[0001] 本发明涉及兽用化药领域，具体涉及一种碘醚柳胺纳米混悬液及其制备方法与应用。

[0002] 碘醚柳胺是世界各国广泛应用的抗牛、羊片形吸虫药，还适用于血矛线虫病、羊鼻蝇蛆病和仰口线虫的治疗。目前中国兽药标准有碘醚柳胺混悬液(2％)、碘醚柳胺粉(2.5％)、碘醚柳胺片(50mg)三种剂型和规格，标准用量以碘醚柳胺计均为7‑12mg/Kg体重，由于用量大，存在耐药性风险、毒副作用大、畜产品安全隐患等客观问题。

[0003] 作为难溶性驱虫药物，碘醚柳胺混悬液仅仅是剂型上的改变，质量标准本质上没有提升，如：使用剂量没变、久置分层沉淀、使用不方便。以英特威国际有限公司法国厂生产的芬苯达唑混悬液为例，其用量是国内芬苯达唑粉、芬苯达唑片的用量的三分之一，关键在于实现了纳米化工艺改进。

[0004] 因此，提供一种碘醚柳胺纳米混悬液的制备方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

[0025] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0026] 在这里专用的词“实施例”，作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。本申请实施例中性能指标测试，除非特别说明，采用本领域常规试验方法。应理解，本申请中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本申请公开的内容。

[0027] 除非另有说明，否则本文使用的技术和科学术语具有本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义；作为本申请中其它未特别注明的试验方法和技术手段均指本领域内普通技术人员通常采用的实验方法和技术手段。

[0028] 为了更好的说明本申请内容，在下文的具体实施例中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本申请同样可以实施。在实施例中，对于本领域技术人员熟知的一些方法、手段、仪器、设备等未作详细描述，以便凸显本申请的主旨。

[0029] 在不冲突的前提下，本申请实施例公开的技术特征可以任意组合，得到的技术方案属于本申请实施例公开的内容。

[0030] 本发明公开了一种碘醚柳胺纳米混悬液的制备方法及应用。

[0031] 为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范围内。

[0032] 实施例1

[0033] 一种碘醚柳胺纳米混悬液的制备方法，包括以下步骤：

[0034] (1)称取碘醚柳胺20kg，加入超微粉碎机中超微粉碎，得到D505μm、D9015μm的碘醚柳胺。

[0035] (2)称取泊洛沙姆(338)2kg、吐温(80)1kg、RH401kg，添加到纯化水200kg中，制成澄清透明的溶液A，备用。

[0036] (3)称取山梨酸钾5kg、泥泊金甲酯(对羟基苯甲酸甲酯)1kg、叔丁基对苯二酚(TBHQ)0.1kg，添加到纯化水305kg中，制成澄清透明溶液B，备用。

[0037] (4)将步骤(1)所得碘醚柳胺添加到步骤(2)所得备用溶液A中，通过胶体磨、砂磨机进行充分研磨，制得粒径D50300nm、D90600nm的混悬液。

[0038] (5)将步骤(3)所得备用溶液B和步骤(4)所得混悬液，加至剪切乳化罐中，加入75kg纯化水，设定转速2900转/分钟剪切、搅拌30分钟，检测沉降体积比1.0,粒径D50300nm、D90600nm后，灌装即得碘醚柳胺纳米混悬液。

[0039] 实施例2

[0040] 一种碘醚柳胺纳米混悬液的制备方法，包括以下步骤：

[0041] (1)称取碘醚柳胺30kg，加入超微粉碎机中超微粉碎，得到D5010μm、D9020μm的碘醚柳胺。

[0042] (2)称取泊洛沙姆(407)2kg、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯1kg、十二烷基硫酸钠2kg，添加纯化水500kg中，制成澄清透明的溶液A，备用。

[0043] (3)称取山梨酸钾2kg、苯甲醇0.5kg，添加到纯化水250kg中，制成澄清透明溶液B，备用。

[0044] (4)将步骤(1)所得碘醚柳胺添加到步骤(2)所得备用溶液A中，通过胶体磨、高压均质机、砂磨机进行充分研磨，制得粒径D50400nm、D90700nm的混悬液。

[0045] (5)将步骤(3)所得备用溶液B和步骤(4)所得混悬液，加至剪切乳化罐中，设定转速2900转/分钟剪切、搅拌40分钟，检测沉降体积比1.0粒径D50400nm、D90700nm,后，灌装即得碘醚柳胺纳米混悬液。

[0046] 实施例3

[0047] 一种碘醚柳胺纳米混悬液的制备方法，包括以下步骤：

[0048] (1)称取碘醚柳胺40kg，加入超微粉碎机中超微粉碎，得到D5015μm、D9030μm的碘醚柳胺。

[0049] (2)称取PVPK301kg、HPMC2kg、十二烷基硫酸钠2.5kg，添加到纯化水825kg中，制成澄清透明的溶液A，备用。

[0050] (3)称取山梨酸钾1kg、苯甲酸钠1kg、苯甲醇0.5kg，添加到纯化水375kg中，制成澄清透明溶液B，备用。

[0051] (4)将步骤(1)所得碘醚柳胺添加到步骤(2)所得备用溶液A中，通过胶体磨、高压均质机进行充分研磨，制得粒径D50500nm、D90800nm的混悬液。

[0052] (5)将步骤(3)所得备用溶液B和步骤(4)所得混悬液，加至剪切乳化罐中，加入纯化水800kg，设定转速2900转/分钟剪切、搅拌50分钟，检测沉降体积比1.0,粒径D50500nm、D90800nm后，灌装即得碘醚柳胺纳米混悬液。

[0053] 为了进一步证明本发明的有益效果以更好地理解本发明，通过以下试验例进一步阐明本发明公开的技术特点，但不可理解为对本发明的限定。对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的其他不含创造性工作的改进，也视为落在本发明的保护范围内。

[0054] (一)碘醚柳胺纳米混悬液长期稳定性观察

[0055] 1、强光照射试验

[0056] 强光照射试验目的是为碘醚柳胺纳米混悬液包装贮存条件提供依据，将供试品置于药品综合稳定性试验箱内，于照度4500±500Lx的条件下放置10天，分别于5天和10天取样，对稳定性重点考察项目，如含量、性状、粒径(D50、D90)、沉降体积比等进行检测。

[0057] 强光照射试验中碘醚柳胺纳米混悬液的含量、性状、粒径和沉降体积比的检测结果见表1，强光照射试验结果表明，在照度4500±500Lx的条件下，试验进行到第10天时，碘醚柳胺纳米混悬液含量、性状、粒径、沉降体积比均无无明显变化。结果表明，碘醚柳胺纳米混悬液经强光照射试验后质量稳定。

[0058] 表1强光照射试验结果

[0059]

[0060]

[0061] 2加速试验

[0062] 加速试验是在超常的条件下进行，其目的是通过加速碘醚柳胺的化学或物理变化，预测碘醚柳胺纳米混悬液的稳定性，为其申报生产、运输和存贮提供必要的资料。按《中国兽药典》中药品稳定性试验指导原则进行操作，将供试品置于40±2℃，相对湿度75±5％条件下，放置6个月，在1个月、2个月、3个月、6个月末分别取样一次，对其稳定性重点考察项目，如含量、性状、粒度和沉降体积比等进行检测。

[0063] 温度40℃和相对湿度75％条件下的加速试验中，碘醚柳胺纳米混悬液的含量、性状、粒度和沉降体积比的检测结果见表2。由表2可见，6个月内碘醚柳胺纳米混悬液经加速试验后质量稳定。

[0064] 表2加速试验结果

[0065]

[0066]

[0067] 综上所述，本发明的碘醚柳胺纳米混悬液经过强光照射试验和加速试验表明，制剂稳定性高，是一种的稳定的兽用纳米混悬液制剂，可以规模化生产。

[0068] (二)碘醚柳胺纳米混悬液与市售碘醚柳胺混悬液药代动力学比对试验

[0069] 1、试验方法

[0070] 选择健康、状态良好的波尔山羊32只，3月龄，平均体重为22.45±4.59kg，雌雄各半，采用耳号标记，编号为1～32号，每8只一组，分为4组，1组为实施例1试验组、2组为实施例2试验组、3组为实施例3试验组、4组为市售碘醚柳胺混悬液试验组。开始试验前禁食12小时，在清洁、安静的环境中饲养，每日定量饲喂不含任何药物的饲草，自由饮水。按照7.0mg/Kg体重标准，分别灌服实施例1、实施例2、实施例3和市售碘醚柳胺混悬液所对应试验组。分别于给药前0d和给药后1d、2d、4d、6d、6.5d、7d、7.5d、8d、8.5d、9d、9.5d、10d、10.5d、11d、11.5d、12d、12.5d、13d、13.5d、14d、14.5d、15d、15.5d、16d、16.5d、17d、17.5d、18d、19d、
22d、24d、26d、28d、30d、32d、34d、36d，从羊的前腔静脉丛采集5mL，3000r/min离心10min，分离血浆，置于‑20℃保存备用。

[0071] 利用高效液相色谱仪、三重四级杆质谱仪、台式离心机、分析天平等仪器进行处理TM和测试，采用WinNonlin 8.1软件中非房室模型进行血浆药代动学参数分析，结果均以平均值±标准差表示。根据药代动力学参数结果计算相对生物利用度。

[0072] 2、试验结果

[0073] 实测的血药浓度时间数据采用WinNonlinTM8.1软件中非房室模型进行血浆药代动学参数分析，结果见表3。

[0074] 表3血浆药代动力学参数

[0075]

[0076] 综上所述，本发明的碘醚柳胺纳米混悬液：达峰时间比市售组提前1.1‑1.15d，达峰浓度是市售组的1.8‑2.05倍，半衰期比市售组长1.25‑2.09天，药时曲线下面积是市售组的1.8‑2.07倍，相对生物利用度是市售组的183.82％‑207.07％，且从趋势分析，实施例1最好，其次实施例2，第三是实施例3，说明碘醚柳胺纳米是一种达峰时间更短、达峰浓度更高、半衰期更长、生物利用度更高的兽用制剂。

[0077] (三)碘醚柳胺纳米混悬液临床应用效果

[0078] 利用本发明实施例1、实施例2、实施例3所制得的样品(按照3.5mg/Kg体重)，以及市售碘醚柳胺混悬(按照7mg/Kg体重)，分别在甘肃、宁夏、内蒙古等自然牧场或养殖场选取了自然发病的牛、羊1140头/只进行了临床试验，临床效果见表4。

[0079] 表4碘醚柳胺纳米混悬液的临床效果

[0080]

[0081]

[0082] 由表4可知，在使用剂量低于兽药标准规定50％的情况下，本发明实施例1、实施例2、实施例3的治疗效果均明显高于市售碘醚柳胺混悬液，且实施例1、实施例2、实施例3治疗效果无明显差异。

[0083] 并根据药代动力学试验结果显示，碘醚柳胺粒径越小，效果越突出，所以规模生产时会再根据辅料及加工成本核算进一步确认与之相适配的技术方案。

[0084] 上述实施实例表明：本发明的碘醚柳胺纳米混悬液具有稳定性好、用量小、生物利用度高、效果好的特点，对于防治牛、羊肝片吸虫、血矛线虫、仰口线虫和羊鼻蝇蛆性价比高，同时减少了耐药风险、减少了药残，保证了畜产品安全。在规模化养殖场和牧区的推广应用及产业化前景十分广阔。

[0085] 对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。