技术领域
[0001] 本发明涉及生物培养技术领域，尤其涉及一种能够促进杜鹃兰种子萌发的方法。
相关背景技术
[0002] 杜鹃兰是兰科杜鹃兰属的多年生地生草本植物，假鳞茎卵球形或近球形，顶端渐突起，基部有须根痕，花期5‑6月，果期9‑12月。喜冷凉的环境，不耐暑热。生长期需保持基质湿润，并适当遮阴。山慈菇为杜鹃兰的干燥假鳞茎，其味甘、微辛，性凉，有小毒。可作药用。有清热解毒，化痰散结、消肿等功效，主要用于痈肿疔毒，瘰疬痰核，淋巴结结核，蛇虫咬伤等症，还应用于抗肿瘤药物中。
[0003] 杜鹃兰虽然具有很高的药用价值和观赏价值，但是自然储量极少，同时市场高价诱惑促使杜鹃兰野生资源无序、过度采挖，导致野生杜鹃兰资源极度匮乏、濒危灭绝。杜鹃兰作为兰科植物，种子多，但种胚发育不成熟，缺少胚乳，种皮双层，外种皮不易吸水，造成种子在自然条件下很难授粉、萌发率低。加之人类活动、采挖、自然生境被破坏等问题，野生资源严重枯竭。
[0004] 自然条件下，杜鹃兰几乎不能授粉结实。通过人工授粉虽可使其结果，但因其种胚发育不完全、种皮抑制等障碍因素，故其有性繁殖十分困难，人工种植中虽可采用假鳞茎繁殖，但繁殖系数极低。
具体实施方式
[0038] 下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0039] 请参阅图1至图4，本发明提供一种能够促进杜鹃兰种子萌发的方法，包括以下步骤：
[0040] S1配置共生原料；
[0041] 具体的，取健康的杜鹃兰块茎，用清水洗净，先后使用2％次氯酸钠(v/v)浸洗15min，75％酒精处理30s，最后用无菌水冲洗多次，将块茎切成小块，放置于PDA培养基上培养10d后，挑取材料尖端处长出的菌丝，转接至相应培养基上分离培养，利用尖端菌丝挑取法多次对所分离的内生菌进行纯化，得到纯化的杜鹃兰内生菌，即共生原料。
[0042] 具体方式：
[0043] S11从健康的杜鹃兰块茎获取生防菌；
[0044] S12将所述生防菌接种到培养基上；
[0045] S13将所述培养基置于培养箱内培养，得到共生原料。
[0046] 具体的，培养箱培养温度为25±2℃，培养时间为28d。
[0047] S2配置萌发培养基；
[0048] 具体的，采用NAA和GGR6作为生长素，并向基础培养基中添加辣木叶汁和黄秋葵汁作为营养物质，与生长调节剂、基础培养基一起作用，可以显著提高提高种子的萌发率和缩短萌发时间。
[0049] S3选取成熟杜鹃兰蒴果进行预处理，获取杜鹃兰种子；
[0050] 具体方式：
[0051] S31选取成熟杜鹃兰蒴果；
[0052] S32清洁所述杜鹃兰蒴果，并对所述杜鹃兰蒴果进行消毒处理；
[0053] 具体方式：
[0054] S321利用流水冲洗所述杜鹃兰蒴果，并利用酒精浸泡处理所述杜鹃兰蒴果；
[0055] 具体的，用流水冲洗进行表面清洁，然后置于超净工作台内，用75％的酒精浸泡2‑3min。
[0056] S322无菌水洗浸泡后的所述杜鹃兰蒴果，并利用消毒液浸泡；
[0057] 具体的，对酒精浸泡后的所述杜鹃兰蒴果用无菌水洗3‑5次，接着再用植物消毒液浸泡5‑10min。
[0058] 所述消毒液由乙酰紫草素0.05‑0.08份、芦荟汁5‑8份、夹竹桃叶提取物0.1‑0.2份、吐温‑60 2‑4份和水75‑100份混合组成。
[0059] S323再次无菌水洗所述杜鹃兰蒴果，并吸干表面水分。
[0060] 具体的，最后用无菌水洗再次水洗所述杜鹃兰蒴果3‑5次，并用滤纸吸干所述杜鹃兰蒴果表面水分。
[0061] S33剖开所述杜鹃兰蒴果抖出杜鹃兰种子，并对所述杜鹃兰种子进行消毒处理。
[0062] 具体方式：
[0063] S331利用解剖刀剖解所述杜鹃兰蒴果，并抖出所述杜鹃兰蒴果内的杜鹃兰种子；
[0064] S332利用酒精浸泡所述杜鹃兰种子，浸泡后进行无菌水洗；
[0065] 具体的，用75％的酒精浸泡消所述杜鹃兰种子15‑20s，进行消毒，并用无菌水洗3‑5次。
[0066] S333利用消毒液浸泡所述杜鹃兰种子，浸泡后再次无菌水洗所述杜鹃兰种子，并将所述杜鹃兰种子上的水份吸干。
[0067] 具体的，利用消毒液浸泡所述杜鹃兰种子8‑12min，最后用无菌水洗再次水洗所述杜鹃兰种子3‑5次，并用滤纸吸干所述杜鹃兰种子表面水分。
[0068] S4将所述共生原料和所述杜鹃兰种子置于所述萌发培养基进行培养。
[0069] 具体方式：
[0070] S41将所述共生原料倒入所述萌发培养基，并将所述共生原料铺平凝固；
[0071] 具体的，将所述共生原料倒入所述萌发培养基，将所述共生原料铺平，待其凝固。
[0072] S42将所述杜鹃兰种子涂布在所述共生原料上，并对所述萌发培养基封口；
[0073] 具体的，用无菌棉签蘸取种子均匀涂布于所述共生原料上，并用封口膜对所述萌发培养基封口。
[0074] S43对封口后的所述萌发培养依次进行暗培养和光照培养。
[0075] 具体的，对封口后的所述萌发培养先暗处理8d后转置到光照下继续培养，培养温度25℃，光照强度为1500lx‑2000lx，培养光照时间12h/d。
[0076] 该方法对杜鹃兰种子杀菌处理，降低杜鹃兰种子和共生原料接种的污染率，还能降种子萌发的时间提前的现象发生，并将从野生杜鹃兰成年植株获取并培养的共生原料(生防菌)，与杀菌后的杜鹃兰种子在萌发培养中培养，该萌发培养基以辣木叶汁和黄秋葵汁作为营养物质，与共生原料共同使用，对杜鹃兰种子双重萌发，显著提高提高种子的萌发率和缩短萌发时间，解决了现有杜鹃兰有性繁殖困难，繁殖系数低的问题。
[0077] 以上所揭露的仅为本发明一种能够促进杜鹃兰种子萌发的方法较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。
