[0001] 本发明涉及兽药领域，具体涉及一种防治家禽腺肌胃炎的中药组合物及其制备方法和应用。

[0002] 家禽腺肌胃炎，是以家禽的腺胃和肌胃为主要炎症特征的一种疾病。随着家禽养殖业的规模化和集约化发展，腺肌胃炎的发生日益频繁，该病成为一种较为常见且危害较大的疾病。而其发病原因较为复杂，不良的养殖环境、病毒和细菌的感染、霉菌毒素污染的饲料以及饲料营养不均衡等均有可能引起腺肌胃炎腺肌胃炎会导致家禽生长迟缓、饲料转化率降低、死亡率增加，给养殖业带来严重的经济损失。因此采取有效的预防和治疗措施，对于保障家禽养殖业的健康发展具有重要意义。

[0034] 以下通过具体实施例对本发明作进一步详细说明，但并不限制本发明的范围。

[0035] 实施例1：

[0036] 一种防治家禽腺肌胃炎的药物，该药物由中药组合物和药学上可接受的辅料制成。按重量份计，所述中药组合物由以下原料药制成：番石榴叶30份、红花木莲20份、尖尾芋10份、山柰10份、桂丁10份、旱柳10份、海螺壳10份和EGF 5份，所述EGF为表皮生长因子，除EGF外，原料药的来源是中药材或相当于上述中药材生药量的中药提取物。

[0037] 上述药物的制备方法为：

[0038] A、采用75％乙醇溶液对番石榴叶、山柰和桂丁混合后进行醇提(药材与75％乙醇溶液的质量比为1：15)，提取2次，每次提取时间1.5h，醇提后过滤，得到乙醇提取液和药渣；回收乙醇提取液中的乙醇，得到番石榴叶、山柰和桂丁粗提液；

[0039] B、将经步骤A处理后的番石榴叶、山柰和桂丁药渣与红花木莲、尖尾芋、旱柳、海螺壳按比例混合，加入水进行提取(药材与水的质量比为1：15)，提取2次，每次1.5h，提取完成后过滤，收集滤液；将番石榴叶、山柰和桂丁粗取液与所述滤液合并，滤液浓缩至投药材质量的1～2倍，加入EGF混匀；

[0040] C、步骤B制备的溶液中，再加入防腐剂0.2％山梨酸钾和表面活性剂0.2％山梨糖醇酐脂肪酸酯，药液混合均匀，即得防治家禽腺肌胃炎的口服液药物。

[0041] 实施例2：

[0042] 一种防治家禽腺肌胃炎的药物，该药物由中药组合物和药学上可接受的辅料制成。按重量份计，所述中药组合物由以下原料药制成：番石榴叶15份、红花木莲15份、尖尾芋15份、山柰5份、桂丁5份、旱柳5份、海螺壳5份和EGF 3份，所述EGF为表皮生长因子，除EGF外，原料药的来源是中药材或相当于上述中药材生药量的中药提取物。

[0043] 上述药物的制备方法与实施例1相同。

[0044] 对比例1：

[0045] 一种防治家禽腺肌胃炎的药物，该药物由中药组合物和药学上可接受的辅料制成。按重量份计，所述中药组合物由以下原料药制成：海螺壳10份和EGF 5份，所述EGF为表皮生长因子，除EGF外原料药的来源是中药材或相当于上述中药材生药量的中药提取物。

[0046] 上述药物的制备方法与实施例1相同。

[0047] 对比例2：

[0048] 一种防治家禽腺肌胃炎的药物，该药物由中药组合物和药学上可接受的辅料制成。按重量份计，所述中药组合物由以下原料药制成：番石榴叶30份和红花木莲25份，所述原料药的来源是中药材。

[0049] 上述药物的制备方法与实施例1相同。

[0050] 对比例3：

[0051] 一种防治家禽腺肌胃炎的药物，该药物由中药组合物和药学上可接受的辅料制成。按重量份计，所述中药组合物由以下原料药制成：尖尾芋10份、山柰10份、桂丁10份和旱柳10份所述原料药的来源是中药材。

[0052] 上述药物的制备方法与实施例1相同。

[0053] 阿莫西林组：

[0054] 一种防治家禽腺肌胃炎的药物，该药物为30％的阿莫西林可溶性粉，适用于细菌感染导致的鸡腺肌胃炎，其通过抑制细菌细胞壁合成，达到杀菌效果。

[0055] 一、本发明防治家禽腺肌胃炎的药物功效验证试验

[0056] 为了验证本发明防治家禽腺肌胃炎的药物功效，以本发明实施例1、实施例2制备的药物为例，进行功效验证试验。同时，为了与本发明防治家禽腺肌胃炎的药物进行对比，本发明还设置了以下对比试验，即对比例1～对比例3和阿莫西林组；对比例1～对比例3药物与本发明实施例1基本相同，其不同之处在于配方中中药组合物采用的原料药不同，对比例1～对比例3中药组合物采用的原料药具体参见表1。阿莫西林组采用的试验药物为某企业生产的阿莫西林可溶性粉，规格：30％，批号：902405028，生产日期：2024.05.24。

[0057] 表1试验各组采用的原料药

[0058]

[0059] 1.试验对象

[0060] 购买尉氏县某养殖有限公司，9日龄双A肉鸡240只，适应性饲养3天，所有试验用肉鸡均采用肉小鸡配合饲料，自由采食，自由饮水。

[0061] 2.鸡腺肌胃炎模型的制备

[0062] 根据预试验验证的造模方法，每天给药前称定每只鸡的重量，固定时间给药，黄曲霉毒素B1(80μg/kg)灌胃1mL，脂多糖160μg/kg胸肌注射1mL；连续给药5天，解剖发现腺胃水肿，乳头不明显，肌胃有不同程度的糜烂，判断发生家禽腺肌胃炎。

[0063] 3.试验药物

[0064] 试验药物为本发明实施例1～实施例2制备的药物、对比例1～对比例3、阿莫西林组。

[0065] 4.试验分组及用药

[0066] 将240只肉鸡随机分为8组(试验1组～试验8组)，每组30只。

[0067] 试验1组～试验6组上午黄曲霉毒素B1(80μg/kg)灌胃1mL，脂多糖160μg/kg胸肌注射1mL，下午采用的药物分别为实施例1～实施例2、对比例1～对比例3、阿莫西林组。试验1组～试验5组用药方法为：灌服给药，每kg体重给药0.20ml，连用5日。试验6组用药方法为：内服，每kg体重给药100mg，连用5日。

[0068] 试验7组为模型组，上午黄曲霉毒素B1(80μg/kg)灌胃1mL，脂多糖160μg/kg胸肌注射1mL，不采用药物进行治疗，仅给予同样的饮水和饲料饲养。

[0069] 试验8组为空白组，仅给予同样的饮水和饲料饲养。

[0070] 5.临床疗效观察及疗效评价标准

[0071] 5.1观察时间

[0072] 临床症状每天观察；试验中途动物死亡或试验结束时解剖。

[0073] 5.2检测指标

[0074] 胃酸指标：pH值；

[0075] 临床表现及生产性能指标：平均日增重；

[0076] 免疫指标：法氏囊指数；形态学指标：腺胃和肌胃。

[0077] 5.3腺肌胃评分标准

[0078] 中兽医症候分级标准：根据发病特点，对其症候进行分级量化，分级量化标准见表2。

[0079] 表2腺肌胃炎症候分级标准

[0080]

[0081] 5.4疗效评价标准

[0082] 治愈：试验期间，用药后，相关临床症状消失并无反复，症候总分不超过2分，为治愈。

[0083] 有效：试验期间，用药后，试验结束时症候总分不超过6分且无单项评分为6分，为有效。

[0084] 无效：试验期间，用药后，试验结束时总分超过6分或单项评分为6分，视为无效。

[0085] 治愈率＝治愈数/组内动物数×100％。

[0086] 有效率＝(治愈数+有效数)/组内动物数×100％。

[0087] 无效率＝无效数/组内动物数×100％。

[0088] 其中，家禽腺肌胃炎的症候评分标准如表2所示。

[0089] 6.试验结果

[0090] 6.1pH值

[0091] 对各组的肉鸡进行胃酸检测，其结果见表3。

[0092] 表3pH值检测数据

[0093]

[0094] 由表3可知，与空白组相比，模型组胃酸pH值显著低于空白组；实施例1、实施例2和对比例1胃酸pH显著高于模型组；对比例2、对比例3略高于模型组；阿莫西林组与模型组差异不显著。表明实施例1、实施例2和对比例1抑制胃酸效果较好，对比例2、对比例3和阿莫西林组抑制胃酸较弱。

[0095] 6.2日均增重

[0096] 对各组的肉鸡进行日均增重检测，其结果见表4。

[0097] 表4日均增重检测数据

[0098]

[0099] 由表4可知，与空白组相比，模型组鸡的日均增显著低于空白组；实施例1和实施例2鸡的日均增显著高于模型组；对比例1‑对比例3日均增重低于实施例；阿莫西林组与模型组日均增重差异不显著。

[0100] 6.3法氏囊指数

[0101] 对各组的肉鸡进行法氏囊指数检测，其结果见表5。

[0102] 表5法氏囊指数检测数据

[0103]

[0104] 由表5可知，与空白组相比，模型组法氏囊指数要显著低于空白组；实施例1和实施例2法氏囊指数明显高于模型组，其中实施例1效果更好；对比例1‑对比例3和阿莫西林组与模型组法氏囊指数差异不大，其中阿莫西林组法氏囊指数最低，可能是阿莫西林在抑制细菌的同时，对免疫器官造成了一定损伤。

[0105] 6.4家禽腺肌胃炎的治疗效果

[0106] 按照采用SPSS20统计软件进行数据分析与处理。计数资料采用X2检验；计量资料采用t检验或方差分析。其结果见表6。

[0107] 表6各试验组用药及治疗效果统计

[0108] 组别 药物 试验动物数量(只) 治愈数量(只) 治愈率(％) 有效数量(只) 有效率(％)试验1组 实施例1 30 19 63.3％ 25 83.3％试验2组 实施例2 30 16 53.3％ 24 80.0％
试验3组 对比例1 30 8 26.7％ 15 50.0％
试验4组 对比例2 30 10 33.3％ 16 53.3％
试验5组 对比例3 30 7 23.3％ 12 40.0％
试验6组 阿莫西林组 30 9 30.0％ 11 36.7％
试验7组 模型组 30 1 3.3％ 4 13.3％
试验8组 空白组 30 / / / /

[0109] 由表6可知，停药后解剖观察腺胃和肌胃，试验1组的治愈率(63.3％)最高，其次是试验2组(53.3％)，试验3组～试验6组次之，试验7组最低(3.3％)；试验1组的有效率(83.3％)最高，其次是试验2组(80.0％)，试验3组～试验6组次之，试验7组最低(13.3％)。阿莫西林组疗效不好，分析原因可能是阿莫西林在抑制细菌的同时，对免疫器官造成了一定损伤，并产生了耐药性。

[0110] 二、本发明防治家禽腺肌胃炎的药物安全性试验

[0111] 1.试验动物及药物用量

[0112] 将120只健康雏鸡公母均匀搭配后，随机分为4组，每组30只，分别为实施例1推荐剂量1倍剂量、3倍剂量、5倍剂量组和空白对照组，固定时间饮水给药，连续给药5天，给予同样饲料饲养。给药方案见表7。

[0113] 表7给药方案

[0114]

[0115] 2.观察及检测指标

[0116] 2.1临床观察

[0117] 试验期间观察试验鸡的精神状态、采食情况和粪便性状等指标，记录异常表现。试验前及试验结束时逐只称重。如果出现死亡，进行剖检和组织病理学检查。

[0118] 2.2体重及体温检测

[0119] 分别于给药前和停药后第1天对试验鸡进行体重及体温检测，详细记录。

[0120] 2.3血液常规指标及血液生化指标检测

[0121] 分别于给药前和停药后第1天对试验鸡进行采血、剖检，测定有关血液常规指标。检测指标包括红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)、白细胞分类计数、血红蛋白含量(HGB)等指标的测定。红细胞和白细胞计数采用血细胞计数法测定，血红蛋白采用比色法测定。

[0122] 用全自动生化分析仪测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、总胆红素(TBiL)、血糖(GLU)、尿酸(UA)、肌酐(Crea)等8项指标。

[0123] 2.4组织病理检查

[0124] 试验结束后，取各组鸡的心、肝、脾、肺和肾脏病理材料，进行称重，并作组织病理切片检查，用10％中性福尔马林溶液固定，石蜡包埋，切片，HE染色后于普通显微镜下观察。

[0125] 3.试验结果

[0126] 3.1临床表现

[0127] 通过对试验鸡的采食、精神、呼吸、饮水、粪便等观察发现，用药后各组试验鸡的食欲良好，精神状态良好，粪便形态无异常变化，无死亡情况。

[0128] 3.2不同给药计量对雏鸡体重的影响

[0129] 给药前和停药后第1天对各组的雏鸡进行体重检测，其结果见表8。

[0130] 表8实施例1对鸡体重的影响

[0131]

[0132] 由表8可知，在给药前、停药后第1天，1、3、5剂量组给药期间鸡增重无明显差异，与空白对照组相比略有下降。

[0133] 3.3不同给药计量对雏鸡体温的影响

[0134] 给药前和停药后第1天对各组的雏鸡进行体温检测，其结果见表9。

[0135] 表9鸡的体温变化

[0136]

[0137] 由表9可知，在给药前、停药后第1天，1、3、5剂量组鸡的体温与空白对照组相比无显著差异(P>0.05)，说明不同剂量组对鸡体温无不良影响。

[0138] 3.4不同给药计量对鸡血液常规指标的影响

[0139] 给药前和停药后第1天对各组的雏鸡进行血液常规指标检测，其结果见表10和表11。

[0140] 表10给药前鸡血常规指标

[0141]

[0142] 表11停药后第1天鸡血常规指标变化

[0143]

[0144] 由表10和表11可知，在给药前、停药后第1天，1、3、5剂量组鸡的RBC、HGB、WBC、淋巴细胞百分率(Ly)、中性粒细胞百分率(GNR)、单核细胞百分率(Mn)与空白对照组相比无显著差异(P>0.05)。这表明，说明不同剂量组不会引起鸡血常规指标异常。

[0145] 3.5不同给药计量对鸡血液生化指标的影响

[0146] 给药前和停药后第1天对各组的雏鸡进行血液生化指标检测，其结果见表12和表13。

[0147] 表12给药前鸡的血液生化指标

[0148]

[0149] 表13停药后第1天鸡的血液生化指标的变化

[0150]

[0151] 由表12和表13可知，在给药前、停药后第1天，1、3、5剂量组鸡的的ALT、AST、TP、ALB、UA、Crea、TBil、Glu与空白对照组相比无显著差异(P>0.05)。这表明，不同剂量组不会引起鸡血液生化指标异常。

[0152] 3.6不同给药计量对脏器指数的影响

[0153] 给药前和停药后第1天对各组的雏鸡进行脏器指数检测，其结果见表14。

[0154] 表14停药后第1天鸡脏器指数的变化

[0155]

[0156] 备注：指数＝脏器重量mg/鸡个体重量g

[0157] 由表14可知，停药后第1天1、3、5剂量组鸡的心、肝、脾、肾的脏器指数与空白对照组相比无显著差异(P>0.05)。这表明不同剂量组对鸡脏器的生长无明显影响。

[0158] 3.7不同给药计量对鸡重要器官病理组织学的影响

[0159] 鸡剖检经肉眼观察内脏器管未见明显病理变化，组织形态、颜色均未见明显异常改变，具体结果见图1。组织病理学切片检查表明，各剂量组鸡的心、肝、脾、肺和肾均未发现明显病理学变化。心肌纤维排列致密，相互连结成网状；肝脏中央静脉明显，肝细胞以中央静脉为轴心呈放射状或呈行排列，有不规则的窦状隙；脾脏脾索和脾窦相间排列，中央动脉明显，还可见大量淋巴细胞和有核红细胞；肺组织中有大量大小不等的肺泡，肺泡隔内含丰富的毛细血管；肾脏组织中肾小管及集合管明显。表明不同剂量组不会造成鸡实质性器官的病理损伤。

[0160] 本试验采用实施例1推荐剂量的1、3、5倍剂量饮水给药给药，连用5天。给药期间，试验各组在给药期间和停药观察期间未出现任何临床不良反应；各剂量组的试验鸡的增重与空白对照组相比差异不显著，说明实施例1对鸡的体重无不良影响；各剂量组的血液生化指标与空白对照组相比无显著差异，数值均在正常范围内；试验期间试验组鸡均无死亡。表明实施例1在推荐剂量内使用时，对鸡临床症状、血常规、血液生化无不良影响，未出现任何临床不良反应，本产品临床使用是安全的。

[0161] 本处方经过有效性试验和安全性试验，证明本品是安全有效的。

[0162] 综上所述，仅仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限定，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述技术内容作为启示加以变更或改型。这等同变化的等效实施例。但是，凡是未脱离本发明技术构思，依据本发明的技术实质对以上实施例所作出的简单修改，等同变化与改型，仍属于本发明权利要求的保护范围。