[0001] 本发明涉及昆虫饲养技术领域，尤其涉及一种龟纹瓢虫性别调控方法。

[0002] 龟纹瓢虫(Propylea japonica)隶属于鞘翅目(Coleoptera)，瓢甲科(Coccinellidae)，其成虫和幼虫均为凶猛的肉食性昆虫，猎物范围广泛，可捕食包括蚜虫、叶蝉、飞虱、蚧壳虫在内的多种半翅目害虫以及鳞翅目昆虫的卵和低龄幼虫等，其中最为喜食蚜虫。并且龟纹瓢虫具有繁殖快、产卵量多、成虫寿命长、捕食量大、适应能力强、年发生代数多等特点，因此是一类极具开发潜力的天敌昆虫。

[0003] 目前关于龟纹瓢虫的规模化人工饲养技术吸引了众多研究者和生产者的关注，然而关于其性别调控的研究却罕见报道。一种生防天敌能否在商业化应用中取得成功，关键在于如何避免其在引入地成为入侵物种，否则可能会对当地的生态环境造成严重影响。例如异色瓢虫(Harmonia axyridis)曾于1916年被北美广大地区引入，用以对蚜虫进行生物防治，初期确实达到了预期目的。然而半个多世纪后，异色瓢虫却已遍布南美、欧洲和北美洲大部分地区，成为引入天敌进行生物防治后又成为入侵物种的典型案例。

[0004] 动物性别决定是一个可塑的生物发育过程，通过调控动物性比可取得更好的经济效益。例如，在水产养殖中，罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)雄虾体重是雌虾的2‑4倍，因而常采用全雄单性养殖方式以提升养殖效益。此外，家蚕(Bombyx mori)雄蚕体质强健，易饲养，且雄蚕丝纤度细、净度好，适于缫制高品位生丝，因此专养雄蚕被广泛应用于蚕业生产。同理，作为一种田间的天敌昆虫，若能精准控制龟纹瓢虫雌雄性别比例，大幅度提升龟纹瓢虫雄性比例，甚至实现全雄性饲养，将有助于在田间大批量释放雄性龟纹瓢虫以防治农业害虫。因雄性龟纹瓢虫缺乏与雌性龟纹瓢虫交配，种群必将无法繁衍，以此可有效降低其成为引入地入侵生物的风险。此外，通过调控龟纹瓢虫性别比例并增加雄性龟纹瓢虫比例，售卖雄性龟纹瓢虫，也可避免客户购买龟纹瓢虫后自繁种群，也提升了该生防天敌的商业价值。这一策略有利于企业建立良性商业循环模式，提升其推广应用生防天敌控制蚜虫的积极性，最终推动生防天敌的产业化发展与农林生态环境的保护。

[0005] 现已有大量文献报道龟纹瓢虫室内人工饲养的方法，但如何精准的去控制性别至今还未见报道。龟纹瓢虫在正常饲养条件下成虫的雌雄比例接近1:1，这对于除性别调控方面外的研究能够满足，然而如何调控龟纹瓢虫的性别分化，提升雄性龟纹瓢虫比例尚未见报道。

[0022] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进一步详细说明。

[0023] 以下实施例仅用于阐释本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

[0024] 本发明提供的一种调控龟纹瓢虫性别比例的方法，包括：

[0025] (1)收取正常饲养条件下龟纹瓢虫的卵，选择植物叶片和种植蚕豆苗的容器外沿上的卵。尽量收取发育时间一致的卵块，避免卵发育进度不一致导致的先孵化幼虫取食卵的现象。为确保卵的孵化期一致，可提前换取新的带有蚜虫的蚕豆苗，以供龟纹瓢虫产卵。在卵孵化出幼虫后，挑取发育一致的1龄幼虫、或2龄幼虫，进行单独饲养。正常饲养条件为光周期16L:8D，温度为23℃‑27℃，环境湿度为60％–80％。

[0026] (2)分别将同一发育时段的卵、1龄幼虫、2龄幼虫放置到塑料培养皿中，塑料培养皿直径6cm–12cm，高1.5cm–3cm。饲养条件为光周期16L:8D，温度31℃–37℃，环境湿度为60–80％。

[0027] (3)在塑料培养皿中将龟纹瓢虫卵及各个龄期幼虫饲养至成虫，限于培养皿的体积一定、龟纹瓢虫数量太多活动空间拥挤外，更容易出现自相残杀的现象，每个培养皿中龟纹瓢虫卵或幼虫的数量应小于50头，且应及时向塑料培养皿中补充蚜虫，保证有足够多的蚜虫可供龟纹瓢虫取食。

[0028] (4)当卵或幼虫饲养至化蛹后不必再补充蚜虫，等待龟纹瓢虫的蛹羽化为成虫后，记录雌雄个数，通过解剖观察龟纹瓢虫性器官鉴定性别，成虫腹部第六腹节内为卵巢的计作雌性、为精巢的计作雄性。

[0029] (5)龟纹瓢虫成虫群体中雄性比例＞97％。

[0030] 实施例1高温处理龟纹瓢虫卵提升成虫期龟纹瓢虫雄性比例的试验

[0031] 1.提前一天晚上更换新的蚕豆苗，第二天早上收取植物叶片和小花盆上的卵块，分别放在铺有卫生纸的培养皿中，每个培养皿中放置50粒卵，收取6组，其中3组在正常饲养条件下成长到成虫，作为对照组；另外3组在31℃气候箱中饲养至成虫，作为试验组。

[0032] 2.至成虫羽化后，分别统计对照组与试验组龟纹瓢虫雌雄成虫数量，并计算雄性、雌性比例，以及雄性占比；采用单因素方差分析检验试验组与处理组间龟纹瓢虫雌雄成虫比例之间的差异显著性。

[0033] 3.对照组与试验组均用豌豆修尾蚜饲养，除饲养温度不同外，其余环境条件相同：光周期均为16L:8D，相对湿度均为70±10％。

[0034] 表1高温饲养条件下龟纹瓢虫卵发育为成虫时雌雄成虫数量与雄性占比[0035]

[0036] 注：*代表试验组与对照组对应指标数值之间差异达到显著水平。

[0037] 结果表明：在31℃温度条件下，龟纹瓢虫卵发育至成虫，雄性成虫的比例显著提高，达98.35％，雄性与雌性比例达40:1。

[0038] 实施例2高温处理龟纹瓢虫1龄幼虫提升成虫期龟纹瓢虫雄性比例的试验[0039] 1.提前一天晚上更换新的蚕豆苗，第二天早上收取植物叶片和小花盆上的卵块，分别放在铺有卫生纸的培养皿中，待龟纹瓢虫卵孵化后，饲养至1龄幼虫，而后挑取发育一致的1龄幼虫置于培养皿中，每个培养皿中30头虫，同样挑取6组，其中3组于正常条件下饲养至成虫，作为对照组；另外3组置于34℃气候箱中一直饲养至成虫，作为试验组。

[0040] 2.至成虫羽化后，分别统计对照组与试验组龟纹瓢虫雌雄成虫数量，并计算雄性、雌性比例，以及雄性占比；采用单因素方差分析检验试验组与处理组间龟纹瓢虫雌雄成虫比例之间的差异显著性。

[0041] 3.对照组与试验组均用豌豆蚜饲养，除饲养温度不同外，其余环境条件相同：光周期均为16L:8D，相对湿度均为70±10％。

[0042] 表2高温饲养条件下龟纹瓢虫1龄幼虫发育为成虫时雌雄成虫数量与雄性占比[0043]

[0044] 注：*代表试验组与对照组对应指标数值之间差异达到显著水平。

[0045] 结果表明：在34℃温度条件下，龟纹瓢虫1龄幼虫发育至成虫，雄性成虫的比例显著提高，达98.89％，雄性与雌性比例达28:1。

[0046] 实施例3高温处理龟纹瓢虫2龄幼虫提升成虫期龟纹瓢虫雄性比例的试验[0047] 1.提前一天晚上更换新的蚕豆苗，第二天早上收取植物叶片和小花盆上的卵块，分别放在铺有卫生纸的培养皿中，待龟纹瓢虫卵孵化后，饲养至2龄幼虫，而后挑取发育一致的2龄幼虫置于培养皿中，每个培养皿中30头虫，同样挑取6组，其中3组于正常条件下饲养至成虫，作为对照组；另外3组置于37℃气候箱中一直饲养至成虫，作为试验组。

[0048] 2.至成虫羽化后，分别统计对照组与试验组龟纹瓢虫雌雄成虫数量，并计算雄性、雌性比例，以及雄性占比；采用单因素方差分析检验试验组与处理组间龟纹瓢虫雌雄成虫比例之间的差异显著性。

[0049] 3.对照组与试验组均用巢菜修尾蚜饲养，除饲养温度不同外，其余环境条件相同：光周期均为16L:8D，相对湿度均为70±10％。

[0050] 表3高温饲养条件下龟纹瓢虫2龄发育为成虫时雌雄成虫数量与性比

[0051]

[0052] 注：*代表试验组与对照组对应指标数值之间差异达到显著水平。

[0053] 结果表明：在37℃温度条件下，龟纹瓢虫2龄幼虫发育至成虫，雄性成虫的比例显著提高，达97.73％，雄性与雌性比例达29:1。

[0054] 对比例高温处理龟纹瓢虫3龄幼虫成虫期对龟纹瓢虫雌雄比例影响的试验[0055] 1.提前一天晚上更换新的蚕豆苗，第二天早上收取植物叶片和小花盆上的卵块，分别放在铺有卫生纸的培养皿中，待龟纹瓢虫卵孵化后，饲养至3龄幼虫，而后挑取发育一致的3龄幼虫置于培养皿中，每个培养皿中30头虫，同样挑取6组，其中3组于正常条件下饲养至成虫，作为对照组；另外3组置于34℃气候箱中一直饲养至成虫，作为试验组。

[0056] 2.至成虫羽化后，分别统计对照组与试验组龟纹瓢虫雌雄成虫数量，并计算雄性、雌性比例，以及雄性占比；采用单因素方差分析检验试验组与处理组间龟纹瓢虫雌雄成虫比例之间的差异显著性。

[0057] 3.对照组与试验组均用豌豆修尾蚜饲养，除饲养温度不同外，其余环境条件相同：光周期均为16L:8D，相对湿度均为70±10％。

[0058] 表4高温饲养条件下龟纹瓢虫3龄发育为成虫时雌雄成虫数量与性比

[0059]

[0060] 结果表明：与对照组相比，在34℃温度条件下，龟纹瓢虫3龄幼虫发育至成虫时，雄性成虫比例仍为50％，雄性与雌性比例为1:1。即龟纹瓢虫发育至3龄之后，其性别决定已经完成，即使采用高温饲养条件，亦不能改变其性别比例。

[0061] 以上实施例与对比例结果表明，采用本发明可实现通过温度控制龟纹瓢虫卵及低龄幼虫发育至成虫时的雌雄性别比例，与正常饲养条件相比，高温饲养环境可改变龟纹瓢虫雌雄性别分化，显著提升雄性成虫比例，短时间内可实现雄性成虫批量化生产。

[0062] 所属领域的普通技术人员应当理解：以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。