90目滤网布对糖胶混合溶液进行过滤，然后将其分装到提前灭菌的果冻杯中并封口，在100℃温度下将封口完成后的果冻杯进行60min灭菌灭菌，冷却后即为栀子蓝果冻成品。

[0043] 步骤（5）含有栀子蓝色素奶茶的制备用120℃沸水冲泡8g茯砖茶，再用纱布将茶叶过滤一遍，弃掉茶汤，保留茶叶，熬制过滤后的茶叶，分别加入500ml的120℃沸水中，经过预熬煮5.5min，用120目纱布过滤茶汤，弃掉茶叶，保留茶汤，加纯牛奶前称量熬制的剩余茶汤量，再按剩余的茶汤量加入相应的2%栀子蓝色素和14%纯牛奶，将熬煮好的奶茶称量剩余量再添加相应2%的食盐，即为栀子蓝奶茶成品。
对比例1

[0044] 步骤（1）京尼平苷的制备取5g栀子粗粉，于75℃条件下，对提取时间0.5h、液固比6∶1和乙醇浓度（质量分数
30%）进行正交实验提取京尼平苷。

[0045] 步骤（2）京尼平苷的提纯802
对FD 树脂进行预处理湿法装柱，装柱量为30mL，将提取液浓缩脱醇至体积1/4用
802
蒸馏水稀释成不同的料液浓度，料液浓度和上柱流速0.5Bv／h脱色栀子蓝色素，将FD 树脂过柱液经减压浓缩至浸膏以乙酸乙酯为萃取溶剂，温度效应30℃、液固体积比0.5和萃取时间10min对京尼平苷萃取，萃取液真空浓缩至干，加入5g丙酮进行热溶，当完全溶解后慢慢滴加与乙酸乙酯等体积的丙酮后静置冷却24h，过滤烘干，得白色针状结晶，制得的京尼平苷备用。

[0046] 步骤（3）天然蓝色素的制备将制得的30g京尼平苷溶于400mL水中，取离心、过滤后的上清液蒸发浓缩当温度达到125℃在搅拌下逐滴加入铵盐的饱和液然后保持物料140℃左右至色素生成，制得的栀子蓝色素备用。

[0047] 步骤（4）含有栀子蓝色素果冻的制备将魔芋胶、卡拉胶、琼脂按照比例1:2:1与8%白砂糖均匀混合，将魔芋粉、卡拉胶、琼脂、缓慢加到200mL冷水中浸泡30min，使复配凝胶剂充分吸水溶胀，以便更好地发挥出胶体的凝胶性能，在80℃恒温水浴锅中加热胶体，用勺子不断搅拌，避免受热不均匀导致结块，当胶体全部溶解在水中并无结块时，将水浴锅升温至100℃，按照0.07%比例加入栀子蓝色素，加热沸腾溶解10min，搅拌均匀，去除搅拌过程中所产生的气泡，当混合胶溶液温度降至75℃时，边搅拌边按照0.2%、0.04%的比例加入柠檬酸和氯化钾混合溶液，使用60目滤网布对糖胶混合溶液进行过滤，然后将其分装到提前灭菌的果冻杯中并封口，在80℃温度下将封口完成后的果冻杯进行30min灭菌灭菌，冷却后即为栀子蓝果冻成品。

[0048] 步骤（5）含有栀子蓝色素奶茶的制备用100℃沸水冲泡5g茯砖茶，再用纱布将茶叶过滤一遍，弃掉茶汤，保留茶叶，熬制过滤后的茶叶，分别加入350ml的100℃沸水中，经过预熬煮2.5min，用100目纱布过滤茶汤，弃掉茶叶，保留茶汤，加纯牛奶前称量熬制的剩余茶汤量，再按剩余的茶汤量加入相应的
0.5%栀子蓝色素和8%纯牛奶，将熬煮好的奶茶称量剩余量再添加相应0.5%的食盐，即为栀子蓝奶茶成品。
对比例2

[0049] 步骤（1）京尼平苷的制备取8g栀子粗粉，于90℃条件下，对提取时间2.0h、液固比12∶1和乙醇浓度（质量分数70%）进行正交实验提取京尼平苷。

[0050] 步骤（2）京尼平苷的提纯802
对FD 树脂进行预处理湿法装柱，装柱量为60mL，将提取液浓缩脱醇至体积1/7用蒸馏水稀释成不同的料液浓度，料液浓度和上柱流速3.0、Bv／h脱色栀子蓝色素，加入8g丙酮进行热溶，当完全溶解后慢慢滴加与乙酸乙酯等体积的丙酮后静置冷却48h，过滤烘干，得白色针状结晶，制得的京尼平苷备用。

[0051] 步骤（3）天然蓝色素的制备将制得的60g京尼平苷溶于550mL水中，加入5gβ‑葡萄糖苷酶60℃加热酶解14h，取离心、过滤后的上清液蒸发浓缩当温度达到155℃在搅拌下逐滴加入铵盐的饱和液然后保持物料160℃左右至色素生成，制得的栀子蓝色素备用。

[0052] 步骤（4）含有栀子蓝色素果冻的制备将魔芋胶、卡拉胶、琼脂按照比例2:4:2与14%白砂糖均匀混合，将魔芋粉、卡拉胶、琼脂、缓慢加到350mL冷水中浸泡60min，使复配凝胶剂充分吸水溶胀，以便更好地发挥出胶体的凝胶性能，在95℃恒温水浴锅中加热胶体，用勺子不断搅拌，避免受热不均匀导致结块，当胶体全部溶解在水中并无结块时，将水浴锅升温至130℃，按照0.1%比例加入栀子蓝色素，加热沸腾溶解25min，搅拌均匀，去除搅拌过程中所产生的气泡，当混合胶溶液温度降至90℃时，边搅拌边按照0.5%、0.07%的比例加入柠檬酸和氯化钾混合溶液，使用90目滤网布对糖胶混合溶液进行过滤，然后将其分装到提前灭菌的果冻杯中并封口，在100℃温度下将封口完成后的果冻杯进行60min灭菌灭菌，冷却后即为栀子蓝果冻成品。

[0053] 步骤（5）含有栀子蓝色素奶茶的制备用120℃沸水冲泡8g茯砖茶，再用纱布将茶叶过滤一遍，弃掉茶汤，保留茶叶，熬制过滤后的茶叶，分别加入500ml的120℃沸水中，经过预熬煮5.5min，用120目纱布过滤茶汤，弃掉茶叶，保留茶汤，加纯牛奶前称量熬制的剩余茶汤量，再按剩余的茶汤量加入相应的2%栀子蓝色素和14%纯牛奶，将熬煮好的奶茶称量剩余量再添加相应2%的食盐，即为栀子蓝奶茶成品。

[0054] 检测实验对比：将实例1至4所得的一种高稳定性天然蓝色素的制备及其在儿童休闲食品中的应用及对比例产品1、2进行检测，具体检测方法如下：
高效液相色谱检测法
采用超高效液相色谱－光电二极管阵列检测－串联四极杆飞行时间质谱鉴别含有栀子蓝色素果冻和含有栀子蓝色素奶茶中的栀子蓝色素，通过对色素萃取液的超高效液相色谱分离，结合高分辨率飞行时间质谱和二极管阵列检测器采集的紫外－可见吸收光谱数据，实现了对样品更快速、更灵敏及准确度更高的鉴别。

[0055] 表面增强拉曼光谱法采用表面增强拉曼光谱法测定含有栀子蓝色素果冻和含有栀子蓝色奶茶中的栀子蓝色素，将制备好的表面增强拉曼光谱基底暴露于栀子蓝色素溶液中，让色素吸附到基底表面，通过滴涂、浸渍或喷雾等方法将样品均匀涂覆在基底上，让样品干燥，确保色素牢固地吸附在基底上，该法新颖、设备操作简单、分析速度快、重现性好、灵敏度相对较高，可以用来快速有效的检测栀子蓝色素果冻和栀子蓝色素奶茶中的栀子蓝色素。

[0056] 表1含有栀子蓝色素果冻和含有栀子蓝色素奶茶中的栀子蓝色素鉴别结果[0057] 由表1中可知，实施例3最好，对比例1较差。实施例3出现特征吸收峰，更加辅证了该样品含栀子蓝色素且十分稳定，造成此结果主要是因为在对比例1制备过程中京尼平苷未经β‑葡萄糖苷酶酶解在对比例2京尼平苷制备过程中未经大孔树脂脱色技术，造成所制备的含有栀子蓝色素的产品差别如此之大。

[0058] 表2含有栀子蓝色素果冻和含有栀子蓝色素奶茶中的栀子蓝色素检测结果[0059] 由表2中可知，实施例3最好，对比例1较差。造成此结果主要是因为在对比例1制备过程中京尼平苷未经β‑葡萄糖苷酶酶解在对比例2京尼平苷制备过程中未经大孔树脂脱色技术，表面增强拉曼光谱法技术的高灵敏度使得即使在很低的浓度下也能检测到栀子蓝色素，这对于食品和化妆品中的色素检测特别有用，因为这些产品中色素的含量通常很低。

[0060] 将实例1至4所得的一种高稳定性天然蓝色素的制备及其在儿童休闲食品中的应用及对比例产品1、2进行检测，经过检测可知，实施例数据优于对比例数据的主要原因造成此结果最主要是因为在对比例1制备过程中京尼平苷未经β‑葡萄糖苷酶酶解，在对比例2制备过程中京尼平苷未经大孔树脂脱色技术，导致最终造成实验效果的不同。

[0061] 本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。