[0001] 本发明涉及植物提取技术领域，具体涉及一种桑树桑黄多酚及其提取纯化工艺。

[0002] 桑黄是一类桑黄孔菌属大型珍稀药用木腐真菌的总称，有着“森林黄金”的美誉，在我国有悠久的药用历史，最早可以追溯到两千多年前《神农本草经》中记录的“桑耳”。经现代药理学实验研究证实，桑黄所具有的药用功效主要包括：降血糖、增强自身免疫力、抑制恶性肿瘤、抗炎、保肝护肝等效用。因此，对于开发桑黄类药物以及研究桑黄的药理活性日趋成为中草药领域的一个重要课题。

[0003] 现代科学研究表明，桑黄的诸多药理活性源于桑黄所含有的多糖、黄酮、酚类、三萜等生物活性物质，但近年来的研究多集中在桑黄多糖的提取及药理活性，而对于桑黄多酚的研究报道较少。目前研究的桑黄多酚包括桑树桑黄多酚和杨树桑黄多酚，而桑树桑黄多酚的提取方法却鲜有报道。目前已知的桑树桑黄多酚的提取量仅能达到45mg/g，且提取的桑树桑黄多酚的纯度较差，纯度最高为50%。基于此，研发一种桑树桑黄多酚的高效提取纯化方法对于桑树桑黄多酚的研究具有重大推动意义。

[0023] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0024] 实施例1本实施例提供了一种提取纯化桑树桑黄多酚的方法，具体包括如下内容：
步骤一、准确称取0.1g的桑树桑黄干粉按照料液比为1:60分散于55%的乙醇溶液中，于45℃下进行超声处理3次，再以12000rpm的转速进行高速离心1min，取上清液定容至
10mL，过滤，得桑树桑黄多酚提取液；
步骤二、将所述桑树桑黄多酚提取液进行以1.0mL/min的上样流速进行湿法上样，上样体积为2Bv，上样浓度为3mg/mL，经AB‑8型大孔树脂吸附10h，再以65%的乙醇溶液为洗脱剂，以1.0mL/min的流速进行洗脱，洗脱体积为3Bv，将洗脱液进行减压蒸馏，干燥，得桑树桑黄多酚。

[0025] 实施例2本实施例提供了一种提取纯化桑树桑黄多酚的方法，具体包括如下内容：
步骤一、准确称取0.1g的桑树桑黄干粉按照料液比为1:60分散于55%的乙醇溶液中，于45℃下进行超声处理3次，再以13000rpm的转速进行高速离心1.5min，取上清液定容至10mL，过滤，得桑树桑黄多酚提取液；
步骤二、将所述桑树桑黄多酚提取液进行以1.1mL/min的上样流速进行湿法上样，上样体积为2Bv，上样浓度为3mg/mL，经AB‑8型大孔树脂吸附10h，再以65%的乙醇溶液为洗脱剂，以1.0mL/min的流速进行洗脱，洗脱体积为3Bv，将洗脱液进行减压蒸馏，干燥，得桑树桑黄多酚。

[0026] 实施例3本实施例提供了一种提取纯化桑树桑黄多酚的方法，具体包括如下内容：
步骤一、准确称取0.1g的桑树桑黄干粉按照料液比为1:60分散于55%的乙醇溶液中，于45℃下进行超声处理3次，再以11000rpm的转速进行高速离心1min，取上清液定容至
10mL，过滤，得桑树桑黄多酚提取液；
步骤二、将所述桑树桑黄多酚提取液进行以0.9mL/min的上样流速进行湿法上样，上样体积为2Bv，上样浓度为3mg/mL，经AB‑8型大孔树脂吸附10h，再以65%的乙醇溶液为洗脱剂，以1.0mL/min的流速进行洗脱，洗脱体积为3Bv，将洗脱液进行减压蒸馏，干燥，得桑树桑黄多酚。

[0027] 对比例1本对比例提供了一种桑树桑黄多酚的提取纯化方法，与实施例1的区别在于：步骤一中，所述桑树桑黄干粉与所述醇溶液的料液比为1:50；其他参数和工艺不变，具体包括如下内容：
步骤一、准确称取0.1g的桑树桑黄干粉按照料液比为1:50分散于55%的乙醇溶液中，于45℃下进行超声处理3次，再以12000rpm的转速进行高速离心1min，取上清液定容至
10mL，过滤，得桑树桑黄多酚提取液；
步骤二、将所述桑树桑黄多酚提取液进行以1.0mL/min的上样流速进行湿法上样，上样体积为2Bv，上样浓度为3mg/mL，经AB‑8型大孔树脂吸附10h，再以65%的乙醇溶液为洗脱剂，以1.0mL/min的流速进行洗脱，洗脱体积为3Bv，将洗脱液进行减压蒸馏，干燥，得桑树桑黄多酚。

[0028] 对比例2本对比例提供了一种桑树桑黄多酚的提取纯化方法，与实施例1的区别在于：步骤一中，所述桑树桑黄干粉与所述醇溶液的料液比为1:70；其他参数和工艺不变，具体包括如下内容：
步骤一、准确称取0.1g的桑树桑黄干粉按照料液比为1:70分散于55%的乙醇溶液中，于45℃下进行超声处理3次，再以12000rpm的转速进行高速离心1min，取上清液定容至
10mL，过滤，得桑树桑黄多酚提取液；
步骤二、将所述桑树桑黄多酚提取液进行以1.0mL/min的上样流速进行湿法上样，上样体积为2Bv，上样浓度为3mg/mL，经AB‑8型大孔树脂吸附10h，再以65%的乙醇溶液为洗脱剂，以1.0mL/min的流速进行洗脱，洗脱体积为3Bv，将洗脱液进行减压蒸馏，干燥，得桑树桑黄多酚。

[0029] 对比例3本对比例提供了一种桑树桑黄多酚的提取纯化方法，与实施例1的区别在于：步骤一中，所述醇溶液的质量浓度为45%；其他参数和工艺不变，具体包括如下内容：
步骤一、准确称取0.1g的桑树桑黄干粉按照料液比为1:60分散于45%的乙醇溶液中，于45℃下进行超声处理3次，再以12000rpm的转速进行高速离心1min，取上清液定容至
10mL，过滤，得桑树桑黄多酚提取液；
步骤二、将所述桑树桑黄多酚提取液进行以1.0mL/min的上样流速进行湿法上样，上样体积为2Bv，上样浓度为3mg/mL，经AB‑8型大孔树脂吸附10h，再以65%的乙醇溶液为洗脱剂，以1.0mL/min的流速进行洗脱，洗脱体积为3Bv，将洗脱液进行减压蒸馏，干燥，得桑树桑黄多酚。

[0030] 对比例4本对比例提供了一种桑树桑黄多酚的提取纯化方法，与实施例1的区别在于：步骤一中，所述醇溶液的质量浓度为65%；其他参数和工艺不变，具体包括如下内容：
步骤一、准确称取0.1g的桑树桑黄干粉按照料液比为1:60分散于65%的乙醇溶液中，于45℃下进行超声处理3次，再以12000rpm的转速进行高速离心1min，取上清液定容至
10mL，过滤，得桑树桑黄多酚提取液；
步骤二、将所述桑树桑黄多酚提取液进行以1.0mL/min的上样流速进行湿法上样，上样体积为2Bv，上样浓度为3mg/mL，经AB‑8型大孔树脂吸附10h，再以65%的乙醇溶液为洗脱剂，以1.0mL/min的流速进行洗脱，洗脱体积为3Bv，将洗脱液进行减压蒸馏，干燥，得桑树桑黄多酚。

[0031] 对比例5本对比例提供了一种桑树桑黄多酚的提取纯化方法，与实施例1的区别在于：步骤一中，所述超声提取的温度为40℃；其他参数和工艺不变，具体包括如下内容：
步骤一、准确称取0.1g的桑树桑黄干粉按照料液比为1:60分散于55%的乙醇溶液中，于40℃下进行超声处理3次，再以12000rpm的转速进行高速离心1min，取上清液定容至
10mL，过滤，得桑树桑黄多酚提取液；
步骤二、将所述桑树桑黄多酚提取液进行以1.0mL/min的上样流速进行湿法上样，上样体积为2Bv，上样浓度为3mg/mL，经AB‑8型大孔树脂吸附10h，再以65%的乙醇溶液为洗脱剂，以1.0mL/min的流速进行洗脱，洗脱体积为3Bv，将洗脱液进行减压蒸馏，干燥，得桑树桑黄多酚。

[0032] 对比例6本对比例提供了一种桑树桑黄多酚的提取纯化方法，与实施例1的区别在于：步骤一中，所述超声提取的温度为50℃；其他参数和工艺不变，具体包括如下内容：
步骤一、准确称取0.1g的桑树桑黄干粉按照料液比为1:60分散于55%的乙醇溶液中，于50℃下进行超声处理3次，再以12000rpm的转速进行高速离心1min，取上清液定容至
10mL，过滤，得桑树桑黄多酚提取液；
步骤二、将所述桑树桑黄多酚提取液进行以1.0mL/min的上样流速进行湿法上样，上样体积为2Bv，上样浓度为3mg/mL，经AB‑8型大孔树脂吸附10h，再以65%的乙醇溶液为洗脱剂，以1.0mL/min的流速进行洗脱，洗脱体积为3Bv，将洗脱液进行减压蒸馏，干燥，得桑树桑黄多酚。

[0033] 对比例7本对比例提供了一种桑树桑黄多酚的提取纯化方法，与实施例1的区别在于：步骤二中，所述大孔树脂为HPD‑100A型；其他参数和工艺不变，具体包括如下内容：
步骤一、准确称取0.1g的桑树桑黄干粉按照料液比为1:60分散于55%的乙醇溶液中，于45℃下进行超声处理3次，再以12000rpm的转速进行高速离心1min，取上清液定容至
10mL，过滤，得桑树桑黄多酚提取液；
步骤二、将所述桑树桑黄多酚提取液进行以1.0mL/min的上样流速进行湿法上样，上样体积为2Bv，上样浓度为3mg/mL，经HPD‑100A型大孔树脂吸附10h，再以65%的乙醇溶液为洗脱剂，以1.0mL/min的流速进行洗脱，洗脱体积为3Bv，将洗脱液进行减压蒸馏，干燥，得桑树桑黄多酚。

[0034] 对比例8本对比例提供了一种桑树桑黄多酚的提取纯化方法，与实施例1的区别在于：步骤二中，所述醇溶液洗脱的洗脱流速为1.3mL/min，其他参数和工艺不变，具体包括如下内容：
步骤一、准确称取0.1g的桑树桑黄干粉按照料液比为1:60分散于55%的乙醇溶液中，于45℃下进行超声处理3次，再以12000rpm的转速进行高速离心1min，取上清液定容至
10mL，过滤，得桑树桑黄多酚提取液；
步骤二、将所述桑树桑黄多酚提取液进行以1.3mL/min的上样流速进行湿法上样，上样体积为2Bv，上样浓度为3mg/mL，经AB‑8型大孔树脂吸附10h，再以65%的乙醇溶液为洗脱剂，以1.0mL/min的流速进行洗脱，洗脱体积为3Bv，将洗脱液进行减压蒸馏，干燥，得桑树桑黄多酚。

[0035] 本发明对实施例1‑3和对比例1‑8所得桑树桑黄多酚进行测定计算，根据如下公式计算得所述桑树桑黄多酚含量和纯度，结果如表1所示。

[0036] 多酚含量（mg/g）＝(C×V×n)/M，获得多酚含量，其中，C为提取液的质量浓度（mg/L）；V为溶液的体积（mL）；n为溶液稀释倍数；M为样品干重（g）。

[0037] 通过下述公式计算桑树桑黄多酚纯化物的纯度，具体测试结果和纯度结果如表1所示。

[0038] 纯度（%）=（多酚体积×多酚浓度）/未经纯化处理的桑树桑黄多酚质量×100%。

[0039] 表1实施例1‑3和对比例1‑8所提取的桑树桑黄多酚含量

[0040] 根据表1可以看出，本发明提供的桑树桑黄多酚的提取纯化工艺不仅提高了桑树桑黄多酚的含量，还进一步提高了所得桑树桑黄多酚的纯度，为桑树桑黄多酚类物质的研究提供了切实可行的理论依据和高纯度原料。

[0041] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。