技术领域
[0001] 本发明属于农业种植技术领域，具体涉及一种利用人工种子高效混播的方法。
相关背景技术
[0002] 混播是建植优良绿色草坪的重要方式，混播草种需根据草坪草的生物学特性及功能和人们的需要进行合理搭配，如：暖季型草种和冷季型草种混播可延长草坪绿期；用耐践踏性强和耐修剪草种混播，以提高草坪的耐磨性等。混播可发挥各种草坪草的优良特性，适应变化较大的环境条件，更快地形成草坪，并能保持草坪质量的稳定性，延长草坪寿命。
[0003] 现有技术中如公开号为CN100348084C的中国专利提供了一种滑草场草坪的建植方法，其通过将早熟禾草种、高羊茅草种和黑麦草草种按比例混合后，对早熟禾草种、高羊茅草种和黑麦草草种三种草种的种子的播种量进行合理科学优化，使得成坪后的滑草场草坪具有更高的耐磨能力和恢复能力，有效地提高了滑草场草坪的使用寿命。
[0004] 但是上述现有混播技术还存在对混播种子前处理不足，导致混播种子发芽率不足和储存不易，致使混播技术发展大大受限。
具体实施方式
[0022] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。
[0023] 实施例1
[0024] 本实施例提供一种利用人工种子高效混播的方法，包括以下步骤：
[0025] S1种子材料消毒：将需要混播的种子材料按比例混匀后浸泡在消毒液I中，浸泡后清洗再将种子浸泡在消毒液II中，最后清洗种子并吸干种子水分；
[0026] 具体的，将2000粒匍匐翦股颖种子‘PennA4’与1000粒普通狗牙根种子‘common’充分混匀，随后将混合后的种子浸泡在75％乙醇(该溶液通过将无水乙醇与水按照75：25的体积比混合得到)中浸泡2分钟，再用蒸馏水洗涤2次后沥干水分。向混合种子中加入100mL的有效氯浓度0.056％的次氯酸钠溶液中浸泡15min，期间适当摇晃2‑3次后用无菌水清洗，冲洗后置于无菌滤纸吸干水分，即获得无菌的种子。
[0027] S2制备人工胚乳：将S1得到的无菌种子材料接种至培养基上悬浮混匀，将悬浮液滴入络合剂中络合；
[0028] 具体的，取30g/L海藻酸钠溶液在121℃下灭菌15min后冷却至室温，向其中加入0.44g的MS粉末混匀后再加入GA3激素制成培养基，保证GA3激素的浓度为5mg/L。将上述培养基混匀后将S1中得到的无菌种子加入混匀悬浮。
[0029] 随后配置无菌4％的CaCl2溶液(将20g的CaCl2溶解于480g水中，并于121℃灭菌15min)，将所混匀的悬浮液滴入CaCl2溶液中，全部滴入后等待10min后全部取出冷藏备用。
如图1所示。
[0030] S3储存和培养：将S2得到的人工胚乳冷冻储存，使用时将冷藏的人工胚乳置于培养基质中培育发芽。
[0031] 具体的，将步骤S2中所得到的人工胚乳均匀播种至含有泥炭土的培养皿中，再将2
其置于培养室中，培养室环境相对湿度为65％、PAR为800μmol/m /s、平均温度30℃/25℃(昼/夜)，光周期16h下培养30天。同时S2中所得人工胚乳可以保存在4℃下7天。
[0032] 实施例2
[0033] 本实施例与实施例1的区别在于，步骤S1中种子浸泡在次氯酸钠溶液中的时间为25min，其他实验步骤和参数与实施例1均相同。
[0034] 实施例3
[0035] 本实施例与实施例1的区别在于，步骤S2中海藻酸钠溶液浓度为20g/L，其他实验步骤和参数与实施例1均相同。
[0036] 实施例4
[0037] 本实施例与实施例1的区别在于，步骤S3中培养的人工胚乳为S2步骤制备后冷藏90天后人工胚乳，其他实验步骤和参数与实施例1均相同，培养情况如图2所示。
[0038] 实施例5
[0039] 本实施例与实施例1的区别在于，步骤S2中培养基中GA3的浓度为10mg/L，其他实验步骤和参数与实施例1均相同。
[0040] 对比例1
[0041] 本对比例与实施例1的区别在于，步骤S1中种子浸泡在次氯酸钠溶液中的时间为0min，其他实验步骤和参数与实施例1均相同。
[0042] 对比例2
[0043] 本对比例与实施例1的区别在于，步骤S1中种子浸泡在次氯酸钠溶液中的时间为30min，其他实验步骤和参数与实施例1均相同。
[0044] 对比例3
[0045] 本对比例与实施例1的区别在于，步骤S2中海藻酸钠溶液浓度为10g/L，其他实验步骤和参数与实施例1均相同。
[0046] 对比例4
[0047] 本对比例与实施例1的区别在于，步骤S2中海藻酸钠溶液浓度为40g/L，其他实验步骤和参数与实施例1均相同。
[0048] 对比例5
[0049] 本对比例与实施例1的区别在于，步骤S2中培养基中GA3的浓度为1mg/L，其他实验步骤和参数与实施例1均相同。
[0050] 对比例6
[0051] 本对比例与实施例1的区别在于，步骤S2中培养基中没有添加GA3，而使用6‑BA作为生长激素，浓度为5mg/L，其他实验步骤和参数与实施例1均相同。
[0052] 对比例7
[0053] 本对比例与实施例1的区别在于，采用种子直接混播的方式培育。具体步骤为将2000粒匍匐翦股颖种子‘PennA4’与1000粒普通狗牙根种子‘common’充分混匀后直接播种在含有泥炭土的培养皿中，再将其置于培养室中，培养室环境相对湿度为65％、PAR为800μ
2
mol/m/s、平均温度30℃/25℃(昼/夜)，光周期16h下培养30天。
[0054] 实验例一：次氯酸钠灭菌步骤及其时间对混播种子发芽情况的影响[0055] 实验方法：取实施例1、实施例2以及对比例1‑2步骤S1中所得无菌种子，将其播种于灭菌后含有湿润滤纸的培养皿中，10天后统计种子的发芽率和污染率，实验结果如下表1中所示，其中发芽率＝种子萌发的数量/接种的种子总数×100％，污染率＝污染的种子数量/接种的种子总数×100％。
[0056] 表1：次氯酸钠灭菌步骤及其时间对混播种子发芽情况的影响实验结果表[0057]
[0058]
[0059] 实验结果分析：由上表可知，当不适用次氯酸钠消毒的种子其种子的污染率为100％，在后期培育过程中会严重影响种子的发育和培养。而当消毒时间过长则会导致种子的发芽率迅速降低。而消毒时间在15～25min中既能保证本混播种子免受污染，还不影响种子的发芽率。
[0060] 实验例二：不同海藻酸钠浓度对种子的影响
[0061] 实验方法：取实施例1、实施例3和对比例3‑4中步骤S2中所制备的人工胚乳置于实施例1中的培养环境中培养，测试种子的发芽率及其种皮完整度。实验结果如下表2中所示：
[0062] 表2：不同海藻酸钠浓度对草种发芽率影响实验结果表
[0063]
[0064] 实验结果分析：由上表可知，海藻酸钠浓度在20～30g/L的情况下，所制备的人工胚乳既能保持较高的发芽率，种皮表面的完整度较高。而当海藻酸钠的浓度降低后人工胚乳无法成型，而海藻酸钠的浓度过高后则种子无法保持正常的发芽率。
[0065] 实验例三：不同生长激素浓度和种类对种子发芽时间的影响
[0066] 实验方法：取实施例1、实施例5和对比例5、6中步骤S2中所制备的人工胚乳并按照其培养条件培养，测试种子的发芽时间。实验结果如下表3中所示：
[0067] 表3：不同生长激素浓度及种类对草种发芽时间影响实验结果表
[0068]
[0069] 实验结果分析：从上述实验结果可知，本发明实施例1和实施例5采用5mg/L和10mg/L的GA3作为生长激素，人工胚乳的平均发芽时间为3天左右。而降低生长激素的浓度或者采用6‑BA代替GA3，人工种子的发芽时间增长至5天左右。
[0070] 对比实施例和对比例7的试验结果，采用直接混合播种出来的人工种子发芽率在99％左右，但是其平均发芽时间约为5天，相比于本发明实施例中的人工胚乳发芽时间延长了2天。同时采用直接混合播种出来的人工种子培育出来的草坪草种混合不均，草坪质量较差。
[0071] 对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非只包含一个技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
