技术领域
[0001] 本发明属于中药提取技术领域，具体涉及一种从五味子中提取五味子甲素的工艺。
相关背景技术
[0002] 五味子俗称山花椒、秤砣子、药五味子、面藤、五梅子等，为木兰科植物五味子的干燥成熟果实。唐等《新修本草》载“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有成味”，故有五味子之名。古医书称它荎蕏、玄及、会及，最早列于神农本草经上品，中药功效在于滋补强壮之力，药用价值极高，临床主要用于久咳虚喘、津伤口渴、阴虚消渴、自汗、盗汗、遗精、久泻不止、心悸、失眠、多梦等，是我国中医应用最广泛的滋补中药之一。五味子中含有木脂素、挥发油、有机酸、多糖、三萜及倍半萜等多种化学成分，其中木脂素为主要有效成分。木脂素类成分中含量较高的包括五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素等。五味子甲素的结构式见图1。五味子甲素(SchizandrinA)，又称五味子素A、去氧五味子素，属于木脂素成分中的联苯环辛烯类，溶于氯仿、乙醚、苯等有机溶剂，难溶于水。药理作用广泛：①具有显著的肝细胞损伤拮抗作用，阴断多种毒物对肝细胞膜的损伤，抑制毒性产物的生成，降低血清转氨酶。②诱导肝微粒体细胞色素P450的活性，增强肝脏的解毒功能；③对活性氧自由基拮抗作用，抑制肝细胞膜的脂质过氧化；④促进肝糖原生成和蛋白质的合成代谢，有利于肝细胞功能恢复。它适应于慢性、迁延性肝炎等肝细胞损伤所致转氨酶升高的患者。
[0003] 五味子甲素传统的提取方法有醇提取、氯仿提取和热水提取，但是提取效果不理想。中国专利CN 103694213 B公开了一种五味子中木脂素单体的提取分离制备方法，采用超临界流体提取结合高速逆流色谱分离的方法，提取后可获得纯度高的五味子甲素等单体。但是该方法使用的高速逆流色谱分离仪器价格太昂贵，不易推广。
具体实施方式
[0023] 下面将结合本发明具体实施，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0024] 本发明各实施例中所述方法，如无特殊说明，均为常规方法。所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0025] 实施例1
[0026] 一种从五味子中提取五味子甲素的工艺，具体包括以下步骤：
[0027] 制备混合液：将五味子粉碎至40目，在频率40KHz，温度50℃超声10min后，用70％的乙醇溶液回流40min提取得混合液。所述五味子与70％的乙醇溶液按比例为1g:8mL。超声所用溶剂为乙酸乙酯，其中，五味子与乙酸乙酯的比例为1g:6mL。
[0028] 水沉分离：将混合液与水按体积比为1:5溶于水中4h后，1000rpm离心5min、萃取获得有机相。所述离心用溶剂为80％的乙醇溶液。所述萃取用溶剂为三氯甲烷。
[0029] 层析分离：将有机相用二氯甲烷溶解，洗脱剂洗脱后得五味子甲素粗品。所述洗脱剂为石油醚与无水乙醇的混合物，石油醚与无水乙醇的体积比为5:3。
[0030] 结晶：将五味子甲素粗品用正己烷和石油醚的混合物进行结晶，得五味子甲素。本步骤中，所述正己烷与石油醚的体积比为1:0.5。
[0031] 实施例2
[0032] 一种从五味子中提取五味子甲素的工艺，具体包括以下步骤：
[0033] 制备混合液：将五味子粉碎至40目，在频率40KHz，温度50℃超声10min后，用70％的乙醇溶液回流40min提取得混合液。所述五味子与70％的乙醇溶液按比例为1g:8mL。超声所用溶剂为乙酸乙酯，其中，五味子与乙酸乙酯的比例为1g:7mL。
[0034] 水沉分离：将混合液与水按体积比为1:5溶于水中4h后，1000rpm离心7min、萃取获得有机相。所述离心用溶剂为80％的乙醇溶液。所述萃取用溶剂为乙醚。
[0035] 层析分离：将有机相用二氯甲烷溶解，洗脱剂洗脱后得五味子甲素粗品。所述洗脱剂为石油醚与无水乙醇的混合物，石油醚与无水乙醇的体积比为10:7。
[0036] 结晶：将五味子甲素粗品用正己烷和石油醚的混合物进行结晶，得五味子甲素。本步骤中，所述正己烷与石油醚的体积比为1:0.5。
[0037] 实施例3
[0038] 一种从五味子中提取五味子甲素的工艺，具体包括以下步骤：
[0039] 制备混合液：将五味子粉碎至50目，在频率50KHz，温度55℃超声13min后，用70％的乙醇溶液回流50min提取得混合液。所述五味子与70％的乙醇溶液按比例为1g:9mL。超声所用溶剂为乙酸乙酯，其中，五味子与乙酸乙酯的比例为1g:8mL。
[0040] 水沉分离：将混合液与水按体积比为1:6溶于水中5h后，2000rpm离心8min、萃取获得有机相。所述离心用溶剂为90％的乙醇溶液。所述萃取用溶剂为苯。
[0041] 层析分离：将有机相用二氯甲烷溶解，洗脱剂洗脱后得五味子甲素粗品。所述洗脱剂为石油醚与无水乙醇的混合物，石油醚与无水乙醇的体积比为11:6。
[0042] 结晶：将五味子甲素粗品用正己烷和石油醚的混合物进行结晶，得五味子甲素。本步骤中，所述正己烷与石油醚的体积比为1:0.5。
[0043] 实施例4
[0044] 一种从五味子中提取五味子甲素的工艺，具体包括以下步骤：
[0045] 制备混合液：将五味子粉碎至50目，在频率60KHz，温度60℃超声15min后，用70％的乙醇溶液回流60min提取得混合液。所述五味子与70％的乙醇溶液按比例为1g:10mL。超声所用溶剂为乙酸乙酯，其中，五味子与乙酸乙酯的比例为1g:9mL。
[0046] 水沉分离：将混合液与水按体积比为1:6溶于水中6h后，2000rpm离心9min、萃取获得有机相。所述离心用溶剂为95％的乙醇溶液。所述萃取用溶剂为三氯甲烷。
[0047] 层析分离：将有机相用二氯甲烷溶解，洗脱剂洗脱后得五味子甲素粗品。所述洗脱剂为石油醚与无水乙醇的混合物，石油醚与无水乙醇的体积比为11:7。
[0048] 结晶：将五味子甲素粗品用正己烷和石油醚的混合物进行结晶，得五味子甲素。本步骤中，所述正己烷与石油醚的体积比为1:0.5。
[0049] 实施例5
[0050] 一种从五味子中提取五味子甲素的工艺，具体包括以下步骤：
[0051] 制备混合液：将五味子粉碎至50目，在频率60KHz，温度60℃超声15min后，用70％的乙醇溶液回流60min提取得混合液。所述五味子与70％的乙醇溶液按比例为1g:10mL。超声所用溶剂为乙酸乙酯，其中，五味子与乙酸乙酯的比例为1g:9mL。
[0052] 水沉分离：将混合液与水按体积比为1:6溶于水中6h后，2000rpm离心10min、萃取获得有机相。所述离心用溶剂为95％的乙醇溶液。所述萃取用溶剂为三氯甲烷。
[0053] 层析分离：将有机相用二氯甲烷溶解，洗脱剂洗脱后得五味子甲素粗品。所述洗脱剂为石油醚与无水乙醇的混合物，石油醚与无水乙醇的体积比为12:7。
[0054] 结晶：将五味子甲素粗品用正己烷和石油醚的混合物进行结晶，得五味子甲素。本步骤中，所述正己烷与石油醚的体积比为1:0.5。
[0055] 对比例1(无回流)
[0056] 一种从五味子中提取五味子甲素的工艺，具体包括以下步骤：
[0057] 制备混合液：将五味子粉碎至50目，在频率60KHz，温度60℃超声15min后，提取得混合液。超声所用溶剂为乙酸乙酯，其中，五味子与乙酸乙酯的比例为1g:9mL。
[0058] 水沉分离：将混合液与水按体积比为1:6溶于水中6h后，2000rpm离心10min、萃取获得有机相。所述离心用溶剂为95％的乙醇溶液。所述萃取用溶剂为三氯甲烷。
[0059] 层析分离：将有机相用二氯甲烷溶解，洗脱剂洗脱后得五味子甲素粗品。所述洗脱剂为石油醚与无水乙醇的混合物，石油醚与无水乙醇的体积比为12:7。
[0060] 结晶：将五味子甲素粗品用正己烷和石油醚的混合物进行结晶，得五味子甲素。本步骤中，所述正己烷与石油醚的体积比为1:0.5。
[0061] 对比例2(无水沉分离)
[0062] 一种从五味子中提取五味子甲素的工艺，具体包括以下步骤：
[0063] 制备混合液：将五味子粉碎至50目，在频率60KHz，温度60℃超声15min后，用70％的乙醇溶液回流60min提取得混合液。所述五味子与70％的乙醇溶液按比例为1g:10mL。超声所用溶剂为乙酸乙酯，其中，五味子与乙酸乙酯的比例为1g:9mL。
[0064] 层析分离：将混合液去除溶剂，用二氯甲烷溶解，洗脱剂洗脱后得五味子甲素粗品。所述洗脱剂为石油醚与无水乙醇的混合物，石油醚与无水乙醇的体积比为12:7。
[0065] 结晶：将五味子甲素粗品用正己烷和石油醚的混合物进行结晶，得五味子甲素。本步骤中，所述正己烷与石油醚的体积比为1:0.5。
[0066] 对比例3(无层析分离)
[0067] 一种从五味子中提取五味子甲素的工艺，具体包括以下步骤：
[0068] 制备混合液：将五味子粉碎至50目，在频率60KHz，温度60℃超声15min后，用70％的乙醇溶液回流60min提取得混合液。所述五味子与70％的乙醇溶液按比例为1g:10mL。超声所用溶剂为乙酸乙酯，其中，五味子与乙酸乙酯的比例为1g:9mL。
[0069] 水沉分离：将混合液与水按体积比为1:6溶于水中6h后，2000rpm离心10min、萃取获得有机相。所述离心用溶剂为95％的乙醇溶液。所述萃取用溶剂为三氯甲烷。
[0070] 结晶：将有机相用正己烷和石油醚的混合物进行结晶，得五味子甲素。本步骤中，所述正己烷与石油醚的体积比为1:0.5。
[0071] 对比例4(无结晶)
[0072] 一种从五味子中提取五味子甲素的工艺，具体包括以下步骤：
[0073] 制备混合液：将五味子粉碎至50目，在频率60KHz，温度60℃超声15min后，用70％的乙醇溶液回流60min提取得混合液。所述五味子与70％的乙醇溶液按比例为1g:10mL。超声所用溶剂为乙酸乙酯，其中，五味子与乙酸乙酯的比例为1g:9mL。
[0074] 水沉分离：将混合液与水按体积比为1:6溶于水中6h后，2000rpm离心10min、萃取获得有机相。所述离心用溶剂为95％的乙醇溶液。所述萃取用溶剂为三氯甲烷。
[0075] 层析分离：将有机相用二氯甲烷溶解，洗脱剂洗脱后得五味子甲素。所述洗脱剂为石油醚与无水乙醇的混合物，体积比为12:7。
[0076] 表1不同实施例和对比例提取的五味子甲素的含量和收率
[0077] 含量(％) 收率(％)实施例1 99.3 85.4
实施例2 99.5 86.1
实施例3 99.6 85.9
实施例4 99.4 85.7
实施例5 99.5 85.8
对比例1 92.1 71.3
对比例2 83.3 72.6
对比例3 62.4 90.5
对比例4 95.2 86.6
[0078] 由表1可知，实施例1～5的提取工艺提取的五味子甲素含量和收率均较高。与实施例1～5相比，对比例1去掉了回流步骤，由于回流是将五味子中的总木脂素提取出来，去掉回流步骤后，对最终提取的五味子甲素的含量影响不大，但收率影响很大。与实施例1～5相比，对比例2去掉了水沉分离步骤，由于水沉分离是为了去掉更多五味子中的水溶性杂质，去掉水沉分离步骤后，对最终提取的五味子甲素的含量较大，收率影响也大。与实施例1～5相比，对比例3去掉了层析分离步骤，由于层析分离是从五味子中的总木脂素提取出大量的五味子甲素，去掉层析分离步骤后，对最终提取的五味子甲素的含量影响非常大，杂质较多，因最终产物不纯，收率略有提升。与实施例1～5相比，对比例4去掉了结晶步骤，由于结晶是将层析分离后的五味子甲素粗品进行纯度更高的提纯，去掉结晶步骤后，对最终提取的五味子甲素的含量有影响，收率影响不大。因此，本发明实施例1～5的提取工艺是将超声、回流、水沉分离、层析分离、结晶法联用，才能有效地从五味子中提取得到五味子甲素。
[0079] 尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
[0080] 显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
