[0003] 本发明属于药物化学领域。具体而言，本发明涉及一类式(I)所示的含芳基的胺类化合物，其制备方法和药物组合物，及其在制备预防或治疗与NMDA受体和/或单胺转运体和/或sigma受体相关联的疾病，特别是中枢神经系统疾病的药物中的应用。

[0004] 抑郁症是一种严重的精神类疾病，主要表现是情绪消沉，自卑抑郁，甚至患者有自杀的倾向。目前治疗抑郁症的主要药物是SSRI/SSNI(Selective serotonin/norepinephrine reuptake inhibitors)。但此类药对近三分之一的患者没有疗效，且普遍存在起效慢、甚至增加患者自杀倾向等缺陷。该领域存在巨大的未满足的临床需求。

[0005] NMDA(N‑甲基‑D‑天冬氨酸(N‑methyl‑D‑aspartic acid))型谷氨酸受体(简称NMDA受体或NMDAR)是一种配体门控离子通道。该受体在体内可以被中枢神经内最重要的兴奋性神经递质谷氨酸所激活，从而介导突触间兴奋性信号的传导。NMDAR的离子通道开放2+ + +
后，对Ca 、K、Na等阳离子的通透性增强，产生兴奋性突触后电位，引发一系列生理生化反应。NMDAR分子结构复杂，各种亚型在时空分布和药理学特性上具有特异性。其数量、构成和分布在不同发育时期、不同脑区呈现动态变化，参与诸多生理活动，为复杂的神经活动提供分子基础，从而保证了神经网络的正常活动。NMDAR的整合、定位、回收、以及突触内外的分布等过程依赖于神经活动的调节，其功能稳态被打破和众多脑疾病高度相关，比如抑郁症、癫痫、精神分裂症等。

[0006] 单胺转运体是在中枢和外周神经系统神经元细胞膜上发现的一类负责转运突触传递中常用神经递质的蛋白质。单胺转运体抑制剂通常被用作抗抑郁药物来治疗抑郁和焦虑障碍，如具有去甲肾上腺素转运体和多巴胺转运体抑制作用的安非他酮，具有5‑HT转运体抑制作用的氟西汀、西酞普兰。Sigma受体主要位于中枢神经系统中，也位于内分泌和免疫系统中，与中枢神经系统中的精神病、抑郁症、认知、神经保护和运动功能紧密相关。Sigma1受体激动剂可能具有抗抑郁、促进学习记忆的作用，而拮抗剂可能具有抗精神病、镇痛作用。sigma2受体是治疗阿尔茨海默病、精神分裂症和创伤性脑损伤等中枢疾病的理想分子靶标，且sigma2受体激动剂和拮抗剂都是神经退行性疾病的潜在疗法。

[0007] NMDA受体拮抗剂氯胺酮作为一种良好的麻醉剂已被运用于医学上超过50年。研究发现静脉注射亚麻醉剂量的NMDAR拮抗剂氯胺酮能在数小时内迅速缓解抑郁症的症状，并且效果能维持至少一周。强生公司研发的艾氯胺酮已于2019年获FDA批准上市，用于难治性抑郁症的治疗。鉴于氯胺酮的主要分子靶点是NMDAR，许多人提出抑制该靶点也是氯胺酮抗抑郁作用的原因。这种机制表明，氯胺酮的抗抑郁作用和解离副作用可能在机制层面上是密不可分的。然而，许多证据对这一假设提出了质疑(J Psychiatry Neurosci.2017，42(4)，222.)。首先，已发现氯胺酮的R对映异构体(R‑ket)在啮齿动物模型中作为抗抑郁药比S对映异构体(S‑ket)更有效且更持久，尽管R‑ket对NMDAR的亲和力明显比S‑ket弱(Pharmacol Biochem Behav.2014，116，137.)。类似地，氯胺酮代谢物(2R，6R)‑羟基去甲氯胺酮(HNK)已被证明在啮齿动物模型中诱导抗抑郁作用，但在诱导抗抑郁作用的剂量水平下在体内不会与NMDAR结合(Nature.2016，533(7604)，481.和ProcNatlAcad Sci USA.2019，116(11)，5160.和Org Lett.2017，19(17)，4572.)。因此，R‑ket和HNK都可以诱导抗抑郁作用，同时限制氯胺酮的解离作用。然而，为减弱氯胺酮的解离副作用而提出的其他策略结果均不佳，例如，通过靶向NMDAR的NR2B亚基或利用具有低捕获特性的化合物(Nature.2016，533(7604)，481.和Sci  Rep.2017，7(1)，15725.和Int  J 
Neuropsychopharmacol.2019，22(2)，119.和J Psychiatr Res.2017，86，55.和Psychiatry Res.2016，239，281.)。因此，支持氯胺酮抗抑郁作用的精确分子机制仍然知之甚少，可能涉及其他尚未确定的靶点目标。此外，NMDAR调节剂的抗抑郁作用及其伴随的解离作用的大小通常是高度不可预测的。这些发现提出了令人兴奋的可能性，即氯胺酮的抗抑郁作用实际上可能与其解离副作用分开。

[0008] 氯胺酮和艾氯胺酮的解离性副作用和较差的口服生物利用度极大地限制了其临床应用。尽管已经开发了其他可口服的NMDAR拮抗剂，但迄今为止还没有一种药物被证明具有类似于氯胺酮的快速抗抑郁临床疗效。因此，仍然迫切需要具有强大的临床功效、低或无解离副作用、良好的口服生物利用度的新型抗抑郁药。保留类似于氯胺酮的快速抗抑郁活性，同时具有降低的解离副作用和良好的口服生物利用度的药物将提供一种新的治疗选择，由于其降低的解离作用和伴随的降低的滥用可能性，该治疗选择更易于管理并且可能在家庭使用中可行。

[0176] 下列实施例和药理实施例进一步阐明本发明，但并不限制本发明的范围。

[0177] 除特殊说明外，在实施例和药理实施例中所采用的原料、试剂、方法等均为本领域常规的原料、试剂、方法。

[0178] 缩略词

[0179]DMAP 4‑二甲氨基吡啶 DIPEA N，N‑二异丙基乙胺
THF 四氢呋喃 DBU 1，8‑二氮杂二环十一碳‑7‑烯
DCM 二氯甲烷 DMA 二甲基乙酰胺
TFA 三氟乙酸 TBDPSCl 叔丁基二苯基氯硅烷
BMS 硼烷二甲基硫醚络合物 NMP N‑甲基吡咯烷酮
EA 乙酸乙酯 DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
MTBE 甲基叔丁基醚 PTSA 对甲苯磺酰酸
TMSCl 三甲基氯硅烷 Oxone 单过硫酸氢钾复合盐

[0180] 以下实施例涉及到手性分离的操作，手性分离条件如下：

[0181] 色谱柱：DAICEL CHIRALCEL OD‑H 4.6x250mm，5um；流动相：正己烷/0.1％二乙胺异丙醇＝50/50；流速：0.8ml/min；柱温：35℃；检测波长：270nm。

[0182] 不同化合物的手性分离，可以在上述条件的基础上，通过调整流动相比例或流速进行分离。

[0183] 实施例

[0184] 实施例1 6‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2,6‑二胺(化合物A1)的制备[0185]

[0186] 步骤一：

[0187] 化合物A1‑1(765mg)溶于二氯甲烷(20mL)，加入DMAP(444mg)、二碳酸二叔丁酯(1.5g)，室温反应过夜，反应液浓缩，柱层析得化合物A1‑2，类白色固体250mg。

[0188] 步骤二：

[0189] 50mL反应瓶中加入无水THF(5mL)，苯基氯化镁(4.7mL)氮气保护，冷却到0‑5℃，滴加化合物A1‑2(500mg)的THF(5mL)溶液，室温反应过夜。饱和氯化铵水溶液淬灭反应，反应液经乙酸乙酯萃取，干燥，浓缩，柱层析纯化，得化合物A1‑3约385mg。

[0190] 步骤三：

[0191] 化合物A1‑3(500mg)溶于DCM(10mL)中，加叠氮钠(470mg，5eq)，冰浴下滴加TFA(1.32g，8eq)，冰浴下反应30min后，移至室温避光过夜。反应液中加冰水，用氨水调节pH至9，转移至分液漏斗中，DCM萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物A1‑4，棕色固体350mg。

[0192] 步骤四：

[0193] 化合物A1‑4(1.0g)溶于甲醇(25mL)中，加钯碳(10％，100mg)，通氢气，室温反应过夜。反应液过滤，浓缩，二氯甲烷打浆得固体434mg，母液浓缩，柱层析纯化得固体172mg，共+得化合物A1约606mg。LRMS‑ESI(m/z)：246.16[M+H] .

[0194] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ7.51(d，J＝7.3Hz，2H)，7.28(t，J＝7.6Hz，2H)，7.18(t，J＝7.3Hz，1H)，6.60(s，2H)，2.98(d，J＝16.0Hz，1H)，2.58(d，J＝16.0Hz，1H)，2.49(m，1H)，2.10(m，2H)，1.91(br，2H)，1.79(m，1H).

[0195] 手性柱分离得到异构体A1‑P1(R构型)和A1‑P2(S构型)：

[0196]

[0197] A1‑P1(R构型)：HPLC纯度：＞99％，保留时间：6.534min。手性纯度：100％，保留时间：9.186min。

[0198] A1‑P2(S构型)：HPLC纯度：＞99％，保留时间：6.553min。手性纯度：100％，保留时间：14.432min。

[0199] 实施例2N‑(2‑氨基‑6‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑6‑基)甲酰胺(化合物A2)的制备

[0200]

[0201] 50mL反应瓶中加入甲酸(920mg)、乙酸酐(2.04g)，氮气保护，60℃回流反应2h，冷却到室温，加入二氯甲烷(40mL)，制得0.5M甲乙酐溶液备用。取化合物A1(3.8g)加入二氯甲烷(50mL)，滴加上述0.5M甲乙酐溶液(35mL)，室温反应1h。用饱和碳酸氢钠水溶液调pH＝9，二氯甲烷萃取，干燥，滤液浓缩，柱层析得化合物A2，类白色固体3.8g。

[0202] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ8.28(s，1H)，7.97(s，1H)，7.38(m，2H)，7.30(t，J＝7.6Hz，2H)，7.20(t，J＝7.1Hz，1H)，6.65(s，2H)，2.99(dd，J＝29.1，16.3Hz，2H)，2.56(m，+
1H)，2.40(m，1H)，2.25(m，1H)，2.16(m，1H).LRMS‑ESI(m/z)：274.16[M+H] .

[0203] 实施例3N6‑甲基‑6‑苯基‑4,5,6，7‑四氢苯并噻唑‑2，6‑二胺(化合物A3)及其盐酸盐的制备

[0204]

[0205] 取化合物A2(3.8g)加入无水THF(60mL)，滴加BMS(136mL)，65℃反应过夜，冷却到室温，滴加甲醇淬灭，浓缩干溶剂，加入甲醇(50mL)、水(50mL)回流2h，DCM萃取，干燥，浓缩，柱层析纯化得碱式的A3，类白色固体(2.8g)，加入甲醇(30mL)溶清，滴加4M HCl/EA(3.2mL)搅拌反应，浓缩干溶剂，MTBE打浆，过滤，得化合物A3盐酸盐(2.9g)。

[0206] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ10.36(m，1H)，9.82(m，1H)，9.26(br，2H)，7.61(m，2H)，7.46(m，3H)，3.64(d，J＝16.5Hz，1H)，3.27(d，J＝16.5Hz，1H)，2.66(m，2H)，2.52(m，1H)，+
2.14(t，J＝4.8Hz，3H)，1.90(m，1H).LRMS‑ESI(m/z)：246.16[M+H] .

[0207] 手性柱分离得到异构体A3‑P1(R构型)和A3‑P2(S构型)：

[0208]

[0209] A3‑P1(R构型)：HPLC纯度：＞98％，保留时间：6.914min。手性纯度：＞95％，保留时间：6.847min。

[0210] A3‑P2(S构型)：HPLC纯度：＞95％，保留时间：6.924min。手性纯度：＞95％，保留时间：6.782min。

[0211] 实施例4N‑(2‑氨基‑6‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑6‑基)乙酰胺(化合物A4)的制备

[0212]

[0213] 取化合物A1(400mg)加入二氯甲烷(20mL)，滴加乙酸酐(167mg，1.1eq)，25℃反应过夜。用饱和碳酸氢钠水溶液调pH＝9，二氯甲烷萃取，干燥，浓缩，柱层析得化合物A4，类白色固体(359mg,收率76.5％)。

[0214] 实施例5N6‑乙基‑6‑苯基‑4,5,6,7‑四氢苯并噻唑‑2,6‑二胺(化合物A5)及其盐酸盐的制备

[0215]

[0216] 化合物A4(320mg)加入二氯甲烷(20mL)，滴加TMSCl(500mg，5eq)，搅拌反应30min，加入四氢铝锂(480mg，12eq)，25℃反应5h。2M氢氧化钠水溶液(1mL)淬灭反应，加入无水硫酸镁、二氯甲烷搅拌，过滤，浓缩柱层析得白色固体(247mg)，加入乙酸乙酯(3mL)，滴加2M氯化氢乙酸乙酯溶液(0.5mL)搅拌反应30min，过滤，得化合物A5盐酸盐(250mg)。

[0217] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ9.96(s，1H)，9.33(s，1H)，7.57(m，J＝7.4Hz，2H)，7.44(m，3H)，6.81(s，2H)，3.61(d，J＝15.8Hz，1H)，3.21(d，J＝15.1Hz，1H)，2.78(m，1H)，2.60(m，1H)，2.43(m，2H)，2.27(m，1H)，1.71(m，1H)，1.14(t，J＝6.8Hz，3H).LRMS‑ESI(m/z)：+
274.17[M+H] .

[0218] 实施例6N‑(2‑氨基‑6‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑6‑基)丙酰胺(化合物A6)的制备

[0219]

[0220] 取化合物A1(400mg)加入二氯甲烷(20mL)，滴加丙酸酐(234mg，1.1eq)，25℃反应过夜。饱和碳酸氢钠水溶液调pH＝9，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得化合物A6，类白色固体(274mg，收率55.8％)。

[0221] 实施例7 6‑苯基‑N6‑丙基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2，6‑二胺(化合物A7)及其盐酸盐的制备

[0222]

[0223] 取化合物A6(274mg)加入二氯甲烷(20mL)，滴加TMSCl(990mg，10eq)，搅拌反应30min，加入四氢铝锂(968mg，28eq)，回流反应24h。2M氢氧化钠水溶液(1mL)淬灭反应，加入无水硫酸镁，二氯甲烷搅拌，过滤，浓缩柱层析得白色固体(229mg)，加入乙酸乙酯(3mL)，滴加2M氯化氢乙酸乙酯溶液(0.5mL)搅拌反应30min，过滤，得化合物A7盐酸盐(240mg)。

[0224] LRMS‑ESI(m/z)：288.19[M+H]+.1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ9.62(s，1H)，9.14(s，1H)，7.55(m，2H)，7.43(m，3H)，6.78(s，2H)，3.64(d，J＝16.3Hz，1H)，3.15(d，J＝16.2Hz，
1H)，2.71(m，1H)，2.65‑2.31(m，3H)，2.19(m，1H)，1.73(m，1H)，1.56(m，2H)，0.80(t，J＝
7.4Hz，3H).

[0225] 实施例8 6‑(2‑氟苯基)‑4，5，6,7‑四氢苯并噻唑‑2，6‑二胺(化合物A9)的制备[0226]

[0227] 步骤一：

[0228] 邻氟溴苯(5g，1eq)、氯化锂(0.6g，0，5eq)加入到THF(30mL)中，氮气保护下，降温至‑10℃以下，加入2.0M异丙基氯化镁THF溶液(14.3mL，1eq)，加入完毕，控制‑5‑‑10℃搅拌3h。

[0229] 另取A1‑2(1g，0.13eq)分散到10mL THF中，滴到上述体系中，控温‑5‑‑10℃反应2h。加入甲醇和水淬灭，加入EA(100mL)搅拌，过滤，滤液用水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化得A9‑1，类白色固体0.95g(收率70.5％)。

[0230] 步骤二：

[0231] 900mg A9‑1溶于DCM(10mL)中，加叠氮钠(0.83g，5eq)，冰浴下滴加TFA(9mL)，冰浴下反应30min后，移至室温避光过夜。加冰水(50mL)，用氨水调节pH至9，DCM萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析后得A9‑2，70mg。

[0232] 步骤三：

[0233] A9‑2(70mg)溶于甲醇(70mL)中，加10％钯碳(50mg)，通氢气，室温反应过夜。过滤，滤液浓缩，柱层析得化合物A9，白色固体38mg，收率59％。

[0234] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ7.47(t，J＝16.3Hz，1H)，7.31‑7.26(m，1H)，7.17‑7.11(m，2H)，6.63(s，2H)，3.10(d，J＝16Hz，1H)，2.62‑2.50(m，2H)，2.35‑2.31(m，1H)，2.16‑+2.12(m，1H)，1.82‑1.78(m，1H).ESI(m/z)：264.13[M+H] .HPLC纯度：＞97％，保留时间：
6.229min。

[0235] 实施例9 5‑苯基‑5‑(吡咯烷‑1‑基)‑4，5，6，7‑四氢‑1H‑吲唑(化合物A12)及其盐酸盐的制备

[0236]

[0237] 步骤一：三氮唑(12.4g，1.1eq)、四氢吡咯(13.35g，1.2eq)、1，4‑环己二酮单乙二醇缩酮A12‑1(25.0g，160mmol)溶于甲苯中，回流分水18h，温度降至室温，得到A12‑2溶液备用。

[0238] 步骤二：溴苯(75g，3eq)溶于无水THF中，‑78℃缓慢滴入正丁基锂(2.5M)(150mL，3.3eq)，滴加完毕，‑78℃保温1h，滴入上述制备的A12‑2溶液，滴加完毕后，保温搅拌1h，室温搅拌12h，柱层析得A12‑3，10.5g。

[0239] 步骤三：化合物A12‑3(10.5g，6.5mmol)溶于乙醇中，加入浓盐酸(12M，3eq)，室温搅拌过夜，浓缩干溶剂，饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝11‑12，DCM萃取，干燥过滤浓缩，柱层析得化合物A12‑4，8.5g。

[0240] 步骤四：

[0241] 化合物A12‑4(3.0g，11.1mmol)溶于甲苯中，加入无水硫酸镁干燥2天，过滤待用；甲苯中加入叔丁醇钠(2.46g，2eq)，加入甲酸乙酯(1.38g，1.5eq)，0‑10℃下加入上述A12‑4溶液，室温搅拌过夜。将反应液用甲苯萃取2次，水相调节pH＝6‑7，二氯甲烷萃取3次，干燥，过滤浓缩柱层析得化合物A12‑5，2.5g。

[0242] 步骤五：

[0243] 化合物A12‑5(200mg，7.3mmol)溶于乙醇中，加入水合肼0.5mL，加热回流7h。浓缩干溶剂，残余物柱层析得A12约60mg，将上述柱层析得到的产物溶于甲基叔丁基醚中，加入市售4M的氯化氢/二氧六环溶液(1eq，0.056mL)，析出固体，过滤烘干得化合物A12盐酸盐25mg。

[0244] LRMS‑ESI(m/z)：268.49[M+H]+.1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ11.67(s，1H)，7.75(m，2H)，7.64(s，1H)，7.42(m，3H)，3.87(d，J＝14.2Hz，1H)，3.48(m，1H)，3.32(d，J＝15.3Hz，
1H)，3.21(m，1H)，3.10(m，1H)，3.00(m，2H)，2.83(dd，J＝16.8，5.1Hz，1H)，2.55(m，1H)，
2.13(m，1H)，1.83(m，2H)，1.66(m，2H).

[0245] 手性柱分离得到异构体A12‑P1(S构型)和A12‑P2(R构型)：

[0246]

[0247] A12‑P1(S构型)：HPLC纯度：＞99％，保留时间：8.786min。手性纯度：＞99％，保留时间：7.703min。

[0248] A12‑P2(R构型)：HPLC纯度：＞99％，保留时间：8.778min。手性纯度：＞95％，保留时间：10.236min。

[0249] 实施例10N‑甲基‑6‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑6‑胺(化合物A13)及其盐酸盐的制备

[0250]

[0251] 将化合物A3(450mg)加入到85％的磷酸中(25mL)，降温至‑10℃，加入亚硝酸钠(6eq)的水溶液，‑10℃搅拌1h，然后滴加到0℃的50％的次磷酸溶液中(7mL)，0℃下搅拌1.5h，饱和碳酸钠中和至pH为8‑9，EA萃取三次，合并有机相，浓缩，柱层析得到的A13样品加入到50mL的EA中，加入HCl/EA溶液成盐，得到化合物A13盐酸盐，190mg。

[0252] LRMS‑ESI(m/z)：245.16[M+H]+.1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ10.32(m，1H)，9.75(m，1H)，8.95(s，1H)，7.57(d，J＝6.9Hz，2H)，7.41(m，3H)，4.03(d，J＝16.7Hz，1H)，3.48(d，J＝
16.7Hz，1H)，2.91(d，J＝16.4Hz，1H)，2.72(m，1H)，2.55(m，1H)，2.19(t，J＝5.2Hz，3H)，
2.10(m，1H).

[0253] 手性柱分离得到异构体A13‑P1(R构型)和A13‑P2(S构型)：

[0254]

[0255] A13‑P1(R构型)：HPLC纯度：＞95％，保留时间：10.144min。手性纯度：＞99％，保留时间：4.501min。

[0256] A13‑P2(S构型)：HPLC纯度：＞95％，保留时间：10.151min。手性纯度：＞99％，保留时间：6.418min。

[0257] 实施例11 6‑苯基‑4，5，6,7‑四氢苯并噻唑‑6‑胺(化合物A14)及其盐酸盐的制备[0258]

[0259] 将化合物A1(300mg)加入到浓盐酸(12M，8mL)中，搅拌至溶清后，降温至‑30℃，滴加1M的亚硝酸钠水溶液(1.7eq，2mL)，加入后保温搅拌1h，加入次磷酸(0.2mL)，冰水浴下搅拌1h后，降温至‑30℃加入饱和碳酸钠水溶液中和，二氯甲烷‑甲醇萃取，无水硫酸钠干燥后，浓缩至干，柱层析纯化得到60mg的A14样品，加入2mL的EA，滴加氯化氢乙酸乙酯溶液，析出固体，过滤，干燥得到化合物A14盐酸盐，35mg。

[0260] LRMS‑ESI(m/z)：231.12[M+H]+.1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ8.97(s，1H)，8.93(br，3H)，7.58(d，2H)，7.40(m，3H)，3.78(d，J＝16.6Hz，1H)，3.47(d，J＝16.6Hz，1H)，2.90(m，
1H)，2.59(m，1H)，2.44(m，1H)，2.27(m，1H).

[0261] 手性柱分离得到异构体A14‑P1(R构型)和A14‑P2(S构型)：

[0262]

[0263] A14‑P1(R构型)：HPLC纯度：＞98％，保留时间：9.514min。手性纯度：100％，保留时间：7.835min。

[0264] A14‑P2(S构型)：HPLC纯度：＞95％，保留时间：9.607min。手性纯度：100％，保留时间：21.014min。

[0265] 实施例12 2‑甲基‑N‑(4‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑4‑基)丙烷‑2‑磺胺(化合物A15)的制备

[0266]

[0267] 步骤一：反应瓶中加入A15‑1(5g，1eq)、叔丁基亚磺酰胺(5.57g，1.4eq)、钛酸四乙脂(8.24g，1.1eq)、THF，氮气保护，回流反应24h(70℃)。冷却到室温，反应液倒入冰盐水中，加入EA搅拌，过滤，分液保留有机相，水相用EA萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，干燥浓缩，柱层析得化合物A15‑2，2.69g，收率32.1％。

[0268] 步骤二：碘苯(1.0g，2.5eq)加入DCM(10mL)中，氮气保护，降至‑60℃，滴加丁基锂(1.64mL，2.5M，2.1eq)，保温反应1.5h，记作反应液2，待用。化合物A15‑2(500mg，1eq)加入DCM(10mL)中溶清，记作反应液1，待用。反应液1控温‑60℃左右滴加入反应液2中，保温反应2h。氯化铵淬灭反应，EA萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到化合物A15，322mg固体，收率49.3％。

[0269] 实施例13 4‑苯基‑4，5，6,7‑四氢苯并噻吩‑4‑胺(化合物A16)的制备

[0270]

[0271] 取化合物A15(322mg，1eq)加入二氧六环(9.7mL)中，滴加盐酸乙酸乙酯溶液(0.73mL，4M，3eq)，室温反应0.5h。加入饱和碳酸氢钠水溶液中和，EA萃取，饱和食盐水洗，干燥浓缩，柱层析得到化合物A16，192mg，收率86.7％。加入2mLDCM，滴0.3mL 4M的氯化氢乙酸乙酯溶液，浓缩，异丙醇打浆，过滤得到盐酸盐形式的A16，HPLC：96.7％。

[0272] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ9.14(s，3H)，7.49(d，J＝5.3Hz，1H)，7.44‑7.33(m，3H)，7.30‑7.22(m，2H)，7.03(d，J＝5.3Hz，1H)，2.85(m，2H)，2.23(t，J＝4.8Hz，1H)，1.95(m，
1H)，1.49(m，1H).

[0273] 实施例14N‑(4‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑4‑基)甲酰胺(化合物A17)的制备[0274]

[0275] 反应瓶中加入无水甲酸(347mg，9eq)和乙酸酐(770mg，9eq)中，氮气保护升温至60℃反应2h后降至室温(25℃左右)，加入化合物A16(192mg，1eq)的DCM(4mL)溶液，室温下搅拌0.5h。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，DCM萃取，浓缩，得到226mg油状液体，为化合物A17。

[0276] 实施例15N‑(4‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑4‑基)甲酰胺(化合物A18)及其盐酸盐的制备

[0277]

[0278] 取化合物A17(226mg，超理论，1eq)加入THF(10mL)溶液中，氮气保护下滴加1.0M的硼烷四氢呋喃溶液(8.4mL，10eq，1.0M)升温至回流反应3h。加入甲醇淬灭反应，浓缩至干，加入甲醇和水1∶1(5mL)升温至回流，TLC检测反应完毕，降至室温DCM萃取，浓缩得到A18粗品，加入2mL DCM，滴0.3mL 4M的氯化氢乙酸乙酯溶液，浓缩至干，加入异丙醇打浆，过滤，得到盐酸盐形式的A18，类白色固体150mg，收率73.6％。HPLC：98.3％。

[0279] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ10.10(s，1H)，9.75(s，1H)，7.57(d，J＝5.3Hz，1H)，7.49‑7.37(m，3H)，7.36‑7.31(m，2H)，7.10(d，J＝5.3Hz，1H)，2.92‑2.78(m，2H)，2.41(t，J＝5.2Hz，3H)，2.35(dd，J＝12.5，2.4Hz，1H)，2.25(m，1H)，1.94(m，1H)，1.40(m，1H).[0280] 实施例16 6‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑6‑胺(化合物A19)的制备[0281]

[0282] 步骤一：

[0283] 100mL反应瓶中依次加入化合物A19‑1(10g，1eq)、丙二酸(13g，1.4eq)和吡啶12mL，升温至100℃，反应6h。反应液冷却后，加入3M盐酸，调pH至3，析出固体，过滤，水淋洗，正庚烷淋洗(50mL*2)，得化合物A19‑2，13.6g类白色固体。

[0284] 步骤二：

[0285] 500mL反应瓶中，加入化合物A19‑2(13.6g)、甲酸铵(22.47g，4eq)、10％钯碳(10g)和异丙醇(150mL)，氮气保护，升温至90℃反应36h。反应液冷却至室温，垫硅藻土滤除钯碳，浓缩大部分异丙醇，加入2M盐酸稀释(300mL，pH＝2‑3)，EA萃取(200mL*2)，硫酸钠干燥浓缩得化合物A19‑3，10.5g固体，两步收率76.09％。

[0286] 步骤三：

[0287] 250mL反应瓶中加入多聚磷酸(PPA)(50g)，升温至120℃，待PPA能搅拌起来，分批加入化合物A19‑3(5g，1eq)，保温反应1h。撤出油浴，趁热且缓慢向反应体系中加冰块淬灭反应(共加入冰水100mL)，待料液冷却至室温后，加入EA(100mL)搅拌，垫硅藻土滤除黑渣，静置分层，水相再用50mL EA反萃一次，合并有机相，饱和碳酸氢钠洗涤一次(100mL)，水洗(100mL)，干燥，垫硅胶滤过，浓缩得化合物A19‑4，棕黄色固体2.5g，收率56.56％。

[0288] 步骤四：

[0289] 250mL三口瓶中加入甲基三苯基溴化膦(19.40g，1.5eq)和无水四氢呋喃(40mL)，控温0℃左右，滴加入2.5M丁基锂(2.10mL，1.4eq)，加完室温反应1h。控温0℃左右，将化合物A19‑4(5g，1eq)的四氢呋喃(10mL)溶液滴加入上述反应体系中，加完，室温反应过夜。向料液中加入冰水(100mL)和EA(100mL)，垫硅藻土滤过，静置分液，有机相浓缩至最小体积，柱层析得化合物A19‑5，1.1g油状物，收率22.31％。

[0290] 步骤五：

[0291] 100mL反应瓶中加入化合物A19‑5(1.3g，1eq)和甲醇‑水(体积比95/5，共39mL)，冰水浴下，分批加入HTIB氧化剂(3.56g，0.95eq)，加完，室温反应20min。反应液浓缩除大部分甲醇(35℃)，加入DCM和水(各20mL)，室温搅拌20min，分层，DCM相浓缩、柱层析纯化得化合物A19‑6，630mg油状物，收率43.45％。

[0292] 步骤六：

[0293] 25mL反应瓶中，加入化合物A19‑6(358mg，1eq)和DCM(5mL)，氮气保护，控温0‑10℃滴加入2M苯基氯化镁(1.18mL，1eq)，加完后，保温反应30min。将反应液倒入饱和氯化铵中，分出DCM，干燥，浓缩，柱层析纯化得化合物A19‑7，263mg油状物，收率48.52％。

[0294] 步骤七：

[0295] 50mL反应瓶中加入化合物A19‑7(263mg，1eq)、叠氮化钠(1.11g，15eq)和DCM(26.3mL)，氮气保护，冰水浴下，滴加入TFA(13mL)，加完保温反应30min。反应液倒入冰水中(20mL)，用氨水调pH至9，静置分出DCM相，干燥、柱层析纯化得到化合物A19‑8。

[0296] 步骤八：

[0297] 将化合物A19‑8溶于甲醇中(13mL)，加入钯碳(0.52g)，氢气置换，常压反应2h。反应液滤除钯碳，浓缩得化合物A19，90mg固体，两步收率34.35％。

[0298] LRMS‑ESI(m/z)：230.14[M+H]+.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.54(d，J＝7.3Hz，1H)，7.35(t，J＝7.6Hz，1H)，7.25(m，1H)，7.11(d，J＝5.1Hz，1H)，6.79(d，J＝5.1Hz，1H)，3.34(d，J＝16.6Hz，1H)，2.94(d，J＝16.2Hz，1H)，2.87‑2.74(m，1H)，2.61(dt，J＝16.7，5.5Hz，
1H)，2.32‑2.17(m，1H)，2.04‑1.92(m，1H).

[0299] 手性柱分离得到异构体A19‑P1(R构型)和A19‑P2(S构型)：

[0300]

[0301] A19‑P1(R构型)：HPLC纯度：＞93％，保留时间：13.149min。手性纯度：99％，保留时间：9.196min。

[0302] A19‑P2(S构型)：HPLC纯度：＞97％，保留时间：13.279min。手性纯度：98.8％，保留时间：10.021min。

[0303] 实施例17N‑(6‑苯基‑4,5,6，7‑四氢苯并噻吩‑6‑基)甲酰胺(化合物A20)的制备[0304]

[0305] 制备甲乙酐：10mL反应瓶中加入乙酸酐(0.51mL，28eq)和98％甲酸(0.21mL，28eq)，65℃搅拌1‑2h，冷却至室温，制得甲乙酐备用。将化合物A19(45mg，1eq，碱式)的DCM/THF混合溶液，冰水浴下滴加入自制的甲乙酐中，室温搅拌1h。向反应液中缓慢加入饱和碳酸氢钠水溶液，调pH至8，分出DCM相，浓缩，柱层析纯化得化合物A20，37mg胶状物，收率
73.27％。

[0306] 实施例18N‑甲基‑6‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑6‑胺(化合物A21)及其盐酸盐的制备

[0307]

[0308] 将化合物A20(37mg，1eq)溶于THF(3.7mL)中，氮气保护，冰水浴下分批加入四氢铝锂(55mg，10eq)，升温至回流反应3h。反应液冷却至0‑10℃，滴加0.05mL水和0.05mL 20％氢氧化钠溶液，垫硅藻土滤过，浓缩至最小体积，加入lmL 4M氯化氢乙酸乙酯溶液，搅拌10min，浓缩，再加0.5mL EA搅拌析晶，过滤得盐酸盐形式的化合物A21，23mg类白色固体，收率57.5％。

[0309] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ10.02(s，1H)，9.53(s，1H)，7.56(d，J＝6.9Hz，2H)，7.46‑7.36(m，3H)，7.31(d，J＝5.1Hz，1H)，6.70(d，J＝5.1Hz，1H)，3.90(d，J＝16.5Hz，1H)，
3.35(d，J＝16.5Hz，1H)，2.73(m，1H)，2.62(m，1H)，2.41(m，1H)，1.96(m，1H).LRMS‑ESI(m/+
z)：244.18[M+H] .

[0310] 实施例19 5‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑5‑胺(化合物A22)的制备[0311]

[0312] 步骤一：

[0313] 取A22‑1(195mg，1.3mmol)于50mL三口瓶中，置换氮气后加入干燥的THF(5mL)，降温至0℃，滴加PhMgCl(1mL，1.97mmol，1.5eq.)，滴加完毕后0℃下反应2h。加饱和氯化铵水溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤后，干燥，过滤，浓缩至干，柱层析得到产品A22‑2，黄色油状物115mg。

[0314] 步骤二：

[0315] 取A22‑2(115mg，0.5mmol)溶解于DCM(3mL)，加入NaN3(65mg，1mmol，2eq.)，，置换氮气后降温至0℃，滴加TFA(0.2mL，2.56mmol，5eq.)，滴加完毕后0℃下反应2.5h。冰水浴下加水稀释后加氨水淬灭反应，然后乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤后，干燥，过滤，浓缩得到A22‑3。

[0316] 步骤三：

[0317] 取A22‑3溶解于MeOH(10mL)，加入Pd/C(150mg)，置换氢气，室温反应2h。将反应液过滤除去Pd/C后浓缩、残余物溶解于MTBE(10mL)，滴加4M的氯化氢/乙酸乙酯溶液(0.1mL)，有白色固体析出，过滤得到化合物A22，灰白色固体30mg，三步收率8.8％。

[0318] 1H NMR(400MHz，CD3OH)δ7.52‑7.50(m，2H)，7.46‑7.38(m，3H)，7.28(d，J＝4.0Hz，1H)，6.92(d，J＝4.0Hz，1H)，3.62(d，J＝16Hz，1H)，3.15(d，J＝16Hz，1H)，2.97‑2.92(m，
1H)，2.64‑2.59(m，1H)，2.55‑2.47(m，1H)，2.44‑2.38(m，1H).LRMS‑ESI(m/z)：213.17[M‑+
NH2] .

[0319] 手性柱分离得到异构体A22‑P1(S构型)和A22‑P2(R构型)：

[0320]

[0321] A22‑P1(R构型)：HPLC纯度：＞97％，保留时间：13.319min。手性纯度：99％，保留时间：10.137min。

[0322] A22‑P2(S构型)：HPLC纯度：＞97％，保留时间：13.321min。手性纯度：98.8％，保留时间：10.871min。

[0323] 实施例20 5‑(N‑甲基苯甲酰胺基)‑5‑苯基‑4，5,6,7‑四氢苯并噻吩‑2‑羧酸(化合物A23)的制备

[0324]

[0325] 步骤一：

[0326] 反应瓶中，加入化合物A23‑18g、N‑甲基苄胺(6.83g，1.1eq)、1，2，3‑三氮唑(4.25g，1.2eq)、甲苯50mL，回流分水过夜，降温至室温。另取反应瓶加入苯基溴化镁(4eq，in THF)，冰浴下将上述反应液滴加入其中，搅拌90min，将反应液倒入氯化铵水溶液中，加EA，有机相水洗，干燥、浓缩、柱层析得化合物A23‑2，淡黄色油状物3.85g，收率22％。

[0327] 步骤二：

[0328] 反应瓶中加入3.85g化合物A23‑2，加入Pd(OH)2/C 460mg，加入乙醇50mL和甲酸铵6.75g(10eq)，氮气置换，回流50min。滤除不溶物，滤渣用乙醇淋洗，合并滤液，浓缩，残液加DCM稀释，分别用水和饱和氯化钠溶液洗涤一次，干燥浓缩得化合物A23‑3，2.49g无色油状物，收率92％。

[0329] 步骤三：

[0330] 反应瓶中加入2.49g化合物A23‑3，加入DCM，DIPEA 1.5eq，冰浴下加入苯甲酰氯1.1eq，加毕室温下反应过夜。加入EA稀释，分别用氯化铵水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤一次，干燥浓缩，再用15mL正庚烷打浆，得化合物A23‑4，淡黄色固体2.97g。收率84％。

[0331] 步骤四：

[0332] 反应瓶中加入2.9g化合物A23‑4，加入80mL丙酮和40mL水，加入0.2eq对甲苯磺酸，回流5h。加入EA稀释，分别用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤一次，干燥、浓缩、柱层析得化合物A23‑5，无色油状物2.34g，收率92％。

[0333] 步骤五：

[0334] 将4eq DMF溶于30mL干燥DCM中，冰浴下搅拌20min，将3eq三氯氧磷滴加入体系中，加毕，室温下搅拌1h，再次冰浴下搅拌10min，将化合物A23‑5(2g，1eq)溶于15mL干燥DCM中，快速加入上述反应液。氮气保护，自然升温至室温，搅拌过夜。将反应液倒入冰水中，调pH至弱碱性，分出有机相，饱和食盐水洗，干燥、浓缩、柱层析得化合物A23‑6，淡黄色油状物1.04g。收率45％。

[0335] 步骤六：

[0336] 将钠块(3eq)加入到冰浴下的无水乙醇中，待完全反应后，加入2eq巯基乙酸乙酯，再加入化合物A23‑6(1g，1eq)的无水乙醇溶液，氮气保护，室温下搅拌3h。直接加入5N氢氧化钠水溶液(按4eq NaOH计)，60℃下搅拌4h。反应结束，加水稀释，加MTBE分层，弃去有机层，分出水层，用1M的盐酸调pH至2左右，加EA萃取，有机相再用饱和食盐水洗，干燥、浓缩得化合物A23，淡黄色固体1.03g。

[0337] 实施例21Nv甲基‑N‑(5‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑5‑基)苯甲酰胺(化合物A24)的制备

[0338]

[0339] 反应瓶中加入600mg化合物A23，加入氧化亚铜0.5eq，DBU 0.4eq和少量DMF，氮气置换多次，160℃反应5h，冷却反应液，加过量EA搅拌，滤除不溶物，滤渣用EA淋洗，滤液加EA稀释，分别用氯化铵水溶液和饱和食盐水洗涤一次，干燥浓缩柱层析得化合物A24，白色固体405mg。

[0340] 实施例22N‑甲基‑5‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑5‑胺(化合物A25)及其盐酸盐的制备

[0341]

[0342] 反应瓶中加入干燥THF和360mg化合物A24搅拌溶解，冰浴降温，分批多次加入2eq LAH，加毕氮气保护，自然升温至环境温度搅拌3h。将反应液倒入含有2.7g四水合酒石酸钾钠的冰水溶液中，加入EA萃取，有机相用饱和食盐水洗，干燥浓缩，碱性三氧化二铝柱层析，得无色油状物A25约220mg，溶于甲醇中，冰浴下滴加氯化氢/甲醇溶液(HCl约1eq)，加毕，搅拌30min，浓缩，往残余物中加入适量乙腈，搅拌，析出白色固体，过滤，烘干得化合物A25盐酸盐，白色固体210mg。

[0343] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ10.21(q，J＝6.2Hz，1H)，9.67(m，1H)，7.58‑7.50(m，2H)，7.45‑7.36(m，3H)，7.34(d，J＝5.1Hz，1H)，6.94(d，J＝5.1Hz，1H)，3.72(dd，J＝16.1，
2.0Hz，1H)，3.25(dd，J＝16.0，2.3Hz，1H)，2.87(dq，J＝16.9，2.4Hz，1H)，2.67(ddt，J＝
12.8，5.2，2.4Hz，1H)，2.47(m，1H)，2.19(t，J＝5.3Hz，3H)，2.14‑2.00(m，1H).LRMS‑ESI(m/+
z)：244.14[M+H] .

[0344] 实施例23 7‑(N‑甲基甲酰胺)‑7‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑2‑羧酸甲酯(化合物A27)的制备

[0345]

[0346] 步骤一：

[0347] 制备甲乙酐：10mL反应瓶中加入乙酸酐(127.8mg，3eq)和无水甲酸(57.6mg，3eq)，65℃搅拌1‑2h，冷却至室温，得甲乙酐备用。

[0348] 化合物A27‑1(100mg)悬浮于DCM中，加入5eq DIPEA，冰浴，滴加入3eq自制的甲乙酐，加毕环境温度下反应40min，TLC检测反应结束。DCM稀释，稀盐酸洗，食盐水洗，干燥浓缩得化合物A27‑2，类白色固体90mg。采用此法再次制备了1.1g化合物A27‑2。

[0349] 步骤二：

[0350] 反应瓶中加入540mg化合物A27‑2与2eq三乙胺，5mL DMF‑DMA混合物，95℃下反应过夜。浓缩除去溶剂，残余物加DCM稀释，分别用氯化铵水溶液、饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩得黄色油状物；另取反应瓶中加入将2.5eq DMF(按照A27‑2计算)与干燥DCM混合，置于冰浴下搅拌，滴加入2.5eq三氯氧磷，加毕，室温下搅拌40min，将之前所得的若干黄色油状物溶于少量干燥DCM中，滴加入体系中，加毕氮气保护下室温搅拌3h。DCM稀释，氢氧化钠水溶液洗，饱和食盐水洗，干燥浓缩柱层析得化合物A27‑3，淡黄色油状物613mg。收率94％。

[0351] 步骤三：

[0352] 将钠块(2.5eq)加入到冰浴下的无水甲醇中，待完全反应后，加入1.1eq巯基乙酸乙酯，再加入化合物A27‑3(610mg，1eq)的无水甲醇溶液，室温下搅拌3h。取少量反应液，与氯化铵溶液混合，加EA萃取，有机相干燥浓缩，柱层析得标题化合物A27。

[0353] 1H NMR(400MHz，Chloroform‑d)δ8.03(s，1H)，7.51(s，1H)，7.45‑7.30(m，5H)，3.81(s，3H)，2.78(s，3H)，2.75(m，2H)，2.50‑2.41(m，2H)，1.88(m，2H).

[0354] 实施例24 7‑(N‑甲基甲酰胺)‑7‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑2‑羧酸(化合物A28)的制备

[0355]

[0356] 向化合物A27的反应液中加入5M氢氧化钠水溶液(按4eq NaOH计)，室温下搅拌过夜。加水稀释，加MTBE，分层，弃去有机层，分出水层用4M盐酸调pH至2左右，加DCM萃取，有机相再用饱和食盐水洗，干燥浓缩得化合物A28，淡黄色油730mg，收率100％。

[0357] LRMS‑ESI(m/z)：314.39[M‑H]‑.

[0358] 实施例25N‑甲基‑N‑(7‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑7‑基)甲酰胺(化合物A29)的制备

[0359]

[0360] 化合物A28投料720mg，加入氧化亚铜0.5eq、DBU 0.4eq和少量DMF，氮气置换多次，160℃反应4h，冷却反应液，加过量EA搅拌，滤除不溶物，滤渣用EA洗，滤液加EA稀释，分别用饱和氯化铵水溶液和饱和食盐水洗涤一次，干燥浓缩柱层析得化合物A29，白色固体350mg，收率60％。

[0361] 1H NMR(400MHz，Chloroform‑d)δ8.01(s，1H)，7.44‑7.30(m，5H)，7.22(d，J＝5.2Hz，1H)，6.79(d，J＝5.2Hz，1H)，2.76(s，3H)，2.74(m，2H)，2.53‑2.40(m，2H)，1.93(m，
1H)，1.83(m，1H).

[0362] 实施例26N‑甲基‑7‑苯基‑4，5,6，7‑四氢苯并噻吩‑7‑胺(化合物A30)及其盐酸盐的制备

[0363]

[0364] 化合物A29投料350mg，溶于干燥THF中，冰浴降温，分批多次加入2eq四氢铝锂，加毕氮气保护，自然升温至室温搅拌40min。将反应液倒入四水合酒石酸钾钠的冰水溶液中，加入EA萃取，分层清晰，有机相再用饱和食盐水洗，干燥浓缩，中性三氧化二铝柱层析，分离得到无色油状物210mg，油状物A30溶于甲醇中，冰浴10min，滴加氯化氢/甲醇溶液(HCl约1eq)，加毕，搅拌10min，减压浓缩至干，再加入2mL乙腈，环境温度下搅拌过夜，过滤，烘干得
170mg化合物A30盐酸盐，白色固体。

[0365] 1H NMR(500MHz，Methanol‑d4)δ7.63(d，J＝5.2Hz，1H)，7.51‑7.41(m，3H)，7.36‑7.33(m，2H)，7.03(d，J＝5.2Hz，1H)，2.88‑2.73(m，2H)，2.69(s，3H)，2.51‑2.37(m，2H)，+
2.02‑1.92(m，1H)，1.70‑1.59(m，1H).LRMS‑ESI(m/z)：213.07[M‑NHMe] .

[0366] 实施例27 2‑甲基‑N‑(4‑苯基‑4,5,6，7‑四氢苯并噻唑‑4‑基)丙烷‑2‑磺胺(化合物A31)的制备

[0367]

[0368] 步骤一：

[0369] 化合物A31‑1(20g，1eq)加入冰醋酸(200mL)，氮气保护，缓慢滴加液溴(29g，1eq)的醋酸溶液(20mL)，室温反应2h。加入硫脲(27.4g，2eq)，加热回流3小时，浓缩干溶剂，加入乙醇打浆，过滤得化合物A31‑2(15g，50％)。

[0370] 步骤二：

[0371] 化合物A31‑2(20.6g，1eq)加入THF，氮气保护，冷却到0‑5℃，滴加亚硝酸异戊酯(17.3g，1.2eq)，滴毕，升温到45℃反应2h，氯化铵淬灭，DCM萃取，饱和食盐水洗，干燥，浓缩，柱层析得化合物A31‑3，深棕色固体5.7g。

[0372] 步骤三：

[0373] 反应瓶中加入化合物A31‑3(300mg，1eq)、叔丁基亚磺酰胺(330mg，1.4eq)、钛酸四乙脂(489mg，1.1eq)、THF，氮气保护，40℃反应过夜，冷却到室温，反应液倒入冰盐水中，加入EA搅拌过滤，分液，EA萃取，饱和食盐水洗，干燥浓缩，柱层析得化合物A31‑4约288mg。采用同样的方法制备克级化合物A31‑4。

[0374] 步骤四：

[0375] 碘苯(35.4g，2.5eq)加入DCM(356mL)中，氮气保护，降至‑60℃，滴加丁基锂(58.3mL，2.5M，2.1eq)，保温反应3h，计作反应液2，待用。化合物A31‑4(17.8g，leq)加入DCM(338mL)中溶清，计作反应液1，待用。反应液1控温‑60℃左右滴加入反应液2中，保温反应2h。氯化铵淬灭反应，EA萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到5.5g化合物A31。

[0376] 实施例28 4‑苯基‑4，5，6,7‑四氢苯并噻唑‑4‑胺(化合物A32)的制备

[0377]

[0378] 化合物A31(5.5g，1eq)加入二氧六环(165mL)中，滴加盐酸乙酸乙酯溶液(12.4mL，4M，3eq)，室温反应0.5h。加入饱和碳酸氢钠水溶液中和，EA萃取，饱和食盐水洗，干燥浓缩，柱层析得到化合物A32，2.81g。

[0379] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ8.85(s，1H)，7.68‑6.74(m，5H)，2.85(m，2H)，2.27(s，+2H)，1.92(m，2H)，1.85(m，1H)，1.56(m，1H).LRMS‑ESI(m/z)：214.09[M‑NH2] .[0380] 实施例29N‑(4‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑4‑基)甲酰胺(化合物A33)的制备[0381]

[0382] 无水甲酸(1.8g，9eq)加入乙酸酐(3.99g，9eq)中，氮气保护升温至60℃反应2h后降至室温(25℃左右)，加入化合物A32(1.0g，1eq)的DCM(20mL)溶液，室温下搅拌1.5h。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，DCM萃取，有机相浓缩，柱层析，得到化合物A33，952mg，淡黄色固体。

[0383] 实施例30N‑甲基‑4‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑4‑胺(化合物A34)及其盐酸盐的制备

[0384]

[0385] 化合物A33(950mg，1eq)加入THF(40mL)溶液中，氮气保护下滴加硼烷四氢呋喃(36.8mL，10eq，1.0M)升温至回流反应2h，TLC显示反应完毕，降至0‑5℃，冰浴下加入甲醇淬灭反应，浓缩至干，加入甲醇和水1∶1(17mL)室温搅拌，TLC检测反应完毕，DCM萃取，有机相浓缩，柱层析，得到364mg粗品，加入10mLDCM，滴氯化氢乙酸乙酯溶液(0.37mL，1.0eq，4.0M)，减压浓缩至干，加入异丙醚打浆，过滤，得到330mg化合物A34。

[0386] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ9.94(m，2H)，9.21(s，1H)，7.46‑7.36(m，3H)，7.29(m，2H)，2.90(m，2H)，2.47(m，1H)，2.43(t，J＝5.2Hz，3H)，2.36(td，J＝13.1，2.4Hz，1H)，2.00+
(m，1H)，1.43(m，1H).LRMS‑ESI(m/z)：214.08[M‑NHCH3] .

[0387] 实施例31 4‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2，4‑二胺(化合物A35)的制备[0388]

[0389] 步骤一：

[0390] 化合物A35‑1(800mg)加入二氯甲烷(20mL)，加入DMAP(464mg)、二碳酸二叔丁酯(1.57g)，室温反应过夜。浓缩，柱层析得化合物A35‑2，类白色固体250mg。

[0391] 步骤二：

[0392] 100mL三口瓶中加入2.7mL(26.087mmol，7eq)溴苯、6mL无水四氢呋喃，氮气保护下置于‑78℃的低温反应釜中搅拌。待内温降到‑60℃以下，开始滴加10.4mL (26.087mmol，7eq)2.5M的正丁基锂，控制内温不超过‑60℃，滴毕，1h后，缓慢加入1g(3.726mmol，1eq)化合物A35‑2的THF溶液(10mL)，控制内温不超过‑60℃，滴毕，‑78℃下搅拌5h。反应体系中加入饱和氯化铵水溶液，加入EA萃取，EA相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得化合物A35‑3，1.13g淡黄色固体。

[0393] LRMS‑ESI(m/z)：347.18[M+H]+.

[0394] 步骤三：

[0395] 取1.13g(3.261mmol，1eq)化合物A35‑3于50mL三口瓶中，加入8mL DCM，氮气保护下置于冰浴中搅拌10min后加入2.1g(32.61mmol，10eq)NaN3，加毕，缓慢滴加4mL CF3COOH，室温搅拌过夜。体系倾入适量冰水中，缓慢滴加氨水调节pH值10左右，适量DCM萃取，DCM相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物A35‑4，油状物。

[0396] LRMS‑ESI(m/z)：272.06[M+H]+.

[0397] 步骤四：

[0398] 上步所得油状物A35‑4中加入2mL THF，122mg(0.2eq)六水合氯化钴，氮气保护下搅拌。缓慢滴加390mg(4eq)NaBH4的水(10mL)溶液，室温搅拌2h。用2M盐酸调节pH值为3左右，过滤，滤去不溶物，再用饱和碳酸钠溶液调节pH值为10左右，DCM/MeOH＝20∶1萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩柱层析得化合物A35，白色固体320mg。

[0399] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ7.30‑7.22(m，4H)，7.16‑7.12(m，1H)，6.67(s，2H)，2.57‑2.54(m，2H)，2.22(s，2H)，1.84‑1.81(m，2H)，1.78‑1.72(m，1H)，1.54‑1.43(m，1H)+
.LRMS‑ESI(m/z)：274.17[M‑NH2] .HPLC纯度：＞97％，保留时间：10.848min。

[0400] 实施例32‑35N‑(2‑氨基‑4‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑4‑基)甲酰胺(化合物A36)、N,N’‑(4‑苯基‑4,5,6，7‑四氢苯并噻唑‑2，4‑二基)二甲酰胺(化合物A37)、N4‑甲基‑4‑苯基‑4,5,6，7‑四氢苯并噻唑‑2，4‑二胺(化合物A38)、N4‑甲基‑4‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2，4‑二胺(化合物A39)的制备

[0401]

[0402] 步骤一：

[0403] 取240mg化合物A35于25mL单口瓶中，加入8mL甲酸乙酯，氮气保护下回流过夜。将反应体系浓缩干，加入适量DCM：MeOH＝20：1，有机相用饱和食盐水洗一次，硫酸钠干燥，浓缩得黄褐色固体200mg。取少量柱层析分离得化合物A36和得化合物A37。

[0404] A36：LRMS‑ESI(m/z)：274.17[M+H]+.

[0405] A37：LRMS‑ESI(m/z)：320.20[M+H]+.

[0406] 步骤二：

[0407] A36和A37的混合物加入5mL硼烷四氢呋喃溶液，氮气保护下回流过夜。将体系冷却至室温，缓慢滴加甲醇淬灭多余的硼烷，浓缩，加入6mL甲醇和2滴浓盐酸，氮气保护下回流过夜。体系冷却至室温，加入少量氨水调节pH值8‑9，浓缩，柱层析得50mg化合物A39，HCl/+MeOH成盐得56mg淡黄色粉末。质谱出碎片峰，LRMS‑ESI(m/z)：243.32[M‑NHCH3] .[0408] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ9.03(br，1H)，7.57(m，1H)，7.39(m，4H)，7.35(m，1H)，
2.80(d，J＝4.7Hz，3H)，2.60(m，2H)，2.43(s，3H)，2.22(m，2H)，1.85(m，1H)，1.33(m，1H).[0409] 另柱层析得18mg化合物A38。

[0410] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ7.25(d，J＝4.0Hz，4H)，7.19‑7.14(m，1H)，6.69(s，2H)，2.56‑2.54(m，2H)，2.17(s，3H)，2.05‑1.98(m，1H)，1.78‑1.66(m，2H)，1.49‑1.39(m，1H)+
.LRMS‑ESI(m/z)：260.21[M+H] .

[0411] 实施例36N‑(2‑氨基‑5‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑5‑基)甲酰胺(化合物A40)的制备

[0412]

[0413] 步骤一：

[0414] 化合物A40‑1(5.0g，43.1mmol)溶于DMF中，加入咪唑(6.5g，2eq)，0‑10℃下加入TBDPSCl(12g，1.1eq)，室温搅拌过夜，加入水淬灭，EA/水萃取，有机相干燥浓缩柱层析得化合物A40‑2，6.0g淡黄色油状物。

[0415] 步骤二：

[0416] 化合物A40‑2(6.0g，16.9mmol)溶于DCM中，戴斯马丁试剂(24g，1.5eq)，室温搅拌过夜。将反应液倒入水中，EA萃取，干燥浓缩、柱层析得化合物A40‑3，5.0g。

[0417] 步骤三：

[0418] 化合物A40‑3(5.0g，14.2mmol)溶于无水THF中，加入叔丁基亚磺酰胺(2.6g，1.5eq)，0‑10℃滴入钛酸乙酯(11mL，3eq)，室温过夜。将反应液倒入水中，过滤，滤液用EA萃取，干燥浓缩柱层析得化合物A40‑4，6.6g。

[0419] 步骤四：

[0420] 格氏试剂制备：Mg(3.4g，10eq)悬浮于无水THF中，氮气置换3次，缓慢滴入溴苯(29g，10eq)，50℃加热1h，降至‑10‑0℃待用。

[0421] 化合物A40‑4(6.6g，14.2mol)溶于无水THF中，缓慢滴入上述格氏试剂，0‑10℃搅拌2h，室温搅拌1h。加入2M盐酸，室温搅拌过夜。将反应液倒入水中，调节pH＝8‑9，二氯甲烷萃取，干燥浓缩柱层析得化合物A40‑5，3.5g。

[0422] 步骤五：

[0423] 化合物A40‑5(3.5g)溶于甲酸乙酯中，加热回流24h。浓缩干溶剂，柱层析得化合物A40‑6，3.5g。

[0424] 步骤六：

[0425] 化合物A40‑6(3.5g)溶于THF中，加入TABF(1M)(16mL，2eq)，室温搅拌过夜。浓缩干溶剂，柱层析得化合物A40‑7，110mg。

[0426] 步骤七：

[0427] 化合物A40‑7(1.1g，5.1mmol)溶于DCM中，加入戴斯马丁试剂(3.8g，2eq)，室温搅拌过夜。加入硫代硫酸钠淬灭反应，二氯甲烷萃取，干燥过滤浓缩，柱层析得化合物A40‑8，700mg。

[0428] 步骤八：

[0429] 化合物A40‑8(350mg，1.6mmol)溶于DCM中，0‑10℃，加入三溴吡啶嗡(700mg，1.1eq)，室温搅拌3h。加入硫代硫酸钠淬灭反应，二氯甲烷萃取，干燥过滤浓缩，柱层析得溴代中间体，380mg淡黄色固体。将上述淡黄色固体溶于二氧六环中，加入硫脲(350mg，3eq)和二异丙基乙胺(400mg，2eq)，80‑90℃搅拌5h。加入DCM/水萃取，有机相干燥过滤浓缩柱层析得标题化合物200mg。

[0430] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ8.31‑8.19(m，1H)，8.02‑7.97(m，1H)，7.42‑7.19(m，5H)，6.72‑6.70(m，2H)，2.97‑2.90(m，2H)，2.67‑2.62(m，1H)，2.52‑2.47(m，1H)，2.41‑2.32(m，1H)，2.28‑2.14(m，1H).

[0431] 实施例37N‑(2‑氨基‑7‑苯基‑4,5,6,7‑四氢苯并噻唑‑7‑基)甲酰胺(化合物A41)的制备

[0432]

[0433] 化合物A40(200mg，0.73mmol)悬浮于THF中，加入硼烷四氢呋喃溶液(10eq)，加热回流3h。加入甲醇淬灭反应，浓缩干溶剂，加入甲醇/水，回流过夜，氯仿萃取，干燥、浓缩、柱层析得化合物A41 100mg。

[0434] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ7.40(m，2H)，7.35(t，J＝7.5Hz，2H)，7.26(t，J＝6.9Hz，1H)，6.69(s，2H)，3.09(d，J＝16.7Hz，1H)，2.69(d，J＝16.2Hz，1H)，2.16(m，2H)，2.00(m，+
5H).LRMS‑ESI(m/z)：260.19[M+H] .

[0435] 实施例38N‑(2‑氨基‑7‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑7‑基)甲酰胺(化合物A42)的制备

[0436]

[0437] 取化合物A41(350mg，1.6mmol)溶于DCM中，加热回流，加入三溴吡啶嗡(700mg，1.1eq)，搅拌1h。加入硫代硫酸钠淬灭反应，二氯甲烷萃取，干燥过滤浓缩，柱层析得溴代中间体，380mg淡黄色固体。将上述淡黄色固体溶于二氧六环中，加入硫脲(350mg，3eq)和二异丙基乙胺(400mg，2eq)，80‑90℃加热5h。加入DCM/水萃取，有机相干燥过滤浓缩柱层析得化合物A42，150mg。

[0438] 实施例39N7‑甲基‑7‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2，7‑二胺(化合物A43)的制备[0439]

[0440] 化合物A42(150mg，0.56mmol)悬浮于THF中，加入硼烷四氢呋喃溶液10eq，加热回流3h。加入甲醇淬灭反应，浓缩干溶剂，加入甲醇/水等体积的混合液，回流过夜，氯仿萃取，干燥、过滤、柱层析得化合物A43，80mg。

[0441] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ7.36(m，2H)，7.29(t，J＝7.5Hz，2H)，7.19(t，J＝7.1Hz，1H)，6.63(s，2H)，2.92(d，J＝16.3Hz，1H)，2.55(d，J＝16.6Hz，1H)，2.03(m，3H)，1.92(s，+
3H)，1.88(m，1H).LRMS‑ESI(m/z)：260.18[M+H] .

[0442] 实施例40 5‑吗啉‑5‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑2‑羧酸乙酯(化合物A44)及其盐酸盐的制备

[0443]

[0444] 步骤一：

[0445] 将5g化合物A23‑1与1.1eq吗啉，1.2eq三氮唑混合于40mL甲苯中，回流分水过夜，制得含有化合物A44‑1的溶液。

[0446] 步骤二：

[0447] 氮气保护下，将4eq苯基溴化镁四氢呋喃溶液置于冰浴中搅拌10min，再将前述化合物A44‑1的溶液滴加到反应体系中，加毕于室温下搅拌2h，将反应液倒入氯化铵水溶液中，加入EA萃取，有机相再用水洗涤两次，直接浓缩得含有化合物A44‑2的粗品。

[0448] 步骤三：

[0449] 化合物A44‑2溶于20mL四氢呋喃中，加入20mL 1M的盐酸，40℃反应过夜。调pH至弱碱性，EA萃取，有机相水洗，饱和食盐水洗，干燥浓缩柱层析得化合物A44‑3，油状物4.4g，三步收率53％。于PE中打浆，过滤得淡黄色固体3.4g。

[0450] 步骤四：

[0451] 冰浴及氮气保护下，将2eq三氯氧磷滴加到含1.6eq DMF的二氯甲烷溶液中，加毕于室温下搅拌20min，再次冰浴降温，将200mg化合物A44‑3(1eq)分批多次加入到反应体系中，加毕于室温下反应过夜。加碳酸氢钠水溶液，分层，有机相饱和食盐水洗，浓缩、柱层析得到115mg化合物A44‑4。

[0452] 步骤五：

[0453] 将2eq金属钠加入到冰浴下的无水乙醇中，氮气保护，待钠块完全消失于溶液中后，加入1.1eq巯基乙酸乙酯，再滴加入化合物A44‑4(110mg，1eq)的乙醇溶液，加毕室温下反应过夜。加氯化铵淬灭反应，DCM萃取，有机相干燥、浓缩柱层析得无色油状物105mg。于甲醇中加入氯化氢/甲醇溶液成盐酸盐，于EA中打浆，过滤得到化合物A44盐酸盐，白色固体85mg。

[0454] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ11.65(s，1H)，7.69(m，2H)，7.57(s，1H)，7.52‑7.42(m，3H)，4.23(q，J＝7.1Hz，2H)，4.20‑3.82(m，5H)，3.60‑3.50(m，3H)，3.24(d，J＝12.5Hz，1H)，
3.12‑3.03(m，1H)，2.70‑2.55(m，3H)，2.35(m，1H)，1.25(t，J＝7.1Hz，3H).LRMS‑ESI(m/z)：
+
372.43[M+H] .

[0455] 实施例41 3‑氨基‑5‑吗啉‑5‑苯基‑4,5,6,7‑四氢苯并噻吩‑2‑羧酸乙酯(化合物A45)及其盐酸盐的制备

[0456]

[0457] 将200mg化合物A44‑3与1.5eq氰基乙酸乙酯，1.5eq吗啉，1.5eq单质硫混合于乙醇中，50℃搅拌过夜。反应液冷却后有固体析出，过滤，滤饼柱层析纯化后得到80mg A45固体，于甲醇中加入氯化氢/甲醇溶液成盐酸盐，于乙腈中打浆，过滤得到标题化合物A45盐酸盐，淡黄色固体65mg。

[0458] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ11.30(s，1H)，7.67(s，2H)，7.48(m，3H)，7.25(m，2H)，4.16‑3.82(m，7H)，3.65‑3.40(m，3H)，3.09(d，J＝12.9Hz，1H)，2.99‑2.89(m，1H)，2.55(m，+
2H)，2.39(m，1H)，2.11(m，1H)，1.17(t，J＝7.1Hz，3H).LRMS‑ESI(m/z)：387.39[M+H] .[0459] 实施例42 5‑吗啉‑5‑苯基‑4,5,6，7‑四氢苯并噻吩‑2‑羧酸(化合物A46)的制备[0460]

[0461] 反应瓶中加入化合物A44 590mg，加入乙醇和1.27mL 5N氢氧化钠水溶液(4eq)，60℃反应8h，加水稀释，加入MTBE，分出水相，调pH至中性，DCM萃取(5mL×5)，合并有机相，少量饱和食盐水洗，干燥浓缩得粗品455mg，加入MTBE打浆，过滤，滤饼烘干得淡粉红色固体320mg，化合物A46。

[0462] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ12.78(s，1H)，7.53(s，1H)，7.35‑7.17(m，5H)，3.50(t，J＝4.5Hz，4H)，3.23(d，J＝16.5Hz，1H)，3.00(d，J＝16.4Hz，1H)，2.80(dt，J＝17.0，4.4Hz，+1H)，2.45(m，2H)，2.27(m，3H)，2.19‑2.01(m，2H).LRMS‑ESI(m/z)：344.47[M+H] .[0463] 实施例43 4‑(5‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑5‑基)吗啉(化合物A47)及其盐酸盐的制备

[0464]

[0465] 将235mg化合物A46与0.5eq氧化亚铜，0.4eq DBU混合于少量DMF中，氮气置换多次，160℃反应4h，冷却后加EA稀释，氯化铵水溶液洗，饱和食盐水洗，干燥浓缩柱层析得白色固体100mg的A47，于甲醇中加入氯化氢/甲醇溶液成盐酸盐，于乙腈中打浆，过滤得到白色固体100mg，为化合物A47盐酸盐。

[0466] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ11.67(s，1H)，7.77‑7.60(m，2H)，7.45(m，3H)，7.28(d，J＝5.1Hz，1H)，6.87(d，J＝5.1Hz，1H)，4.17‑3.81(m，5H)，3.63(d，J＝12.4Hz，1H)，3.49(d，J＝14.4Hz，2H)，3.21(q，J＝4.5Hz，1H)，2.98(dd，J＝17.2，5.4Hz，1H)，2.60(m，3H)，2.29(m，+1H).LRMS‑ESI(m/z)：300.45[M+H] .

[0467] 实施例44 6‑苯基‑6‑(哌啶‑1‑基)‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2‑胺(化合物A48)及其盐酸盐的制备

[0468]

[0469] 步骤一：

[0470] 格氏试剂制备：镁(345.6mg，4.8eq)悬浮于干燥的四氢呋喃中，滴入溴苯(200mg，0.48eq)升温至50‑60℃，引发，再滴入溴苯(1.8g，3.6eq)保持微沸，30min滴加完毕，升温至
60℃搅拌1h，大部分镁消失，降至0‑10℃待用。

[0471] 另取反应瓶中加入三氮唑(1.0g，1.2eq)，哌啶(1.4mL，1.2eq)，1，4‑环己二酮单乙二醇缩酮A23‑1(2.0g，12.8mmol)溶于甲苯中，回流分水18h，得到A48‑1的甲苯溶液。降至室温，滴入上述制备的格氏试剂中(0‑10℃)，滴加完毕后，室温搅拌12h，柱层析得化合物A48‑2，1.0g。

[0472] 步骤二：

[0473] 将化合物A48‑2(900mg)溶于乙醇中，加入盐酸，加热至70℃搅拌12h。将反应液浓缩至干，甲叔醚/水萃取，水相用氢氧化钠溶液调节pH＝11‑12，二氯甲烷萃取，干燥过滤浓缩得化合物A48‑3，500mg。

[0474] 步骤三：

[0475] 化合物A48‑3(500mg，2mmol)溶于乙酸中，加入三溴吡啶(800mg，1.2eq)，加热回流3h，加入硫脲(300mg，2eq)加热回流18h，浓缩干溶剂，加入饱和碳酸钠溶液，调节pH＝9‑10，二氯甲烷萃取，有机相干燥浓缩柱层析得A48，白色固体200mg。加入甲醇(5mL)溶清，滴加HCl/EA溶液搅拌反应，浓缩干溶剂，得化合物A48盐酸盐，白色固体。

[0476] LRMS‑ESI(m/z)：314.28[M+H]+.1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ10.75(s，1H)，7.69(br，2H)，7.45(m，3H)，7.15(br，2H)，3.99(d，J＝15.1Hz，1H)，3.68(d，J＝10.9Hz，1H)，3.61(d，J＝11.2Hz，1H)，3.47(d，J＝15.0Hz，1H)，3.11(m，1H)，2.55(m，2H)，2.32(m，2H)，2.10(m，
1H)，1.71(d，J＝13.2Hz，2H)，1.60(d，J＝11.7Hz，1H)，1.18(m，1H).

[0477] 实施例45 6‑(3‑氯苯基)‑6‑(哌啶‑1‑基)‑4,5,6,7‑四氢苯并噻唑‑2‑胺(化合物A49)的制备

[0478]

[0479] 步骤一：

[0480] 间氯苯碘(12g，2eq)溶于无水THF中，‑78℃缓慢滴入正丁基锂(2.5M)(23mL，1.1eq)，滴加完毕，‑78℃保温1h，滴入新制备的A48‑1甲苯溶液，滴加完毕后，保温‑78℃搅拌1h，室温搅拌12h，柱层析得化合物A49‑1，3.0g。

[0481] 步骤二：

[0482] 化合物A49‑1(3.0g，1.35mmol)溶于乙醇中，加入浓盐酸(3eq，12M)，室温搅拌过夜，浓缩干溶剂，饱和碳酸氢钠调节pH＝11‑12，DCM萃取，干燥过滤浓缩，柱层析得化合物A49‑2，1.8g。

[0483] 步骤三：

[0484] 化合物A49‑2(200mg，0.7mmol)溶于乙酸中，加入三溴吡啶嗡(1.1g，4eq)，加热回流4h。继续加入硫脲(420mg，8mmol)，加热回流18h，浓缩干溶剂，加入饱和碳酸钠溶液，调节pH＝9‑10，二氯甲烷萃取，干燥，过滤浓缩柱层析得标题化合物A49 25mg。

[0485] LRMS‑ESI(m/z)：348.38[M+H]+.

[0486] 实施例46 6‑苯基‑6‑(吡咯烷‑1‑基)‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2‑胺(化合物A50)的制备

[0487]

[0488] 步骤一：

[0489] 三氮唑(12.4g，1.1eq)、四氢吡咯(13.35g，1.2eq)、1，4‑环己二酮单乙二醇缩酮(25.0g，160mmol)溶于甲苯中，回流分水18h，降至室温，得到化合物A50‑1的甲苯溶液待用。

[0490] 步骤二：

[0491] 溴苯(75g，3eq)溶于无水THF中，‑78℃缓慢滴入正丁基锂(2.5M)(150mL，3.3eq)，滴加完毕，‑78℃保温1h，滴入上述制备的A50‑1甲苯溶液，滴加完毕后，保温‑78℃搅拌1h，室温搅拌12h，柱层析得化合物A50‑2，10.5g。

[0492] 步骤三：

[0493] 化合物A50‑2(10.5g，6.5mmol)溶于乙醇中，加入浓盐酸(12M，1.6mL)，室温搅拌过夜，浓缩干溶剂，饱和碳酸氢钠调节pH＝11‑12，DCM萃取，干燥过滤浓缩，柱层析得化合物A50‑3，8.5g。

[0494] 步骤四：

[0495] 化合物A50‑3(200mg，0.7mmol)溶于乙酸中，加入三溴吡啶嗡(1.1g，4eq)，加热回流4h。继续加入硫脲(420mg，8mmol)，加热回流18h，浓缩干溶剂，加入饱和碳酸钠溶液，调节pH＝9‑10，二氯甲烷萃取，干燥，过滤浓缩柱层析得标题化合物200mg。

[0496] LRMS‑ESI(m/z)：300.33[M+H]+.1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ7.37(m，2H)，7.28(t，J＝7.4Hz，2H)，7.20(t，J＝6.9Hz，1H)，6.59(s，2H)，3.15(d，J＝14.6Hz，1H)，2.89(d，J＝15.7Hz，1H)，2.55(br，2H)，2.39(m，3H)，2.16(m，2H)，1.73(m，1H)，1.56(br，4H).[0497] 手性柱分离得到异构体A50‑P1(S构型)和A50‑P2(R构型)：

[0498]

[0499] A50‑P1(S构型)：HPLC纯度：＞99％，保留时间：5.761min。手性纯度：＞95％，保留时间：7.617min。

[0500] A50‑P2(R构型)：HPLC纯度：＞99％，保留时间：7.452min。手性纯度：＞95％，保留时间：7.623min。

[0501] 实施例47 6‑(3‑氯苯基)‑6‑(吡咯烷‑1‑基)‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2‑胺(化合物A51)的制备

[0502]

[0503] 步骤一：

[0504] 间氯碘苯(45g，1.2eq)溶于无水THF中，‑78℃缓慢滴入正丁基锂(2.5M)(88mL，1.5eq)，滴加完毕，‑78℃保温1h，滴入新制备的A50‑1甲苯溶液，滴加完毕后，保温‑78℃搅拌1h，室温搅拌12h，柱层析得化合物A51‑1，8.5g。

[0505] 步骤二：

[0506] 化合物A51‑1(8.5g，6.5mmol)溶于乙醇中，加入浓盐酸(12M，1.6mL)，室温搅拌过夜，浓缩干溶剂，饱和碳酸氢钠溶液调节pH＝11‑12，DCM萃取，干燥过滤浓缩，柱层析得化合物A51‑2，5.2g。

[0507] 步骤三：

[0508] 化合物A51‑2(300mg，9.4mmol)溶于乙酸中，加入三溴吡啶嗡(1.02g，4eq)，加热回流4h，生成溴代中间体。继续加入二甲基硫脲(560mg，8eq)，加热回流18h，浓缩干溶剂，加入饱和碳酸钠溶液，调节pH＝9‑10，二氯甲烷萃取，干燥，过滤浓缩柱层析得90mg化合物A51，白色固体。

[0509] LRMS‑ESI(m/z)：334.39[M+H]+.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.38(s，1H)，7.29(m，3H)，6.62(s，2H)，3.13(d，J＝16.2Hz，1H)，2.88(d，J＝16.0Hz，1H)，2.55(br，2H)，2.37(m，3H)，
2.15(m，2H)，1.70(m，1H)，1.58(br，4H).

[0510] 实施例48 5‑苯基‑5‑(吡咯烷‑1‑基)‑4，5，6，7‑四氢苯并噻吩‑2‑羧酸(化合物A52)的制备

[0511]

[0512] 步骤一：0‑10℃下，将三氯氧磷(126mg，2eq)滴加到DMF(50mg，1.5eq)二氯甲烷溶液中，冰浴下搅拌2h，化合物A50‑3(100mg，0.5mmol)溶于二氯甲烷中，加入上述反应液中，室温搅拌过夜。缓慢滴入乙酸钠水溶液中，分液，有机相干燥过滤、浓缩得到化合物A52‑1，油状物。

[0513] 步骤二：将上述油状物A52‑1溶于乙醇中，加入巯基乙酸乙酯(74mg，1.5eq)，搅拌10min，冰浴下加入乙醇钠(55mg，4eq)，室温下反应过夜，加入水，加热回流2h。浓缩乙醇，1M盐酸溶液调节pH＝5‑6，二氯甲烷萃取，有机相干燥，浓缩，柱层析得化合物A52 55mg，淡黄色油状物。

[0514] 实施例49 1‑(5‑苯基‑4,5,6，7‑四氢苯并噻吩‑5‑基)吡咯烷(化合物A53)的制备[0515]

[0516] 化合物A52(55mg，0.17mmol)溶于NMP中，加入氧化亚铜(24mg，1eq)，喹啉(26mg，1.1eq)，升温至140℃，12h，原料基本完全反应，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，干燥过滤浓缩得化合物A53，20mg。

[0517] 实施例50 6‑苯基‑6‑(吡咯烷‑1‑基)‑4，5，6，7‑四氢苯并噻二唑(化合物A54)的制备

[0518]

[0519] 化合物A50‑3(200mg，0.9mmol)溶于甲醇中，加入氨基脲(200mg，2eq)，乙酸钾(200mg，2.1eq)加热回流6h。浓缩干溶剂，二氯甲烷/水萃取，干燥过滤浓缩，得固体300mg。将上述制备的固体溶于二氯甲烷中，‑20℃缓慢滴入二氯亚砜中，室温搅拌1h。将反应液倒入水中，氢氧化钠调节pH＝12，二氯甲烷萃取，干燥，过滤浓缩，柱层析得化合物A54 100mg。

[0520] 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.29(m，5H)3.65(d，J＝17.3Hz，1H)，3.41(d，J＝17.1Hz，1H)，3.28(dt，J＝16.4，4.4Hz，1H)，2.64(m，3H)，2.55(m，2H)，2.43(m，2H)，1.68(m，4H)+
.LRMS‑ESI(m/z)：286.35[M+H] .

[0521] 实施例51 5‑苯基‑5‑(吡咯烷‑1‑基)‑4，5，6，7‑四氢苯并[dl异恶唑(化合物A55)的制备

[0522]

[0523] 步骤一：

[0524] 化合物A50‑3(300mg，0.7mmol)溶于甲苯中，加入无水硫酸镁干燥2天，过滤待用；甲苯中加入叔丁醇钠(246mg,2eq)，加入甲酸乙酯(138mg，1.5eq)，0‑10℃下加入A50‑3的甲苯溶液，室温搅拌过夜。将反应液用甲苯萃取2次，保留水相并用1M盐酸溶液调节pH＝6‑7，二氯甲烷萃取3次，干燥，过滤浓缩柱层析得化合物A55‑1，800mg。

[0525] 步骤二：

[0526] 化合物A55‑1(110mg)溶于乙酸中，加入盐酸羟胺(70mg，2eq)，升温至80℃加热5h。浓缩干溶剂，饱和碳酸钠调节pH＝9‑10，二氯甲烷萃取，干燥，过滤浓缩，柱层析得化合物A55 66mg。

[0527] ESI‑MS m/z 269.36[M+H]+.

[0528] 实施例52N,N‑二甲基‑6‑苯基‑6‑(吡咯烷‑1‑基)‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2‑胺(化合物A56)的制备

[0529]

[0530] 化合物A50‑3(50mg，0.16mmol)溶于乙酸中，加入三溴吡啶嗡(300g，4eq)，加热回流4h，得到溴代中间体。继续加入二甲基硫脲(100mg，8mmol)，加热回流18h。浓缩干溶剂，加入饱和碳酸钠水溶液，调节pH＝9‑10，二氯甲烷萃取，干燥，过滤浓缩柱层析得化合物A56 10mg。

[0531] LRMS‑ESI(m/z)：328.45[M+H]+.

[0532] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ7.36(m，2H)7.31(t，J＝7.6Hz，2H)，7.21(t，J＝7.1Hz，1H)，2.97(d，J＝16.8Hz，1H)，2.94(s，3H)，2.83(s，3H)，2.78(d，J＝16.8Hz，1H)，2.50(m，
2H)，2.46‑2.33(m，3H)，2.26(m，1H)，2.15(m，1H)，1.68(m，1H)，1.55(m，4H).[0533] 实施例53 6‑(3‑氯苯基)‑N，N‑二甲基‑6‑(吡咯烷‑1‑基)‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2‑胺(化合物A57)及其盐酸盐的制备

[0534]

[0535] 化合物A51‑2(300mg，9.4mmol)溶于乙酸中，加入三溴吡啶嗡(1.1g，4eq)，加热回流4h，生成溴代中间体。继续加入二甲基硫脲(600mg，8eq)，加热回流18h，浓缩干溶剂，加入饱和碳酸钠水溶液，调节pH＝9‑10，二氯甲烷萃取，干燥，过滤浓缩柱层析得A57，为150mg油状物，将上述油状物溶于甲基叔丁基醚中，加入12M的浓盐酸调节pH＝2‑3，大量固体析出，过滤烘干得化合物A57盐酸盐，95mg。

[0536] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ12.28(s，1H)，10.32(s，1H)，7.93(s，1H)，7.77(d，J＝7.6Hz，1H)，7.53(m，2H)，4.15(d，J＝16.3Hz，1H)，3.57(d，J＝17.9Hz，1H)，3.40(s，3H)，
3.35(m，1H)，3.17(m，1H)，2.96(s，3H)，2.88(m，4H)，2.63(td，J＝13.1，5.9Hz，1H)，2.11(m，+
1H)，1.84(m，2H)，1.67(m，2H).LRMS‑ESI(m/z)：362.41[M+H] .

[0537] 实施例54 6‑(3‑氯苯基)‑6‑(哌啶‑1‑基)‑4,5,6,7‑四氢苯并噻二唑(化合物A58)及其马来酸盐的制备

[0538]

[0539] 化合物A49‑2(300mg，1.3mmol)溶于甲醇中，加入氨基脲(300mg，2eq)、乙酸钾(300mg，2.1eq)，加热回流6h。浓缩干溶剂，二氯甲烷/水萃取，有机相干燥过滤浓缩，得300mg固体。将上述制备的固体溶于二氯甲烷中，‑20℃缓慢滴入二氯亚砜中，室温搅拌1h。
将反应液倒入水中，氢氧化钠溶液调节pH＝12，二氯甲烷萃取，干燥，过滤柱层析得碱式化合物A58，100mg固体。将上述固体溶于丙酮中，加入马来酸搅拌，大量固体析出，过滤，烘干得化合物A58马来酸盐100mg，白色固体。

[0540] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ7.58(br，1H)，7.41(m，3H)，6.16(s，2H)，3.54(d，J＝17.3Hz，1H)，3.30(d，J＝14.6Hz，1H)，2.99‑2.37(m，8H)，1.58(br，4H)，1.39(br，2H).ESI‑+
MS m/z 334.38[M+H] .

[0541] 实施例55 6‑(3‑氯苯基)‑N6‑甲基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2，6‑二胺(化合物A59)的制备

[0542]

[0543] 步骤一：

[0544] 三氮唑(1.0g，1.2eq)、N‑甲基苄胺(1.8mL，1.2eq)、1，4‑环己二酮单乙二醇缩酮(2.0g，1.28mmol)溶于甲苯中，回流分水18h，将至室温，得到含A59‑1的溶液待用。

[0545] 步骤二：

[0546] 间氯苯碘(6g，2eq)溶于无水THF中，‑78℃缓慢滴入正丁基锂(2.5M)(6mL，1.1eq)，滴加完毕，‑78℃保温1h，滴入上述制备的A59‑1，滴加完毕后，保温搅拌1h，室温搅拌12h，柱层析得化合物A59‑2，600mg。

[0547] 步骤三：

[0548] 化合物A59‑2(500mg，1.35mmol)溶于甲苯中，加入DIAD(275mg，1.1eq)，加热回流18h，浓缩干甲苯，加入饱和氯化铵水溶液和乙醇，回流18h，浓缩除去乙醇，氨水调节pH至7‑
8，EA萃取，干燥浓缩，柱层析得化合物A59‑3，120mg。

[0549] 步骤四：

[0550] 化合物A59‑3(50mg)溶于乙醇中，加入浓盐酸(12M，3eq)，室温搅拌12h。浓缩干溶剂，加入饱和碳酸钠，调节pH＝9‑10，二氯甲烷萃取，干燥，过滤浓缩柱层析得化合物A59‑4，20mg。

[0551] 步骤五：

[0552] 化合物A59‑4(20mg，0.09mmol)溶于乙酸中，加入三溴吡啶嗡(135mg，0.36mmol)，加热回流4h，生成溴代中间体。继续加入硫脲(54mg，0.72mm0l)，加热回流18h，浓缩干溶剂，加入饱和碳酸钠水溶液，调节pH＝9‑10，二氯甲烷萃取，干燥，过滤浓缩柱层析得化合物A59 5mg。

[0553] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ7.64(s，1H)，7.49(d，J＝7.7Hz，1H)，7.36(t，J＝7.8Hz，1H)，7.30(d，J＝7.9Hz，1H)，6.72(s，2H)，3.10(m，3H)，3.00(d，J＝15.8Hz，1H)，2.67(d，J＝
16.0Hz，1H)，2.50(m，2H)，2.32(d，J＝10.7Hz，1H)，1.90(dd，J＝10.6，3.0Hz，1H).ESI‑MS +
m/z 294.33[M+H] .

[0554] 实施例56 4‑(2‑氯苯基)‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2，4‑二胺(化合物A60)及其马来酸盐的制备

[0555]

[0556] 步骤一：

[0557] 邻氯溴苯(24.83g，130mmol)溶于干燥THF(100mL)中，冷至‑78℃，滴加n‑BuLi(48mL，2.5M)，约1h加完，1h后滴加A35‑2(5.340g，20mmol)的THF(80mL)溶液，控温‑78℃搅拌5h。饱和氯化铵水溶液淬灭反应，EA萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥，浓缩，柱层析得化合物A60‑1，黄色泡沫状固体(2.8g)。

[0558] 步骤二：

[0559] 化合物A60‑1(2.3g，6.0mmol)溶于DCM(100mL)中，加叠氮钠(7.8g，120mmol)，冰浴下滴加TFA(80mL)，1h内加完，加毕后，冰浴下继续反应1h，室温过夜，加冰水100mL，用5M氨水调节pH至9，DCM萃取，有机相用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得化合物A60‑2，白色泡沫状固体(1.050g)。

[0560] 步骤三：

[0561] 化合物A60‑2(1.050g)溶于THF(20mL)中，加六水合氯化钴(167mg)，滴加硼氢化钠(260mg)水溶液(20mL)，室温反应30min，加1M盐酸淬灭反应，再调节pH＝12，DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得碱式化合物A60(浅褐色固体)，参照实施例54的方法成马来酸盐得化合物A60马来酸盐(682mg)。

[0562] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ8.89(br，2H)，7.44(m，2H)，7.38(m，1H)，7.30(d，J＝7.5Hz，1H)，6.92(s，2H)，6.02(s，2H)，2.71(m，1H)，2.61(m，1H)，2.43(m，1H)，2.04(m，2H)，+
1.80(m，1H).ESI‑MS m/z 308.11[M+H] .

[0563] 实施例57N‑(2‑氨基‑4‑(2‑氯苯基)‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑4‑基)甲酰胺(化合物A61)的制备

[0564]

[0565] 取化合物A60(260mg)溶于甲酸乙酯(12mL)，90℃加热18h。将反应液浓缩干，柱层析得化合物A61。

[0566] 实施例58 4‑(2‑氯苯基)‑N4‑甲基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2,4‑二胺(化合物A62)及其马来酸盐的制备

[0567]

[0568] 取化合物A61溶于干燥的THF(20mL)中，滴加硼烷二甲硫醚溶液(3.8mL，2M)，室温搅拌20min后，回流5h。冷至室温，小心加入甲醇(15mL)淬灭反应，浓缩溶剂，加甲醇(30mL)回流过夜，浓缩，柱层析得碱式化合物A62(浅褐色固体)，参照实施例54的方法成马来酸盐得化合物A62马来酸盐。

[0569] 1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.58(d，J＝7.2Hz，1H)，7.46(t，J＝7.0Hz，1H)，7.36(t，J＝7.7Hz，1H)，6.92(d，J＝7.8Hz，1H)，6.31(s，3H)，2.94(m，1H)，2.85(s，3H)，2.71(m，2H)，+2.20(t，J＝11.9Hz，1H)，1.97(m，1H)，1.46(m，1H).ESI‑MS m/z 294.05[M+H] .[0570] 实施例59 4‑(2‑氯苯基)‑N4‑乙基‑4,5,6,7‑四氢苯并噻唑‑2，4‑二胺(化合物A63)的制备

[0571]

[0572] 取化合物A60(195mg，0.7mmol)溶于MeOH(5mL)中，加醋酸(84mg，1.4mmol)，乙醛(168μL，5M in THF)，室温搅拌1h后，加氰基硼氢化钠(91mg)，室温反应24h后，补加乙醛(42μL)、氰基硼氢化钠(23mg)，继续反应20h。加2M氢氧化钠溶液调至pH＝12，DCM萃取，干燥，浓缩，柱层析得化合物A63，浅黄色油状物72mg。

[0573] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ7.63(s，1H)，7.37‑7.12(m，4H)，6.61(b r，2H)，2.58(m，+3H)，2.21(m，1H)，2.05(m，2H)，1.67(m，2H)，1.01(m，3H).ESI‑MS m/z 308.11[M+H] .[0574] 实施例60 4‑(2‑氯苯基)‑N4‑丙基‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2，4‑二胺(化合物A64)的制备

[0575]

[0576] 化合物A60(20mg，0.07mmol)溶于甲醇(1mL)中，加乙酸(9mg，0.14mmol)，丙醛(5mg，1.2eq)，5min后加氰基硼氢化钠(9mg，2eq)，搅拌5h。加水10mL，1M氢氧化钠溶液调至pH＝10，DCM萃取，干燥，浓缩，柱层析得化合物A64，白色固体(13mg)。

[0577] 1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.49(d，J＝7.8Hz，1H)，7.36(t，J＝7.2Hz，1H)，7.30(t，J＝7.4Hz，1H)，7.06(s，1H)，3.37(m，1H)，2.79(m，1H)，2.74‑2.56(m，3H)，2.09(m，1H)，1.97(m，1H)，1.68(m，2H)，1.49(m，1H)，0.97(t，J＝7.4Hz，3H).

[0578] 实施例61 5‑苯基‑4，5，6，7‑四氢‑1H‑吲唑‑5‑胺(化合物A65)的制备[0579]

[0580] 步骤一：

[0581] 将化合物A23‑1(1eq，5g)、叔丁基亚磺酰胺(1.5eq，5.82g)、钛酸四乙酯(3eq，21g)溶于超干四氢呋喃(100mL)中，氮气保护，室温下搅拌过夜。用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭。过滤后，滤液用乙酸乙酯萃取3次。干燥浓缩，柱层析得A65‑1，7.06g，产率85％。

[0582] 步骤二：

[0583] 氮气保护下，将苯基氯化镁(3eq，20mL)加入到250mL三口瓶中。冰浴下加入缓慢加入A65‑1的四氢呋喃溶液。加毕，搅拌20min后撤去冰浴室温搅拌。TLC监测反应完毕后，加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应。过滤后，EA萃取三次。干燥浓缩，柱层析得A65‑2，白色固体3.01g。

[0584] 步骤三：

[0585] 将A65‑2(1eq，2.5g)溶于丙酮和水的混合溶剂40mL(丙酮：水＝3：1)。加入PTSA(0.5eq，0.705g)搅拌。TLC监测反应完毕后，加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭。EA萃取三次，干燥浓缩得A65‑3，棕红色液体1.675g，产率77.15％。

[0586] 步骤四：

[0587] 将A65‑3(1eq，1.675g)、DMF‑DMA(5eq，3.79mL)在110℃下加热回流过夜。反应完毕后得到A65‑4溶液，无需处理直接用于下一步。

[0588] 步骤五：

[0589] 将上一步得到的A65‑4溶液和水合肼(5eq，1.68g)溶于甲醇，80℃下加热过夜。浓缩至干，得A65‑5，棕红色液体2g。

[0590] 步骤六：

[0591] 将A65‑5(1eq，500mg)溶于2mL的无水乙醇中。搅拌十分钟后加入2M的盐酸溶液搅拌2h。用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，调节pH为8‑9，EA萃取三次，干燥浓缩，用氨基柱柱层析得化合物A65，暗红色化合物340mg。

[0592] 1H NMR(500MHz，Chloroform‑d)δ7.58‑7.52(m，2H)，7.40(s，1H)，7.37(t，J＝7.6Hz，2H)，7.26(s，1H)，3.67(d，J＝2.0Hz，2H)，3.17(d，J＝15.6Hz，1H)，2.88(dt，J＝
15.7，7.9Hz，1H)，2.76(d，J＝15.6Hz，1H)，2.69‑2.58(m，1H)，2.31(ddd，J＝14.2，8.8，+
6.0Hz，1H)，2.06(dq，J＝13.6，6.8，5.8Hz，1H).ESI‑MS m/z 197.34[M+H] .

[0593] 实施例62N‑(2‑氨基‑6‑苯基‑4,5，6，7‑四氢苯并噻唑‑6‑基)环丙烷甲酰胺(化合物A66)的制备

[0594]

[0595] 取A1(15mg，1eq)溶于2mL THF中，加入三乙胺(9mg，1.1eq)，冰水浴降温至0℃，缓慢加入环丙烷甲酸酐(14mg，1.1eq)，室温反应14小时。加饱和碳酸氢钠溶液淬灭，DCM萃取3次，有机相合并，干燥，浓缩，柱层析纯化，得18mg化合物A66。

[0596] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ8.21(s，1H)，7.34(d，J＝7.6Hz，2H)，7.28(t，J＝7.6Hz，2H)，7.18(t，J＝7.1Hz，1H)，6.63(s，2H)，3.04(d，J＝16.5Hz，1H)，2.93(d，J＝16.1Hz，1H)，+
2.62(m，1H)，2.35(m，1H)，2.15(m，2H)，1.69(m，1H)，0.57(m，4H).ESI‑MS m/z 314.22[M+H] .[0597] 实施例63 6‑苯基‑N6‑(环丙基甲基)‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑‑2，6‑二胺(化合物A67)盐酸盐的制备

[0598]

[0599] 取A1(150mg，1eq)溶于2mL DCM中，加入环丙甲醛(43mg，1eq)，室温反应14小时，缓慢加入三乙酰氧基硼氢化钠(130mg，1eq)，室温反应1小时。加水淬灭，DCM萃取3次，有机相合并，干燥，浓缩，柱层析纯化，残余物A67于甲醇中加入氯化氢/甲醇溶液成盐酸盐，浓缩得105mg盐酸盐形式的化合物A67。

[0600] 1H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ10.42(s，1H)，9.59(s，1H)，9.16(br，2H)，7.59(m，2H)，7.44(m，3H)，3.60(m，2H)，2.78‑2.53(m，4H)，2.13(m，1H)，1.76(m，1H)，0.98(m，1H)，0.50(d，J＝8.0Hz，2H)，0.24(m，1H)，0.064(m，1H).

[0601] ESI‑MS m/z 300.18[M+H]+.

[0602] 实施例64N‑苄基‑N‑甲基‑5‑苯基‑4,5,6,7‑四氢‑1H‑吲唑‑5‑胺(化合物A68)的制备

[0603]

[0604] 步骤一：

[0605] 化合物A23‑2(1eq)溶于乙醇中，加入浓盐酸(12M，3eq)，室温搅拌过夜，加入硫酸钠干燥后浓缩溶剂，饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝11‑12，DCM萃取，干燥过滤浓缩，柱层析得到化合物A68‑1，产率83％。

[0606] 步骤二：

[0607] 化合物A68‑1溶于甲苯中，加入无水硫酸镁干燥，过滤待用；另取反应瓶中加入甲苯、叔丁醇钠(2eq)，再加入甲酸乙酯(1.5eq)，0‑10℃下加入上述化合物A68‑1的溶液，室温搅拌过夜。将反应液用甲苯萃取2次，保留水相并用1M盐酸溶液调节pH＝6‑7，二氯甲烷萃取3次，干燥、浓缩、柱层析得到化合物A68‑2，产率93％。

[0608] 步骤三：

[0609] 化合物A68‑2(1eq，90mg)溶于乙醇中，加入85％水合肼(3eq，97mg)，升温至85℃加热5h。加入无水硫酸钠干燥后，浓缩干溶剂，残余物柱层析得化合物A68，白色固体，产率98％。

[0610] 1H NMR(500MHz，Chloroform‑d)δ7.63‑7.51(m，2H)，7.47(s，1H)，7.31(d，J＝8.1Hz，3H)，7.27(d，J＝2.5Hz，3H)，7.23(qd，J＝6.9，3.7Hz，2H)，3.57(d，J＝13.3Hz，1H)，
3.43(d，J＝13.3Hz，1H)，3.16(s，2H)，2.70(ddd，J＝16.0，4.9，3.0 Hz，1H)，2.43(td，J＝
12.2，5.0Hz，1H)，2.24(s，3H)，2.21(s，1H)，1.97(ddd，J＝16.4，11.9，4.8Hz，1H).ESI‑MS +
m/z 318.18[M+H] .

[0611] 实施例65N‑甲基‑5‑苯基‑4，5，6，7‑四氢‑1H‑吲唑‑5‑胺(化合物A69)的制备[0612]

[0613] 取化合物A68(1eq，25mg)溶于硝基甲烷中，室温下加入Oxone氧化剂(3eq，81mg)。30℃下搅拌24h。加入硫代硫酸钠淬灭反应，EA萃取三次，用饱和食盐水洗涤两次，干燥、浓缩、柱层析得化合物A69。

[0614] 1H NMR(500MHz，Chloroform‑d)δ7.50‑7.40(m，2H)，7.35(s，1H)，7.32(dd，J＝8.4，7.0Hz，2H)，7.25‑7.21(m，1H)，3.13(d，J＝15.5Hz，1H)，2.82(d，J＝15.5Hz，1H)，2.73(ddd，J＝16.3，7.4，5.6Hz，1H)，2.46(dt，J＝16.9，6.6Hz，1H)，2.30(q，J＝6.7Hz，2H)，2.13+
(s，3H).ESI‑MS m/z 228.11[M+H] .

[0615] 实施例66 5‑苯基‑5‑(哌啶‑1‑基)‑4，5，6，7‑四氢‑1H‑吲唑(化合物A70)的制备[0616]

[0617] 步骤一：化合物A48‑3(1eq，0.7g)溶于甲苯中，加入无水硫酸镁干燥，过滤待用；另取反应瓶中加入甲苯、叔丁醇钠(2eq，523mg)，再加入甲酸乙酯(1.5eq，303mg)，0‑10℃下加入上述化合物A48‑3的甲苯溶液，室温搅拌过夜。将反应液用甲苯萃取2次，保留水相并用1M盐酸溶液调节pH＝6‑7，二氯甲烷萃取3次，干燥、浓缩、柱层析得到化合物A70‑1，0.72g，产率93％。

[0618] 步骤二：化合物A70‑1(1eq，90mg)溶于乙醇中，加入85％水合肼(3eq，97mg)，升温至85℃加热5h。加入无水硫酸钠干燥后，浓缩干溶剂，残余物柱层析得化合物A70，白色固体87mg，产率98％。

[0619] 1H NMR(500MHz，Chloroform‑d)δ7.46‑7.32(m，3H)，7.19(dt，J＝14.0，7.0Hz，3H)，3.37‑2.83(m，2H)，2.61(d，J＝15.9Hz，3H)，2.34(s，3H)，2.10‑1.75(m，2H)，1.68‑1.21+
(m，6H).ESI‑MS m/z 282.31[M+H] .

[0620] 手性柱分离得到异构体A70‑P1(S构型)和A70‑P2(R构型)：

[0621]

[0622] A70‑P1(S构型)：HPLC纯度：＞95％，保留时间：10.024min。手性纯度：＞99％，保留时间：6.319min。

[0623] A70‑P2(R构型)：HPLC纯度：＞95％，保留时间：10.009min。手性纯度：＞95％，保留时间：7.971min。

[0624] 实施例67 6‑苯基‑6‑(哌啶‑1‑基)‑4，5，6，7‑四氢苯并噻唑(化合物A71)的制备[0625]

[0626] 取A48碱式(160mg，1.0eq)溶于THF(2mL)，加入亚硝酸叔丁酯(65mg，1.1eq)，60℃反应5h。加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，浓缩，柱层析纯化，得到化合物A71 1
25mg，无色油状物。H NMR(500MHz，Chloroform‑d)δ8.57(s，1H)，7.33(m，2H)，7.22(m，3H)，
3.27(m，2H)，2.84(d，J＝15.4Hz，1H)，2.60(m，2H)，2.36(m，3H)，2.05(m，2H)，1.80‑1.33(m，+
6H).ESI‑MS m/z 299.20[M+H] .

[0627] 实施例68 6‑((甲氨基)甲基)‑6‑苯基‑4，5，6，7‑四氢苯并[d]噻唑‑2‑胺(化合物A252)的制备

[0628]

[0629] 步骤一：250ml三口瓶中加入A252‑1(5.5g，1.0eq)，乙二醇(1.7g，1.05eq)，甲苯(100ml)氮气保护下，升温至120℃反应2‑3h。反应液降温至室温，100ml饱和碳酸氢钠洗涤，收集有机相，100ml饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得A252‑2，油状物5.2g。

[0630] 步骤二：250ml三口瓶中加入上述油状物A252‑2，50ml四氢呋喃搅拌溶清，氮气置换，冰水浴降温至0℃左右，分批次加入氢化铝锂(1.5g，1.5eq)，待加入完毕后，升温至70℃左右搅拌2h。反应液冰水浴降温至0℃，饱和氯化铵溶液淬灭，100ml乙酸乙酯萃取，有机相用50ml饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得A252‑3，类白色固体5.5g。

[0631] 步骤三：100ml三口瓶中加入A252‑3(2.2g)，20ml甲酸乙酯搅拌溶解，氮气保护下升温至70℃反应2h左右。减压浓缩得A252‑4，类白色固体2g。

[0632] 步骤四：50ml三口瓶中加入A252‑4(650mg)，10ml二氯甲烷搅拌溶清，加入三溴吡啶翁(950mg，1.1eq)，室温搅拌4‑5h。5ml饱和硫代硫酸钠溶液淬灭反应，20ml二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥、浓缩得450mg类白色固体。加入10ml二氧六环搅拌溶清，加入硫脲(615mg，3.0eq)，DIPEA(700mg，2.0eq)，升温至80‑90℃搅拌过夜。反应液冷却至室温，加入水、二氯甲烷各10ml萃取，有机相干燥、浓缩，柱层析，得A252‑5，类白色固体350mg。

[0633] 步骤五：50ml三口瓶中加入A252‑5(200mg)，10ml四氢呋喃搅拌溶清，氮气保护下，加入硼烷四氢呋喃溶液(7ml，10eq)，升温至60℃保温反应2h。降温至0℃左右，缓慢滴加5ml甲醇淬灭反应，浓缩除去溶剂，加入水和甲醇各10ml，升温至70℃搅拌1‑2h，降温至室温，加1
入20ml二氯甲烷萃取，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得类白色固体100mg。H NMR(400MHz，DMSO‑d6)δ7.43(s，1H)，7.37‑7.26(m，3H)，7.24‑7.17(m，1H)，6.63(s，2H)，5.48(s，1H)，3.44(d，J＝16.2Hz，1H)，3.05‑2.94(m，2H)，2.88(d，J＝15.7Hz，1H)，2.83‑2.78(m，
1H)，2.20‑2.06(m，2H)，1.87‑1.79(m，1H)，1.70(d，J＝5.2Hz，3H).ESI‑MS m/z 274.18[M++
H]

[0634] 在下表中显示的化合物A8、A10、A11、A26、A72‑A396，除了使用与最终产物相对应的起始原料和中间体以外，使用与以上实施例中相同的方法制备。

[0635]

[0636]

[0637]

[0638]

[0639]

[0640]

[0641]

[0642]

[0643]

[0644]

[0645]

[0646]

[0647]

[0648]

[0649]

[0650]

[0651]

[0652]

[0653]

[0654]

[0655]

[0656]

[0657]

[0658]

[0659]

[0660]

[0661]

[0662]

[0663]

[0664]

[0665]

[0666]

[0667]

[0668]

[0669]

[0670]

[0671]

[0672]

[0673]

[0674]

[0675]

[0676]

[0677]

[0678]

[0679]

[0680]

[0681]

[0682]

[0683]

[0684]

[0685]

[0686]

[0687]

[0688]

[0689]

[0690]

[0691]

[0692]

[0693]

[0694]

[0695] 以下药理实施例中被测试化合物为外消旋体用“rac”表示，纯对映体用“R”或“S”表示。

[0696] 药理实施例1NMDA受体拮抗活性测试

[0697] 采用电生理全细胞手动膜片钳方法，测试化合物对NMDA受体(N‑甲基‑D‑天冬氨酸受体，NR1/2A)通道电流的影响。

[0698] 实验仪器：

[0699] 膜片钳放大器(Multiclamp 700B，Axopatch 200B，Axon，美国)

[0700] 数模转换器(Digidata 1440A，Digidata 1550B，Axon，美国)

[0701] 倒置显微镜(IX71，IX51，Olympus，日本)

[0702] 快速给药系统(RSC‑200，Bio‑Logic，法国)

[0703] 微操作器(MX7600R，Syskiyou，美国)

[0704] 电极拉制仪(P‑97，Sutter，美国)

[0705] 玻璃电极(BF150‑86‑10，Sutter，美国)

[0706] 防震台与屏蔽网(63‑534，TMC，美国)

[0707] 数据采集与分析软件(pClamp，Axon，美国)

[0708] 二氧化碳培养箱(HERAcell 150i，Thermo，美国)

[0709] 生物安全柜(MODEL 1384，Thermo，美国)

[0710] 纯水仪(Milli Q，Millipore，美国)

[0711] 试剂：

[0712] 氯化钠(NaCl)(Sigma，Cat：S7653)

[0713] 氯化钾(KCl)(Sigma，Cat：P9333)

[0714] 氯化铯(CsCl)(Sigma，Cat：V900481)

[0715] 氟化铯(CsF)(Sigma，Cat：289345)

[0716] 氯化钙(CaCl2)(Sigma，Cat：21115)

[0717] 葡萄糖(Glucose)(Sigma，Cat：G7528)

[0718] 4‑(2‑羟乙基)哌嗪‑1‑乙磺酸，N‑(2‑羟乙基)哌嗪‑N’‑(2‑乙磺酸)(简称HEPES)(Sigma，Cat：H3375)

[0719] 乙二醇双(2‑氨基乙基醚)四乙酸(简称EGTA)(Sigma，Cat：E3889)

[0720] Lipofectamine 3000转染试剂盒(Gibco，Cat：L3000015)(包含Lipofectamine 3000和P3000两种试剂)

[0721] DMEM(Gibco，Cat：C11995500BT)

[0722] 胎牛血清(FBS)(Gibco，Cat：10099141)

[0723] Opti‑MEM(Gibco，Cat：31985070)

[0724] 氢氧化钠(NaOH)(国药，Cat：10019718)

[0725] 氢氧化铯(CsOH)(Sigma，Cat：232068)

[0726] 二甲亚砜(DMSO)(Sigma，Cat：276855)

[0727] 谷氨酸(Glutamic acid)(Sigma，Cat：G1626‑100G)

[0728] 甘氨酸(Glycine)(Amresco，Cat：0167‑1KG)

[0729] 细胞外液配方(mM)：140NaCl，2.8KCl，1 CaCl2，10HEPES and 20Sucrose，用NaOH调节pH至7.4。

[0730] 细胞内液配方(mM)：10CsCl，115CsF，10EGTA and 10HEPES，用CsOH调节pH至7.2。

[0731] 具体操作：

[0732] a.细胞培养和处理

[0733] HEK293细胞系在含有10％胎牛血清的DMEM培养基中培养，培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。

[0734] 细胞传代：除去旧培养基并用PBS洗一次，然后加入1mL 0.25％Trypsine‑EDTA溶液，室温孵育1分钟。当细胞从皿底脱离，加入3mL 37℃预热的完全培养基(90％DMEM+10％FBS)。将细胞悬液用吸管轻轻吹打使聚集的细胞分离。将细胞悬液转移至无菌的离心管中，800rpm离心3分钟收集细胞。按1∶5的比例将细胞接种于T25细胞培养瓶中(最终体积：6mL)，用于扩增或维持培养。

[0735] 瞬时转染：瞬转前24h将细胞密度80％左右的HEK‑293细胞重铺至35mm2的细胞培5
养皿中，每个细胞培养皿接种量为3×10个细胞。

[0736] 每孔按如下体积配制瞬转试剂：

[0737] 1)取7.5μL Lipofectamine 3000加入至250μL Opti‑MEM培养基中，轻轻吹打混匀，作为组分A，室温孵育5min；

[0738] 2)取pCDNA5‑FRT‑TO‑hNR1‑T2A‑2A质粒3.6μg、GFP质粒0.4μg、7.5μL P3000加入至250μL Opti‑MEM培养基中，轻轻吹打混匀，作为组分B，室温孵育5min；

[0739] 3)将B组分加入A中，轻轻吹打至充分混匀，室温孵育15min形成DNA脂质体混合物；

[0740] 4)将DNA‑脂质体混合物加入到35mm2的细胞培养皿中，每孔500μL。放入培养箱继续培养；

[0741] 5)6h后换液，将35mm2的细胞培养皿中的培养基全部吸出，加入2mL/孔的完全培养基(90％DMEM+10％FBS)，继续培养18h后进行膜片钳检测；

[0742] b.化合物准备：测试当天，将本发明化合物母液用DMSO稀释成中间浓度，然后用细胞外液(含100μM Glutamic acid+100μM Glycine)稀释得到需要测试的最终浓度。最终测试浓度中的DMSO含量不超过0.2％。

[0743] c.电生理记录过程

[0744] 瞬时表达NMDA受体通道的HEK293细胞，在室温下用全细胞膜片钳技术记录100μM Glutamic acid(含100μM Glycine)诱发的电流。玻璃微电极由玻璃电极毛胚(BF150‑86‑10，Sutter)经拉制仪拉制而成，灌注电极内液后的尖端电阻为2‑5MΩ左右，将玻璃微电极插入放大器探头即可连接至膜片钳放大器。钳制电压和数据记录由pClamp软件通过电脑控制和记录，采样频率为10kHz，滤波频率为2kHz。在得到全细胞记录后，细胞钳制在‑70mV，用快速给药系统以重力方式给予100μM Glutamic acid(含100μM Glycine)诱发通道电流，待电流稳定后给予含化合物的100μM Glutamic acid(含100μM Glycine)观察电流幅度变化情况，化合物从低浓度至高浓度连续给药，最后再次给予100μM Glutamic acid(含100μM Glycine)。化合物每个测试浓度至少给予20s，每个浓度至少测试2个细胞(n≥2)。

[0745] d.数据处理

[0746] 数据分析处理采用pClamp，GraphPad Prism 8和Excel软件。不同化合物浓度对通道电流(‑70mV下100μM Glutamic acid(含100μM Glycine)诱发的电流幅度)的抑制程度用以下公式计算：

[0747] Inhibition％＝[1‑(I/Io)]×100％

[0748] 其中，Inhibition％代表化合物对NMDA通道电流的抑制百分率，I和Io分别表示在加药后和加药前100μM Glutamic acid(含100μM Glycine)诱发的电流幅度。

[0749] 化合物IC50使用GraphPad Prism 8软件通过以下方程拟合计算得出：

[0750] Y＝Bottom+(Top‑Bottom)/(1+10^((LogIC50‑X)*HillSlope))

[0751] 其中，X为供试品检测浓度的Log值，Y为对应浓度下抑制百分率，Bottom和Top分别为最小和最大抑制百分率。部分化合物的测试结果见表1。

[0752] 表1：

[0753]

[0754]

[0755]

[0756]

[0757] 以上数据显示，本发明实施例化合物对NMDA受体具有一定的拮抗活性，预期对NMDA受体相关的中枢神经系统疾病具有治疗作用。

[0758] 药理实施例2：人肝微粒体实验

[0759] 对照品和试剂：NADPH、氯化镁、睾酮、磷酸缓冲液等由大连美仑生物技术有限公司等提供。

[0760] 肝微粒体：人肝微粒体由Corning公司提供。

[0761] 实验步骤：肝微粒体孵育于96孔板中进行，每个孵育体系体积为200μL，介质为0.1M磷酸缓冲液(pH 7.4)，包括终浓度为0.2mg/mL的肝微粒体、1μM的受试药物、3.0mM MgCl2、0.01％DMSO、0.5％乙腈及2.0mM NADPH。采用回旋式水浴恒温震荡器，先以不含NADPH的上述孵育体系37℃预孵5min后，加入NADPH起始反应，分别在0、5、15、30、60min混匀后从孵育体系中取出20μL样品加入到200μL含内标的乙腈终止反应。相同条件下1μM睾酮(Testosterone)作为阳性对照，用来检测反应体系的可靠性。对于阴性对照，用磷酸缓冲液代替NADPH，其他孵育条件同上，60min时混匀后取出20μL样品加入到200μL含内标的终止液终止反应。

[0762] 样品分析：孵育样品经有机溶剂抽提沉淀蛋白等处理后，采用液相色谱‑串联质谱(LC‑MS/MS)方法，对样品中的受试药物或阳性对照药物的浓度进行半定量测定。使用分析物峰面积与内标峰面积的比值来表示样品中的浓度。

[0763] 数据处理和分析：使用Excel软件，以孵育体系中药物的ln剩余率对孵育时间作图，进行线性回归得到斜率k，按以下公式求半衰期T1/2(min)、固有清除率CLint(mL/min/kg)：

[0764] T1/2＝‑0.693/k

[0765]

[0766] 实验结果见下表2：

[0767] 表2

[0768]

[0769] NA：无法计算。

[0770] 以上数据显示，本发明实施例化合物在人肝微粒体中具有良好的代谢稳定性。

[0771] 药理实施例3：小鼠体内代谢实验

[0772] 动物：雄性ICR小鼠。动物被随机分配到治疗组，并在给药前12h禁食。

[0773] 药物：本发明化合物用溶媒(5％DMSO+5％Solutol HS15+90％Saline)溶解。静脉注射(iv)剂量为2.5mg/kg，给药体积为5mL/kg；口服(po)剂量为10mg/kg，给药体积为10mL/kg体重。样品采集和生物分析：小鼠于0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8h(每个时间点n＝3)从眼眶取血放入含有肝素钠的EP管中。小鼠取血后立即脱椎处死，取下对应时间点的小鼠大脑。所有样本立即收集，快速冷冻并置于‑70℃备用。血浆样本是通过全血离心得到，再取10μL血浆与190μL内标溶液(20ng/mL溶于含0.1％甲酸乙腈)混匀。混匀后在13000rpm下离心
10min，每个取120uL上清液，然后取出0.5‑10ul(根据化合物的灵敏度决定)采用合适的液相色谱‑串联质谱(LC‑MS/MS)方法进行药物分析，每个分析物的标准品用于校准和鉴定。按脑组织：提取液(50％乙腈水)＝1(g)：8(mL)，在OMNI Bead Ruptor 24Elite匀浆机中使用
3mm磁珠5颗在速度3.2m/s下匀浆2min，4℃，3000g条件下，离心3min，取上清液50uL，加入
200uL内标溶液(20ng/mL溶于80％乙腈水)混匀，混匀后在13000rpm下离心10min，每个取
120uL上清液，然后取出0.5‑10ul(根据化合物的灵敏度决定)上清液采用合适的LC‑MS/MS方法进行药物分析，每个分析物的标准品用于校准和鉴定。

[0774] 数据分析：低于定量下限(LLOQ)的药物浓度为零。使用非室间、快速浓注或血管外输入分析模型在PK Solver中进行药代动力学数据分析。LLOQ以下的数据点不参与分析，以提高t1/2计算的有效性。实验结果见下表3：

[0775] 表3

[0776]

[0777]

[0778] 以上数据显示，本发明实施例化合物在小鼠体内具有良好的口服生物利用度。

[0779] 药理实施例4：sigma受体亲和力实验

[0780] 4.1材料与试剂

[0781] 细胞膜：本实验采用的膜蛋白提取于药明康德构建的稳定表达Sigma1受体的HEK293细胞株和稳定表达Sigma2受体的HEK293细胞株。

[0782] 试剂：

[0783] [3H]‑DTG(PerkinElmer，Cat：NET986250UC)

[0784] Haloperidol(Sigma，Cat：Sigma‑H1512‑5G)

[0785] Tris‑HCl(Sigma，Cat：T3038‑1L)

[0786] NaCl(Sigma，Cat：S5150‑1L)

[0787] PEI(Poly ethyleneimine)(Sigma，Cat：P3143)

[0788] Microscint 20cocktail(PerkinElmer，Cat：6013329)

[0789] Haloperidol(Sigma，Sigma‑H1512‑5G)

[0790] 仪器与耗材：

[0791] Top Seal‑A封板膜(Perkin Elmer，Cat#6050185)

[0792] 96well conical polypropylene plates(Agilent，Cat#50421385)

[0793] 96‑well细胞收集器(PerkinElmer，Cat#C961961)

[0794] Unifilter‑96GF/C过滤板(Perkin Elmer，Cat#6005174)

[0795] Microbeta(PerkinElmer)

[0796] 4.2方法与步骤

[0797] 1)检测缓冲液：50mM Tris‑HCl，pH＝7.4，4℃保存；

[0798] 2)Sigma 1R实验洗板缓冲液：50mM Tris‑HCl，pH＝7.4，4℃保存；Sigma2R实验洗板缓冲液：50mM Tris‑HCl，100mM NaCl，pH＝7.4，4℃保存；

[0799] 3)将化合物稀释到各工作浓度：8个浓度4倍连续梯度稀释。

[0800] 用预冷的检测缓冲液配置细胞膜溶液及同位素溶液，配置信息如下：膜浓度10μg/well，同位素配体[3H]‑DTG的最终浓度5nM。

[0801] 5)将待测化合物和阳性对照稀释至工作浓度后，向实验板内按照每孔1μL加入。Sigma 1R实验的高信号对照孔(High control)加入1μLDMSO，低信号对照孔(Low control)中加入1μL 100μM的Haloperidol(终浓度500nM)。Sigma 2R实验的高信号对照孔(High control)加入1μL DMSO，低信号对照孔(Low control)中加入1μL 400μM的Haloperidol(终浓度2uM)。

[0802] 6)按照每孔100μL细胞膜加入到实验板，然后加入100μL对应的同位素配体。

[0803] 7)密封实验板，37℃条件下震荡孵育2小时。用0.3％PEI浸泡GF/C过滤板，至少30分钟。

[0804] 8)孵育完毕用细胞收集器将细胞膜收集到GF/C过滤板上，用预冷的洗板缓冲液洗4次后，将GF/C过滤板置于50℃烘箱中干燥1小时。

[0805] 9)把干燥好的GF/C过滤板底部封膜，每孔加入50μL闪烁液，并密封。

[0806] 10)使用Microbeta读数。

[0807] 11)使用GraphPad Prism分析数据，计算IC50值和Ki值。亲和力抑制常数Ki采用Cheng Prusoff公式计算：Ki＝IC50/(1+L/KD)。

[0808] 实验结果见下表4：

[0809] 表4

[0810]

[0811]

[0812] 以上表4数据显示，本发明实施例化合物对sigma受体具有较好的亲和力，预期对与sigma受体相关的中枢神经系统疾病具有治疗作用。

[0813] 药理实施例5：强迫游泳实验(Forced Swim Test)：

[0814] 药物：本发明化合物用5％DMSO混匀后加入5％ HS 15混匀，再加入90％生理盐水，配制成合适浓度的溶液，现配现用。

[0815] 动物：雄性C57小鼠，22g左右。对动物随机分组，分为空白对照组和各受试药组，每组动物8只，各组小鼠分别腹腔注射给予溶媒处方或者各受试药。

[0816] 实验步骤：给药后0.5h对小鼠进行强迫游泳测试。强迫游泳设备中水位为45cm，水温25℃，实验开始前将小鼠置于实验房间适应环境1h。实验开始时将小鼠置于设备中，时长6min，整个过程用摄像头记录，分析数据时只统计最后4min小鼠的不动时间。

[0817] 实验结果见下表5：

[0818] 表5

[0819]

[0820]

[0821] 以上数据显示，药物组在1‑5mg/kg低剂量下都表现出了显著的抗抑郁样作用。

[0822] 药理实施例6：单胺转运体抑制活性测试

[0823] (1)5‑HT转运体抑制活性测试：

[0824] 主要试剂与仪器：

[0825] HEPES(Invitrogen，Cat：15630‑106)

[0826] HBSS(Invitrogen，Cat：14025)

[0827] Bovine Serum Albumin(Sigma，Cat：B2064‑100G)

[0828] Neurotransmitter transporter uptake assay kit(Molecular devices，Cat：R8174)

[0829] Incubator(Thermo，240)

[0830] Envision(Perkin Elmer，envision2014)

[0831] 384孔板(Greiner，Cat：784075)

[0832] 在过表达人SERT的HEK‑293细胞中，使用Neurotransmitter transporter uptake assay kit(Molecular devices)检测待测化合物对人SERT的转运体抑制作用。测试按照试剂盒说明书中的方法进行，采用西酞普兰(Citalopram)作为阳性对照。具体操作如下：

[0833] a)将HEK‑293‑hSERT细胞以20000个/孔接种到384孔板中，然后将384孔板转移至培养箱中，37℃过夜；

[0834] b)次日，于384孔板中，用实验缓冲液(含0.1％BSA及20mM HEPES的HBSS溶液)配制西酞普兰和本发明化合物的测试溶液，西酞普兰的测试起始浓度为1μM，3X稀释，待测化合物测试起始浓度为10μM或100μM，3X稀释，每个浓度重复2次；

[0835] c)从培养箱中取出培养有HEK‑293‑hSERT细胞的384孔板，移去孔中培养基，每孔中加入25μL待测试化合物溶液；在37℃培养箱中孵育30min；

[0836] d)每孔加入25μL染料，在37℃培养箱中孵育30min；

[0837] e)在Envision上读取荧光值，使用Graphpad Prism软件分析数据，结果见表6。

[0838] (2)DAT和NET转运体抑制活性测试：

[0839] 主要试剂与仪器：

[0840]

[0841] 使用Neurotransmitter transporter uptake assay kit对表达人DAT和NET的HEK‑293细胞的转运体抑制作用。测试按照试剂盒说明书中的方法进行，采用Centanafadine作为阳性对照。具体操作如下：

[0842] NET瞬转细胞准备：

[0843] 第一天细胞铺板：HEK 293T细胞经胰酶消化处理，离心后用培养基重悬，经细胞计6
数后接种于6cm培养皿中，接种密度为3×10cells/孔；

[0844] 第二天细胞转染：HEK 293T细胞进行换液处理，随后将待转染NET‑pcDNA5/FRT质TM粒分别准备A、B两管。A管加入200μL Opti‑MEM，然后加入10μL Lipofectamine  3000混合均匀。B管先加入200μL Opti‑MEM，然后加入5μg NET‑pcDNA5/FRT质粒，混合均匀，再在B管TM
中加入10μL P3000 混合均匀(质粒与转染试剂比例为1μg∶2μL)。将稀释后的A管溶液加入到稀释后的B管溶液中，混合均匀，室温孵育15分钟。最后将混合物轻轻加入已经换液的细胞中，轻轻摇动以混合，然后于温度为37℃，二氧化碳浓度为5％的培养箱中培养过夜。转染
18‑20小时后细胞用于化合物功能活性测定。

[0845] DAT稳转培养：DAT‑HEK细胞系在含有10％胎牛血清及0.2mg/mL Hygromycin B的DMEM培养基中培养，培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。

[0846] DAT稳转细胞传代：除去旧培养基并用PBS洗一次，然后加入1mL TrypLETM Express溶液，37℃孵育2min左右。当细胞从皿底脱离，加入约5mL 37℃预热的完全培养基。将细胞悬液用吸管轻轻吹打使聚集的细胞分离。将细胞悬液转移至无菌的离心管中，1000rpm离心5min。为维持细胞的生理活性，实验细胞融合度控制在80％左右。

[0847] a)NET细胞转染过夜后，经胰酶消化处理，用DMEM+10％Dialyzed FBS培养基重悬后接种20000cells/孔细胞于384孔板中培养过夜。稳转的DAT细胞经胰酶消化处理，用DMEM+10％Dialyzed FBS培养基重悬后接种2500cells/孔细胞种于384孔板中培养过夜。

[0848] b)按照试剂盒说明书配制1×Assay Buffer待用；将阳性化合物及待测化合物用DMSO进行梯度稀释，然后用1×Assay Buffer稀释至2×；

[0849] c)离心去掉384孔板中的培养基；

[0850] d)取16μL步骤b)中配制好的化合物加入到相应实验孔中，其中阳性对照孔加入首浓度的2×阳性对照化合物，阴性对照孔加入0.2％DMSO buffer，离心后置于37℃孵育30min；

[0851] e)用1×HBSS配制检测试剂，每孔加入16μL的检测试剂，离心后置于37℃孵育60min；

[0852] f)孵育完成后，利用酶标仪检测波长425nm激发下，510nm读值，用GraphPad Prism软件非线性回归方法进行曲线拟合及IC50计算。结果见下表6。

[0853] 表6

[0854]

[0855]

[0856]

[0857]

[0858] 以上数据显示，本发明化合物对单胺转运体具有一定的拮抗活性，预期对单胺转运体相关联的中枢神经系统疾病具有治疗作用。