技术领域
[0001] 本发明涉及植物病害防治技术领域，特别是一种防治水稻立枯病的微生物菌剂及其应用。
相关背景技术
[0002] 水稻立枯病是一种由多种病原菌引起的水稻苗期重要土传病害，常导致水稻种子腐烂、幼苗猝倒或立枯，严重影响水稻产量和品质。目前水稻立枯病的主要防治手段，常为化学农药的使用，如依靠化学杀菌剂，如25％甲霜灵可湿性粉剂、50％多菌灵可湿性粉剂、10％苯醚甲环唑可湿性粉剂、恶苗灵、立枯净等。但其会环境污染、使病原体抗药性增强。或是选择适当期限播种、对苗床进行管理，做好防寒、保温、通风的工作，或者加强田间管理，但是这些方式都只能暂时性地降低发病率，效果微乎其微。水稻立枯病发病率在8％‑50％之间，严重时可高达60％以上，严重影响水稻秧苗品质和水稻生产。由于水稻立枯病的发病原因由环境和病原菌共同作用，致病机理复杂。目前从水稻发病植株中分离到的能导致水稻立枯病的真菌种类有镰刀菌、腐霉菌、丝核菌和根霉菌。其中镰刀菌和丝核菌被认为是我国水稻秧苗立枯病的主要病原菌。
[0003] 目前，农作物病害防治措施逐渐向生物防治靠近，越来越多的生防菌种被挖掘和开发，在使用过程中，直接在田间施用生防菌种的菌液，利用菌种‑菌种之间的拮抗作用达到防治效果。但实际上，由于田间土壤环境复杂，生防菌种在田间的定殖率并不高，导致防治效果不稳定，需要追施，更是增加了种植成本。有必要提供一种防效时间长、定殖率高、防治效果稳定的微生物菌剂，以降低水稻立枯病的发生率。可见，寻找环境友好型防治方法具有重要意义。进一步地，如何提供一种防治水稻立枯病的生防菌株是本领域技术人员亟需解决的问题。
具体实施方式
[0015] 现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0016] 应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0017] 除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0018] 在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
[0019] 关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0020] 本实施例中涉及的菌株来源如下：苏云金芽孢杆菌、长枝木霉菌购自广州真微生物科技有限公司；酿酒酵母菌购自山东萍聚生物科技有限公司。其他未特别说明的试剂和材料本领域技术人员均可通过常规购买得到。
[0021] 实施例1
[0022] 一种防治水稻立枯病的微生物菌剂，具体制备过程如下：
[0023] 准备工作：确保操作环境清洁无菌，并准备好所需器具和容器，根据所需量计量并准备好每种成分；
[0024] 制备过程：按重量份数计，将苏云金芽孢杆菌5份、长枝木霉菌3份和酿酒酵母菌2份，和麸皮85份混合，加入维生素B10.3份、腐殖酸6份和磷酸亚铁6份再次混匀，混匀后得到微生物菌剂。其中，苏云金芽孢杆菌的含菌量为80亿CFU/g；长枝木霉菌的含菌量为60亿CFU/g；酿酒酵母菌的含菌量为50亿CFU/g。
[0025] 保存：避免微生物菌剂暴露在阳光直射或极端温度条件下，存储在干燥、阴凉的地方，避免与其他化学物质接触。
[0026] 实施例2
[0027] 一种防治水稻立枯病的微生物菌剂，具体制备过程如下：
[0028] 准备工作：确保操作环境清洁无菌，并准备好所需器具和容器，根据所需量计量并准备好每种成分；
[0029] 制备过程：按重量份数计，将苏云金芽孢杆菌3份、长枝木霉菌3份和酿酒酵母菌1份，和麸皮70份混合，加入维生素B10.2份、腐殖酸5份和磷酸亚铁5份再次混匀，混匀后得到微生物菌剂。其中，苏云金芽孢杆菌的含菌量为60亿CFU/g；长枝木霉菌的含菌量为50亿CFU/g；酿酒酵母菌的含菌量为40亿CFU/g。
[0030] 保存：避免微生物菌剂暴露在阳光直射或极端温度条件下，存储在干燥、阴凉的地方，避免与其他化学物质接触。
[0031] 实施例3
[0032] 一种防治水稻立枯病的微生物菌剂，具体制备过程如下：
[0033] 准备工作：确保操作环境清洁无菌，并准备好所需器具和容器，根据所需量计量并准备好每种成分；
[0034] 制备过程：按重量份数计，将苏云金芽孢杆菌7份、长枝木霉菌5份和酿酒酵母菌3份，和麸皮100份混合，加入维生素B10.6份、腐殖酸10份和磷酸亚铁10份再次混匀，混匀后得到微生物菌剂。其中，苏云金芽孢杆菌的含菌量为100亿CFU/g；长枝木霉菌的含菌量为80亿CFU/g；酿酒酵母菌的含菌量为80亿CFU/g。
[0035] 保存：避免微生物菌剂暴露在阳光直射或极端温度条件下，存储在干燥、阴凉的地方，避免与其他化学物质接触。
[0036] 对比例1
[0037] 本对比例与实施例1的区别仅在于，省略酿酒酵母菌，其他操作与实施例1相同。
[0038] 对比例2
[0039] 本对比例与实施例1的区别仅在于，省略长枝木霉菌，其他操作与实施例1相同。
[0040] 对比例3
[0041] 本对比例与实施例1的区别仅在于，省略长枝木霉菌和酿酒酵母菌，其他操作与实施例1相同。
[0042] 对比例4
[0043] 本对比例与实施例1的区别仅在于，省略腐殖酸，其他操作与实施例1相同。
[0044] 对比例5
[0045] 本对比例与实施例1的区别仅在于，省略磷酸亚铁，其他操作与实施例1相同。
[0046] 对比例6
[0047] 本对比例与实施例1的区别仅在于，本对比例的制备过程：按重量份数计，将苏云金芽孢杆菌8份、长枝木霉菌1份和酿酒酵母菌4份，和麸皮110份混合，加入维生素B10.7份、腐殖酸4份和磷酸亚铁4份再次混匀，混匀后得到微生物菌剂。其他操作与实施例1相同。
[0048] 对比例7
[0049] 本对比例与实施例1的区别仅在于，本对比例的制备过程：苏云金芽孢杆菌的含菌量为110亿CFU/g；长枝木霉菌的含菌量为90亿CFU/g；酿酒酵母菌的含菌量为30亿CFU/g。其他操作与实施例1相同。
[0050] 试验例1
[0051] 本试验例采用室内盆栽实验检测各组(实施例1‑3、对比例1‑7)的微生物菌剂对水稻立枯病的防治效果以及生防菌种(苏云金芽孢杆菌、长枝木霉菌和酿酒酵母菌)的定殖效果。具体过程如下：
[0052] 将供试土壤于121℃下灭菌2h，然后晾干，按照1×105CFU/g干土的比例接种丝核菌。将供试土壤移入盆中，调整供试土壤的湿度为60％。将各组的微生物菌剂按照1×5
10CFU/g干土的剂量(本试验例施加相同菌种数的菌剂，便于结果分析)施入盆中，对水稻种子进行消毒，然后每盘播种水稻种子10粒。此外，设置空白对照组和阳性对照组，空白对照组既不接种病原菌也不接种微生物菌剂，阳性对照组仅接种病原菌。各组设置3个重复，在27℃和湿度70％的条件下，播种15天后，统计水稻出苗率，见表1。
[0053] 同时，分别在播种后第1d、第7d和第20d，取盆栽表层5cm以下土壤，采用稀释平板计数法，统计效果明显的实施例1、对比例3和对比例6中丝核菌和生防菌的数量，见表2。统计结果取平均值。
[0054] 水稻出苗率统计结果如表1所示。
[0055] 表1各组水稻出苗率
[0056]
[0057]
[0058] 表1显示，立枯病能够降低水稻的出苗率，实施例1‑3的微生物菌剂能够通过抑制病原菌，提高水稻的出苗率，达到与空白对照组相近的状态。在省略某种或某几种原料以及调整用量的情况下，微生物菌剂对病原菌的抑制作用下降，对水稻出苗率的改善效果下降。当苏云金芽孢杆菌、长枝木霉菌和酿酒酵母菌三者共同添加到微生物菌剂中时，水稻出苗改善效果明显。
[0059] 丝核菌和生防菌的统计数量如表2所示。
[0060] 表2各组土壤中丝核菌和生防菌的统计数量
[0061]
[0062]
[0063] 表2显示，接种/播种后的第1d，病原菌和生防菌种都呈现下降趋势，而第7d和第20d呈现上升趋势，这表明本发明的微生物需要逐渐适应复杂的土壤环境。但根据实施例1、对比例3和6可以看出，只有当苏云金芽孢杆菌、长枝木霉菌和酿酒酵母菌三者按照特定比例去共同添加到微生物菌剂中时，才能够有效提高生防菌种的适应力，提高其定殖率；单独添加的效果明显低于三者共用的效果。
[0064] 综上所述，本发明的微生物菌剂对丝核菌具有抑制作用，当苏云金芽孢杆菌、长枝木霉菌和酿酒酵母菌三者共同添加到微生物菌剂中时，水稻出苗率的改善效果明显。
[0065] 以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
