[0001] 本发明涉及医药化学制备技术领域，具体涉及Guanacastane型二萜衍生物candollinsA‑L及其制备方法和应用。

[0002] 帕金森疾病(PD)是由中枢神经系统的蛋白聚集，神经死亡及紧张所致的一种神经退行性疾病。近年来，帕金森的患病率逐年升高，严重威胁中老年人群的生命安全及生活质量。然而，至今没有可以有效治愈或者减轻帕金森的病变过程的有效治疗药物。由神经毒素1‑甲基‑4‑苯基‑1,2,3,6‑四氢吡啶(MPP+)抑制复合物Ⅰ的电子转移所导致的线粒体损伤和功能障碍是帕金森的重要致病机制。研究探索可以保护由MPP+诱导损伤的神经元细胞的药物是发掘可以治疗帕金森等神经退行性疾病的重要途经之一。植物内生菌次级代谢产物是发掘具有生物活性的天然小分子药物的重要途经之一，其特点在于制备方法简单高效，生产成本低，且易于大量生产。

[0128] 为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0129] 在本发明中：白黄小脆柄菇(Psathyrella candolleana)SY 7×1，保藏名称为Psathyrella candolleana SY 7×1，保藏编号为CCTCC NO：M 2024722，保藏地址为中国.武汉.武汉大学.中国典型培养物保藏中心，该培养物已于2024年04月19日由保藏中心收
到，并登记入册，根据请求，由该日起保存三十年，在期满前收到提供该培养物样品的请求后再延续保存五年，该培养物的存活性由保藏中心于2024年04月26日检测完毕，结果为存活。

[0130] 实施例1：

[0131] 菌株Psathyrella candolleana SY 7×1的分离、鉴定：

[0132] 将采集到的山药用75％乙醇溶液灭菌20s，依次用无菌水清洗6遍，除去多余的乙3
醇溶液，然后将清洗过的山药组织切成2mm左右的小块，用火烧灭菌后镊子将切好的组织接到平板(PDA、孟加拉红培养基)中，每块平板接5块组织，每种培养基接组织共20个平板，以上操作均在无菌超净台中进行。用封口膜将培养皿封口，放到恒温培养箱，设置温度为28℃。培养过程中每隔一天观察一次真菌的形态和长势，直到生长至适合分离，取出来进行编号。并接种于PDA培养基上，等生长一段时间后，观察是否为单一菌落，筛去同样的菌种，将排重后剩余的菌种接种于试管斜面4℃保存备用。

[0133] 将菌株SY7×1在PDA培养基上培养，菌落形态如图1所示：菌丝生长较慢，28℃培养5d后生长成直径约3cm的圆形菌落。菌落正面成白色和黄色絮状，背面菌落中心为黑色且从圆心到外周颜色逐渐变淡。菌丝茂密，辐射生长。菌落未观察到渗出物，无明显气味。

[0134] 将菌株SY7×1测序得到ITS基因序列经过拼接处理，确定其可信区间序列如下SQE ID No.1所示：

[0135] SQE ID No.1：

[0136] CCTTCGAGGTTTGACGGGTTGTAGCTGGCCTTTCACGAGGCATGTGCACGCCTGGCTCATCCACTCTTAACCTCTGTGCACTTTATGTAAGAGAAAAAAATGGTGGAAGCTTCCAGGATCTCGCGAGAGGTCTTCGGTTGAACA
AGCCGTTTTTCTTTCTTATGTTTTACTACAAACGCTTCAGTTATAGAATGTCAACTGTGTATAACACATTTATATA
CAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGC
AGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCACTCCTTGGTATTCCGAGGAGTATGCCTGTTTGAGTC
TCATGGTATTCTCAACCCCTAAATTTTTGTAATGAAGGTTTAGCGGGCTTGGACTTGGAGGTTGTGTCGGCCCTTG
TCGGTCGACTCCTCTGAAATGCATTAGCGTGAATCT TACGGATCGCCTTCAGTGTGATAATTATCTGCGCTGTGG
TGTTGAAGTATTTATGGTGTTCATGCTTCGAACCGTCTCCTTGCCGAGACAATCATTTGACAATCTGAGCTCAAAT
CAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAAGGCGGAGGGAAGGGTTCATTATCGA；

[0137] 结合形态学特征和分子鉴定，具体为通过分析rRNA内部转录间隔区(ITS)(菌丝体样品送至擎科生物科技有限公司进行提取、扩增和测序)，将测序所得结果输入GenBank(www.ncbi.nlm.nih.gov)，利用GenBank中的同源序列，结果表明内生菌SY7×1与NCBI中的Psathyrella candolleana EU520251.1的相似度达到99.26％，进而确定分离得到的内生菌为一种鬼伞科脆柄菇属内生真菌Psathyrella candolleana SY7×1，并进行命名和生物保藏，保藏编号为CCTCC NO：M 2024722。

[0138] 实施例2：

[0139] 制备化合物1‑12：

[0140] 1、菌体活化：将实施例1中分离得到的Psathyrella candolleana SY7×1接种于PDA斜面培养基中置于28℃恒温培养箱中培养3d后完成活化，活化后的菌株置于4℃冰箱中备用。

[0141] 2、山药琼脂固体固体培养基的制备：将新鲜山药洗净去皮后切成体积为1cm3的山药块，称取200g切好的山药加入1L水中沸水煮20min，纱布过滤得到山药的水提物，先后加入20g葡萄糖和15g琼脂搅拌溶解均匀，分装至1L锥形瓶中，每瓶300ml培养基。121℃高压灭菌30min后取出自然冷却凝固。

[0142] 3、发酵过程：将活化的菌株接种于制备好的山药琼脂固体培养基中，室温条件下静置发酵2个月。

[0143] 4、发酵结束后，固体发酵培养基使用乙酸乙酯萃取，培养基与乙酸乙酯体积比为1：1。乙酸乙酯萃取次数为5次，真空浓缩后得到粗提物。

[0144] 5、将所得粗提物使用适量体积比为1：1的二氯甲烷‑甲醇混合溶液溶解，得到粗提物浓溶液；

[0145] 将所得粗提物使用适量体积比为1：1的二氯甲烷‑甲醇混合溶液溶解，得到粗提物浓溶液；将上述粗提物浓溶液与粗提物干重等质量的硅胶混合，放置于55℃恒温烘箱中烘干除去有机溶剂，使用100‑200目硅胶装柱，依次使用石油醚，石油醚：乙酸乙酯(v:v)30:1，石油醚：乙酸乙酯(v:v)20:1，石油醚：乙酸乙酯(v:v)10:1，二氯甲烷，二氯甲烷：甲醇(v:v)50：1，二氯甲烷：甲醇(v:v)10:1的混合溶液进行梯度洗脱，从而将粗提物根据极性差异划分为七个部分Fractions 1‑7。

[0146] 取石油醚：乙酸乙酯(v:v)10:1段(Fraction4)使用正相柱，石油醚：乙酸乙酯(v:v)30:1，石油醚：乙酸乙酯(v:v)25:1，石油醚：乙酸乙酯(v:v)20:1，石油醚：乙酸乙酯(v:v)
15:1和石油醚：乙酸乙酯(v:v)10:1的混合溶液体系梯度洗脱并根据TLC分析将其划分为7个部分(Fr.4.1‑4.7)。

[0147] 取Fr.4.3段使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂，将经TLC分析结果相同的部分合并得到3个部分Fr.4.3.1‑Fr.4.3.3。取Fr.4.3.1使用硅胶色谱分离，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)150:1的混合溶液，分离得到化合物12。

[0148] 取Fr.4.3.2使用硅胶色谱分离，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)200:1的混合溶液，然后使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂，分离得到化合物9。

[0149] 取Fr.4.4段使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱，将经TLC分析结果相同的部分合并得到4个部分Fr.4.4.1‑Fr.4.4.4，取Fr.4.4.1使用硅胶色谱分离，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(v:v)150:1混合溶液，得到化合物1。

[0150] 取Fr.4.4.3段使用硅胶色谱分离，洗脱剂先后为石油醚：乙酸乙酯(v:v)5:1和二氯甲烷：甲醇(v:v)100:1混合溶液，得到化合物4。

[0151] 取Fr.4.5段使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱，将经TLC分析结果相同的部分合并得到5个部分Fr.4.5.1‑Fr.4.5.5，取Fr.4.5.2段使用硅胶色谱分离，洗脱剂先后为二氯甲烷：甲醇(v:v)100:1和石油醚：乙酸乙酯(v:v)5:1的混合溶液，然后使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱得到化合物2。

[0152] 取Fr.4.6段使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱，将经TLC分析结果相同的部分合并得到4个部分Fr.4.6.1‑Fr.4.6.4。取Fr.4.6.2段使用硅胶色谱分离，洗脱剂先后为石油醚：乙酸乙酯(v:v)5:1和二氯甲烷：甲醇(v:v)150:1的混合溶液，得到化合物5和化合物6。

[0153] 取Fr.4.6.3段使用硅胶色谱分离，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯(v:v)5:1的混合溶液，然后使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱，得到化合物7。

[0154] 取Fr.4.6.4段使用硅胶色谱分离，洗脱剂先后为石油醚：丙酮(v:v)5:1和二氯甲烷：甲醇(v:v)100:1。然后使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱，得到化合物3和化合物11。

[0155] 取Fr.4.7段使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱并根据TLC分析结果将其划分为5个部分(Fr.4.7.1‑4.7.5)。取Fr.4.7.2段使用硅胶色谱分离，洗脱剂先后为二氯甲烷：甲醇(v:v)150:1和石油醚：乙酸乙酯(v:v)6:1的混合溶液，得到化合物8和化合物10。

[0156] 实施例3：

[0157] 化合物1‑12的结构鉴定：

[0158] 通过1D/2D NMR(一维核磁共振波谱和二维核磁共振波谱)以及HR‑ESI‑MS(高分辨电喷雾电离质谱)对化合物candollinsA‑L(1‑12)的结构进行鉴定。

[0159] 由1H‑NMR和13C‑NMR，结合HSQC‑DEPT谱可以得到该化合物的对应C和H相连接的化学位移。

[0160] 1、对于化合物1：

[0161] 化合物1为黄色油状，该化合物HR‑ESI‑MS测得的准分子离子峰为m/z 317.1750[M++H] ,calcd.for C19H25O4，317.1753；表明其分子式为C19H24O4；具有8个不饱和度。

[0162] 根据1H‑NMR和13C‑NMR波谱数据显示：化合物1中含有4个甲基[δH 1.73(3H,s,H‑15),δH 1.02(3H,s,H‑16),δH 1.03(3H,s,H‑17),δH 1.17(3H,t,H‑15)；δC 11.1(C‑15),δC 
26.0(C‑16),δC19.6(C‑17),δC 11.2(C‑19)]；

[0163] 4个亚甲基[δH 1.90(1H,m,H‑7β),2.13(1H,dd,J＝13.0Hz,5.5Hz,H‑7α)；1.64(1H,m,H‑9β),2.44(1H,td,J＝14.1Hz,4.4Hz,H‑9α)；1.67(1H,m,H‑10β),1.85(1H,m,H‑10α)；16.9(2H,m,H‑18)；δC 45.5(C‑7),33.6(C‑9),29.6(C‑10),16.9(C‑18)]；

[0164] 1个含氧次甲基[δH 4.43(1H,dd,J＝14.1Hz,5.6Hz,H‑6),δC67.5(C‑6)]；

[0165] 1个烯烃次甲基[δH 6.99(1H,s,H‑2)δC 127.0(C‑2)],7个季碳[δC 140.0(C‑1),157.1(C‑3),129.0(C‑4),37.0(C‑8),43.0(C‑11),151.4(C‑12),148.8(C‑13)]；

[0166] 2个羰基碳[δC 198.7(C‑5),186.8(C‑14)]；

[0167] 从该化合物的NMR数据可以看出，其结构类似于文献报道的guanacastane型二萜psathin A[T.D.Zhao,X.Q.Yang,J.Zhou,Y.B.Yang,Z.T.Ding,Antibiotic Guanacastane Diterpenoids with Two New Skeletons from Psathyrella candolleana Uncovered by Semisolid and Liquid Media,J.Agric.Food Chem.,2023,71,2006‑2013]，不同之处在于该化合物缺少C‑19位的含氧亚甲基和C‑6位的羟基取代。通过HMBC谱中H‑18与C‑12；H‑19与C‑12和C‑18的相关，以及COSY谱中H‑18与H‑19的相关确定C‑18和C‑19位是一个乙基基团。

[0168] 通过H‑7与C‑3,C‑5,C‑6和C‑8；H‑15与C‑3,C‑4和C‑5；H‑16与C‑3,C‑7,C‑8和C‑9；H‑17与C‑1,C‑10,C‑11和C‑12的HMBC相关，以及H‑6/H‑7和H‑9/H‑10的1H‑1H COSY相关确定了化合物1的平面结构。为了确定该化合物的立体构型，通过H‑6/H‑9α；H‑16/H‑9β以及H‑
17/H‑10α的NOESY相关进而确定化合物1的相对构型，合物1的绝对构型通过比对其与
psathinA的实验CD谱图以及生源确定，命名为candollinA，结构式为：

[0169]

[0170] 2、对于化合物2：

[0171] 化合物2为黄色油状，该化合物HR‑ESI‑MS测得的准分子离子峰为m/z 329.1390[M+ 1+H]，calcd.for C19H21O5,329.1389。表明其分子式为C19H20O5。具有10个不饱和度。根据H‑
13
NMR和 C‑NMR波谱数据显示，其结构类似于candollinsA，不同之处在于该化合物缺少C‑18位的亚甲基，C‑6位的含氧次甲基和C‑7位的亚甲基。通过HMBC谱中H‑19与C‑12和C‑18的相关确定C‑18和C‑19位是一个乙酰基基团。通过H‑2与C‑1和C‑14；H‑7与C‑3,C‑5,C‑6和C‑8；
H‑15与C‑3,C‑4和C‑5；H‑16与C‑3,C‑7,C‑8和C‑9；H‑17与C‑1,C‑10,C‑11和C‑12的HMBC相关，以及H‑9/H‑10的1H‑1H COSY相关确定了化合物2的平面结构。通过H‑16/H‑9β以及H‑17/H‑10α的NOESY相关进而确定化合物2的相对构型。化合物2的绝对构型通过比对其与化合物
1的实验CD谱图以及生源确定，命名为candollin B，结构式为：

[0172]

[0173] 3、对于化合物3：

[0174] 化合物3为黄色油状，该化合物HR‑ESI‑MS测得的准分子离子峰为m/z 315.1592[M+ 1+H]calcd.for C19H23O4,315.1596。表明其分子式为C19H22O4。具有9个不饱和度。根据H‑NMR
13
和 C‑NMR波谱数据显示，其结构类似于化合物1和2。通过H‑2与C‑1,C‑3和C‑14；H‑15与C‑2,C‑3和C‑4的HMBC相关确定了五元醚环的结构。通过H‑6与C‑5和C‑7；H‑16与C‑7和C‑8；H‑17与C‑1,C‑10,C‑11和C‑12；H‑18与C‑12和C‑13；H‑19与C‑12,C‑18和C‑19的HMBC相关以及
1 1
COSY谱中H‑6/H‑7,H‑9/H‑10以及H‑18/H‑19的H‑H COSY相关确定了化合物3的平面结构。
通过H‑2/H‑16，H‑16/H‑9β以及H‑17/H‑10α的NOESY相关进而确定化合物3的相对构型。化合物3的绝对构型通过比对其与化合物1和2的实验CD谱图以及生源确定，命名为candollin C，结构式为：

[0175]

[0176] 4、对于化合物4：

[0177] 化合物4为黄色油状，该化合物HR‑ESI‑MS测得的准分子离子峰为m/z 289.1433[M++H]calcd.for C17H21O4,289.1440。表明其分子式为C17H20O4。具有8个不饱和度。根据1H‑NMR和13C‑NMR波谱数据显示(表2)，其结构类似于化合物1,不同的地方在于C‑18和C‑19位的乙基基团。通过H‑12与C‑1,C‑11,C‑14和C‑17；H‑17与C‑1和C‑11的HMBC相关确定了五元环的结构。通过H‑2与C‑1和C‑14；H‑6与C‑5和C‑7；H‑7与C‑3和C‑8；H‑15与C‑3,C‑4和C‑5；H‑16与
1 1
C‑3,C‑8和C‑9；H‑17与C‑10的HMBC相关，以及H‑6/H‑7以及H‑9/H‑10的H‑ H COSY相关确定了化合物4的平面结构。通过谱中H‑6/H‑9α，H‑16/H‑9以及H‑17/H‑10α的NOESY相关进而确定化合物4的相对构型。化合物4的绝对构型通过比对其与化合物1的实验CD谱图以及生源确定，命名为candollin D，其结构式为：

[0178]

[0179] 5、对于化合物5：

[0180] 化合物5为黄色油状，该化合物HR‑ESI‑MS测得的准分子离子峰为m/z 317.1749[M+ 1+H]calcd.for C19H25O4,317.1753。表明其分子式为C19H24O4。具有8个不饱和度。根据H‑NMR
13
和 C‑NMR波谱数据显示，其结构类似于化合物1，不同的地方在于C‑15位的甲基以及C‑18和C‑19位的乙基基团消失。通过H‑4与C‑2,C‑6和C‑8；H‑6与C‑5；H‑7与C‑6和C‑8的HMBC相关以
1 1
及H‑6/H‑7的H‑H COSY相关确定了六元环的结构。通过H‑17与C‑12和C‑1；H‑18与C‑12和C‑
17；H‑19与C‑12和C‑17的HMBC相关以及H‑19/H‑18/H‑20的1H‑1H COSY相关确定了C‑18,C‑
19和C‑20的异丙基结构。通过H‑2与C‑1,C‑11和C‑14；H‑6与C‑5；H‑7与C‑6和C‑8；H‑15与C‑
3,C‑7,C‑8和C‑9；H‑16与C‑1,C‑10,C‑11和C‑12的HMBC相关以及H‑6/H‑7以及H‑9/H‑10的
1H‑1H COSY相关确定了化合物5的平面结构。通过谱中H‑6/H‑9α，H‑16/H‑9以及H‑17/H‑10α的NOESY相关进而确定化合物5的相对构型。化合物5的绝对构型通过比对其与化合物1的实验CD谱图以及生源确定，命名为candollin E，其结构式为：

[0181]

[0182] 6、对于化合物6：

[0183] 化合物6为黄色油状，该化合物HR‑ESI‑MS测得的准分子离子峰为m/z 315.1588[M+H]+calcd.for C19H23O4,315.1596。表明其分子式为C19H22O4。具有9个不饱和度。根据1H‑NMR和13C‑NMR波谱数据显示(表2)，其结构类似于化合物5,不同的地方在于C‑4位的次甲基以及C‑15位的甲基基团。通过H‑2与C‑3和C‑8；H‑5与C‑6,C‑7和C‑8；H‑9与C‑8；H‑10与C‑8以及H‑15与C‑3,C‑4和C‑5的HMBC相关确定了苯环的结构。通过H‑2与C‑1,C‑11和C‑14；
H‑10与C‑11；H‑16与C‑1,C‑10,C‑11和C‑12；H‑17与C‑12和C‑13；H‑18与C‑12和C‑17以及H‑
19与C‑12和C‑17的HMBC相关以及H‑9/H‑10和H‑18/H‑17/H‑19的1H‑1H COSY相关确定了化合物6的平面结构。通过H‑6/H‑9α，H‑16/H‑9β以及H‑17/H‑10α的NOESY相关进而确定化合物
6的相对构型。化合物6的绝对构型通过ECD计算谱图(如图98所示)以及生源确定，命名为candollinF，其结构式为：

[0184]

[0185] 7、对于化合物7：

[0186] 化合物7为黄色油状，该化合物HR‑ESI‑MS测得的准分子离子峰为m/z 403.2110[M+ 1+H]calcd.for C23H31O6，403.2121。表明其分子式为C23H30O6。具有9个不饱和度。根据H‑NMR
13
和 C‑NMR波谱数据显示，其结构类似于化合物5，不同的地方在于C‑4位的次甲基。通过H‑15与C‑3,C‑4,C‑5和C‑17；H‑16与C‑4,C‑15与C‑17；H‑18与C‑17的HMBC相关以及H‑15/H‑16的
1 1
H‑H COSY相关确定C‑4位的取代基为丙酸甲酯。通过H‑2与C‑1,C‑11和C‑14；H‑6与C‑5和C‑
7；H‑7与C‑4,C‑5和C‑8；H‑19与C‑3,C‑7,C‑8和C‑9；H‑20与C‑1,C‑10,C‑11和C‑12；H‑21与C‑
12和C‑13；H‑22与C‑12和C‑21以及H‑23与C‑12和C‑21的HMBC相关，以H‑6/H‑7，H‑9/H‑10和H‑22/H‑21/H‑23的1H‑1H COSY相关确定了化合物7的平面结构。通过H‑6/H‑9α，H‑16与H‑9β以及H‑17与H‑10α的NOESY相关进而确定化合物7的相对构型。化合物7的绝对构型通过比对其与化合物5的实验CD谱图以及生源确定，命名为candollin G，其结构式为：

[0187]

[0188] 8、对于化合物8：

[0189] 化合物8为黄色油状，该化合物HR‑ESI‑MS测得的准分子离子峰为m/z 347.1849[M+ 1+H]calcd.for C20H27O5,347.1858。表明其分子式为C20H26O5。具有8个不饱和度。根据H‑NMR
13
和 C‑NMR波谱数据显示，其结构类似于文献中的psathin E[T.D.Zhao,X.Q.Yang,J.Zhou,Y.B.Yang,Z.T.Ding,Antibiotic Guanacastane Diterpenoids with Two New Skeletons from Psathyrella candolleana Uncovered by Semisolid and Liquid Media,
J.Agric.Food Chem.,2023,71,2006‑2013]，不同的地方在于C‑13位的含氧次甲基和C‑2位的烯烃次甲基。通过H‑1与C‑2,C‑11和C‑14；H‑7与C‑3,C‑5,C‑6和C‑8；H‑12与C‑13和C‑18；
H‑13与C‑11,C‑12,C‑14和C‑18；H‑15与C‑2,C‑3和C‑4；H‑16与C‑3,C‑8和C‑9；H‑17与C‑1,C‑
10和C‑11；H‑18与C‑12；H‑19与C‑18及H‑20与C‑18的HMBC相关，以及H‑1/H‑2，H‑9/H‑10，H‑
13/H‑12/H‑18及H‑19/H‑18/H‑20的1H‑1H COSY相关最终确定化合物8的平面结构。通过H‑
1/H‑17，H‑2/H‑16，H‑17/H‑10α，H‑6/H‑9α，H‑16/H‑9β，H‑17/H‑10及H‑12/H‑13的NOESY相关进而确定化合物8的相对构型。化合物8的绝对构型通过比对其与化合物psathin E的实验CD谱图以及生源确定。命名为candollin H，其结构式如下：

[0190]

[0191] 9、对于化合物9：

[0192] 化合物9为黄色油状，该化合物HR‑ESI‑MS测得的准分子离子峰为m/z 343.1540[M+ 1+H] calcd.for C20H23O5,343.1545。表明其分子式为C20H22O5。具有10个不饱和度。根据H‑
13
NMR和 C‑NMR波谱数据显示，其结构类似于文献中的psathin F[T.D.Zhao,X.Q.Yang,
J.Zhou,Y.B.Yang,Z.T.Ding,Antibiotic Guanacastane Diterpenoids with Two New 
Skeletons from Psathyrella candolleana Uncovered by Semisolid and Liquid 
Media,J.Agric.Food Chem.,2023,71,2006‑2013]，不同的地方在于C‑6和C‑7位的亚甲基，C‑13位的含氧次甲基,C‑14位的羰基和C‑15位的含氧次甲基。通过H‑7与C‑3,C‑5,C‑6和C‑
8；H‑12与C‑11,C‑13和C‑18；H‑15与C‑2,C‑3和C‑4；H‑16与C‑3,C‑8和C‑9；H‑17与C‑1,C‑10和C‑11；H‑19与C‑12和C‑18及H‑20与C‑12和C‑18的HMBC相关，以及H‑9/H‑10，H‑12/H‑18及H‑19/H‑18/H‑20的1H‑1H COSY相关最终确定化合物9的平面结构。通过H‑16/H‑9β，H‑10α/H‑17/H‑18的NOESY相关确定了化合物9的相对构型。化合物9的绝对构型通过比对其与化合物psathin F的实验CD谱图以及生源确定，命名为candollin I，其结构式如下：

[0193]

[0194] 10、对于化合物10：

[0195] 化合物10为黄色油状，该化合物HR‑ESI‑MS测得的准分子离子峰为m/z 361.1639+ 1[M+H]calcd.for C20H25O6,361.1651。表明其分子式为C20H24O6。具有10个不饱和度。根据 H‑
13
NMR和 C‑NMR波谱数据显示，其结构类似于文献中的heptemerones E[M.Kettering,
C.Valdivia,O.Sterner,H.Anke,E.Thines,Heptemerones  A～G,Seven Novel 
Diterpenoids from Coprinus heptemerus:Producing Organism,Fermentation,
Isolation and Biological Activities,J.Antibio,2005,58,390‑396]。通过H‑7与C‑3,C‑5,C‑6和C‑8；H‑12与C‑11和C‑18；H‑13与C11,C‑12和C‑14；H‑15与C‑2,C‑3和C‑4；H‑16与C‑3,C‑8和C‑9；H‑17与C‑1,C‑10和C‑11；H‑19与C‑12和C‑18及H‑20与C‑12和C‑18的HMBC相关，以及H‑9/H‑10，H‑13/H‑12/H‑18及H‑19/H‑18/H‑20的1H‑1H COSY相关最终确定化合物
10的平面结构。通过H‑12/H‑1，H‑16/H‑9β，H‑10α/H‑17/H‑18的NOESY相关确定了化合物10的相对构型。化合物10的绝对构型通过heptemerones E的生源确定。命名为candollin J，其结构式如下：

[0196]

[0197] 11、对于化合物11：

[0198] 化合物11为黄色油状，该化合物HR‑ESI‑MS测得的准分子离子峰为m/z 347.1854+ 1[M+H]calcd.for C20H27O5,347.1858。表明其分子式为C20H26O5。具有10个不饱和度。根据 H‑
13
NMR和 C‑NMR波谱数据显示，其结构类似于化合物9。通过H‑2与C‑1和C‑3；H‑6与C‑5；H‑7与C‑3,C‑5,C‑6和C‑8；H‑12与C‑11和C‑13；H‑15与C‑2,C‑3和C‑4；H‑16与C‑3,C‑8和C‑9；H‑17与C‑1,C‑10和C‑11；H‑19与C‑12和C‑18及H‑20与C‑12和C‑18的HMBC相关，以及H‑6/H‑7，H‑
9/H‑10及H‑19/H‑18/H‑20的1H‑1H COSY相关最终确定化合物11的平面结构。通过H‑2/H‑
16，H‑6/H‑9α，H‑16/H‑9β，H‑10α/H‑17/H‑18的NOESY相关确定了化合物11的相对构型。化合物11的绝对构型通过对比化合物9的实验CD谱和生源确定。命名为candollin K，其结构式如下：

[0199]

[0200] 12、对于化合物12：

[0201] 化合物12为黄色油状，该化合物HR‑ESI‑MS测得的准分子离子峰为m/z 329.1749+ 1[M+H] calcd.for C20H25O4,329.1753。表明其分子式为C20H24O4。具有9个不饱和度。根据H‑
13
NMR和 C‑NMR波谱数据显示，其结构类似于化合物10。通过H‑2与C‑1和C‑14；H‑7与C‑3,C‑5,C‑6和C‑8；H‑15与C‑3和C‑4；H‑16与C‑3,C‑8和C‑9；H‑17与C‑1,C‑10和C‑11；H‑19与C‑12和C‑1及H‑20与C‑18的HMBC相关，以及H‑9/H‑10及H‑19/H‑18/H‑20的1H‑1H COSY相关最终确定化合物12的平面结构。通过H‑16/H‑9β,H‑17/H‑10α的NOESY相关确定了化合物12的相对构型。化合物12的绝对构型通过对比化合物10的实验CD谱和生源确定。命名为candollin L，其结构式如下：

[0202]

[0203] 实施例4：

[0204] Guanacastane型二萜衍生物candollins A‑L(上述化合物1‑12)对MPP+诱导PC12细胞损伤的保护活性：

[0205] 选择MPP+处理多巴胺能细胞PC12构建帕金森疾病模型(PD)。

[0206] 具体实验步骤如下所示：

[0207] 1.PC12低分化细胞采用DMEM高糖+10％FBS+100U/mL双抗的培养基进行培养，培养箱温度37℃，5％CO2；当PC12低分化细胞长至合适数量时，胰酶消化，制成细胞悬液；

[0208] 2.将细胞悬液吸至15mL离心管中，800rpm，5min，离心结束后弃上清液，加入5mL新的完全培养基后吹打成均匀的细胞悬液；

[0209] 3.取0.02ml细胞悬液，使用细胞计数板计数，将细胞浓度调整至1×105cells/ml，加入96孔板，每孔100μL，放入细胞培养箱培养；

[0210] 4.23小时后，将原培养基吸出，然后加入新的培养基(同1中配方)，加入待测样本(化合物在体系中终浓度20μM)，1小时后，加入MPP(MPP在体系中终浓度750μM)；

[0211] 5.实验设计：各组设计各做3个重复。

[0212] Blank组：只有培养基；

[0213] MPP组：培养基加终浓度750μM MPP；

[0214] 化合物组：培养基加终浓度20μM化合物，再加终浓度750μM MPP。

[0215] 6.加入MPP24小时后，加入MTS，2小时后，读值检测。

[0216] 具体结果如下表所示：

[0217]

[0218]

[0219] 实验结果表明，筛选的化合物1,2,8,11,12对MPP+诱导的神经细胞损伤有显著保+
护作用(p<0.01)；化合物3‑7,9,10对MPP 诱导的神经细胞损伤有非常显著保护作用(p<
0.001)。

[0220] 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。