[0001] 本发明涉及化工技术领域，具体涉及一种5‑甲基烟酸的纯化方法。

[0002] 富马酸卢帕他定，别名8‑氯‑6,11‑二氢‑11‑[1‑[(5‑甲基‑3‑吡啶基)甲基]‑4‑哌啶亚基]‑5H‑苯并[5,6]环庚烷并[1,2‑b]吡啶富马酸盐，由西班牙制药公司Uriach最先研制产生，是一种具备双重作用机制的抗过敏药物，通过抗组胺和拮抗血小板活化因子（PAF）的双重阻断作用，对治疗过敏性疾病有着显著的治疗效果。5‑甲基烟酸是重要的药物中间体，作为抗过敏药物富马酸卢帕他定的合成用起始物料，在现有公布专利CN113200910A关于5‑甲基烟酸的制备工艺，得到最终产物为甲醇的混合物，并未提供一种有效地分离纯化的方法；CN105712978A关于5‑甲基烟酸甲酯反应液后处理过程为浓缩，在pH为8～9的环境中，通过乙酸乙酯萃取，经过食盐水洗涤，将有机层干燥浓缩得到5‑甲基烟酸甲酯，后续反应是将5‑甲基烟酸甲酯直接溶解于甲醇做进一步反应，但是产品纯度却未做出报道。

[0003] 同时，查阅目前已公布的文献和专利中并没有5‑甲基烟酸的纯化或检测法，现有国家或行业标准中没有5‑甲基烟酸或富马酸卢帕他定起始物料5‑甲基烟酸的相关质量标准及质量控制检测方法。

[0019] 以下结合具体实施例对本发明作出进一步清楚详细的描述说明。本领域普通技术人员在基于这些说明的情况下将能够实现本发明。此外，下述说明中涉及到的本发明的实施例通常仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。因此，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

[0020] 如无特殊说明，本发明实施例所用原料均为市售或本领域技术人员可获得的原料；如无特殊说明，本发明实施例所用方法均为本领域技术人员所掌握的方法。

[0021] 如无特殊说明，本发明所用标准样采用分析纯的各物质成分采用共溶混匀并结晶的方式进行制备，其各成分具体含量详见实施例5部分。

[0022] 实施例1：一种5‑甲基烟酸的纯化方法，所述方法包括：
（1）将纯度99 %的三氟乙酸、纯度99.9 %的乙腈以及蒸馏水按比例混合均匀，在温度为24 ℃、压强为0.03 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气2 h，制得流动相A，其中流动相A组分为0.1 wt%的三氟乙酸、1.8 wt%的乙腈、余量为蒸馏水；
（2）将纯度99 %的三氟乙酸与纯度99.9 %的乙腈按比例混合均匀，在温度为24 ℃、压强为0.03 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气2 h，制得流动相B，其中流动相B组分为
0.1 wt%的三氟乙酸、余量为乙腈；
（3）将硅球加入2 mol/L盐酸中，盐酸的使用量为40 mL/g硅球，浸泡进行3 h，烘干，制得活化硅球；将活化硅球与纯度99 %的N,N‑二甲基三甲基硅胺按0.8：1的质量比混合均匀，在转速为80 r/min、温度为60 ℃的环境中，搅拌4 h，烘干，制得改性硅胶；将改性硅胶、纯度99 %的氯铂酸以及纯度99 %的三氯甲烷按2：1：0.8的质量比混合均匀，在温度为
140 ℃温度条件下回流7 h，制得改性填料；将改性填料、纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶以及纯度99 %的聚乙二醇按4：6：25的质量比混合均匀，在功率为200 W、温度为20 ℃的环境中，超声60 min，制得尺寸为250×4.5 mm的吸附柱；
（4）将1 g浓度为65 %的5‑甲基烟酸标准样（待处理物）、流动相A以及流动相B按比例混合均匀，制得待处理液，其中由90 %的流动相A和10 %的流动相B构成稀释剂，稀释剂与
5‑甲基烟酸含量65 %的待处理物制备成浓度为1 mg/mL的待处理液，通过吸附柱，将纯化后液体蒸发结晶，以HPLC法检测并记录结晶纯度和质量。

[0023] 检测得纯化后得到0.662 g纯度为98.1 %的晶体，通过计算可知理论原待处理物纯度为64.94 wt%，与标准样的浓度差距极小，可见本发明技术方案除了实现对5‑甲基烟酸的纯化还能够配合常规的HPLC法进行高精度表征，用以检测待测样中的5‑甲基烟酸含量，且能够避免大量的杂质干扰，而常见的干扰物杂质将会对HPLC法的检测结果产生极大的干扰，如直接对本例所用的标准样以HPLC法进行5‑甲基烟酸含量表征，表征结果则显示约68.7 wt%，具有极大的偏差。

[0024] 实施例2：一种5‑甲基烟酸的纯化方法，所述方法包括：
（1）将纯度99 %的三氟乙酸、纯度99.9 %的乙腈以及蒸馏水按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度60 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相A，其中流动相A组分为0.1 wt%的三氟乙酸、2 wt%的乙腈、余量为蒸馏水；
（2）将纯度99 %的三氟乙酸与纯度99.9 %的乙腈按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相B，其中流动相B组分为
0.2 wt%的三氟乙酸、余量为乙腈；
（3）将硅球加入2 mol/L盐酸中，盐酸的使用量为50 mL/g硅球，浸泡进行2.5 h，烘干，制得活化硅球；将活化硅球与纯度99 %的N,N‑二甲基三甲基硅胺按1：1的质量比混合均匀，在转速为90 r/min、温度为70 ℃的环境中，搅拌3 h，烘干，制得改性硅胶；将改性硅胶、纯度99 %的氯铂酸以及纯度99 %的三氯甲烷按2.5：1：1的质量比混合均匀，在温度为150 ℃温度条件下回流6 h，制得改性填料；将改性填料、纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶以及纯度99 %的聚乙二醇按5：7.5：25的质量比混合均匀，在功率为300 W、温度为25 ℃的环境中，超声45 min，制得尺寸为250×4.7 mm的吸附柱；
（4）将1 g浓度为65 %的5‑甲基烟酸标准样（待处理物）、流动相A以及流动相B按比例混合均匀，制得待处理液，其中由95 %的流动相A和5 %的流动相B构成稀释剂，稀释剂与
5‑甲基烟酸含量65 %的待处理物制备成浓度为1 mg/mL的待处理液，通过吸附柱，将纯化后液体蒸发结晶，以HPLC法检测并记录结晶纯度和质量。

[0025] 检测得纯化后得到0.663 g纯度为97.9 %的晶体，通过计算可知理论原待处理物纯度为64.91 %，与实际待处理物纯度相差极小，可见本发明技术方案除了实现对5‑甲基烟酸的纯化还能够配合常规的HPLC法进行高精度表征，用以检测待测样中的5‑甲基烟酸含量。

[0026] 实施例3：一种5‑甲基烟酸的纯化方法，所述方法包括：
（1）将纯度99 %的三氟乙酸、纯度99.9 %的乙腈以及去离子水按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相A，其中流动相A组分为0.1 wt%的三氟乙酸、2 wt%的乙腈、余量为去离子水；
（2）将纯度99 %的三氟乙酸与纯度99.9 %的乙腈按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度60 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相B，其中流动相B组分为
0.2 wt%的三氟乙酸、余量为乙腈；
（3）将硅球加入2 mol/L盐酸中，盐酸的使用量为50 mL/g硅球，浸泡进行2.5 h，烘干，制得活化硅球；将活化硅球与纯度99 %的N,N‑二甲基三甲基硅胺按1：1的质量比混合均匀，在转速为90 r/min、温度为70 ℃的环境中，搅拌3 h，烘干，制得改性硅胶；将改性硅胶、纯度99 %的氯铂酸以及纯度99 %的三氯甲烷按2.5：1：1的质量比混合均匀，在温度为150 ℃温度条件下回流6 h，制得改性填料；将改性填料、纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶以及纯度99 %的聚乙二醇按5：7.5：25的质量比混合均匀，在功率为300 W、温度为25 ℃的环境中，超声45 min，制得尺寸为250×4.7 mm的吸附柱；
（4）将1 g浓度为65 %的5‑甲基烟酸标准样（待处理物）、流动相A以及流动相B按比例混合均匀，制得待处理液，其中由流动相A构成稀释剂，稀释剂与5‑甲基烟酸含量65 %的待处理物制备成浓度为1 mg/mL的待处理液，通过吸附柱，将纯化后液体蒸发结晶，以HPLC法检测并记录结晶纯度和质量。

[0027] 检测得纯化后得到0.659 g纯度为98.3 %的晶体，通过计算可知理论原待处理物纯度为64.78 %，与实际待处理物纯度相差极小，可见本发明技术方案除了实现对5‑甲基烟酸的纯化还能够配合常规的HPLC法进行高精度表征，用以检测待测样中的5‑甲基烟酸含量。

[0028] 实施例4：一种5‑甲基烟酸的纯化方法，所述方法包括：
（1）将纯度99 %的三氟乙酸、纯度99.9 %的乙腈以及蒸馏水按比例混合均匀，在温度为26 ℃、压强为0.07 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气1 h，制得流动相A，其中流动相A组分为0.1 wt%的三氟乙酸、2.2 wt%的乙腈、余量为蒸馏水；
（2）将硅球加入2 mol/L盐酸中，盐酸的使用量为60 mL/g硅球，浸泡进行2 h，烘干，制得活化硅球；将活化硅球与纯度99 %的N,N‑二甲基三甲基硅胺按1.2：1的质量比混合均匀，在转速为100 r/min、温度为80 ℃的环境中，搅拌2 h，烘干，制得改性硅胶；将改性硅胶、纯度99 %的氯铂酸以及纯度99 %的三氯甲烷按3：1：1.2的质量比混合均匀，在温度为
160 ℃温度条件下回流5 h，制得改性填料；将改性填料、纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶以及纯度99 %的聚乙二醇按6：10：25的质量比混合均匀，在功率为400 W、温度为30 ℃的环境中，超声30 min，制得尺寸为250×5.0 mm的吸附柱；
（3）将1 g浓度为65 %的5‑甲基烟酸标准样（待处理物）以及流动相A按比例混合均匀，制得待处理液，其中由95 %的流动相A和5 %的流动相B构成稀释剂，稀释剂与5‑甲基烟酸含量65 %的待处理物制备成浓度为1 mg/mL的待处理液，通过吸附柱，将纯化后液体蒸发结晶，检测并记录结晶纯度和质量。

[0029] 检测得纯化后得到0.658 g纯度为98.5 %的晶体，通过计算可知理论原待处理物纯度为64.81 %，与实际待处理物纯度相差极小，可见本发明技术方案除了实现对5‑甲基烟酸的纯化还能够配合常规的HPLC法进行高精度表征，用以检测待测样中的5‑甲基烟酸含量。

[0030] 实施例5：一种5‑甲基烟酸的纯化方法，所述方法包括：
（1）将纯度99 %的三氟乙酸、纯度99.9 %的乙腈以及蒸馏水按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度60 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相A，其中流动相A组分为0.1 wt%的三氟乙酸、2 wt%的乙腈、余量为蒸馏水；
（2）将纯度99 %的三氟乙酸与纯度99.9 %的乙腈按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相B，其中流动相B组分为
0.2 wt%的三氟乙酸、余量为乙腈；
（3）将硅球加入2 mol/L盐酸中，盐酸的使用量为50 mL/g硅球，浸泡进行2.5 h，烘干，制得活化硅球；将活化硅球与纯度99 %的N,N‑二甲基三甲基硅胺按1：1的质量比混合均匀，在转速为90 r/min、温度为70 ℃的环境中，搅拌3 h，烘干，制得改性硅胶；将改性硅胶、纯度99 %的氯铂酸以及纯度99 %的三氯甲烷按2.5：1：1的质量比混合均匀，在温度为150 ℃温度条件下回流6 h，制得改性填料；将改性填料、纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶以及纯度99 %的聚乙二醇按5：7.5：25的质量比混合均匀，在功率为300 W、温度为25 ℃的环境中，超声45 min，制得尺寸为250×4.7 mm的吸附柱；
（4）将1 g浓度为65 %的5‑甲基烟酸标准样（待处理物）、流动相A以及流动相B按比例混合均匀，制得待处理液，其中由流动相A构成稀释剂，稀释剂与5‑甲基烟酸含量65 %的待处理物制备成浓度为1 mg/mL的待处理液，通过吸附柱，将纯化后液体蒸发结晶，以HPLC法检测并记录结晶纯度和质量，得到0.659 g纯度为98.3 %的5‑甲基烟酸，洗脱吸附柱，并对洗脱物进行表征，表征方法使用高效液相色谱‑紫外/二极管阵列检测器，控制参数：流速为2 mL/min、进样量为20 μL、波长为210 nm。表征吸附柱上各成分含量，并根据表征结果通过计算待原始处理物的纯度，具体表征结果如下。

[0031]

[0032] 从上表表征结果来看，本发明纯化方法还能够非常有效地分离杂质以及纯化目标成分5‑甲基烟酸以外，还能够配合HPLC法对目标产物和杂质成分浓度进行非常高精度的表征，相较于传统的HPLC法直测，精度能够非常有效地提升。

[0033] 应用实施例按照实施例2的操作步骤配置8组吸附柱与流动相A、B，精密称取25 mg的纯度为
99.5 %的5‑甲基烟酸，超声溶解制备浓度为1 mg/mL的5‑甲基烟酸标准液，使用一组吸附柱以及流动相A、B作为空白组；精密称取25 mg的同实施例2的标准样（下同），超声溶解为试剂组；精密称取25 mg标准样，超声溶解，使用一组吸附柱以及流动相A、B作为操作A组；精密称取25 mg的标准样，超声溶解，使用三组吸附柱以及流动相A、B作为操作B组；精密称取25 mg的5‑甲基烟酸浓度为30 %待处理物，超声溶解，使用三组吸附柱以及流动相A、B作为操作C组，回收流出液并结晶回收产物5‑甲基烟酸，都使用高效液相色谱‑紫外/二极管阵列检测器以流速为1.5 mL/min、进样量为15 μL、波长为210 nm的条件下进行检测，具体表征结果如下。

[0034] 空白组

[0035] 试剂组

[0036] 操作A组

[0037] 操作B组

[0038] 操作C组

[0039] 上述应用实施例表征结果均为溶液中溶质组分占比，不包含溶剂。

[0040] 综合上述表征结果，将空白组、试剂组与操作A组表征结果作比较，可以推断出本发明技术方案提供的吸附柱以及纯化方式不但可以有效分离5‑甲基烟酸中的杂质3,5‑二甲基吡啶、吡啶‑3,5‑二甲酸，还可以有效分离其中的全部9种位置异构体杂质，并且对高纯度5‑甲基烟酸也能起到纯化效果；将操作A组与操作B组表征结果作比较，可以推断出本发明技术方案中的吸附柱纯化方法能够通过套用，起到提高纯化效果的作用，但是经过发明人后续的研究发现，当套用组数超过5组后，纯化的增长效果不能匹配成本的增长幅度；将操作B组与操作C组表征结果作比较，可以推断出本发明技术方案所提供的纯化方案不仅能够对较高浓度的5‑甲基烟酸进行纯化，对低浓度的5‑甲基烟酸纯化效果也尤其出众；此外，将空白组、试剂组、操作A组、操作B组以及操作C组表征结果作比较，可以推断出本发明技术方案提供的5‑甲基烟酸纯化检测方式能够有效检测包括3,5‑二甲基吡啶、吡啶‑3,5‑二甲酸在内的9种位置异构体杂质，补充行业标准中没有5‑甲基烟酸（或富马酸卢帕他定起始物料5‑甲基烟酸）的相关质量标准及质量控制检测方法。

[0041] 对比例1一种5‑甲基烟酸的纯化方法，其具体制备方法同实施例2，仅对本发明特有的流动相A组分进行改动，使用等量市售纯度99 %的乙腈代替三氯乙酸，进行5‑甲基烟酸的纯化，具体操作如下：
一种5‑甲基烟酸的纯化方法，
所述方法包括：
（1）将纯度99.9 %的乙腈以及蒸馏水按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为
0.05 MPa、相对湿度60 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相A，其中流动相A组分为2.1 wt%的乙腈、余量为蒸馏水；
（2）将纯度99 %的三氟乙酸与纯度99.9 %的乙腈按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相B，其中流动相B组分为
0.2 wt%的三氟乙酸、余量为乙腈；
（3）将硅球加入2 mol/L盐酸中，盐酸的使用量为50 mL/g硅球，浸泡进行2.5 h，烘干，制得活化硅球；将活化硅球与纯度99 %的N,N‑二甲基三甲基硅胺按1：1的质量比混合均匀，在转速为90 r/min、温度为70 ℃的环境中，搅拌3 h，烘干，制得改性硅胶；将改性硅胶、纯度99 %的氯铂酸以及纯度99 %的三氯甲烷按2.5：1：1的质量比混合均匀，在温度为150 ℃温度条件下回流6 h，制得改性填料；将改性填料、纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶以及纯度99 %的聚乙二醇按5：7.5：25的质量比混合均匀，在功率为300 W、温度为25 ℃的环境中，超声45 min，制得尺寸为250×4.7 mm的吸附柱；
（4）将1 g浓度为65 %的5‑甲基烟酸标准样（待处理物）、流动相A以及流动相B按比例混合均匀，制得待处理液，其中由95 %的流动相A和5 %的流动相B构成稀释剂，稀释剂与
5‑甲基烟酸含量65 %的待处理物制备成浓度为1 mg/mL的待处理液，通过吸附柱，回收产物后使用高效液相色谱‑紫外/二极管阵列检测器以流速为2 mL/min、进样量为20 μL、波长为
210 nm的条件下进行检测并记录产物纯度，表征结果显示回收5‑甲基烟酸产物0.679 g，产物中5‑甲基烟酸纯度为91.63 wt%。

[0042] 经过对上述表征结果与实施例2的对比分析，对比例所提供的纯化检测方法不具备较好的纯化效果，在处理含有间甲基的位置异构体时，其过滤效果并不理想。此外，当使用乙腈与水作为流动相A时，液相色谱仪在分离杂质峰和样品峰方面表现不佳，导致色谱峰过早洗脱并出现峰变形现象，从而降低了检测效果。因此，我们需要进一步优化纯化方法和改进液相色谱条件，以提高检测准确性和稳定性。

[0043] 对比例2一种5‑甲基烟酸的纯化方法，其具体制备方法同实施例2，仅对本发明特有的流动相A组分进行改动，进行5‑甲基烟酸的纯化，具体操作如下：
一种5‑甲基烟酸的纯化方法，
所述方法包括：
（1）将纯度99 %的三氟乙酸、纯度99.9 %的乙腈以及蒸馏水按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度60 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相A，其中流动相A组分为2 wt%的三氟乙酸、2 wt%的乙腈、余量为蒸馏水；
（2）将纯度99 %的三氟乙酸与纯度99.9 %的乙腈按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相B，其中流动相B组分为
0.2 wt%的三氟乙酸、余量为乙腈；
（3）将硅球加入2 mol/L盐酸中，盐酸的使用量为50 mL/g硅球，浸泡进行2.5 h，烘干，制得活化硅球；将活化硅球与纯度99 %的N,N‑二甲基三甲基硅胺按1：1的质量比混合均匀，在转速为90 r/min、温度为70 ℃的环境中，搅拌3 h，烘干，制得改性硅胶；将改性硅胶、纯度99 %的氯铂酸以及纯度99 %的三氯甲烷按2.5：1：1的质量比混合均匀，在温度为150 ℃温度条件下回流6 h，制得改性填料；将改性填料、纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶以及纯度99 %的聚乙二醇按5：7.5：25的质量比混合均匀，在功率为300 W、温度为25 ℃的环境中，超声45 min，制得尺寸为250×4.7 mm的吸附柱；
（4）将1 g浓度为65 %的5‑甲基烟酸标准样（待处理物）、流动相A以及流动相B按比例混合均匀，制得待处理液，其中由95 %的流动相A和5 %的流动相B构成稀释剂，稀释剂与
5‑甲基烟酸含量65 %的待处理物制备成浓度为1 mg/mL的待处理液，通过吸附柱，回收产物后使用高效液相色谱‑紫外/二极管阵列检测器以流速为2 mL/min、进样量为20 μL、波长为
210 nm的条件下进行检测并记录产物纯度，表征结果显示回收5‑甲基烟酸产物0.711 g，产物中5‑甲基烟酸纯度为89.77 wt%。

[0044] 经过对上述表征结果与实施例2的对比分析，对比例所提供的纯化检测方法不具备较好的纯化效果，经过发明人研究发现，含有杂质的5‑甲基烟酸经过本发明方案中的流动相A稀释后，5‑甲基烟酸与其他杂质的空间构型差异性无法被完全应用，导致纯化效果提升有限。

[0045] 对比例3一种5‑甲基烟酸的纯化方法，其具体制备方法同实施例2，仅不对本发明特有的改性填料进行制备和使用，使用等量市售纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶代替预改性片芯，进行5‑甲基烟酸的纯化，具体操作如下：
一种5‑甲基烟酸的纯化方法，
所述方法包括：
（1）将纯度99 %的三氟乙酸、纯度99.9 %的乙腈以及蒸馏水按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度60 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相A，其中流动相A组分为0.1 wt%的三氟乙酸、2 wt%的乙腈、余量为蒸馏水；
（2）将纯度99 %的三氟乙酸与纯度99.9 %的乙腈按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相B，其中流动相B组分为
0.2 wt%的三氟乙酸、余量为乙腈；
（3）将纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶以及纯度99 %的聚乙二醇按1：2的质量比混合均匀，在功率为300 W、温度为25 ℃的环境中，超声45 min，制得尺寸为250×4.7 mm的吸附柱；
（4）将1 g浓度为65 %的5‑甲基烟酸标准样（待处理物）、流动相A以及流动相B按比例混合均匀，制得待处理液，其中由95 %的流动相A和5 %的流动相B构成稀释剂，稀释剂与
5‑甲基烟酸含量65 %的待处理物制备成浓度为1 mg/mL的待处理液，通过吸附柱，回收产物后使用高效液相色谱‑紫外/二极管阵列检测器以流速为2 mL/min、进样量为20 μL、波长为
210 nm的条件下进行检测并记录产物纯度，表征结果显示回收5‑甲基烟酸产物0.693 g，产物中5‑甲基烟酸纯度为88.96 wt%。

[0046] 经过对上述表征结果与实施例2的对比分析，对比例所提供的纯化检测方法不具备较好的纯化效果，同时在相同的色谱条件下完成分析的时间要明显长于实施例所用时间，经过对比例证明本发明提供的改性填料在极性基团的作用下，强化异构体极性嵌入基团的能力，对5‑甲基烟酸的分离纯化起到明显的提高作用。

[0047] 对比例4一种5‑甲基烟酸的纯化方法，其具体制备方法同实施例2，仅对本发明特有的吸附柱组分进行改变，使用等量市售纯度99 %的三异丙基氯硅烷代替N,N‑二甲基三甲基硅胺，进行5‑甲基烟酸的纯化，具体操作如下：
一种5‑甲基烟酸的纯化方法，
所述方法包括：
（1）将纯度99 %的三氟乙酸、纯度99.9 %的乙腈以及蒸馏水按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度60 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相A，其中流动相A组分为0.1 wt%的三氟乙酸、2 wt%的乙腈、余量为蒸馏水；
（2）将纯度99 %的三氟乙酸与纯度99.9 %的乙腈按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相B，其中流动相B组分为
0.2 wt%的三氟乙酸、余量为乙腈；
（3）将硅球加入2 mol/L盐酸中，盐酸的使用量为50 mL/g硅球，浸泡进行2.5 h，烘干，制得活化硅球；将活化硅球与纯度99 %的三异丙基氯硅烷按1：1的质量比混合均匀，在转速为90 r/min、温度为70 ℃的环境中，搅拌3 h，烘干，制得改性硅胶；将改性硅胶、纯度
99 %的氯铂酸以及纯度99 %的三氯甲烷按2.5：1：1的质量比混合均匀，在温度为150 ℃温度条件下回流6 h，制得改性填料；将改性填料、纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶以及纯度99 %的聚乙二醇按5：7.5：25的质量比混合均匀，在功率为300 W、温度为25 ℃的环境中，超声45 min，制得尺寸为250×4.7 mm的吸附柱；
（4）将1 g浓度为65 %的5‑甲基烟酸标准样（待处理物）、流动相A以及流动相B按比例混合均匀，制得待处理液，其中由95 %的流动相A和5 %的流动相B构成稀释剂，稀释剂与
5‑甲基烟酸含量65 %的待处理物制备成浓度为1 mg/mL的待处理液，通过吸附柱，回收产物后使用高效液相色谱‑紫外/二极管阵列检测器以流速为2 mL/min、进样量为20 μL、波长为
210 nm的条件下进行检测并记录产物纯度，表征结果显示回收5‑甲基烟酸产物0.687 g，产物中5‑甲基烟酸纯度为93.11 wt%。

[0048] 对比例5一种5‑甲基烟酸的纯化方法，其具体制备方法同实施例2，仅对本发明特有的吸附柱组分进行改变，使用等量市售纯度99 %的三异丙基氯硅烷代替N,N‑二甲基三甲基硅胺，进行5‑甲基烟酸的纯化，具体操作如下：
一种5‑甲基烟酸的纯化方法，
所述方法包括：
（1）将纯度99 %的三氟乙酸、纯度99.9 %的乙腈以及蒸馏水按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度60 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相A，其中流动相A组分为0.1 wt%的三氟乙酸、2 wt%的乙腈、余量为蒸馏水；
（2）将纯度99 %的三氟乙酸与纯度99.9 %的乙腈按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相B，其中流动相B组分为
0.2 wt%的三氟乙酸、余量为乙腈；
（3）将硅球加入2 mol/L盐酸中，盐酸的使用量为50 mL/g硅球，浸泡进行2.5 h，烘干，制得活化硅球；将活化硅球与纯度99 %的三异丙基氯硅烷按1：1的质量比混合均匀，在转速为90 r/min、温度为70 ℃的环境中，搅拌3 h，烘干，制得改性硅胶；将改性硅胶、纯度
99 %的氯铂酸以及纯度99 %的三氯甲烷按2.5：1：1的质量比混合均匀，在温度为150 ℃温度条件下回流6 h，制得改性填料；将改性填料、纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶以及纯度99 %的聚乙二醇按5：7.5：25的质量比混合均匀，在功率为300 W、温度为25 ℃的环境中，超声45 min，制得尺寸为250×4.7 mm的吸附柱；
（4）将1 g浓度为65 %的5‑甲基烟酸标准样（待处理物）、流动相A以及流动相B按比例混合均匀，制得待处理液，其中由95 %的流动相A和5 %的流动相B构成稀释剂，稀释剂与
5‑甲基烟酸含量65 %的待处理物制备成浓度为1 mg/mL的待处理液，通过吸附柱，回收产物后使用高效液相色谱‑紫外/二极管阵列检测器以流速为2 mL/min、进样量为20 μL、波长为
210 nm的条件下进行检测并记录产物纯度，表征结果显示回收5‑甲基烟酸产物0.653 g，产物中5‑甲基烟酸纯度为96.17 wt%。

[0049] 分析对比例4与对比例5表征结果与实施例2对比，对比例5所提供的纯化检测方法能起到部分纯化效果，对比例4对较高浓度是5‑甲基烟酸纯化效果并不明显，经过发明人研究推测，对比例所制备的手性吸附柱对5‑甲基烟酸浓度到达交换顶点值以后，开始和氨基酸样品争夺固定相上的交换位置，使得对高浓度5‑甲基烟酸的分离效果减弱，无法达到5‑甲基烟酸的分离基线。

[0050] 对比例6一种5‑甲基烟酸的纯化方法，其具体制备方法同实施例2，仅对本发明中的检测流速进行改变，进行5‑甲基烟酸的纯化，具体操作如下：
一种5‑甲基烟酸的纯化方法，
所述方法包括：
（1）将纯度99 %的三氟乙酸、纯度99.9 %的乙腈以及蒸馏水按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度60 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相A，其中流动相A组分为0.1 wt%的三氟乙酸、2 wt%的乙腈、余量为蒸馏水；
（2）将纯度99 %的三氟乙酸与纯度99.9 %的乙腈按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相B，其中流动相B组分为
0.2 wt%的三氟乙酸、余量为乙腈；
（3）将硅球加入2 mol/L盐酸中，盐酸的使用量为50 mL/g硅球，浸泡进行2.5 h，烘干，制得活化硅球；将活化硅球与纯度99 %的N,N‑二甲基三甲基硅胺按1：1的质量比混合均匀，在转速为90 r/min、温度为70 ℃的环境中，搅拌3 h，烘干，制得改性硅胶；将改性硅胶、纯度99 %的氯铂酸以及纯度99 %的三氯甲烷按2.5：1：1的质量比混合均匀，在温度为150 ℃温度条件下回流6 h，制得改性填料；将改性填料、纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶以及纯度99 %的聚乙二醇按5：7.5：25的质量比混合均匀，在功率为300 W、温度为25 ℃的环境中，超声45 min，制得尺寸为250×4.7 mm的吸附柱；
（4）将1 g浓度为65 %的5‑甲基烟酸标准样（待处理物）、流动相A以及流动相B按比例混合均匀，制得待处理液，其中由95 %的流动相A和5 %的流动相B构成稀释剂，稀释剂与
5‑甲基烟酸含量65 %的待处理物制备成浓度为1 mg/mL的待处理液，通过吸附柱，回收产物后使用高效液相色谱‑紫外/二极管阵列检测器以流速为2 mL/min、进样量为20 μL、波长为
210 nm的条件下进行检测并记录产物纯度，表征结果显示回收5‑甲基烟酸产物0.643 g，产物中5‑甲基烟酸纯度为98.66 wt%。

[0051] 分析上述表征结果与实施例2对比，对比例所提供的纯化检测方法能起到较好的纯化效果，但是当吸附柱重复使用3次后出现难以修复的塌陷，同时发明人还观察到流速越高，5‑甲基烟酸与异构体的分离度越差，所以对流速的精密控制也是本发明技术方案的核心之一。

[0052] 对比例7使用市售的十八烷基硅烷键合硅胶填料吸附柱，并且使用常规单液相稀释标准
样，使用高效液相色谱‑紫外/二极管阵列检测器以流速为1.5 mL/min、进样量为15 μL、波长为210 nm的条件下进行检测，具体表征结果如下。

[0053]

[0054] 上述对比例表征结果为溶液中溶质组分占比，不包含溶剂。

[0055] 经过对比上述表征结果与实施例2的数据，发明人发现目前公开的纯化检测技术对于5‑甲基烟酸所有异构体的含量检测存在明显的局限性。在实际应用中，异构体在常规吸附柱上的保留效果较弱，难以达到预期的分离效果。因此，本发明技术方案采用了高效液相色谱法（HPLC）对5‑甲基烟酸进行严格的质量控制。该方法具有出色的分离效能，能够准确区分主要杂质及位置异构体杂质，展现出卓越的专属性和精确度。借助这一方法，可以精确测定5‑甲基烟酸的纯度及杂质含量，从而确保最终产品富马酸卢帕他定的质量稳定可靠。这种科学严谨的质量控制手段，为产品的生产与应用提供了有力的技术保障。

[0056] 对比例8一种5‑甲基烟酸的纯化方法，其具体制备方法同实施例2，仅对本发明中的待处理液组成进行改变，进行5‑甲基烟酸的纯化，具体操作如下：
一种5‑甲基烟酸的纯化方法，
所述方法包括：
（1）将纯度99 %的三氟乙酸、纯度99.9 %的乙腈以及蒸馏水按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度60 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相A，其中流动相A组分为0.1 wt%的三氟乙酸、2 wt%的乙腈、余量为蒸馏水；
（2）将纯度99 %的三氟乙酸与纯度99.9 %的乙腈按比例混合均匀，在温度为25 ℃、压强为0.05 MPa、相对湿度70 %的环境下脱气1.5 h，制得流动相B，其中流动相B组分为
0.2 wt%的三氟乙酸、余量为乙腈；
（3）将硅球加入2 mol/L盐酸中，盐酸的使用量为50 mL/g硅球，浸泡进行2.5 h，烘干，制得活化硅球；将活化硅球与纯度99 %的N,N‑二甲基三甲基硅胺按1：1的质量比混合均匀，在转速为90 r/min、温度为70 ℃的环境中，搅拌3 h，烘干，制得改性硅胶；将改性硅胶、纯度99 %的氯铂酸以及纯度99 %的三氯甲烷按2.5：1：1的质量比混合均匀，在温度为150 ℃温度条件下回流6 h，制得改性填料；将改性填料、纯度99 %的十八烷基硅烷键合硅胶以及纯度99 %的聚乙二醇按5：7.5：25的质量比混合均匀，在功率为300 W、温度为25 ℃的环境中，超声45 min，制得尺寸为250×4.7 mm的吸附柱；
（4）将1 g浓度为65 %的5‑甲基烟酸标准样（待处理物）、流动相A以及流动相B按比例混合均匀，制得待处理液，其中稀释剂由80 %的流动相A和20 %的流动相B构成，稀释剂与
5‑甲基烟酸含量65 %的待处理物制备成浓度为1 mg/mL的待处理液，通过吸附柱，回收产物后使用高效液相色谱‑紫外/二极管阵列检测器以流速为2 mL/min、进样量为20 μL、波长为
210 nm的条件下进行检测并记录产物纯度，表征结果显示回收5‑甲基烟酸产物0.612 g，产物中5‑甲基烟酸纯度为94.15 wt%。

[0057] 此外，使用高效液相色谱‑紫外/二极管阵列检测器以流速为1.5 mL/min、进样量为15 μL、波长为210 nm的条件下进行检测。

[0058] 分析上述表征结果与实施例2对比，对比例所提供的纯化检测方法具备纯化效果，但是无法通过高效液相色谱法分析待处理液组成成分，经过发明人深入分析，由于稀释剂流动相B比例高于初始流动相B比例，使得乙腈的共价键的异裂将引起电荷的分离，改变检测液极性，出现明显的溶剂效应，导致有效峰面积增加，无法准确读取待处理液组成成分信息。